CN103627510A - 一种从香菇中综合获取有效成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从香菇中综合获取有效成分的方法，步骤：1）将香菇粉碎，高压处理；2）加入正己烷或石油醚中，提取，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；3)将脂肪酸提取液浓缩得到香菇的脂肪酸提取物；将提取后的残渣加入木瓜蛋白酶的水溶液，超声处理，再反应，得到分解液；4）将分解液浓缩，得到香菇多糖和氨基酸的提取物；5）将香菇多糖和氨基酸的提取物用蒸馏水溶解；6）超滤，得到截留量为8000-14000的溶液和滤过液；浓缩，得到氨基酸的提取物；7）将截留的溶液浓缩，加入乙醇沉淀，离心分离弃上清，收集沉淀物得到香菇的多糖提取物。本发明对香菇中脂肪酸、多糖和氨基酸的提取量较传统方法有显著提高。
Description
技术领域
本发明涉及一种从香菇中综合获取有效成分的方法。
背景技术
香菇是一种真菌，属担子菌纲伞菌目口蘑科香菇属。我国是世界上香菇生产大国，产量占世界总产的七成。现代医学认为香菇“为补偿维生素D的药剂，预防佝偻病，并治贫血”。古书中也对香菇有记载：《本草纲目》中记载香菇“干平、无毒”；《医林纂要》中香菇“甘、寒”；《日用本草》中香菇“益气、不饥、治风破血”；《本经逢原》中香菇“大益胃气”。
香菇中含有很多的营养成分具有一定的药用价值，科学研究表明，香菇具有抗癌、抗氧化、降低胆固醇活性、抗菌抗病毒、抑制和免疫调节的生物活性。
香菇中含有少量的脂肪酸，但是不饱和脂肪酸的含量很高，亚油酸含量达90%，对防治心血管病有很好的作用。
香菇干品中的碳水化合物含量高达50%，多糖已证实有很好的抗癌效用，研究表明香菇多糖可以增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力，提高机体抗肿瘤功能，是理想的免疫促进剂。
香菇中含有较高含量的氨基酸，人体必需的八种氨基酸中，香菇含有七种，因此可以作为补充氨基酸的首选食品。氨基酸对防止肝硬化、软骨病、降低胆固醇、降血压有一定的功效。
目前提取脂肪酸的方法主要采用石油醚或正己烷利用索氏提取器提取、超声波提取或微波提取，提取多糖和氨基酸主要采取水提法，目前的方法只是采用单一的方法进行提取，提取率较低，并且目前的方法没有对香菇中的物质进行综合的利用，造成了一定程度上的浪费。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种从香菇中综合获取有效成分的方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）将香菇子实体粉碎，在表压0.1～0.25Mpa、109～135℃的条件下，在高压蒸汽灭菌锅中处理1～3h；
2）采用以下三种方法之一种进行操作：
方法一：按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:10～20的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用索氏提取器，在60℃～70℃，提取6h～8h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
方法二：按香菇子实体粉末与石油醚质量比为1:10～20的比例，将步骤（1）获得的产物加入石油醚中，在超声波清洗仪中，在超声频率为80～100Hz条件下，提取时间为1h～3h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
方法三：按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:10～20的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用微波炉，在微波功率为500W～800W的条件下，提取40s～70s，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3)将所述脂肪酸提取液在30～50℃、表压-0.06～-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩得到香菇的脂肪酸提取物；
将所述提取后的残渣加入15～20质量倍的质量浓度为1.2%～3.0%木瓜蛋白酶的水溶液，在功率90W-200W，超声处理10-30min，再在52℃～70℃，反应6h～8h，得到分解液；
4）将分解液在40～60℃、表压-0.06～-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到香菇多糖和氨基酸的提取物；
5）将所述香菇多糖和氨基酸的提取物用蒸馏水溶解；
6）将步骤5）获得的溶液进行超滤，得到截留量为8000-14000的溶液和滤过液；或将步骤5）获得的溶液进行透析，得到截留量为8000-14000的溶液和透析液；所述滤过液或透析液即为氨基酸溶液，在40～60℃、表压-0.06～-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到氨基酸的提取物；
7）在40℃～60℃的温度和表压-0.06～-0.1MPa的压力下，将所述截留量为8000-14000的溶液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/10～1/4，加入乙醇至乙醇质量浓度到达70%以上进行沉淀，离心分离弃上清，收集沉淀物用无水乙醇进行洗涤脱色3～5次，离心分离，收集二次沉淀物，得到香菇的多糖提取物。
所述步骤1）中高压处理的压力为0.1Mpa，温度为121℃。
本发明在适宜的条件下对原料进行了高压前处理破坏细胞结构，增加脂肪酸、多糖和蛋白质的溶出，超声处理和酶处理又进一步破坏了香菇细胞的细胞壁，加大了多糖和氨基酸的溶出。提取率较高，做到了对香菇中的物质进行综合的利用，减少了浪费。
传统的方法脂肪酸的提取率为1.51μl/g，本发明的方法脂肪酸的提取率增加至19.20μl/g（P=0.004<0.01），传统的方法多糖和氨基酸的提取率分别为10.46mg/g和49.06mg/g，本发明的方法多糖和氨基酸的提取率分别增加至29.74mg/g（P=0.005<0.01）和61.50mg/g（P=0.08）。本发明对香菇中三种有效成分脂肪酸、多糖和氨基酸的提取量较传统方法有显著提高。
附图说明
图1为香菇经传统方法提取和依照本专利方法提取得到的脂肪酸、多糖、氨基酸的得率比较；
图2为香菇经传统方法提取和依照本专利方法提取得到的脂肪酸、多糖、氨基酸提取物的还原力比较。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）取香菇的整个子实体,在电磨中粉碎，取5.00g在高压蒸汽灭菌锅中在表压为100KPa，121℃处理1h；
2）按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:10的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用索氏提取器，在70℃，提取8h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3)将所述脂肪酸提取液在40℃、表压-0.09Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩得到香菇的脂肪酸提取物；
将所述提取后的残渣加入20质量倍的质量浓度为1.2%木瓜蛋白酶的水溶液，在功率200W，超声处理10min，再在52℃，反应8h，得到分解液；
4）将分解液在50℃、表压-0.09Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到香菇多糖和氨基酸的提取物；
5）将所述香菇多糖和氨基酸的提取物用蒸馏水溶解；
6）将步骤5）获得的溶液用分子截留量为8000-14000的透析袋进行透析，重复5次，得到截留量为8000-14000的溶液和透析液；透析液即为氨基酸溶液，在60℃、表压-0.06Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到氨基酸的提取物；干膏得率22.7%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为29.7%；
7）在60℃的温度和表压-0.09MPa的压力下，将截留量为8000-14000的溶液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/6，加入乙醇至乙醇质量浓度到达71%进行沉淀，离心分离弃上清，收集沉淀物用无水乙醇进行洗涤脱色4次，离心分离，收集二次沉淀物，得到香菇的多糖提取物。干膏得率2.17%，用硫酸苯酚法测得香菇多糖的含量为72.2%。
脂肪酸提取物的含量测定：
1）脂肪酸提取物加入到体积浓度为5%的H2SO4-MeOH溶液中，脂肪酸提取物与5%H2SO4-MeOH的料液体积比为1:20，反应温度为60℃，反应时间为8h，得到脂肪酸甲酯化的产物。
2）脂肪酸甲酯化的产物用正己烷萃取，脂肪酸甲酯化产物与正己烷的体积比为1:3，萃取5次，提取物进行合并，脂肪酸提取物在40℃的温度和表压-0.09Mpa的压力范围在旋转蒸发器中进行浓缩至5ml，得香菇脂肪酸甲酯化产物，用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为48.7μl。
实施例2
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）取香菇的整个子实体,在电磨中粉碎，取5.00g在高压蒸汽灭菌锅中在表压为165KPa，109℃处理2h；
2）按香菇子实体粉末与石油醚质量比为1:15的比例，将步骤（1）获得的产物加入石油醚中，在超声波清洗仪中，在超声频率为100Hz条件下，提取时间为2h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3)将所述脂肪酸提取液在40℃、表压-0.09Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩得到香菇的脂肪酸提取物；
将所述提取后的残渣加入17质量倍的质量浓度为2.0%木瓜蛋白酶的水溶液，在功率90W，超声处理30min，再在70℃，反应7h，得到分解液；
4）将分解液在50℃、表压-0.09Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到香菇多糖和氨基酸的提取物；
5）将所述香菇多糖和氨基酸的提取物用蒸馏水溶解；
6）将步骤5）获得的溶液用分子截留量为8000-14000的透析袋进行透析，重复5次，得到截留量为8000-14000的溶液和透析液；透析液即为氨基酸溶液，在40℃、表压-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到氨基酸的提取物；干膏得率27.3%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为22.5%；
7）在40℃的温度和表压-0.1MPa的压力下，将截留量为8000-14000的溶液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/10，加入乙醇至乙醇质量浓度到达80%进行沉淀，离心分离弃上清，收集沉淀物用无水乙醇进行洗涤脱色5次，离心分离，收集二次沉淀物，得到香菇的多糖提取物。干膏得率3.28%，用硫酸苯酚法测得香菇多糖的含量为90.7%。
脂肪酸提取物的含量测定同实施例1：
用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为96.1μl。
实施例3
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）取香菇的整个子实体,在电磨中粉碎，取5.00g在高压蒸汽灭菌锅中在表压为250KPa，135℃处理3h；
2）按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:15的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用微波炉，微波功率为800W，提取时间为40s，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3)将所述脂肪酸提取液在30℃、表压-0.06Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩得到香菇的脂肪酸提取物；
将所述提取后的残渣加入15质量倍的质量浓度为3.0%木瓜蛋白酶的水溶液，在功率150W，超声处理20min，再在52℃，反应6h，得到分解液；
4）将分解液在60℃、表压-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到香菇多糖和氨基酸的提取物；
5）将所述香菇多糖和氨基酸的提取物用蒸馏水溶解；
6）将步骤5）获得的溶液用分子截留量为8000-14000的透析袋进行透析，重复5次，得到截留量为8000-14000的溶液和透析液；透析液即为氨基酸溶液，在50℃、表压-0.09Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到氨基酸的提取物；干膏得率21.3%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为18.6%；
7）在50℃的温度和表压-0.06MPa的压力下，将截留量为8000-14000的溶液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/4，加入乙醇至乙醇质量浓度到达90%进行沉淀，离心分离弃上清，收集沉淀物用无水乙醇进行洗涤脱色3次，离心分离，收集二次沉淀物，得到香菇的多糖提取物。干膏得率1.62%，用硫酸苯酚法测得多糖的含量为91.0%。
脂肪酸提取物的含量测定同实施例1：
用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为85.3μl。
实施例4
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）同实施例2；
2）按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:10的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用索氏提取器，在60℃，提取7h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3)将所述脂肪酸提取液在50℃、表压-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩得到香菇的脂肪酸提取物；
将所述提取后的残渣加入18质量倍的质量浓度为2.0%木瓜蛋白酶的水溶液，在功率170W，超声处理15min，再在60℃，反应7h，得到分解液；
4）将分解液在40℃、表压-0.06Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到香菇多糖和氨基酸的提取物；
5）同实施例2；
6）将步骤5）获得的溶液进行超滤，得到截留量为8000-14000的溶液和滤过液；所述滤过液为氨基酸溶液，在50℃、表压-0.09Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到氨基酸的提取物；氨基酸的提取物干膏得率22.0%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为23.9%；
7）同实施例2。
香菇的多糖提取物干膏得率2.64%，用硫酸苯酚法测得多糖的含量为77.3%；
脂肪酸提取物的含量测定同实施例1：
用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为88.4μl。
实施例5
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）同实施例2；
2）按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:20的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用索氏提取器，在65℃，提取6h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3）-5）同实施例2；
6）将步骤5）获得的溶液进行超滤，得到截留量为8000-14000的溶液和滤过液；所述滤过液为氨基酸溶液，在40℃、表压-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到氨基酸的提取物；氨基酸的提取物干膏得率24.8%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为22.6%；
7）同实施例2。
香菇的多糖提取物干膏得率1.83%，用硫酸苯酚法测得多糖的含量为80.6%；
脂肪酸提取物的含量测定同实施例1：
用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为72.8μl。
实施例6
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）同实施例2；
2）按香菇子实体粉末与石油醚质量比为1:10的比例，将步骤（1）获得的产物加入石油醚中，在超声波清洗仪中，在超声频率为80Hz条件下，提取时间为3h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3）-5）同实施例2；
6）将步骤5）获得的溶液进行超滤，得到截留量为8000-14000的溶液和滤过液；所述滤过液为氨基酸溶液，在60℃、表压-0.06Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到氨基酸的提取物；氨基酸的提取物干膏得率21.9%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为20.3%；
7）同实施例2。
香菇的多糖提取物干膏得率2.47%，用硫酸苯酚法测得多糖的含量为75.9%；
脂肪酸提取物的含量测定同实施例1：
用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为89.7μl。
实施例7
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）同实施例2；
2）按香菇子实体粉末与石油醚质量比为1:20的比例，将步骤（1）获得的产物加入石油醚中，在超声波清洗仪中，在超声频率为90Hz条件下，提取时间为1h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3）-7）同实施例2。
氨基酸的提取物干膏得率26.1%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为21.5%；
香菇的多糖提取物干膏得率2.89%，用硫酸苯酚法测得多糖的含量为73.5%；
脂肪酸提取物的含量测定同实施例1：
用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为84.0μl。
实施例8
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）同实施例1；
2）按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:10的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用微波炉，在微波功率为500W的条件下，提取70s，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3）-7）同实施例2。
氨基酸的提取物干膏得率25.7%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为24.1%；
香菇的多糖提取物干膏得率2.34%，用硫酸苯酚法测得多糖的含量为82.6%；
脂肪酸提取物的含量测定同实施例1：
用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为90.5μl。
实施例9
一种从香菇中综合获取有效成分的方法，包括如下步骤：
1）同实施例1；
2）按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:20的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用微波炉，在微波功率为600W的条件下，提取60s，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3）-7）同实施例2。
氨基酸的提取物干膏得率23.4%，用茚三酮比色法测得氨基酸的含量为19.6%；
香菇的多糖提取物干膏得率2.13%，用硫酸苯酚法测得多糖的含量为85.2%；
脂肪酸提取物的含量测定同实施例1：
用气相色谱测得脂肪酸甲酯的量为87.9μl。
本发明人将利用上述本发明提供的方法实施例2及现有提取方法从香菇中提取脂肪酸、多糖、氨基酸的得率绘制成图，结果见图1。注：图1中脂肪酸的含量单位为μl/g；多糖和氨基酸提取物的得率=干膏得率*含量*1000。
另外，本发明人对图1中提取的脂肪酸、多糖和氨基酸提取物的还原力能力进行了实验，结果见图2。
Claims (2)
1.一种从香菇中综合获取有效成分的方法，其特征包括如下步骤：
1）将香菇子实体粉碎，在表压0.1～0.25Mpa、109～135℃的条件下，在高压蒸汽灭菌锅中处理1～3h；
2）采用以下三种方法之一种进行操作：
方法一：按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:10～20的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用索氏提取器，在60℃～70℃，提取6h～8h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
方法二：按香菇子实体粉末与石油醚质量比为1:10～20的比例，将步骤（1）获得的产物加入石油醚中，在超声波清洗仪中，在超声频率为80～100Hz条件下，提取时间为1h～3h，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
方法三：按香菇子实体粉末与正己烷质量比为1:10～20的比例，将步骤（1）获得的产物加入正己烷中，用微波炉，在微波功率为500W～800W的条件下，提取40s～70s，过滤，得到脂肪酸提取液和提取后的残渣；
3)将所述脂肪酸提取液在30～50℃、表压-0.06～-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩得到香菇的脂肪酸提取物；
将所述提取后的残渣加入15～20质量倍的质量浓度为1.2%～3.0%木瓜蛋白酶的水溶液，在功率90W-200W，超声处理10-30min，再在52℃～70℃，反应6h～8h，得到分解液；
4）将分解液在40～60℃、表压-0.06～-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到香菇多糖和氨基酸的提取物；
5）将所述香菇多糖和氨基酸的提取物用蒸馏水溶解；
6）将步骤5）获得的溶液进行超滤，得到截留量为8000-14000的溶液和滤过液；或将步骤5）获得的溶液进行透析，得到截留量为8000-14000的溶液和透析液；所述滤过液或透析液即为氨基酸溶液，在40～60℃、表压-0.06～-0.1Mpa的条件下，在旋转蒸发器中进行浓缩，得到氨基酸的提取物；
7）在40℃～60℃的温度和表压-0.06～-0.1MPa的压力下，将所述截留量为8000-14000的溶液置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/10～1/4，加入乙醇至乙醇质量浓度到达70%以上进行沉淀，离心分离弃上清，收集沉淀物用无水乙醇进行洗涤脱色3～5次，离心分离，收集二次沉淀物，得到香菇的多糖提取物。
2.根据权利要求1所述的一种从香菇中综合获取有效成分的方法，其特征在于所述步骤1）中高压处理的压力为0.1Mpa，温度为121℃。
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