CN103688863B - 一种利用胚芽体细胞培育性状改良的野生构树的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用胚芽体细胞培育改良野生构树性状的方法，包括以下步骤：1）采用野生构树为母本；2）胚芽的选择和切取；3）胚芽的灭菌；4）通过诱导愈伤组织；5）愈伤组织分化成苗形成完整植株；6）分化成苗后的管理；本发明通过胚芽体细胞组织培养技术，使野生构树的速生性加强，木质纤维增长，嫩芽叶的植物蛋白含量提高，成为既能够超速生，又有较长木质纤维，还使嫩芽叶的营养更丰富。

Description

一种利用胚芽体细胞培育性状改良的野生构树的方法

技术领域

本发明涉及一种利用胚芽体细胞培育性状改良的野生构树的方法。

背景技术

构树，学名(Broussonetiapapyrifera)，为桑科构树属，多年生、落叶乔木，茎干色白，可作为造纸原料，嫩芽叶含植物蛋白，可作为动物饲料，但由于木质纤维长度较短，不能造出高品质纸浆。因此如何培育木质纤维较长的构树植株就成了人们探索的一个课题。

长期以来，广大生产者主要通过利用多施肥、摘除侧芽等手段，有的甚至利用赤霉素等植物激素，从而达到培育所谓较长木质纤维和速生的目的。这种方法不仅增加生产成本，而且生物性状不能延续。

近年来，时有报道人们利用植物体细胞进行组织培养改良植物生物性状；但因其继代繁殖的分离性较高，优良生物性状的延续性不强。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用胚芽体细胞培育性状改良的野生构树的方法，该方法通过胚芽体细胞组织培养技术，使野生构树的速生性加强，木质纤维增长，嫩芽叶的植物蛋白含量提高，成为既能够超速生，又有较长木质纤维，还使嫩芽叶的营养更丰富。

为解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

一种利用胚芽体细胞培育性状改良的野生构树的方法，包括以下步骤：

1)采用野生构树为母本：选择较为粗壮的野生构树；

2)胚芽的选择和切取：在步骤1)中所选取的野生构树上选择饱满的野生构树的种子，在无土条件下发芽，待胚芽生长到1.5cm-2cm时切取中段胚芽，长度为1.8cm-1cm；

3)胚芽的灭菌：将步骤2)中所切取的胚芽，浸入70％-75％浓度的酒精中，消毒30秒，取出后，再投入到0.09％-0.1％浓度的酸性升汞溶液中灭菌15分钟，再使用无菌水冲洗3-5遍；

4)诱导愈伤组织：将步骤3)所得到的胚芽体细胞接种到诱导培养基中进行中进行暗培养，得到愈伤组织，静置25-30天后达到愈伤组织发出高峰期，当愈伤组织生长到1.5—2.0mm时，转接到分化培养基上进行分化培养，增加光照，并保持25℃-30℃的温度，约50天后得到分化苗，所述诱导培养基包括以下物质组分：N6培养基1300ml-1500ml；5％浓度的蔗糖水4500ml-5000ml；2,4—D丁脂0.1mg/10ml；萘乙酸0.1mg/10ml，所述分化培养基包括以下物质组分：MS基本培养基2000ml-2500ml；6-苄氨基嘌呤0.1mg/10ml；NAA萘乙酸0.1mg/10ml；

5)愈伤组织分化成苗形成完整植株：将步骤4)中最后所得到的分化苗嫁接到步骤1)中所选取的野生构树上；

6)分化成苗后的管理，包括：试管苗移植初期的管理、炼苗期的管理和移栽大田的管理，所述试管苗移植初期的管理，包括做好遮光、防风、保湿，并保持温度在25℃-30℃范围，所述炼苗期的管理，包括保持水分和营养供给，同时增加光照，及时抹除侧芽，所述移栽大田的管理，包括做好所移栽土地的施肥、所移栽苗木的整形修剪、防治病虫害和摘除顶芽。

本发明的有益效果是：本发明过胚芽体细胞组织培养技术，使野生构树的速生性加强，木质纤维增长，嫩芽叶的植物蛋白含量提高，成为既能够超速生，又有较长木质纤维，还使嫩芽叶的营养更丰富，并且本发明实施方式较为简单，成活率高，成本低廉，适合推广使用。

具体实施方式

一种利用胚芽体细胞培育性状改良的野生构树的方法，包括以下步骤：

1)采用野生构树为母本：选择较为粗壮的野生构树；

2)胚芽的选择和切取：在步骤1)中所选取的野生构树上选择饱满的野生购树的种子，在无土条件下发芽，待胚芽生长到1.5cm-2cm时切取中段胚芽，长度为1.8cm-1cm；胚芽体细胞是指体细胞组织培养时用来进行培养的外植体，是改良构树的生命基础。从植物生理学上看胚芽是一个具有根、茎、叶等器官分化能力的活体植物全息细胞，能通过相关生物技术培养后形成植株，具备生长、分枝等生理活动的基础性植物体；胚芽的选择直接影响到愈伤组织的发出率，所以选择健壮色泽白的胚芽是关键；

3)胚芽的灭菌：将步骤2)中所切取的胚芽，浸入70％-75％浓度的酒精中，消毒30秒，取出后，再投入到0.09％-0.1％浓度的酸性升汞溶液中灭菌15分钟，再使用无菌水冲洗3-5遍；

4)诱导愈伤组织：将诱导培养基接种到步骤3)所得到的胚芽体细胞中进行暗培养，得到愈伤组织，静置25-30天后达到愈伤组织发出高峰期，当愈伤组织生长到1.5—2.0mm时，转接到分化培养基上进行分化陪养，增加光照，并保持25℃-30℃的温度，约50天后得到分化苗；

5)愈伤组织分化成苗形成完整植株：将步骤4)中最后所得到的分化苗嫁接到步骤1)中所选取的野生构树上；

6)分化成苗后的管理，包括：试管苗移植初期的管理、炼苗期的管理和移栽大田的管理。

其中，所述诱导培养基包括以下物质组分：

作为优选的技术方案，所述分化培养基包括以下物质组分：

MS基本培养基2000ml-2500ml

6-苄氨基嘌呤0.1mg/10ml

NAA萘乙酸0.1mg/10ml。

所述试管苗移植初期的管理，包括做好遮光、防风、保湿，并保持温度在25℃-30℃范围。

所述炼苗期的管理，包括保持水分和营养供给，同时增加光照，及时抹除侧芽。

所述移栽大田的管理，包括做好所移栽土地的施肥、所移栽苗木的整形修剪、防治病虫害和摘除顶芽。

本发明的有益效果是：本发明过胚芽体细胞组织培养技术，使野生构树的速生性加强，木质纤维增长，嫩芽叶的植物蛋白含量提高，成为既能够超速生，又有较长木质纤维，还使嫩芽叶的营养更丰富，并且本发明实施方式较为简单，成活率高，成本低廉，适合推广使用。

实施例1

1)采用野生构树为母本：选择较为粗壮的野生构树；

2)胚芽的选择和切取：在步骤1)中所选取的野生构树上选择饱满的野生购树的种子，在无土条件下发芽，待胚芽生长到1.5cm时切取中段胚芽，长度为1.8cm；胚芽体细胞是指体细胞组织培养时用来进行培养的外植体，是改良构树的生命基础。从植物生理学上看胚芽是一个具有根、茎、叶等器官分化能力的活体植物全息细胞，能通过相关生物技术培养后形成植株，具备生长、分枝等生理活动的基础性植物体；胚芽的选择直接影响到愈伤组织的发出率，所以选择健壮色泽白的胚芽是关键；

3)胚芽的灭菌：将步骤2)中所切取的胚芽，浸入75％浓度的酒精中，消毒30秒，取出后，再投入到0.1％浓度的酸性升汞溶液中灭菌15分钟，再使用无菌水冲洗5遍；

4)诱导愈伤组织：将诱导培养基接种到步骤3)所得到的胚芽体细胞中进行暗培养，得到愈伤组织，静置30天后达到愈伤组织发出高峰期，当愈伤组织生长到1.5时，转接到分化培养基上进行分化陪养，增加光照，并保持30℃的温度，50天后得到分化苗；

5)愈伤组织分化成苗形成完整植株：将步骤4)中最后所得到的分化苗嫁接到步骤1)中所选取的野生构树上；

6)分化成苗后的管理，包括：试管苗移植初期的管理、炼苗期的管理和移栽大田的管理。

其中，所述诱导培养基包括以下物质组分：

所述分化培养基包括以下物质组分：

MS基本培养基2500ml

6-苄氨基嘌呤0.1mg/10ml

NAA萘乙酸0.1mg/10ml。

所述试管苗移植初期的管理，包括做好遮光、防风、保湿，并保持温度在25℃-30℃范围。

所述炼苗期的管理，包括保持水分和营养供给，同时增加光照，及时抹除侧芽。

所述移栽大田的管理，包括做好所移栽土地的施肥、所移栽苗木的整形修剪、防治病虫害和摘除顶芽。

附表说明如下:

表l:改良构树和野生构树一年生长对照表

表2:改良构树和野生构树生物性状的对照表

表l:改良构树和野生构树一年生长对照表

表2：改良构树和野生构树生物性状的对照表

经表1和表2分析结果得出，本发明过胚芽体细胞组织培养技术，使野生构树的速生性加强，木质纤维增长，嫩芽叶的植物蛋白含量提高，成为既能够超速生，又有较长木质纤维，还使嫩芽叶的营养更丰富。

实施例2

1)采用野生构树为母本：选择较为粗壮的野生构树；

2)胚芽的选择和切取：在步骤1)中所选取的野生构树上选择饱满的野生购树的种子，在无土条件下发芽，待胚芽生长到2cm时切取中段胚芽，长度为1cm；胚芽体细胞是指体细胞组织培养时用来进行培养的外植体，是改良构树的生命基础。从植物生理学上看胚芽是一个具有根、茎、叶等器官分化能力的活体植物全息细胞，能通过相关生物技术培养后形成植株，具备生长、分枝等生理活动的基础性植物体；胚芽的选择直接影响到愈伤组织的发出率，所以选择健壮色泽白的胚芽是关键；

3)胚芽的灭菌：将步骤2)中所切取的胚芽，浸入75％浓度的酒精中，消毒30秒，取出后，再投入到0.09％浓度的酸性升汞溶液中灭菌15分钟，再使用无菌水冲洗3-5遍；

4)诱导愈伤组织：将诱导培养基接种到步骤3)所得到的胚芽体细胞中进行暗培养，得到愈伤组织，静置30天后达到愈伤组织发出高峰期，当愈伤组织生长到1.7mm时，转接到分化培养基上进行分化陪养，增加光照，并保持30℃的温度，约50天后得到分化苗；

5)愈伤组织分化成苗形成完整植株：将步骤4)中最后所得到的分化苗嫁接到步骤1)中所选取的野生构树上；

6)分化成苗后的管理，包括：试管苗移植初期的管理、炼苗期的管理和移栽大田的管理。

其中，所述诱导培养基包括以下物质组分：

所述分化培养基包括以下物质组分：

MS基本培养基2300ml

6-苄氨基嘌呤0.1mg/10ml

NAA萘乙酸0.1mg/10ml。

所述试管苗移植初期的管理，包括做好遮光、防风、保湿，并保持温度在30℃。

所述炼苗期的管理，包括保持水分和营养供给，同时增加光照，及时抹除侧芽。

所述移栽大田的管理，包括做好所移栽土地的施肥、所移栽苗木的整形修剪、防治病虫害和摘除顶芽。

附表说明如下:

表3:改良构树和野生构树一年生长对照表

表4:改良构树和野生构树生物性状的对照表

表3:改良构树和野生构树一年生长对照表

表4：改良构树和野生构树生物性状的对照表

经表3和表4分析结果得出，本发明过胚芽体细胞组织培养技术，使野生构树的速生性加强，木质纤维增长，嫩芽叶的植物蛋白含量提高，成为既能够超速生，又有较长木质纤维，还使嫩芽叶的营养更丰富。

Claims (1)

1.一种利用胚芽体细胞培育性状改良的野生构树的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)采用野生构树为母本：选择较为粗壮的野生构树；

2)胚芽的选择和切取：在步骤1)中所选取的野生构树上选择饱满的野生构树的种子，在无土条件下发芽，待胚芽生长到1.5cm-2cm时切取中段胚芽，长度为1.8cm-1cm；

3)胚芽的灭菌：将步骤2)中所切取的胚芽，浸入70％-75％浓度的酒精中，消毒30秒，取出后，再投入到0.09％-0.1％浓度的酸性升汞溶液中灭菌15分钟，再使用无菌水冲洗3-5遍；

4)诱导愈伤组织：将步骤3)所得到的胚芽体细胞接种到诱导培养基中进行中进行暗培养，得到愈伤组织，静置25-30天后达到愈伤组织发出高峰期，当愈伤组织生长到1.5—2.0mm时，转接到分化培养基上进行分化培养，增加光照，并保持25℃-30℃的温度，约50天后得到分化苗，所述诱导培养基包括以下物质组分：N6培养基1300ml-1500ml；5％浓度的蔗糖水4500ml-5000ml；2,4—D丁脂0.1mg/10ml；萘乙酸0.1mg/10ml，所述分化培养基包括以下物质组分：MS基本培养基2000ml-2500ml；6-苄氨基嘌呤0.1mg/10ml；NAA萘乙酸0.1mg/10ml；

5)愈伤组织分化成苗形成完整植株：将步骤4)中最后所得到的分化苗嫁接到步骤1)中所选取的野生构树上；

6)分化成苗后的管理，包括：试管苗移植初期的管理、炼苗期的管理和移栽大田的管理，所述试管苗移植初期的管理，包括做好遮光、防风、保湿，并保持温度在25℃-30℃范围，所述炼苗期的管理，包括保持水分和营养供给，同时增加光照，及时抹除侧芽，所述移栽大田的管理，包括做好所移栽土地的施肥、所移栽苗木的整形修剪、防治病虫害和摘除顶芽。