CN103626845B - 作为糖原磷酸化酶抑制剂的芳基并吡咯-2-甲酰胺二肽衍生物、其制备方法及医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类新型的芳基并吡咯-2-甲酰胺二肽衍生物(I)、其制备方法及其医药用途。该类化合物具有糖原磷酸化酶抑制作用，可用于制备抗糖尿病及其并发症药物、抗脑缺血药物、抗心血管疾病药物、降血脂药物、减肥药物、抗动脉粥样硬化药物、治疗代谢综合症药物或抗肿瘤药物。本发明还涉及这类化合物的制备方法以及含有它们的药物制剂。
Description
技术领域
本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类新型的芳基并吡咯-2-甲酰胺二肽类糖原磷酸化酶抑制剂。该类化合物可用于制备抗糖尿病及其并发症药物、抗脑缺血药物、抗心血管疾病药物、降血脂药物、减肥药物、抗动脉粥样硬化药物、治疗代谢综合症药物或抗肿瘤药物。本发明还涉及这类化合物的合成方法以及含有它们的药物组合。
背景技术
能量代谢主要包括脂肪代谢、糖代谢和蛋白质代谢等，其中，糖代谢是能量代谢的重要组成部分。众所周知，糖代谢异常是糖尿病等代谢综合征的主要病理因素，并且，与糖代谢相关的药物靶点已成为抗糖尿病药物研究的关注焦点。另一方面，越来越多的证据表明，糖代谢异常与缺血性心脑损伤(导致心绞痛、心肌梗死和中风等)、肿瘤、前列腺肥大和缺血性神经退行性等重大疾病也有着密切联系(中国药科大学学报，2006，37，1)。
糖原代谢是糖代谢的一个重要组成部分，尤其是在某些疾病状态下(如禁食高血糖和缺血性损伤等)，糖原代谢异常成为重要的病理因素。从形式上来讲，糖原是体内葡萄糖的贮存形式，然而，糖原的功能不仅局限于葡萄糖的储存，这是因为糖原的代谢中间产物可以直接参与到糖的有氧代谢和无氧代谢中去。糖原磷酸化酶(Glycogenphosphorylase，GP)是催化糖原降解的第一步关键酶，该酶催化糖原的磷酸解，产生的葡萄糖-1-磷酸在磷酸葡萄糖变位酶催化下转变为葡萄糖-6-磷酸，后者或是在葡萄糖-6-磷酸酶催化下生成葡萄糖，为机体组织提供葡萄糖，或是直接进入无氧代谢和有氧代谢途径以参与能量供应。由于糖原磷酸化酶是糖原代谢中的一个关键因子，因此，对它的药理性抑制有可能用于治疗与糖原过度降解相关的疾病，如糖尿病、缺血性心肌损伤和肿瘤等(Curr.Protein.Pept.Sci.，2002，3，561；Am.J.Physiol.Heart.Girc.Physiol.，2004，286，H1177)。
此外，高血压及其相关的病理改变例如动脉粥样硬化、高脂血症以及高胆固醇血症等都与体内升高的胰岛素水平有关。抑制糖原磷酸化酶可有效降低胰岛素水平，因此可用于治疗高胆固醇血症、高胰岛素血症、高脂血症、动脉粥样硬化及心肌缺血。
近年来，研发新型糖原磷酸化酶抑制剂这一领域已受到广泛关注。例如，美国专利申请No.6,297,269和欧洲专利申请No.EP0832066记载了作为糖原磷酸化酶抑制剂的取代的N-(吲哚-2-羰基)酰胺及其衍生物，美国专利申请No.6,107,329记载了作为糖原磷酸化酶抑制剂的取代的N-(吲哚-2-羰基)甘氨酰胺及其衍生物，欧洲专利申请No.WO2006059163记载了作为糖原磷酸化酶抑制剂的吡咯并吡啶-2-甲酸酰胺衍生物，美国专利No.5,952,322记载了利用糖原磷酸化酶抑制剂来降低非心脏缺血性组织损伤的方法。
发明内容
本发明首次公开了式(I)所示的具有药用价值的芳基并吡咯-2-甲酰胺二肽衍生物、其制备方法及医药用途，包括在制备抗糖尿病及其并发症药物、抗脑缺血药物、抗心血管疾病药物、降血脂药物、减肥药物、抗动脉粥样硬化药物、治疗代谢综合症药物和抗肿瘤药物方面的用途。尤其是式(I)所示的化合物是新型的糖原磷酸化酶抑制剂，因此可以用于治疗与糖原代谢异常相关的疾病，这些疾病包括：糖尿病(特别是2型糖尿病)及其并发症、缺血性心脑血管疾病(特别是心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、中风、脑梗死或缺血性神经退行性疾病等)、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、代谢综合征、肥胖、禁食高血糖症和肿瘤。此外，本发明还提供一种含有式(I)所示化合物的药物制剂。
本发明涉及式(I)所示的化合物及其药学上可接受的盐或酯：
其中：
X1、X2、X3和X4全为C或者X1、X2、X3和X4之一为N而其他的必须为C；
R1和R1’各自独立代表H、卤素、羟基、氰基、C0-4烷基、C1-4烷氧基、氟代甲基、二氟甲基、三氟甲基、乙烯基、乙炔基；
R2和R3各自独立代表天然或非天然α氨基酸的侧链；
R4代表羟基、氨基。
上述化合物中优选的化合物为：
X1、X2、X3和X4全为C；
R1和R1’各自独立为H、卤素、氰基；
R2和R3各自独立代表天然或非天然α氨基酸的侧链；
R4代表羟基、氨基。
更为优选的化合物是：
本发明所述的化合物可采用已报道的工艺方法制备，也可以采用下述方法制备得到：
当R4为羟基时，制备步骤包括：
a)按照常规的二肽合成方法，将氨基端用叔丁氧羰基(Boc)或芴甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸与羧基端用酯保护的氨基酸，在有机碱或无机碱的存在下，用缩合试剂进行酰胺化缩合。缩合试剂可以采用常规的酰胺化缩合试剂，如1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、O-苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、1-丙基磷酸三环酸酐(T3P)。所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，所采用的有机碱为N，N-二异丙基乙胺或三乙胺；
b)将a产物溶解在有机溶剂中，加入脱保护试剂脱去氨基端的保护，温度为0℃至回流。其中，氨基端用叔丁氧羰基(Boc)保护的a产物用三氟乙酸脱去保护，氨基端用芴甲氧羰基(Fmoc)保护的a产物用哌啶脱去保护。所采用的溶剂可以是乙腈、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己烷、环己烷、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用乙腈或二氯甲烷作为溶剂；
c)将取代的芳基并吡咯-2-羧酸，与b产物溶解在有机溶剂中，加入缩合试剂与有机胺或无机碱，反应1-72小时，温度为0℃至45℃。溶剂一般选择惰性溶剂，特别是非质子性溶剂，包括乙腈、氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基甲酰胺、甲苯、正己烷、环己烷、四氢呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用二氯甲烷、1，2-二氯乙烷或N，N-二甲基甲酰胺。缩合试剂可以采用常规的酰胺化缩合试剂，如1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、O-苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、1-丙基磷酸三环酸酐(T3P)。所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，所采用的有机碱为N，N-二异丙基乙胺或三乙胺；
d)将c产物溶解在有机溶剂中，加入碱溶液进行水解反应，温度为0℃至回流。所采用的溶剂可以是甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己烷、环己烷、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用甲醇或四氢呋喃作为溶剂。所采用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂。
当R4为氨基时，制备步骤包括：
a)按照常规的二肽合成方法，将氨基端用叔丁氧羰基(Boc)或芴甲氧羰基(Fmoc)保护的氨基酸与各种氨基酸酰胺化合物，在有机碱或无机碱的存在下，用缩合试剂进行酰胺化缩合。缩合试剂可以采用常规的酰胺化缩合试剂，如1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、O-苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、1-丙基磷酸三环酸酐(T3P)。所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，所采用的有机碱为N，N-二异丙基乙胺或三乙胺；
b)将a产物溶解在有机溶剂中，加入脱保护试剂脱去氨基端的保护，温度为0℃至回流。其中，氨基端用叔丁氧羰基(Boc)保护的a产物用三氟乙酸脱去保护，氨基端用芴甲氧羰基(Fmoc)保护的a产物用哌啶脱去保护。所采用的溶剂可以是乙腈、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己烷、环己烷、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用乙腈或二氯甲烷作为溶剂；
c)将取代的芳基并吡咯-2-羧酸，与b产物溶解在有机溶剂中，加入缩合试剂与有机胺或无机碱，反应1-72小时，温度为0℃至45℃。溶剂一般选择惰性溶剂，特别是非质子性溶剂，包括乙腈、氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基甲酰胺、甲苯、正己烷、环己烷、四氢呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂，优先采用二氯甲烷、1，2-二氯乙烷或N，N-二甲基甲酰胺。缩合试剂可以采用常规的酰胺化缩合试剂，如1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、O-苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、1-丙基磷酸三环酸酐(T3P)。所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，所采用的有机碱为N，N-二异丙基乙胺或三乙胺。
本发明还包括药物制剂，该制剂包含作为活性剂的通式(I)化合物或其药用盐、酯、或药学上可接受的载体。
上述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，是指一种或几种惰性的、非毒性的固体或液体填充物、稀释剂，助剂等，它们不逆向与活性化合物或病人发生作用。
本发明组合物的剂型可以是片剂、胶囊、丸剂、栓剂、软胶囊、口服液、混悬剂、注射液等药剂学上常用的剂型。
口服用药片和胶囊含有传统的赋形剂如填充物、稀释剂、润滑剂、分散剂以及粘合剂。
本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。
以上活性剂的剂量将因配方而异。
一般地，已证明有利的量，为达到所需结果，每千克每24小时给药的式(1)化合物的总量为约0.01-800mg，优选的总量为0.1-100mg/kg。如果必要，以几次单剂量的形式给药。然而，如果必要，也可以偏离上述用量，即这取决于待治疗的受试者的类型和体重、个体对药物的行为、疾病的性质和严重性、制剂和给药的类型、以及给药时间和间隔。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
图1是表示当R4为羟基时，本发明部分衍生物的制备过程。
图2是表示当R4为氨基时，本发明部分衍生物的制备过程。
在图1和图2中，X1、X2、X3、X4、R1、R1’、R2、R3、R4的定义如上述式(I)中所定义，R5代表各种氨基酸的N端保护基，如叔丁氧羰基(Boc)或芴甲氧羰基(Fmoc)，R6代表各种氨基酸的C端保护基，如甲基、乙基。
具体实施方式：
下面通过实施例具体说明本发明的内容。在本发明中，以下所述的实例是为了更好的阐述本发明，并不是用来限制本发明的范围。
以下通过实施例进一步说明本发明的实施
实施例1
(S)-2-(2-叔丁氧羰基氨基-3-苯丙酰胺基)乙酸甲酯
将N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸(500mg，1.88mmol)和甘氨酸甲酯盐酸盐(236mg，1.88mmol)溶于干燥的二氯甲烷(100mL)中，冰浴下加入EDCI(540mg，2.82mmol)，HOBt(381mg，2.82mmol)，DMAP(24mg，0.19mmol)和DIPEA(1.0mL，5.72mmol)，氮气保护下室温搅拌3小时。反应液依次以1N盐酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤除去干燥剂，浓缩，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯4/1，V/V)得白色固体(400mg，64％)。ESI-MSm/z：359[M+Na]+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：8.38(brs，1H)，7.29(s，5H)，6.93(d，J=8.8Hz，1H)，4.23(brs，1H)，3.93(dd，J=5.6，17.6Hz，1H)，3.86(dd，J=5.6，17.6Hz，1H)，3.02(d，J=13.2Hz，1H)，2.75(t，J=11.6Hz，1H)，1.30(s，9H).
(S)-2-(2-氨基-3-苯丙酰胺基)乙酸甲酯
将(S)-2-(2-叔丁氧羰基氨基-3-苯丙酰胺基)乙酸甲酯(400mg，1.19mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，冰浴下滴加三氟醋酸(0.88ml，11.9mmol)，滴毕维持此温度搅拌2小时。减压蒸除反应液，残渣溶于乙酸乙酯，依次以饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤除去干燥剂，浓缩，得到(S)-2-(2-氨基-3-苯丙酰胺基)乙酸甲酯粗品，此粗品无需纯化可直接用于下一步反应。
(S)-2-[2-(5-氯-1H-吲哚-2-酰胺)-3-苯丙酰胺基]乙酸甲酯
将5-氯吲哚-2-甲酸(124mg，0.63mmol)、和(S)-2-(2-氨基-3-苯丙酰胺基)乙酸甲酯(150mg，0.63mmol)溶于干燥的二氯甲烷(6mL)中，冰浴下加入1-丙基磷酸三环酸酐的乙酸乙酯溶液(50wt.％，0.38mL，1.26mmol)，和DIPEA(0.33mL，1.89mmol)，氮气保护下室温搅拌3小时。反应液依次以1N盐酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，有机相用无水Na2SO4干燥。过滤除去干燥剂，浓缩，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯2/1，V/V)得白色固体(100mg，38％)。
ESI-MSm/z：414[M+H]+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：11.70(s，1H)，8.76(d，J=8.4Hz，1H)，8.62(brs，1H)，7.73(s，5H)，7.36-7.41(m，3H)，7.13-7.27(m，5H)，4.80(t，J=8.0Hz，1H)，3.91(d，J=4.8Hz，1H)，3.65(s，3H)，3.16(d，J=11.2Hz，1H)，3.00(t，J=11.2Hz，1H).
(S)-2-[2-(5-氯-1H-吲哚-2-酰胺)-3-苯丙酰胺基]乙酸
将(S)-2-[2-(5-氯-1H-吲哚-2-酰胺)-3-苯丙酰胺基]乙酸甲酯(100mg，0.24mmol)溶于四氢呋喃(8ml)溶液中，滴加2N氢氧化锂水溶液(0.6mL)，滴毕室温搅拌2h。反应液用1N盐酸水溶液中和，乙酸乙酯萃取。有机层依次以饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤除去干燥剂，浓缩，得白色固体(90mg，94％)。
ESI-MSm/z：400[M+H]+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：11.69(s，1H)，8.75(d，J=12.0Hz，1H)，8.45(t，J=4.8Hz，1H)，7.71(d，J=2.4Hz，1H)，7.35-7.40(s，5H)，7.36-7.41(m，2H)，7.13-7.25(m，4H)，4.78(m，1H)，3.80(d，J=8.4Hz，1H)，3.13-3.19(m，1H)，2.98(t，J=14.8Hz，1H).
实施例2
N-叔丁氧羰基-L-苯丙酰胺
将N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸(5.04g，19mmol)与EDCI(5.47g，28.5mmol)，HOBt(3.85g，28.5mmol)溶于干燥的四氢呋喃(50mL)中，冰浴下加入质量分数为28％的氨水溶液(1.46mL，38mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。反应液以乙酸乙酯稀释，依次以1N盐酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤除去干燥剂，浓缩，快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯2/1，V/V)得灰白色固体(2.31g，46％)。
ESI-MSm/z：303[M+K]+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：7.24-7.36(m，6H)，7.01(s，1H)，6.79(d，J=11.6Hz，1H)，4.02-4.12(m，1H)，2.95(dd，J=12.4，5.6Hz，1H)，2.72(t，J=15.6Hz，1H)，1.30(s，9H).
L-苯丙酰胺
将N-叔丁氧羰基-L-苯丙酰胺(1.8g，6.8mmol)溶于二氯甲烷(50mL)，冰浴下，缓慢滴加新鲜制备的氯化氢的二氯甲烷溶液(2N，34mL)，室温搅拌过夜。次日，将反应液过滤，滤饼以二氯甲烷洗涤，真空干燥得白色固体(1.28g，94％)。
ESI-MSm/z：165[M+H]+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：8.30(s，3H)，8.01(s，1H)，7.52(s，1H)，7.26-7.35(m，5H)，3.97(t，J=8.8Hz，1H)，3.00-3.14(m，2H).
(R)-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰氨基]-3-苯基丙酸酰胺
将N-叔丁氧羰基-甘氨酸(0.88g，5.33mmol)溶于干燥的DMF(10mL)中，冰浴下加入EDCI(1.44g，7.5mmol)，HOBt(1g，7.5mmol)，DIPEA(3.5mL，20mmol)，氮气保护下保持0℃搅拌30分钟。然后分批加入L-苯丙酰胺(0.82g，5mmol)，氮气保护下室温搅拌过夜。减压蒸干溶剂，残渣以乙酸乙酯稀释，依次以1N盐酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤除去干燥剂，浓缩，快速柱层析(二氯甲烷：甲醇：9/1，V/V)得白色固体(1.02g，63％)。
ESI-MSm/z：344[M+Na]+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：7.88(d，J=11.2Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.18-7.27(m，5H)，7.12(s，1H)，6.94(t，J=8.0Hz，1H)，4.38-4.45(m，1H)，3.57(ddd，J=8.0，26，53.2Hz，1H)，3.41(ddd，J=8.0，26，53.2Hz，1H)，2.99(dd，J=6.4，18.4Hz，1H)，2.79(dd，J=12.0，18.0Hz，1H)，1.37(s，9H).
(R)-[2-氨基乙酰氨基]-3-苯基丙酸酰胺
将(R)-[2-(叔丁氧羰基氨基)乙酰氨基]-3-苯基丙酸酰胺(320mg，1mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，冰浴下，缓慢滴加新鲜制备的氯化氢的二氯甲烷溶液(2N，5mL)，滴毕维持此温度搅拌2小时。将反应液过滤，滤饼以二氯甲烷洗涤，真空干燥得(R)-[2-氨基乙酰氨基]-3-苯基丙酸酰胺粗品，此粗品无需纯化可直接用于下一步反应。
(R)-[2-(5-氯-1H-吲哚-2-酰胺)乙酰氨基]-3-苯基丙酸酰胺
将5-氯吲哚-2-甲酸(182mg，0.93mmol)溶于干燥的DMF(8mL)中，冰浴下加入EDCI(245mg，1.28mmol)，HOBt(173mg，1.28mmol)和DIPEA(0.60mL，3.4mmol)，氮气保护下保持0℃搅拌30分钟。然后滴加(R)-[2-氨基乙酰氨基]-3-苯基丙酸酰胺(206mg，0.93mmol)的DMF溶液5mL，氮气保护下室温搅拌过夜。减压蒸干溶剂，残渣以乙酸乙酯稀释，依次以1N盐酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。过滤除去干燥剂，浓缩，白色固体析出，过滤，滤饼以乙酸乙酯反复洗涤，真空干燥得白色固体(0.18g，48％)。
ESI-MSm/z：399[M+H]+.
1H-NMR(d6-DMSO，400MHz)：11.91(s，1H)，8.99(t，J=6.0Hz，1H)，8.23(d，J=8.4Hz，1H)，7.70(d，J=2.0Hz，1H)，7.53(s，1H)，7.45(d，J=8.8Hz，1H)，7.14-7.25(m，8H)，4.41-4.47(m，1H)，3.95(ddd，J=6.0，22.4，64.4Hz，1H)，3.79(ddd，J=6.0，22.4，64.4Hz，1H)，3.03(dd，J=4.4，13.6Hz，1H)，2.84(dd，J=9.2，13.6Hz，1H).
体外糖原磷酸化酶抑制活性试验：
试剂的配制：1)显色液的配制：称量钼酸铵5g，溶解于500ml1MHCl中，用搅拌器搅拌，至全部溶解后在加入孔雀绿190mg，继续搅拌至全部溶解，并用锡箔纸避光；2)缓冲液的配制：①精密称量Hepes0.5958g，溶于5mlH2O中，用10MNaOH调PH至7.2，配制成终浓度为0.5M的Hepes；②精密称量KCl0.3728g，溶于5mlH2O中，配制成终浓度为1M的KCl；③精密称量MgCl20.0255g，溶于1mlH2O中，配制成终浓度为125mM的MgCl2；④精密称量EGTA0.0476g，溶于5mlH2O中，用10MNaOH调PH至7.0，配制成终浓度为25mM的EGTA；⑤精密称量G-1-P0.0152g，溶于10mlH2O中，配制成终浓度为5mM的G-1-P；⑥精密称量glycogen10mg，溶于1mlH2O中，配制成终浓度为10mg/ml的glycogen；3)阳性药caffeine溶液的配制：将caffeine溶于10mlH2O配制0.5、5、50和500μM的溶液；4)配制GPa溶液：取1μl的GPa加入到100μl反应体系中，终浓度为250ng/100μl；5)待测试化合物溶液的配制：将待测试化合物溶于DMSO配制成浓度为10mM溶液，取适量化合物溶液加入到反应体系中至不同终浓度。
测定rabbit肌糖原磷酸化酶活性的量效曲线：通过读取不同浓度的GPa加入显色液后的在655nm下的OD值，来测定其量效曲线。由量效曲线可选择GPa的量为250ng。
实验步骤：1)设计PC(阳性对照)、Blank(空白对照)、阳性药(咖啡因)；2)加反应buffer52μl；3)加测试化合物至终浓度；4)加酶1μl，终浓度为250ng/100μl；5)加显色液150μl；6)30摄氏度条件下反应20分钟；7)在波长655nm条件下比色；8)数据的读取及抑制率的计算：抑制率=[阳性对照-待测样品]/[阳性对照-空白对照]。
测试结果显示，实施例中的化合物IC50<1μm，该药理学数据显示，本发明通式(I)化合物具有糖原磷酸化酶的抑制作用，因此可用于制备抗糖尿病药物、抗脑缺血药物、抗心血管疾病药物、降血脂药物、减肥药物、抗动脉粥样硬化药物或抗肿瘤药物。
Claims (14)
1.如下式所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯：
其中：
X1、X2、X3和X4全为C或者X1、X2、X3和X4之一为N而其他的必须为C；
R1和R1’各自独立代表H、卤素；
R2和R3各自独立代表天然α氨基酸的侧链，所述天然α氨基酸为甘氨酸或苯丙氨酸；
R4代表羟基、氨基。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或酯，其特征在于：
X1、X2、X3和X4全为C；
R1和R1’各自独立为H、卤素；
R2和R3各自独立代表天然α氨基酸的侧链，所述天然α氨基酸为甘氨酸或苯丙氨酸；
R4代表羟基、氨基。
3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐或酯，其中，化合物是下列任一化合物或其药学上可接受的盐或酯：
4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物的制各方法，其特征在于：
当R4为羟基时，制备步骤包括：
a)将氨基端用叔丁氧羰基或芴甲氧羰基保护的氨基酸与羧基端用酯保护的氨基酸，在有机碱或无机碱的存在下，用缩合试剂进行酰胺化缩合；缩合试剂采用1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、N，N′-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯或1-丙基磷酸三环酸酐；所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，所采用的有机碱为N，N-二异丙基乙胺或三乙胺；
b)将步骤a)的产物溶解在有机溶剂中，加入脱保护试剂脱去氨基端的保护，温度为0℃至回流；其中，氨基端用叔丁氧羰基保护的步骤a)的产物用三氟乙酸脱去保护，氨基端用芴甲氧羰基保护的步骤a)的产物用哌啶脱去保护；所采用的溶剂是乙腈、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己烷、环己烷、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂；
c)将取代的芳基并吡咯-2-羧酸，与步骤b)的产物溶解在有机溶剂中，加入缩合试剂与有机胺或无机碱，反应1-72小时，温度为0℃至45℃；溶剂是乙腈、氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基甲酰胺、甲苯、正己烷、环己烷、四氢呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂；缩合试剂采用1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、N，N′-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯或1-丙基磷酸三环酸酐；所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，所采用的有机胺为N，N-二异丙基乙胺或三乙胺；
d)将步骤c)的产物溶解在有机溶剂中，加入碱溶液进行水解反应，温度为0℃至回流；所采用的溶剂是甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己烷、环己烷、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂；所采用的碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂；
当R4为氨基时，制备步骤包括：
a)将氨基端用叔丁氧羰基或芴甲氧羰基保护的氨基酸与各种氨基酸酰胺化合物，在有机碱或无机碱的存在下，用缩合试剂进行酰胺化缩合；缩合试剂采用1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、N，N′-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯或1-丙基磷酸三环酸酐；所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，所采用的有机碱为N，N-二异丙基乙胺或三乙胺；
b)将步骤a)的产物溶解在有机溶剂中，加入脱保护试剂脱去氨基端的保护，温度为0℃至回流；其中，氨基端用叔丁氧羰基保护的步骤a)的产物用三氟乙酸脱去保护，氨基端用芴甲氧羰基保护的步骤a)的产物用哌啶脱去保护；所采用的溶剂是乙腈、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己烷、环己烷、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂；
c)将取代的芳基并吡咯-2-羧酸，与步骤b)的产物溶解在有机溶剂中，加入缩合试剂与有机胺或无机碱，反应1-72小时，温度为0℃至45℃；溶剂是乙腈、氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、N，N-二甲基甲酰胺、甲苯、正己烷、环己烷、四氢呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶剂的混合溶剂；缩合试剂采用1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、N，N′-二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯或1-丙基磷酸三环酸酐；所采用的无机碱为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾，所采用的有机胺为N，N-二异丙基乙胺或三乙胺。
5.如权利要求4所述的方法，其中，当R4为羟基时，步骤b)中所采用的溶剂是乙腈或二氯甲烷。
6.如权利要求4所述的方法，其中，当R4为羟基时，步骤c)中的溶剂是二氯甲烷、1，2-二氯乙烷或N，N-二甲基甲酰胺。
7.如权利要求4所述的方法，其中，当R4为羟基时，步骤d)中的溶剂是甲醇或四氢呋喃。
8.如权利要求4所述的方法，其中，当R4为氨基时，步骤b)中所采用的溶剂是乙腈或二氯甲烷。
9.如权利要求4所述的方法，其中，当R4为氨基时，步骤c)中的溶剂是二氯甲烷、1，2-二氯乙烷或N，N-二甲基甲酰胺。
10.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的如权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的载体。
11.如权利要求1-3中任一项所述的化合物在制备糖原磷酸化酶抑制剂的用途。
12.如权利要求11所述的用途，其特征在于，所述糖原磷酸化酶抑制剂用于预防或治疗糖尿病或其并发症、高血脂症、肥胖、缺血性心脑血管疾病、高胰高血糖素症、胰岛素抵抗、禁食高血糖症、高血压或其并发症、动脉粥样硬化症、代谢综合征或肿瘤。
13.如权利要求12所述的用途，其特征在于：所述糖尿病是2型糖尿病，其并发症包括：糖尿病肾病、糖尿病足、糖尿病神经病变或糖尿病并发的心脑血管疾病。
14.如权利要求12所述的用途，其特征在于：所述缺血性心脑血管疾病是心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、脑缺血、中风、脑梗死或缺血性神经退行性疾病。
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