CN103656630B - 一种提纯动物药材中纤溶酶并制备成中药组合物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用膜分离技术分离提纯动物药材中纤溶酶成分，以及利用该成分制备中药组合物的制备方法，其方法步骤：（1）称取蚂蚁或土鳖虫适量，粉碎至形成粗粉；（2）加6倍量水浸泡，搅拌至匀浆，取匀浆液置恒温水浴、搅拌；（3）离心，弃去沉淀；（4）取离心液经孔径膜过滤；（5）滤液经超滤器（截留分子段3000-20000），超滤浓缩约呈1:1（即药材与药液体积比），浓缩液冷冻干燥成粉，备用。（6）取冻干粉可单独使用或与其他成分配合成组合物再使用。本发明提供了一种新的方法分离提纯动物药材中纤溶酶成分，提取工艺简易，效果显著。
Description
技术领域
本发明涉及利用膜分离技术分离提纯动物药材中纤溶酶成分，以及利用该成分制备中药组合物的制备方法。
技术背景
纤溶系统是指纤溶酶原经特异性激活物作用转化为纤溶酶，导致体内纤维蛋白不断溶解的反应体系，主要包括纤溶酶原、纤溶酶、纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制剂。
肝纤维化是肝脏对各种因素所致的慢性损伤的一种修复反应，其特征是细胞外基质（ECM）在肝内过度沉积，而ECM的降解受多种因素的调控，近年有研究显示纤溶酶原激活系统可通过调节基质金属蛋白酶（MMPs）的活性参与ECM的降解过程。
纤溶酶可以直接降解纤维蛋白原和纤维蛋白，还可以降解多种ECM成分，包括纤维连接蛋白、层连蛋白等。此外，纤溶酶又是基质金属蛋白酶（MMPs）活化所必需的，MMPs是最重要的一类降解ECM的蛋白酶类。
肝纤维化属中医“癥结痞块”范畴，中医认为肝血瘀阻是基本病机，用药以活血化瘀为主的治疗原则；现代研究显示纤溶酶原激活系统与肝纤维化有直接关系，活血化瘀中药能明显影响机体纤溶系统，有抗凝血和促进纤维蛋白溶解的功效。因此我们选择中药中动物药材提取纯化具有纤溶活性的成分，研究其在抗肝纤维化的药物领域的开发。长期以来土鳖虫、蚂蚁制剂产品，传统和常规的制备方法是以水煎煮或醇回流提取、浓缩、烘干的制法，而且缺少可靠合理的工艺评估的考察指标，同时由于高温等因素对有效成分影响较大，我们选择采用匀浆常温提取、超滤截留浓缩的制备方法，可以极大的保留药材中动物蛋白有效成分。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种利用膜分离技术分离提纯动物药材中纤溶酶成分，以及利用该成分制备中药组合物的制备方法，其方法步骤：
1、 称取蚂蚁或土鳖虫适量，粉碎至形成粗粉；
2、 加6倍量水浸泡，搅拌至匀浆，取匀浆液置恒温水浴、搅拌；
3、 离心，弃去沉淀；
4、 取离心液经孔径膜过滤；
5、 滤液经超滤器（截留分子段3000-20000），超滤浓缩约呈1:1（即药材与药液体积比），浓缩液冷冻干燥成粉，备用。
6、 取冻干粉可单独使用或与其他成分配合成组合物再使用。
本发明有益效果：提供了一种新的方法分离提纯动物药材中纤溶酶成分，提取工艺简易，效果显著。
附图说明
图1为溶斑标记对照图。采用以尿激酶为对照，于纤维蛋白标准板上，采用本专利公开方法分离、纯化得到的纤溶酶样品溶圈面积显著。标记为5、6、7分别以尿激酶对照的溶斑面积的2.4、4.6、6.3倍。其中：溶斑标记1、2、3为药材提纯前的样品（用量比例为1:2:3）；标记4为尿激酶对照；标记5、6、7为提纯药材中纤溶酶的样品（用量同标记1、2、3，比例为1:2:3）；标记8、9为阴性对照。
具体实施方式
实施例1：
取蚂蚁100g，粉碎成粗粉，加6倍量水浸泡，搅拌至匀浆，取匀浆液置恒温水浴（37℃）、搅拌（100转/分）10小时，离心，弃去沉淀，取离心液先经1μm孔径膜预滤，滤液经0.2μm孔径膜滤过除菌，除菌滤液再经超滤器（截留分子段3000-20000），超滤浓缩约呈1:1（即药材与药液体积比），浓缩液冷冻干燥成粉，备用。取冻干粉配制成每1ml相当蚂蚁0.1g溶液，以尿激酶溶液为对照液，用纤维蛋白平板法测定，结果见表1。
表1 蚂蚁纤溶活性测定结果
| 样 品 | 溶圈面积（mm2） |
| 尿激酶 | 110.74 |
| 蚂蚁供试液 | 106.10 |
实施例2：
取土鳖虫100g，操作工艺同实施例1，结果见表2。
表2：土鳖虫的纤溶活性检测结果
| 样品 | Ⅰ | 尿激酶 |
| 溶圈面积(mm2 ) | 132.25 | 136.89 |
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但实施例和附图并不是用来限定本发明，任何熟悉此技艺者，在不脱离本发明之精神和范围内，自当可作各种变化或润饰，同样属于本发明之保护范围。因此本发明的保护范围应当以本申请的权利要求所界定的为准。
Claims (1)
1.一种提纯动物药材中纤溶酶并制备成中药组合物的方法，其特征在于：
利用膜分离技术分离提纯动物药材中纤溶酶成分，以及利用该成分制备中药组合物；
其方法步骤：
(一) 称取蚂蚁或土鳖虫，粉碎至形成粗粉；
(二) 加6倍量水浸泡，搅拌至匀浆，取匀浆液置恒温水浴、搅拌；
(三) 离心，弃去沉淀；
(四) 取离心液先经1μm孔径膜预滤，滤液经0.2μm孔径膜滤过除菌；
(五) 滤液经超滤器，超滤浓缩后，药材与药材液体积比呈1:1，浓缩液冷冻干燥成粉，备用；
(六) 取冻干粉与其他成分配合成组合物再使用；
所述超滤器的截留分子段3000-20000。
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