CN103709193A - 一种从动物肝脏中提取磷脂的方法 - Google Patents
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Abstract
一种从动物肝脏中提取磷脂的方法，属于农产品加工领域，首先使用胰蛋白酶对动物肝脏进行水解，然后采用超声波强化萃取，最后用乙酸乙酯沉淀获得磷脂。本发明运用了酶法联合超声辅助的方法，从动物肝脏中提取磷脂。酶法取磷脂的作用原理是通过酶的作用降解脂蛋白、脂多糖等脂类复合体，从而促使磷脂的释放，本发明再结合超声波的方法，达到提高卵磷脂提取率的目的。
Description
技术领域
本发明属于农产品加工领域，特别涉及从动物肝脏中提取磷脂的方法。
背景技术
磷脂是一种纯天然营养保健食品，来源极为广泛，目前，人们已发现磷脂几乎存在于所有机体细胞中，主要存在于动植物的细胞中，是生物细胞膜的主要成分。磷脂广泛存在于自然界中所有动植物机体中，人及动物体的脑、神经系统、肝脏、心脏、肺脏、肾脏、血液等物中，植物机体中大豆油、菜籽油、玉米油中含量较多，动物磷脂主要来源于蛋黄、牛奶、动物体心、肝、脑、肾、骨髓和卵等部位。植物磷脂主要存在于种子油料中，并与蛋白质、脂肪酸、糖类、维生素、醇等物质以结合状态存在，是一类重要的油脂伴随物。其中大豆和蛋黄中含量较多，常作为天然卵磷脂提取原料。
现在市场上大多数卵磷脂产品是大豆卵磷脂，还有一部分是蛋黄卵磷脂，因为蛋黄的价格比较高，所以生产蛋黄卵磷脂的成本比大豆磷脂高，具有一定的市场限制，为寻求更多、更广泛、更廉价的卵磷脂原料，开拓市场需求，我们把动物肝脏作为磷脂提取的新原料，进行磷脂的提取。动物肝脏中的磷脂含量较高，但其中一部分磷脂通过脂质的非极性部分与蛋白质组分之间以疏水性相互作用而结合在一起，这部分磷脂很难提取。
发明内容
本发明的目的在于提出一种提高提取率的从动物肝脏中提取磷脂的方法。
本发明技术方案是：首先使用胰蛋白酶对动物肝脏进行水解，然后采用超声波强化萃取，最后用乙酸乙酯沉淀获得磷脂。
本发明运用了酶法联合超声辅助的方法，从动物肝脏中提取磷脂。酶法取磷脂的作用原理是通过酶的作用降解脂蛋白、脂多糖等脂类复合体，从而促使磷脂的释放，本发明再结合超声波的方法，达到提高卵磷脂提取率的目的。
具体的水解工艺是：于45.5±0.5℃温度条件下，在胰蛋白酶存在下，将动物肝脏与乙酸乙酯混合进行水解反应，反应结束后，离心分层，取下层沉淀物。在该温度条件下，胰蛋白酶活性最高，能充分水解脂蛋白，使更多的磷脂暴露出来，从而更容易提取。该工艺目的是，运用胰蛋白酶使与蛋白相结合的磷脂游离出来，有利于磷脂的提取。
所述动物肝脏与乙酸乙酯的混合体积比为1︰4。使用乙酸乙酯可以除去大部分中性酯，有利于磷脂纯度的提高。
所述胰蛋白酶为胰蛋白酶水溶液，可以使胰蛋白酶均匀的分布在提取体系中，有利于水解反应的进行。
所述胰蛋白酶水溶液由质量比为3︰500的胰蛋白酶和水混合组成。
具体的超声波方法是：于35±0.5℃温度条件下，将水解取得的下层沉淀物与乙醇混合后，在超声波反应器功率为210W、频率为28Hz的条件下处理后，再离心分层，取上层液体蒸干物。该温度、超声条件下可以使乙醇易于渗透到细胞中去，加速磷脂的溶出，有利于磷脂的提取。
将所述上层液体蒸干物与乙酸乙酯混合后，于-10℃温度环境下静置至少5分钟，然后取出离心，取固相，即磷脂。在低温条件下可以使磷脂凝固沉淀，便于分离。
所述上层液体蒸干物与乙酸乙酯的混合体积比为1︰4。使用乙酸乙酯可以进一步去除中性酯，使磷脂纯度得到提高。
具体实施方式
一、本发明工艺的实施例：
称取5g鸭肝，切碎后于80mL离心管中，加入蛋白酶溶液（胰蛋白酶活性为2.00×105u/g，取0.015g蛋白酶加入2.5mL水中形成蛋白酶溶液），20mL乙酸乙酯，搅拌均匀，在45.5℃下反应133min，离心，弃上清液，取得下层沉淀物。
再向下层沉淀物中加入17mL95%乙醇，在超声波反应器中35℃反应43min，离心取上层上清液。将上层上清液过滤，旋转蒸干。
取一定质量的蒸干产物，加入5倍体积量的乙酸乙酯，将其放入-10℃冰箱中，5分钟后取出离心，取固相，即磷脂，将其密封好放入-18℃冰箱备用。
二、对比试验：
1、普通工艺：称取5g鸭肝，切碎后于80mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯，搅拌均匀，在45.5℃下静置133min，离心，弃上清液，取得下层沉淀物。向下层沉淀物中加入17mL95%乙醇，在35℃条件下静置43min，离心取上层上清液。将上层上清液过滤，旋转蒸干。取一定质量的蒸干产物，加入5倍体积量的乙酸乙酯，将其放入-10℃冰箱中，5分钟后取出离心，取固相，即磷脂，将其密封好放入-18℃冰箱备用。
2、单独的胰蛋白酶工艺：称取5g鸭肝，切碎后于80mL离心管中，加入蛋白酶溶液（胰蛋白酶活性为2.00×105u/g，取0.015g蛋白酶加入2.5mL水中形成蛋白酶溶液），20mL乙酸乙酯，搅拌均匀，在45.5℃下反应133min，离心，弃上清液，取得下层沉淀物。向下层沉淀物中加入17mL95%乙醇，在35℃条件下静置43min，离心取上层上清液。将上层上清液过滤，旋转蒸干。取一定质量的蒸干产物，加入5倍体积量的乙酸乙酯，将其放入-10℃冰箱中，5分钟后取出离心，取固相，即磷脂，将其密封好放入-18℃冰箱备用。
3、单独的超声工艺：称取5g鸭肝，切碎后于80mL离心管中，加入20mL乙酸乙酯，搅拌均匀，在45.5℃下静置133min，离心，弃上清液，取得下层沉淀物。向下层沉淀物中加入17mL95%乙醇，在超声波反应器中35℃反应43min，离心取上层上清液。将上层上清液过滤，旋转蒸干。取一定质量的蒸干产物，加入5倍体积量的乙酸乙酯，将其放入-10℃冰箱中，5分钟后取出离心，取固相，即磷脂，将其密封好放入-18℃冰箱备用。
三、结论：
将本发明与普通工艺、单独的超声波工艺提取磷脂产量与纯度对比表如下：
| 指标 | 普通工艺 | 单独的胰蛋白酶工艺 | 单独的超声波工艺 | 本发明工艺 |
| 磷脂产量（%） | 2.5 | 2.9 | 2.8 | 3.7 |
| 磷脂纯度（%） | 81.7 | 81.1 | 81.2 | 81.7 |
由上表可见，使用本发明后动物肝脏中磷脂的提取率大大提高，且纯度没有降低。
Claims (8)
1.一种从动物肝脏中提取磷脂的方法，其特征在于：首先使用胰蛋白酶对动物肝脏进行水解，然后采用超声波强化萃取，最后用乙酸乙酯沉淀获得磷脂。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于：于45.5±0.5℃温度条件下，在胰蛋白酶存在下，将动物肝脏与乙酸乙酯混合进行水解反应，反应结束后，离心分层，取下层沉淀物。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于：所述动物肝脏与乙酸乙酯的混合体积比为1︰4。
4.根据权利要求2或3所述方法，其特征在于：所述胰蛋白酶为胰蛋白酶水溶液。
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于：所述胰蛋白酶水溶液由质量比为3︰500的胰蛋白酶和水混合组成。
6.根据权利要求2所述方法，其特征在于：于35±0.5 ℃温度条件下，将水解取得的下层沉淀物与乙醇混合后，在超声波反应器功率为210W、频率为28Hz的条件下处理后，再离心分层，取上层液体蒸干物。
7.根据权利要求6所述方法，其特征在于：将所述上层液体蒸干物与乙酸乙酯混合后，于-10℃温度环境下静置至少5分钟，然后取出离心，取固相，即磷脂。
8.根据权利要求7所述方法，其特征在于：所述上层液体蒸干物与乙酸乙酯的混合体积比为1︰4。
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