CN103675150A - 一种参芎葡萄糖注射液中的丹参素的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开的一种参芎葡萄糖注射液中的丹参素的检测方法，其包括如下步骤：1）色谱条件与系统适用性试验；2）对照品溶液制备；3）样品溶液制备；4）测定。本发明方法检测结果比较稳定，理论塔板数、分离度能达到要求，并且更能够保证检测结果的准确性、有效性；同时，样品易于混匀，避免因混合不均匀带来的检测误差。本发明降低了检测成本，特别适合实验室对其进行的检测工作。

Description

一种参芎葡萄糖注射液中的丹参素的检测方法

技术领域：

本发明涉及丹参素检测方法，尤指一种参芎葡萄糖注射液中的丹参素的检测方法。

背景技术：

丹参素，酚性芳香酸类化合物。其分子式：C₉H₁₀O₅，分子量：198.17。其结构式如下：

丹参素来源于唇形科植物丹参和甘西鼠尾草的根，其具有以下作用：

1.对心肌的作用：丹参素具有缩小心肌梗死范围和减轻病程的作用，同时对心肌缺血，再灌注损伤具有保护作用。

2.抑制血小板聚集及抗凝作用：丹参素能明显抑制血小板的聚集，并明显增加血小板膜的流动性，提示其对冠心病有效。丹参素可提高机体的纤溶活性，改善血液流变性、提高红细胞的变形能力和调解血液的粘滞度，改善全身各脏器（尤其是药物首先到达的心脏、肝脏、肺脏和胰腺）的微循环障碍，有助于机体组织的康复和成人呼吸窘迫综合征等严重并发症的纠正。

3.抗动脉粥样硬化及降血脂作用：丹参素抑制细胞内源性胆固醇的合成，还具有抗脂质蛋白氧化作用，降低血胆固醇，因此具有保护血管屏障，防止脂质沉积及动脉粥样硬化(AS)作用。

4.防止创面的过度愈合，丹参素具有调节核转录因子NF-1结合活性而起到减少成纤维细胞的胶原合成和分泌作用。

5.扩张冠状动脉作用：丹参素能明显扩张冠状动脉，使冠状动脉的血流量显著增加，并能对抗吗啡、心得安等的缩冠脉效应。

6.治疗肝损伤的作用：丹参素可以在一定范围内呈剂量依赖性地直接刺激肝细胞的增殖，表明丹参素还有促进肝细胞修复再生的作用。丹参素通过降低ET含量，上调eNOS表达、下调iNOS的表达调节NO含量，减轻肝脏血管收缩，抑制血小板聚集，改善受损肝脏微循环障碍，从而减轻急性重型肝损伤。

7.抗脑缺血损伤作用：丹参素可明显缩小脑梗死面积，改善神经功能缺损，并减少脑水含量。丹参素可抑制缺氧、缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低，从而具有稳定线粒体膜电位的作用，抑制细胞凋亡的发生。

但是目前参芎葡萄糖注射液中的丹参素的检测方法存在着检测成本高、效率低，准确性差的技术问题。

发明内容：

本发明所解决的技术问题在于针对现有技术对丹参素含量测定的方法所存在的问题，而提供一种保证检测准确的同时，减少检验成本、提高检验效率、方便检验工作开展的参芎葡萄糖注射液中的丹参素的检测方法。

本发明所解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：

一种参芎葡萄糖注射液中的丹参素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，以0.03%-0.05%三氟乙酸水溶液为流动相B，按下表中规定时行梯度洗脱；流速为每分钟0.5-1.5ml，柱温20-50℃；检测波长为258-290nm，理论塔板数按丹参素钠峰计算应不低于1300；

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0－65	2→30	98→70
65－66	30→2	70→98
			66－80	2	98

2）对照品溶液制备：取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、迷迭香酸对照品和丹酚酸B对照品适量，精密称定，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液制成每1ml含丹参素钠0.15-0.25mg、原儿茶醛30-70μg、迷迭香酸30-70μg和丹酚酸B30-70μg的混合溶液，即得对照品溶液；

3）样品溶液制备：精密量取参芎葡萄糖注射液适量，置10-25ml容量瓶中，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的膜滤过，即得样品溶液；

4）测定：分别精密量取对照品溶液与样品品溶液各5-20μl、注入色谱仪，记录色谱图。

本发明方法检测结果比较稳定，理论塔板数、分离度能达到要求，并且更能够保证检测结果的准确性、有效性；同时，样品易于混匀，避免因混合不均匀带来的检测误差。

具体实施方式

以下通过本发明的具体实施例来进一步清楚地了解本发明，但它们不是对本发明的限定

实施例1

1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，以0.03%三氟乙酸水溶液为流动相B，按下表中规定时行梯度洗脱；流速为每分钟0.6ml，柱温30℃；检测波长为270nm，理论塔板数按丹参素钠峰计算应不低于1300；

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0－65	2→30	98→70
65－66	30→2	70→98
			66－80	2	98

2）对照品溶液制备：取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、迷迭香酸对照品和丹酚酸B对照品适量，精密称定，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液制成每1ml含丹参素钠0.2mg、原儿茶醛50μg、迷迭香酸50μg和丹酚酸B50μg的混合溶液，即得对照品溶液；

3）样品溶液制备精密量取参芎葡萄糖注射液适量，置10ml容量瓶中，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的膜滤过，即得样品溶液；

4）测定：分别精密量取对照品溶液与样品溶液各15μl、注入色谱仪，记录色谱图。结果见表1

表1

批号	丹参素含量	塔板数	分离度
				20130901-S	0.20mg/ml	1400	1.8
20130902-S	0.20mg/ml	1420	1.8
				20130903-S	0.19mg/ml	1460	1.7

实施例2

1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，以0.05%三氟乙酸水溶液为流动相B，按下表中规定时行梯度洗脱；流速为每分钟0.8ml，柱温40℃；检测波长为288nm，理论塔板数按丹参素钠峰计算应不低于1300；

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0－65	2→30	98→70
65－66	30→2	70→98
			66－80	2	98

2）对照品溶液制备：取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、迷迭香酸对照品和丹酚酸B对照品适量，精密称定，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液制成每1ml含丹参素钠0.2mg、原儿茶醛50μg、迷迭香酸50μg和丹酚酸B50μg的混合溶液，即得对照品溶液；

3）样品溶液制备精密量取参芎葡萄糖注射液适量，置25ml容量瓶中，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的膜滤过，即得样品溶液；

4）测定：分别精密量取对照品溶液与样品溶液各10μl、注入色谱仪，记录色谱图。结果见表2

表2

批号	丹参素含量	塔板数	分离度
				20130901-S	0.21mg/ml	1500	2.0
20130902-S	0.19mg/ml	1490	2.1
				20130903-S	0.19mg/ml	1495	2.1

实施例3

1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，以0.04%三氟乙酸水溶液为流动相B，按下表中规定时行梯度洗脱；流速为每分钟1.2ml，柱温45℃；检测波长为280nm，理论塔板数按丹参素钠峰计算应不低于1300；

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0－65	2→30	98→70
65－66	30→2	70→98
			66－80	2	98

2）对照品溶液制备：取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、迷迭香酸对照品和丹酚酸B对照品适量，精密称定，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液制成每1ml含丹参素钠0.2mg、原儿茶醛50μg、迷迭香酸50μg和丹酚酸B50μg的混合溶液，即得对照品溶液；

3）样品溶液制备精密量取参芎葡萄糖注射液适量，置25ml容量瓶中，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的膜滤过，即得样品溶液；

4）测定：分别精密量取对照品溶液与样品溶液各15μl、注入色谱仪，记录色谱图。结果见表3

表3

批号	丹参素含量mg/ml	塔板数	分离度
				20130901-S	0.21mg/ml	1600	2.0
20130902-S	0.20mg/ml	1657	2.0
				20130903-S	0.20mg/ml	1652	1.9

Claims (1)

1.一种参芎葡萄糖注射液中的丹参素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，以0.03%-0.05%三氟乙酸水溶液为流动相B，按下表中规定时行梯度洗脱；流速为每分钟0.5-1.5ml，柱温20-50℃；检测波长为258-290nm，理论塔板数按丹参素钠峰计算应不低于1300；

时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 0－65 2→30 98→70 65－66 30→2 70→98 66－80 2 98

2）对照品溶液制备：取丹参素钠对照品、原儿茶醛对照品、迷迭香酸对照品和丹酚酸B对照品适量，精密称定，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液制成每1ml含丹参素钠0.15-0.25mg、原儿茶醛30-70μg、迷迭香酸30-70μg和丹酚酸B30-70μg的混合溶液，即得对照品溶液；

3）样品溶液制备：精密量取参芎葡萄糖注射液适量，置10-25ml容量瓶中，加0.2%冰醋酸的10%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的膜滤过，即得样品溶液；

4）测定：分别精密量取对照品溶液与样品品溶液各5-20μl、注入色谱仪，记录色谱图。