KR102488529B1 - 신규 헵신 저해제 및 이를 유효성분으로 포함하는 전이성 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

신규 헵신 저해제 및 이를 유효성분으로 포함하는 전이성 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 헵신의 활성부위에 결합하여 그 활성을 억제할 수 있는 신규 화합물 등에 관한 것으로서, 암 세포에서 헵신의 과발현에 의한 기저막 파괴를 저해하고, 특히 암의 전이를 예방 및 치료할 수 있고, 세포의 막단백질인 헵신과 결합하는 특성에 의해 암 진단 및 암 전이 가능성을 예측하는데 이용하여, 종래 항암요법과 함께 암 치료 전략을 다각화할 수 있다.

Description

신규 헵신 저해제 및 이를 유효성분으로 포함하는 전이성 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Noble hepsin inhibitor and pharmaceutical composition for preventing or treating metastatic cancer comprising the same as an active ingredient}
본 발명은 헵신의 활성부위에 결합하여 그 활성을 억제할 수 있는 신규 화합물 등에 관한 것이다.
전립선암은 미국 남성에서 가장 빈번하게 발생되고, 종양과 관련된 남성 사망 원인의 두 번째에 해당되는 암이 다. 최근에 우리나라에서도 식생활의 서구화 및 고령화에 따라 성인 남성의 전립선암의 발생빈도가 증가하는 추세이다. 초기에 전립선암이 전립선 내에만 국한되어 발견되는 경우에는 근치적 전립선 적출술, 방사선 치료, 호르몬 요법을 통하여 효과적으로 암을 제어하여 환자의 생존율은 매우 높다. 하지만 전립선암이 뼈, 림프절, 폐 등의 다른 장기로 전이되는 경우에는 진단과 치료가 용이하지 않아 사망률이 급격하게 증가한다. 임상적으로 혈청 전립성 특이항원 (PSA) 측정이 전립선암의 조기 진단에 사용되고 있지만, PSA는 전립선암의 전이나 재발에 있어서 전이 부위나 치료 효과를 모니터링하는 데에는 효율성이 낮은 상황이다. 치료적인 측면에서는 전이성 전립선암에서 과발현되는 단백질을 타겟으로 한 승인을 받은 약물은 없는 상황이다.
헵신(hepsin)은 90%이상의 전립선암 조직에서 발현되고 전이성 전립선암에서의 mRNA수치가 정상 전립선 또는 전립성 비대증에 비하여 10배 이상 높은 것으로 보고되어 있다. 헵신은 제2형 트립신 유사 세린 프로테아제 (type II trypsin-line serine protease, TTSP)로 417개의 아미노산으로 구성된 단백질로 활성 부위가 세포막 외부에 위치하고 있다. 헵신은 전립선암에 초기 단계에서 과발현되어 전립선암의 진행과 전이가 되는 동안 발현이 높은 상태를 유지하고 있다. 헵신 발현은 기저세포막 (basement membrane)의 파괴 정도와 상관관계가 매우 높은 것을 고려하면 헵신의 활성이 기저세포막 파괴에 영향을 미치는 것으로 보고되고 있다. 동물 실험에서 전립선에 서의 헵신 발현이 높은 경우에는 전립선암이 뼈, 간, 폐로 전이가 되는 것이 보고되었다. 혭신은 pro-HGF를 절단하여 HGF-MET 신호전달체계를 활성화시키는 것으로 알려져 있다.
따라서, 헵신의 활성 부위에 결합하여 저해활성을 갖는 화합물 및 그 약학적으로 허용 가능한 염을 유효 성분으로 함유하는 전립선암 전이 저해 약학 조성물을 제시하고자 한다.
KR 10-2015-0145303
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 헵신의 활성을 저해할 수 있는 신규 화합물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 화합물을 유효성분으로 포함하는 암의 예방, 치료, 또는 진단용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 하기 화학식 A 로 표시되는 화합물을 제공한다:
[화학식 A]
Figure 112020088587417-pat00001
.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 화학식 A에서 X는 C 또는 N 일 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 B로 표시되는 화합물을 제공한다:
[화학식 B]
Figure 112020088587417-pat00002
.
또한, 본 발명은 하기 화학식 C로 표시되는 화합물을 제공한다:
[화학식 C]
Figure 112020088587417-pat00003
.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 화학식 C에서 X는
Figure 112020088587417-pat00004
또는
Figure 112020088587417-pat00005
일 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 D로 표시되는 화합물을 제공한다:
[화학식 D]
Figure 112020088587417-pat00006
.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 화학식 D에서 벤젠 고리 치환기는 para 또는 meta일 수 있고, Xn은
Figure 112020088587417-pat00007
또는
Figure 112020088587417-pat00008
일 수 있으며, Xn은
Figure 112020088587417-pat00009
또는
Figure 112020088587417-pat00010
이고, R은 L-Leu(
Figure 112020088587417-pat00011
), Gly(
Figure 112020088587417-pat00012
), L-phe(
Figure 112020088587417-pat00013
), L-Tyr(
Figure 112020088587417-pat00014
), L-Val(
Figure 112020088587417-pat00015
), L-Nle(
Figure 112020088587417-pat00016
), D-Leu(
Figure 112020088587417-pat00017
), L-Nvl(
Figure 112020088587417-pat00018
), L-Aba(
Figure 112020088587417-pat00019
), L-Met(
Figure 112020088587417-pat00020
), L-Ile(
Figure 112020088587417-pat00021
), L-Cha(
Figure 112020088587417-pat00022
), L-Trp(
Figure 112020088587417-pat00023
), 또는 D-Phe(
Figure 112020088587417-pat00024
) 일 수 있으나, 바람직하게 Xn은
Figure 112020088587417-pat00025
이고 R은 L-Leu(
Figure 112020088587417-pat00026
) 또는 D-Leu(
Figure 112020088587417-pat00027
)일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 A 내지 D로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 암은 헵신 과발현 암종으로서, 난소암, 유방암, 자궁암, 신장암, 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 암일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 암의 예방은 암의 전이를 억제하여 전이성 암의 발생을 예방하는 것을 포함한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 A 내지 D로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 암 진단용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 A 내지 D로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물 또는 이의 염을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암의 전이 가능성 예측을 위한 정보제공방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 화합물은 검출가능한 물질로 표지(labeled)된 것일 수 있으며, 상기 검출가능한 물질은 형광 또는 방사성 동위원소일 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화학식 A 내지 D로 표시되는 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물 또는 이의 염을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암의 예방, 치료, 또는 진단 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 암의 예방, 치료, 또는 진단용 약제의 제조를 위한 상기 화학식 A 내지 D로 표시되는 화합물의 용도를 제공한다.
본 발명은 헵신의 활성부위와 결합하는 신규 화합물에 관한 것으로서, 암 세포에서 헵신의 과발현에 의한 기저막 파괴를 저해하고, 특히 암의 전이를 예방 및 치료할 수 있고, 세포의 막단백질인 헵신과 결합하는 특성에 의해 암 진단 및 암 전이 가능성을 예측하는데 이용하여, 특히 전이성 전립선암 치료 전략을 다각화를 기할 수 있다.
도 1은 아미노피리딘(aminopyridine) 및 아미노피리미딘(aminopyrimidine) 유도체 합성의 모식도이다. 각 반응의 조건과 시료는 다음과 같다: (i) NaH (60% in oil), 4-methoxybenzyl chloride, THF, 40 ℃, 15 h; (ii) methyl-2-acetamidoacrylate, NaHCO3, Bu4NCl, (o-tol)3P, PdCl2, DMF, 110 ℃, overnight; (iii) 10% Pd/C, H2 (gas), MeOH/1,4-dioxane (3/2, v/v), catalytic amount AcOH, rt, 24 h; (iv) benzothiazole, TMEDA, n-BuLi, THF, -78 ℃, 1 h; (v) Cp2ZrHCl, THF, rt, 20 min; (vi) HOBt, EDCI·HCl, THF, rt, 17 h; (vii) dess-martin periodinane, CH2Cl2, rt, 3 h; (viii) TFA/CH2Cl2 (1/3, v/v), rt, 16 h.
도 2는 피페리디닐 카르복시미드아미드(piperidinyl carboximidamide) 유도체 합성의 모식도이다. 각 반응의 조건과 시료는 다음과 같다: (i) N-acetylglycine, sodium acetate, acetic anhydride, MeOH, 100 ℃, 1 min; (ii) PtO2(IV), AcOH, H2 (gas), rt, 24 h; (iii) di-tert-butyldicarbonate, 4-dimethylaminopyridine, THF, rt, 2 h; (iv) benzothiazole, TMEDA, n-BuLi, THF, -78 ℃, 1 h; (v) Cp2ZrHCl, THF, rt, 20 min; (vi) N-acetyl-L-Leu, HOBt, EDCI·HCl, THF, rt, 12 h; (vii) dess-martin periodinane, CH2Cl2, rt, 3 h; (viii) TFA, CH2Cl2, rt, 1 h; (ix) 1-amidinopyrazole HCl, DIPEA, DMF, rt, 12 h.
도 3은 사이클로헥실구아니딘(cyclohexylguanidine) 유도체 합성의 모식도이다. 각 반응의 조건과 시료는 다음과 같다: (i) H2 (gas), PtO2(IV), AcOH, MeOH, rt, 24 h; (ii) N,N'-bis(carbobenzoxy)-1H-pyrazole-1-carboxamidine, Et3N, CH2Cl2, rt, 6 h; (iii) N,O-dimethylhydroxylamine HCl, HOBt, EDCI·HCl, DIPEA, THF, rt, 13 h; (iv) benzothiazole (for 34) or thiazole (for 35), TMEDA, n-BuLi, THF, -78 ℃, 1.5 h; (v) TFA, triethylsilane, water, CH2Cl2, rt, 2 h; (vi) N-acetyl-L-leucine, HATU, DIPEA, CH2Cl2, rt, 5 h; (vii) TFA, thioanisole, rt, 12 h.
도 4는 구아니디노페닐알라닌(guanidinophenylalanine) 유도체 합성의 모식도이다. 각 반응의 조건과 시료는 다음과 같다: (i) H2 (gas), Pd/C, MeOH, rt, 3 h; (ii) N,N'-bis(carbobenzoxy)-1H-pyrazole-1-carboxamidine, Et3N, CH2Cl2, rt, 6 h; (iii) N,O-dimethylhydroxylamine HCl, HOBt, EDCI·HCl, DIPEA, THF, rt, 13 h; (iv) benzothiazole or thiazole, TMEDA, n-BuLi, THF, -78 ℃, 1.5 h; (v) TFA, triethylsilane, water, CH2Cl2, rt, 2 h; (vi) N-acetylated appropriate amino acids, HATU, DIPEA, CH2Cl2, rt, 5 h; (vii) TFA, thioanisole, rt, 12 h.
헵신은 전립선암의 진행과 전이가 되는 동안 발현이 높은 상태를 유지하고 있는 세린 프로테아제(serine protease)의 일종으로, 헵신의 과발현은 전립선암 뿐만 아니라 난소암, 유방암, 및 신장암 등에서도 확인되었다. 이에, 본 발명자들은 암의 예방 도는 치료를 위한 타겟으로서 헵신을 선정하고, 헵신의 활성 제해제 개발에 예의 연구하여 신규 화합물을 제조하고 신규 화합물의 헵신에 대한 강한 결합력을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
헵신의 효소활성 작용기(triad)는 Ser195, His57, Asp102 등 3개의 아미노산으로 구성되어 가수분해를 담당하고, Asp189가 리간드의 amidine과의 이온결합에 중요한 역할을 수행하는 것이 알려져 있다.
이에, 본 발명자들은 Ac-LR-kbt(ketobenzothiazole) 리간드를 모핵으로 선정하고 Ac-LR-kbt 리간드의 arginine 측쇄기의 guanidine기가 헵신 결합에 중요한 역할을 수행하는 것으로부터 Arginine 측쇄기 guanidine기의 bioisostere인 2-aminopyridine과 2-amino-pyrimidine를 도입한 Ac-LR-kbt 유도체와 Arginine의 bioisostere인 amidino-4-piperidylalanine, 4-guanidino-phenyl-alanine, 4-guanidino-cyclohexylalanine이 도입된 dipeptide 유도체인 화합물 1 내지 13을 합성한 후 헵신에 대한 결합력을 확인하였다. 구체적으로 guanidine기의 bioisostere가 도입된 Ac-LR-kbt 유도체는 헵신에 대한 결합력이 수백 μM 수준이었고, Arginine의 bioisostere가 도입된 유도체는 100 nM 이하의 헵신 결합력을 나타내었다. 특히, 화합물 6은 Hepsin에 대한 결합력이 100 nM 이하로 매우 강한 결합력을 나타냄을 확인할 수 있었다.
상기 결과로부터, 본 발명자들은 화합물 1 내지 13, 50 내지 58이 헵신의 활성부위에 결합하여 그 활성을 억제할 수 있음을 알 수 있었으며, 이에, 본 발명은 상기 화합물 1 내지 13, 50 내지 58 중 어느 하나의 화합물을 포함하는 암 또는 종양의 예방 및 치료, 또는 암의 전이 예방용 약학적 조성물을 제공할 수 있다.
본 명세서에서 본 발명의 약학적 조성물이 예방 또는 치료하고자 하는 대상 질병인 암은 양성 및 악성 종양을 포함하고, 암종, 모세포종, 및 육종을 포함한다.
본 발명에서 "암(cancer)"은 양성 및 악성 암을 포함하고 "조기 암" 또는 "조기 종양"이란 침습성 또는 전이성이 아닌 암, 또는 0기, I기 또는 II기 암으로서 분류되는 암을 의미한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세 포종 (수모세포종 및 망막모세포종 포함), 육종 (지방육종 및 활막 세포 육종 포함), 신경내분비 종양 (카르 시노이드 종양, 가스트린종, 및 도세포 암 포함), 중피종, 슈반세포종 (청신경종 포함), 수막종, 선암종, 흑색종, 및 백혈병 또는 림프양 악성종양을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 상기 암의 보다 특정한 예는 편평세포암 (예를 들어 상피 편평세포암), 폐암, 예를 들어 소세포 폐암 (SCLC), 비소세포 폐암 (NSCLC), 폐의 선암종 및 폐의 편평세포 암종, 복막암, 간세포암, 위의 암 또는 위암, 예를 들어 위장암, 췌장암, 교모세포 종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간세포암, 유방암 (전이성 유방암 포함), 결장암, 직장암, 결장직장 암, 자궁내막 또는 자궁 암종, 타액선 암종, 신장암 또는 신암, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 간 암종, 항문 암종, 음경 암종, 고환암, 식도암, 담관의 종양뿐만 아니라 두경부암 및 다발성 골수종을 포함하고, 바람직하게는 헵신의 과발현이 확인되는 암일 수 있다.
또한, 상기 "전암성"은 전형적으로 암으로 진행되거나 암을 발생시키기는 상태 또는 성장을 지칭한다. "전암성" 성장은 비정상적인 세포 주기 조절, 증식 또는 분화를 특징으로 하는 세포를 가질 것인데, 이는 세포 주기 조절, 세포 증식 또는 분화의 마커에 의해 결정될 수 있다.
또한, 상기 "이형성"은 조직, 기관 또는 세포의 임의의 비정상적인 성장 또는 발생을 의미한다. 바람직하게는, 이형성은고 등급 또는 전암성이다.
본 명세서에서 "전이"는 암이 그의 원발성 부위로부터 신체 내 다른 부위로 확산되는 것을 의미한다. 암 세포는 원발성 종양으로부터 분리되어, 림프관 및 혈관 내로 침투하고, 혈류를 통하여 순환하여 신체 내 그 밖의 정상 조직의 원위 중심에서 성장 (전이)할 수 있다. 전이는 국소 또는 원위일 수 있다. 전이는 원발성 종양으로부터의 종양 세포 분리가 우발적으로 발생하고 혈류를 통해 이동하여 원위 부위에서 중단되는 순차적 과정이다. 이러한 새로운 부위에서 상기 세포는 혈액 공급을 확립시키고 성장하여 생명을 위협하는 종괴를 형성할 수 있다.
본 발명에서 용어, "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 암의 발생, 확산 또는 재발을 억제시키거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, "치료"는 본 발명의 조성물의 투여로 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어, "약학적 조성물"은 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
또한, 각각의 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 담체, 예컨대 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제, 기제, 부형제, 윤활제 등 당업계에 공지된 담체를 추가로 포함하여 제조할 수 있다.
한편, 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 본 발명의 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 건강상태, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
따라서, 본 발명의 약학적 조성물을 개체에 투여하여 암을 예방 또는 치료할 수 있으며, 암의 전이를 예방할 수 있다.
본 발명에서 용어, “개체”는 쥐, 가축, 생쥐, 인간 등 포유류일 수 있으며, 바람직하게는 인간일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에 투여를 위한 다양한 형태로 제형화 될 수 있으며, 비경구 투여용 제형의 대표적인 것은 주사용 제형으로 등장성 수용액 또는 현탁액이 바람직하다. 주사용 제형은 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 당업계에 공지된 기술에 따라 제조할 수 있다. 예를 들면, 각 성분을 식염수 또는 완충액에 용해시켜 주사용으로 제형화 될 수 있다. 또한, 경구 투여용 제형으로는 예를들면 섭취형 정제, 협측 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 서스펜션, 시럽 및 웨이퍼 등이 있는데, 이들 제형은 유효성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/또는 글리신)와 활탁제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 포함할 수 있다. 상기 정제는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 포함할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제 및/또는 감미제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 제형은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 방부제, 수화제, 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제와 같은 보조제와 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 제제화 될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 목적하는 효과를 상승시킬 수 있는 공지의 화합물과도 병행하여 투여할 수 있다
본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여경로로는 경구적으로 또는 정맥 내, 피하, 비강 내 또는 복강 내 등과 같은 비경구적으로 사람과 동물에게 투여될 수 있다. 경구 투여는 설하 적용도 포함한다. 비경구적 투여는 피하주사, 근육 내 주사 및 정맥 주사와 같은 주사법 및 점적법을 포함한다.
본 발명의 약학적 조성물에 있어서, 본 발명에 따른 신규 화합물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)이 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있으나, 통상적으로 성인을 기준으로 1회 투여시 100㎍ 내지 3,000㎎의 유효용량으로 하루에 수차례 반복 투여될 수 있다. 그러나 상기 신규 화합물의 농도는 약의 투여 경로 및 치료 횟수뿐 만 아니라 환자의 연령, 체중, 건강 상태, 성별, 질환의 중증도, 식이 및 배설율 등 다양한 요인들을 고려하여 환자에 대한 유효 투여량이 결정될 수 있다. 따라서 이러한 점을 고려할 때 당 분야의 통상적인 지식을 가진 자라면 상기 신규 화합물의 혈관신생 억제제 또는 암의 치료 또는 예방제로서의 특정한 용도에 따른 적절한 유효 투여량을 결정할 수 있으며, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 본 발명의 효과를 보이는 한 그 제형, 투여 경로 및 투여방법에 특별히 제한되지는 않는다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 유효성분으로서 신규 화합물 이외에 공지된 항암제를 추가로 포함할 수 있고, 이들 질환의 치료를 위해 공지된 다른 치료와 병용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물과 병용투여 가능한 항암제의 예로는 성장 억제제, 세포독성제, 방사선 요법에 사용되는 작용제, 항혈관신생제, 아폽토시스 작용제, 항-튜불린 작용제, 및 암을 치료하기 위한 그 밖의 작용제, 항-CD20 항체, 혈소판 유래 성장 인자 억제제 (예를 들어, 글리벡 (Gleevec)?? (이마티닙 메실레이트)), COX-2 억제제 (예를 들어, 셀레콕시브), 인터페론, 시토카인, 표적 ErbB2, ErbB3, ErbB4, PDGFR-베타, BlyS, APRIL, BCMA 또는 VEGF 수용체(들) 중 하나 이상에 결합하는 길항제(예를 들어, 중화 항체), TRAIL/Apo2, 및 다른 생물활성제 및 유기 화학 작용제 등이 포함되지만, 이에 제한 되지는 않는다.
한편, 본 발명의 신규 화합물은 세포의 막단백질인 헵신과의 강력한 결합력을 나타내는바, 본 발명의 화합물을 검출 가능한 물질로 표지하여 암 진단용 약학적 조성물에 제공할 수 있다. 표지는 그 자체가 검출가능할 수도 있고 (예를 들어, 방사성 동위원소 표지 또는 형광 표지), 또는 효소 표지의 경우에는 기질 화합물 또는 조성물의 검출가능한 화학적 변경을 촉매할 수도 있다.
또한, 헵신의 과발현은 암의 전이와 높은 관계가 있는바, 상기 암 진단용 약학적 조성물은 암의 전이 가능성 예측을 위한 정보제공방법에 이용될 수 있다.
본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 이하 특정 실시예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.
[화합물 합성 방법]
- 재료 및 방법
각 반응에 사용된 모든 화학물질과 용매는 Sigma-Aldrich, TCI, 및 Alfa Aesar에서 구입하여 추가 정제 없이 사용하였다. 각 반응은 Merck가 0.25mm로 사전 코팅된 실리카겔 플레이트(60 F254)에서 UV lamp 및/똔느 KMnO4 염색을 이용하여 TLC(Thin layer chromatography)로 모니터링하여 분석하였다. 컬럼 크로마토크래피는 실리카겔((230-400 mesh, Merck, Darmstadt, Germany)에서 수행되었고, NMR은 상온에서 Bruker BioSpin Avance 300 MHz NMR 또는 Bruker Ultrashield 600 MHz Plus spectrometer를 이용하여 수행하였다. 화학적 이동(chemical shift)은 internal standard으로 TMS를 이용하여 ppm(δ)으로 기록하였고, 커플링 상수는 헤르츠(Hz) 단위로 표시하였다. 13C NMR 스펙트럼은 동일한 NMR 분광기를 사용하여 분석하였고, CDCl3 (δ = 77.16 ppm)으로 보정하였다. 1H NMR 데이터는 피크 다중도(peak multiplicities)로 보고되었다: s는 단일선(singlet); d는 이중선(doublet); t는 삼중선 (triplet); m은 다중선(multiplet); br은 넓은선; dd는 이중 이중선 (double doublets); dt는 이중 삼중선(double triplet)을 나타낸다. NMR 용매는 CDCl3 및 CD3OD를 포함하고 Eurisotop company에서 제공받아 사용하였다. Mass spectra는 Agilent 6530 Accurate mass Q-TOF LC/MS spectrometer 또는 electrospray ionization PE Biosystems Sciex Api 150 EX mass spectrometer single quadruple equipped와 turbo ion spray interface를 사용하여 획득하였다. 모든 최종 화합물은 C18 컬럼 (Phenomenex, 150mm Х 4.6mm, 3μm, 110
Figure 112020088587417-pat00028
)이 있는 Agilent 1260 Infinity (Agilent)에서 분석 역상 HPLC로 제조되었으며, UV 검출기 (220 및 254 nm)로 모니터링하였다.
방법 A. Weinreb amide 형성
건조 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran: THF)에 녹인 카르복실산(carboxylic acid) (1.0 eq) 용액에 N,O-dimethylhydroxylamine hydrochloride (2.0 eq), hydroxybenzotriazole (HOBt; 1.4 eq), and 1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDCI·HCl; 1.4 eq)를 첨가한다. N,N-diisopropylethylamine (DIPEA; 6.0 eq)는 아르곤 가스 존재 하에서 상기 반응 혼합물에 첨가한다. 이어서 상기 반응 혼합물은 실온에서 13시간 동안 교반하고, 물과 아세트산에틸(EtOAc)로 분리 및 희석한 후, EtOAc와 염수(brine) 사이에 유기층을 분배한다. 혼합 유기층은 MgSO4로 건조하고, 여과 및 감압 농축한다. 이어서 잔류물을 실리카겔 상에서 flash column chromatography (eluting with hexane/EtOAc)으로 정제한다.
방법 B. 벤조티아졸(benzothiazole) 또는 티아졸(thiazole)의 첨가
벤조티아졸 또는 티아졸 (10.2 eq)과 THF 중 N, N, N ', N'-trimethylethylenediamine (TMEDA; 10.0 eq)에 -78 ℃에서 n-BuLi (헥산 중 1.6M, 10.0 eq)를 10 분에 걸쳐 적가한다. 리소-벤조티아졸(litho-benzothiazole) 또는 리소-티아졸 용액을 -78 ℃에서 35 분 동안 교반하고, Weinreb 아미드 또는 메틸 에스테르(methyl ester) 화합물 (1.0 eq)을 THF에 용해시킨 다음 주사기를 통해 -78 ℃에서 15 분에 걸쳐 적가한다. 반응 혼합물을 -78 ℃에서 2 시간 동안 교반하고 포화 수성 염화 암모늄 용액에 붓고 격렬하게 흔들어 급냉시켰다. aqueous layer는 EtOAc로 추출하고, 혼합 유기층은 염수로 세척한 후 MgSO4로 건조, 여과 및 감압 농축한다. 이어서 잔류물을 실리카겔 상에서 flash column chromatography (eluting with hexane/EtOAc)으로 정제한다.
방법 C. amide coupling
THF에 녹인 N-acetylated precursor 용액에 zirconocene chloride hydride (3.0 eq)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 강하게 교반한다. 반응은 20 μL의 물로 종결시키고(quenching) 혼합물을 짧은 실리카겔 컬럽을 통해 여과한다(eluting with CH2Cl2/methanol (10:1, v/v)). 여과액을 진공증발하고 THF에 용해한다. 상기 THF 용액에 N-acetyl-L-leucine (1.7 eq) 및 HOBt (2.0 eq)을 아르곤 퍼지와 함께 첨가하고 0℃로 냉간한다. 반응 혼합물을 EDCI·HCl (2.0 eq)의 THF 부유물에 첨가하고 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물에 포화 수성 중탄산 나트륨 용액(saturated aqueous sodium bicarbonate solution)을 첨가하여 반응을 종결시키고 유기층은 EtOAc로 희석하고 물과 염수로 추출한 다음 혼합 유기층은 MgSO4로 건조하고 여과한 후 진공농축 한다. 잔유물은 실리카겔상에서 flash column chromatography (eluting with CH2Cl2/methanol)를 이용하여 정제한다.
방법 D. amide coupling
아르곤 대기하에서 CH2Cl2 용액에 녹인 N-acetylated amino acid 및 HATU에 DIPEA를 첨가한다. 반응 혼합물은 실온에서 30분 동안 교반 후 deprotected Arg analog trifluoroacetic acid (TFA) 염의 CH2Cl2 현탁액을 첨가한다. 반응 혼합물을 실온에서 6 시간 동안 교반하고, 포화 수성 중탄산 나트륨 용액을 혼합물에 첨가하여 반응을 급냉시킨다. 유기층을 EA로 희석하고 물과 염수로 추출한 다음, 합한 유기층을 MgSO4로 건조하고 여과하고 진공농축한다. 이어서 잔류물을 실리카겔 상에서 flash column chromatography (eluting with hexane/EtOAc)으로 정제한다.
방법 E. Cbz 보호기 제거(Cbz deprotection)
Thioanisole (100 eq)을 Cbz 이중 보호 화합물 (1 eq)에 첨가하고, TFA (560 eq)를 0 ℃에서 반응 혼합물에 적가한다. 반응 혼합물을 실온에서 12 시간 동안 교반 한 다음 진공증발시킨다. 잔류물에 diethyl ether를 첨가한 다음 침전된 조 생성물을 원심 분리에 의해 수집한 다음 에테르 용매를 분리한다. 조 생성물을 역상 HPLC (eluting with water containing 0.1% TFA/acetonitrile containing 0.1% TFA)로 정제한다.
[화합물 합성]
1. 아미노피리딘(aminopyridine) 및 아미노피리미딘(aminopyrimidine) 유도체 합성
아미노피리딘 및 아미노피리미딘 유도체 합성 방법은 도 1과 같다.
1-1. 5-Iodo-N,N-bis(4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (14)
THF (39 mL) 중 2-amino-5-iodopyridine(1234 mg, 5.6 mmol, 1.0 eq)에 NaH (657 mg, 16.8 mmol, 3.0 eq)를 0 ℃에서 첨가한 다음 30 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 아르곤 퍼지(purge) 한 다음, 아르곤 대기하에 4- 4-methoxybenzyl chloride (2.37 mL, 17.4 mmol, 3.1 eq)의 THF 용액 10 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 14 시간 동안 교반하였다. 5 방울의 물을 반응 혼합물에 적가하여 반응을 급냉시켰다. 유기층을 EA로 희석하고 물과 염수로 추출한 다음, 합한 유기층을 MgSO4로 건조하고 여과한 후 진공에서 농축했다. 잔류물은 실리카겔상에서 플래시 컬럼 크로마토 그래피 (eluting with hexane/EtOAc, 30:1 to 15:1)로 정제하여 80 % 수율로 화합물 14를 수득하였다(2068 mg, 4.5 mmol). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.32 (s, 1H), 7.52 (dd, J = 1.8 and 9.0 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 6.82 (d, J = 9.0 Hz, 4H), 6.29 (d, J = 9 Hz, 1H), 4.65 (s, 4H), 3.76 (s, 6H). HRMS (ESI): [M+H] + calculated for C21H21IN2O2, 461.0720; found, 461.0725.
1-2. 5-Iodo-N,N-bis(4-methoxybenzyl)pyrimidin-2-amine (15)
화합물 15는 화합물 14(5-iodo-N,N-bis(4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine)와 동일한 방법으로 수득하였으며, 수율은 50%이다 (Tetrahedron Lett. 2013, 54, 4526-4528.).
1-3. Methyl 2-acetamido-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyridin-3-yl)acrylate (16).
5-Iodo-N,N-bis(4-methoxybenzyl)pyridin-2-amine (1025 mg, 2.2 mmol, 1.0 eq), methyl-2- acetamidoacrylate (479 mg, 3.4 mmol, 1.5 eq), NaHCO3 (375 mg, 4.5 mmol, 2.0 eq), tetrabutylammonium chloride (774 mg, 2.7 mmol, 1.2 eq), tri(o-tolyl)phosphine (274 mg, 0.9 mmol, 0.4 eq), 및 PdCl2 (80 mg, 0.5 mmol, 0.2 eq)를 2 구 둥근 바닥 플라스크에 넣고 아르곤을 퍼지했다. 40mL의 N,N-dimethylformamide (DMF)를 플라스크에 넣은 후 반응 혼합물을 110
Figure 112020088587417-pat00029
에서 13 시간 동안 환류시키고, 반응 혼합물을 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 EA로 희석하고 물, 염수로 후 처리했다. 조합 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 여과 후 진공농축하였다. 잔류은 실리카겔상에서 플래시 컬럼 크로마토 그래피 (eluting with hexane/EtOAc, 10:1 to 1:2) 로 정제하여 화합물 16을 77 % 수율로 수득하였다 (820 mg, 1.72 mmol). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.34 (s, 1H), 7.56 (d, J = 9 Hz, 1H), 7.40 (s, 0.5H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 7.08 (s, 0.5H), 6.84 (d, J = 8.5 Hz, 4H), 6.47 (d, J = 9 Hz, 1H), 4.71 (s, 4H), 3.81 (s, 3H), 3.78 (s, 6H), 2.14 (s, 3H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C27H29N3O5, 476.2180; found, 476.2194.
1-4. (E)-methyl 2-acetamido-3-(2-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyrimidin-5-yl)acrylate (17).
화합물 15는 화합물 16(methyl 2-acetamido-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl) amino)pyridin-3-yl)acrylate)과 동일한 방법으로 수득하였으며, 수율은 29%이다 (Tetrahedron Lett. 2013, 54, 4526-4528.).
1-5. Methyl 2-acetamido-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyridin-3-yl)propanoate (18).
16mL methanol/1,4-dioxane (3:2, v/v) 중의 methyl 2-acetamido-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyridine-3-yl)acrylate (1011mg, 2.1mmol)의 용액에 2, v / v)에 acetic acid (1.5mL) 및 10% Pd/C (90 mg, 0.8 mmol, 0.4 eq)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1 atm의 수소 가스하에 실온에서 21 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음 감압하에 증발시켰다. 잔류물을 실리카겔상에서 플래시 컬럼 크로마토 그래피 (eluting with hexane/EA, 2:1 to 1:2)로 정제하여 화합물 15를 59 % 수율로 수득하였다 (605 mg, 1.3 mmol). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.92 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.12 (d, J = 8.7 Hz, 4H), 6.83 (d, J = 8.7 Hz, 4H), 6.40 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.81 (q, J = 6.6 Hz, 1H), 4.66 (s, 4H), 3.77 (s, 6H), 3.72 (s, 3H), 3.05-2.85 (m, 2H), 1.99 (s, 3H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C27H31N3O5, 478.2336; found, 478.2321.
1-6. Methyl 2-acetamido-3-(2-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyrimidin-5-yl)propanoate (19).
화합물 19는 화합물 18 (methyl 2-acetamido-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino) pyridin-3-yl)propanoate)과 동일한 방법으로 수득하였으며, 수율은 24%이다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.09 (s, 2H), 7.15 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 6.84 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 6.07 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 4.84 (d, J = 6.2 Hz, 1H), 4.79 (s, 4H), 3.79 (s, 9H), 3.00 (q, J = 5.1 Hz, 1H), 2.98 (q, J = 5.1 Hz, 1H), 2.05 (s, 3H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C26H30N4O5, 479.2289; found, 479.2307.
1-7. N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyridin-3-yl)-1-oxopropan-2-yl)acetamide (20).
화합물 20은 상기 방법 B로 합성하였으며, 수율은 78%였다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.24 (dd, J = 1.9 and 5.6Hz, 1H), 8.01 (dd, J = 1.7 and 5.3 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.67-7.54 (m, 2H), 7.13 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 7.13-7.08 (m, 1H), 6.85 (d, J = 8.6 Hz, 4H), 6.38 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.17-6.07 (m, 1H), 4.66 (s, 4H), 3.80 (s, 6H), 3.33 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 3.31 (q, J = 5.3 Hz, 1H), 2.08 (s, 3H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 192.65, 169.65, 163.60, 158.68, 157.96, 153.57, 148.39, 138.47, 137.25, 130.29, 128.34, 128.15, 127.26, 125.90, 122.42, 118.79, 113.97, 105.82, 56.53, 55.28, 50.13, 34.93, 23.27. HRMS (ESI): [M+H] + calculated for C33H32N4O4S, 581.2217; found, 581.2237.
1-8. N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(2-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyrimidin-5-yl)-1-oxopropan-2-yl)acetamide (21).
화합물 21은 상기 방법 B로 합성하였으며, 수율은 50%였다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.22 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.05 (s, 2H), 7.98 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 7.63-7.56 (m, 2H), 7.12 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 4H), 6.52 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.13 (q, J = 5.4 and 7.5 Hz, 1H), 4.71 (s, 4H), 3.78 (s, 6H), 3.32 (q, J = 5.1Hz, 1H), 3.30 (q, J = 5.1Hz, 1H), 2.08 (s, 3H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 192.37, 169.80, 163.29, 161.67, 158.74, 158.43, 153.53, 137.28, 130.19, 128.91, 128.33, 127.40, 125.94, 122.47, 116.60, 113.97, 113.88, 56.41, 55.27, 48.12, 32.69, 23.29. HRMS (ESI): [M-H]- calculated for C32H31N5O4S, 580.2019; found, 580.2050.
1-9. (2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyridin-3-yl)-1-hydroxypropan-2-yl)-4-methylpentanamide (22).
화합물 22는 상기 방법 C로 합성하였으며, 수율은 57%였다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.10 (s, 1H), 7.94 (dd, J = 2.6 and 4.9 Hz, 1H), 7.85 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.73-7.64 (m, 1H), 7.49-7.32 (m, 2H), 7.28 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 7.06 (dd, J = 2.5 and 8.6 Hz, 4H), 6.77 (dd, J = 3.1 and 5.3 Hz, 4H), 6.49 (dd, J = 3.7 and 8.9 Hz, 1H), 5.29 (dd, J = 3.2 and 12.6 Hz, 1H), 4.87-4.72 (m, 1H), 4.72-4.51 (m, 4H), 4.49-4.29 (m, 1H), 3.75 (d, J = 3.2 Hz, 6H), 3.01-2.69 (m, 2H), 1.85 (d, J = 18.0 Hz, 3H), 1.52-1.36 (m, 2H), 0.98-0.81 (m, 1H), 0.78-0.66 (m, 6H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C39H45N5O5S, 696.3214; found, 696.3248.
1-10. (2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(2-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyrimidin-5-yl)-1-hydroxypropan-2-yl)-4-methylpentanamide (23).
화합물 23는 상기 방법 C로 합성하였으며, 수율은 35%였다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.33-8.18 (m, 2H), 8.00-7.92 (m, 2H), 7.54-7.47 (m, 1H), 7.45-7.39 (m, 1H), 7.16-7.08 (m, 4H), 6.87-6.81 (m, 4H), 5.01 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.77-4.61 (m, 4H), 4.60-4.55 (m, 1H), 4.32 (dd, J = 5.8 and 9.8 Hz, 0.2H), 4.28 (dd, J = 6.1 and 8.6 Hz, 0.8H), 3.78 (d, J = 2.8 Hz, 6H), 2.97 (dd, J = 3.8 and 14.4 Hz, 1H), 2.80-2.73 (m, 1H), 1.36-1.29 (m, 1H), 1.27-1.19 (m, 2H), 0.80 (dd, J = 4.1 and 6.5 Hz, 1H), 0.80-0.58 (m, 6H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C38H44N6O5S, 697.3167; found, 697.3148.
1-11. (2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyridin-3-yl)-1-oxopropan-2-yl)-4-methylpentanamide (24).
(2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino) pyridin-3-yl)-1-hydroxypropan-2-yl)-4-methylpentanamide 용액 CH2Cl2 (3mL)를 dess-martin periodinane (0.3M in CH2Cl2, 0.73 mL, 0.2 mmol, 2.0 eq)에 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔에 직접 부은 다음 플래시 컬럼 크로마토 그래피 (eluting with hexane/EtOAc, 5:1 to 1:1)로 정제하여 화합물 24를 80 % 수율로 수득하였다 (56 mg, 0.08 mmol). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.26-8.17 (m, 1H), 8.03-7.95 (m, 1H), 7.91 (d, J = 2.0 Hz, 0.6H), 7.85 (d, J = 2.0 Hz, 0.4H), 7.65-7.51 (m, 2H), 7.20 (dt, J = 2.1 and 8.4 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 8.5 Hz, 4H), 6.91 (t, J = 6.8 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.5 Hz, 4H), 6.39 (d, J = 8.6 Hz, 0.4H), 6.37 (d, J = 8.7 Hz, 0.6H), 5.99 (m, 1H), 5.90 (d, J = 8.2 Hz, 0.6H), 5.81 (d, J = 8.7 Hz, 0.4H), 4.64 (q, J = 8.7 Hz, 4H), 4.56-4.44 (m, 1H), 3.78 (s, 6H), 3.41-3.27 (m, 1H), 3.22-3.08 (m, 1H), 1.94 (d, J = 11.3 Hz, 3H), 1.72-1.38 (m, 3H), 0.90 (d, J = 5.6 Hz, 6H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C39H43N5O5S, 694.3058; found, 694.3075.
1-12. (2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(2-(bis(4-methoxybenzyl)amino)pyrimidin-5-yl)-1-oxopropan-2-yl)-4-methylpentanamide (25).
CH2Cl2 (3 mL)의 (2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(2-(bis(4-methoxybenzyl)amino) pyrimidin-5-yl)-1-hydroxypropan-2-yl)-4-methylpentanamide (102 mg, 0.15 mmol, 1.0 eq) 용액에 dess-martin periodinane (0.3M in CH2Cl2, 1.4 mL, 0.3 mmol, 2.0 eq) 첨가하고 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔에서 flash column chromatography (eluting with hexane/EtOAc, 5:1 to 1:1)이용하여 정제하고 화합물 25를 75% 수율로 수득하였다 (78 mg, 0.11 mmol). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.23-8.12 (m, 3H), 8.01-7.94 (m, 1H), 7.60-7.54 (m, 2H), 7.12 (d, J = 8.1 Hz, 4H), 6.82 (d, J = 8.1 Hz, 4H), 6.12 (d, J = 6.1 Hz, 0.5H), 5.99 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 5.92 (d, J = 7.7 Hz, 0.5H), 4.81-4.57 (m, 5H), 3.78 (s, 6H), 3.33-3.28 (m, 1H), 3.09-3.02 (m, 1H), 1.95 (d, J = 16.8 Hz, 3H), 1.63-1.50 (m, 3H), 0.91 (d, J = 3.9 Hz, 6H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 191.94, 191.81, 172.13, 171.73, 170.49, 170.40, 163.47, 161.65, 161.56, 158.70, 158.45, 153.48, 137.27, 130.34, 130.30, 128.94, 128.86, 128.25, 128.19, 127.34, 127.28, 125.85, 122.43, 116.79, 113.86, 56.47, 55.27, 51.64, 48.22, 48.08, 41.04, 40.54, 32.86, 32.58, 24.85, 24.75, 23.12, 22.97, 22.80, 22.24. HRMS (ESI): [M-H]- calculated for C38H42N6O5S, 693.2859; found, 693.2860.
1-13. (2S)-2-acetamido-N-(3-(6-aminopyridin-3-yl)-1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-1-oxopropan-2-yl)-4-methylpentanamide (1).
CH2Cl2 (2 mL)에 (2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(6-(bis(4-methoxybenzyl)amino) pyridin-3-yl)-1-oxopropan-2-yl)-4-methylpentanamide (20 mg, 0.03 mmol)의 용액에 TFA 1 mL를 첨가하고 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합 반응물은 감암농축되었으며, 잔여물을 diethyl ether에 추가하여 조생성물을 제조하고 원심분리 후 ether 용매를 제거하여 수집하였다. 조생성물은 역상 HPLC (eluting with water (containing 0.1% TFA)/acetonitrile (containing 0.1% TFA), 80:20 to 10:90)로 정제되었다. 화합물 1은 77% 수율로 수득되었다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.25-8.20 (m, 1H), 8.16 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 8.00-7.95 (m, 1H), 7.73 (dd, J = 1.6 and 9.3 Hz, 1H), 7.71-7.61 (m, 2H), 6.99 (dd, J = 9.1 and 19.7 Hz, 1H), 5.87 (q, J = 4.6 HZ, 0.6 H), 5.66-5.61 (m, 0.4H), 4.33 (dd, J = 5.9 and 9.3 Hz, 0.6H), 4.28 (dd, J = 5.2 and 9.8 Hz, 0.4H), 3.43-3.38 (m, 1H), 3.08-2.99 (m, 1H), 1.96 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 1.62-1.55 (m, 0.5H), 1.51-1.36 (m, 2H), 1.33-1.28 (m, 0.5H), 0.88 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 0.86-0.80 (m, 4H). HRMS: [M+Na]+ calculated for C23H27N5O3S, 476.1727; found, 476.1708.
1-14. (2S)-2-acetamido-N-(3-(2-aminopyrimidin-5-yl)-1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-1-oxopropan-2-yl)-4-methylpentanamide (2).
화합물 2는 화합물 1((2S)-2-acetamido-N-(3-(6-aminopyridin- 3-yl)-1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-1-oxopropan-2-yl)-4-methylpentanamide)과 동일한 방법으로 52% 수율로 수득하였다. 1 H NMR (300 MHz, CD3OD): δ ppm 8.27-8.20 (m, 2H), 8.18-8.05 (m, 2H), 7.71-7.57 (m, 2H), 5.88-5.69 (m, 1H), 4.45-4.33 (m, 1H), 3.38-3.26 (m, 1H), 3.05-2.87 (m, 1H), 1.95 (d, J = 7.5 Hz, 3H), 1.64-1.51 (m, 1H), 1.51-1.34 (m, 2H), 0.91-0.81 (m, 6H). HRMS: [M+H]+ calculated for C22H26N6O3S, 455.1860; found, 455.1876.
2. 피페리디닐 카르복시미드아미드(piperidinyl carboximidamide) 유도체 합성
피페리디닐 카르복시미드아미드 유도체의 합성 방법은 도 2와 같다.
2-1. (E)-methyl 2-acetamido-3-(pyridin-4-yl)acrylate (26).
N-acetylglycine (1000mg, 8.5 mmol, 1.0 eq), 4-pyridinecarboxaldehyde (0.8 mL, 8.5 mmol, 1.0 eq), sodium acetate (701 mg, 8.5 mmol, 1.0 eq), 및 acetic anhydride (1.5 mL, 25.6 mmol, 3.0 eq) 을 둥근바닥 플라스크에 넣고, 반응 혼합물을 1분동안 90-100
Figure 112020088587417-pat00030
로 빠르게 퍼지하였다. 반응 혼합물은 짙은 보라색이 된 후 실온에서 식혔다. 반응 혼합물은 hexane으로 수차례 세적하고 methanol (20 mL)에 부유하였다. 이어서 반응 혼합물을 완전히 탈리될 때까지 100 ℃까지 가열하였다. 혼합물의 색이 진한 주황색으로 변하면 용매를 감압하에 증발시키고 잔류물을 EtOAc로 희석하고 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 조합 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔류물은 실리카겔에서 flash column chromatography (eluting with CH2Cl2/methanol, 80:1 to 25:1)로 정제하여 화합물 26을 43% 수율로 수득하였다(816mg, 3.7mmol). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.52 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 8.18 (s, 1H), 7.28 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 7.19 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 2.09 (s, 3H). LRMS(ESI): [M+Na]+ calculated for C11H12N2O3, 243.1; found, 243.1.
2-2. tert-Butyl 4-(2-acetamido-3-methoxy-3-oxopropyl)piperidine-1-carboxylate (27).
화합물 26((E)-methyl 2-acetamido-3-(pyridin-4-yl)acrylate) (240mg, 1.09 mmol, 1.0 eq)를 acetic acid (10 mL)에 용해시킨 다음 platinum(IV) oxide (15 mg, 0.07 mmol, 0.06 eq)를 첨가했다. 혼합물은 실온에서 수소 가스(1 atm) 하에 교반하였다. 반응 혼합물을 셀 라이트를 통해 여과한 다음 진공에서 증발시켰다. 잔류 물을 톨루엔으로 수차례 세척하여 아세트산을 완전히 제거했다. THF에 용해된 잔류 물에 4-dimethylaminopyridine (DMAP; 27 mg, 0.22 mmol, 0.2 eq) 및 di-tert-butyldicarbonate (240 mg, 1.10 mmol, 1.0 eq)를 첨가한 다음 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 혼합 유기층을 MgSO4로 건조시키고, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔류물을 실리카겔상에서 flash column chromatography (eluting with CH2Cl2/methanol, 50:1 to 30:1)로 정제하여 화합물 27을 얻었다(358 mg, 1.09 mmol).
1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 6.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.54-4.46 (m, 1H), 3.92 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 3.58 (s, 3H), 2.52 (t, J = 11.4Hz, 2H), 1.88 (s, 3H), 1.65-1.40 (m, 5H), 1.30 (s, 9H), 1.09-0.89 (m, 2H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 173.23, 170.21, 154.64, 79.22, 52.41, 49.70, 38.92, 32.48, 32.14, 31.25, 28.31, 22.78. HRMS (ESI): [M-H]- calculated for C16H28N2O5, 327.1920; found, 327.1928.
2-3. tert-Butyl 4-(2-acetamido-3-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-oxopropyl)piperidine-1-carboxylate (28).
화합물 28은 방법 B에 의하여 80% 수율로 수득할 수 있다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.16 (dd, J = 1.4 and 7.5 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 1.4 and 7.3 Hz, 1H), 7.62-7.48 (m, 2H), 6.53 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.94 (dt, J = 3.5 and 7.8 Hz, 1H), 4.19-3.93 (br, 2H), 2.68 (dd, J = 8.5 and 11.2 Hz, 2H), 2.06 (s, 3H), 2.02-1.90 (m, 2H), 1.70-1.51 (m, 3H), 1.42 (s, 9H), 1.31-1.10 (m, 2H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 193.86, 170.05, 163.61, 154.80, 153.48, 137.19, 128.09, 127.19, 125.83, 122.35, 79.29, 53.15, 39.88, 33.00, 32.61, 31.24, 28.46, 23.22. HRMS (ESI): [M-H]- calculated for C22H29N3O4S, 430.1801; found, 430.1827.
2-4. tert-Butyl 4-(2-((S)-2-acetamido-4-methylpentanamido)-3-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-hydroxypropyl)pipe-ridine- 1-carboxylate (29).
화합물 29는 방법 C에 의하여 38% 수율로 수득할 수 있다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 7.94-7.82 (m, 2H), 7.51-7.30 (m, 2H), 7.08 (d, J = 8.1 Hz, 0.2H), 6.73 (d, J = 7.9 Hz, 0.5H), 6.35 (d, J = 7.7 Hz, 0.3H), 5.78 (d, J = 5.7 Hz, 0.6H), 5.44 (d, J = 5.6 Hz, 0.4H), 5.26-5.12 (m, 2H), 4.73-4.35 (m, 2H), 3.99 (brs, 2H), 2.57 (dd, J = 12.7 and 14.6 Hz, 2H), 1.95 (s, 1H), 1.91 (s, 2H), 1.80-1.45 (m, 6H), 1.40 (s, 9H), 1.31-1.15 (m, 1H), 1.13-1.00 (m, 1H), 0.93 (dd, J = 4.4 and 6.1 Hz, 3H), 0.85-0.81 (m, 3H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 173.41, 173.09, 171.06, 170.58, 154.77, 154.71, 153.25, 153.03, 134.80, 134.69, 126.12, 126.04, 125.12, 124.96, 122.92, 121.80, 121.76, 79.28, 74.15, 53.04, 52.27, 52.14, 41.15, 40.88, 35.93, 34.69, 32.81, 32.65, 28.43, 24.91, 24.76, 23.10, 22.97, 22.73, 22.61, 22.44, 22.27. HRMS (ESI): [M+Na]+ calculated for C28H42N4O5S, 569.2768; found, 569.2786.
2-5. tert-Butyl 4-(2-((S)-2-acetamido-4-methylpentanamido)-3-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-oxopropyl)piperidi-ne-1-carboxylate (30).
CH2Cl2 (2 mL) 에 tert-Butyl 4-(2-((S)-2-acetamido-4-methylpentanamido)-3-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-hydroxypropyl)piper-idine-1-carboxylate (60 mg, 0.11 mmol, 1.0 eq)를 dess-martin periodinane (0.3M in CH2Cl2, 0.73 mL, 0.22 mmol, 2.0 eq)에 첨가한 후 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카겔상에서 flash column chromatography (eluting with hexane/EA, 5:1 to 1:1)으로 정제하여, 화합물 30을 92% 수율로 수득하였다 (55 mg, 0.10 mmol). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.20-8.10 (m, 1H), 7.99-7.89 (m, 1H), 7.60-7.48 (m, 2H), 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 0.5H), 7.10 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 6.46 (dd, J = 8.5 and 11.2 Hz, 1H), 5.91-5.74 (m, 1H), 4.70-4.49 (m, 1H), 2.67 (t, J = 12.3 Hz, 2H), 2.02-1.86 (m, 2H), 1.97 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 1.75-1.45 (m, 7H), 1.43 (d, J = 3.5 Hz, 9H), 1.32-1.03 (m, 3H), 0.93 (t, J = 6.0 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.0 Hz, 3H). HRMS (ESI): [M+Na]+ calculated for C28H40N4O5S, 567.2612; found, 567.2627.
2-6. (2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-1-oxo-3-(piperidin-4-yl)propan-2-yl)-4-methylpentan-amide (31).
To a solution of tert-Butyl 4-(2-((S)-2-acetamido-4-methylpentanamido)-3-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3- oxopropyl)piperidine-1-carboxylate (112 mg, 0.21 mmol)이 포함된 CH2Cl2 (2 mL) 용액을 TFA (trifluoroacetic acid, 1 mL)에 적가하였다. 반응 혼합물은 실온에서 1시간 동안 교반하였으며, 진공에서 증발시켰다. 잔유물을 실리카겔상에서 flash column chromatography (eluting with CH2Cl2/methanol, 80:1 to 10:1)로 정제하여 화합물 31을 수득하였다 (93 mg, 0.21 mmol). 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 8.17 (d, J = 7.7 Hz 1H), 8.13-8.06 (m, 1H), 7.67-7.53 (m, 2H), 5.77 (dd, J = 3.2 and 11.0 Hz, 0.5H), 5.67 (dd, J = 3.6 and 10.3 Hz, 0.5H), 4.37 (q, J = 8.6 Hz, 1H), 3.47-3.29 (m, 2H), 3.06-2.86 (m, 2H), 2.07-1.87 (m, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.88-1.69 (m, 2H), 1.68-1.41 (m, 5H), 0.95-0.85 (m, 6H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C23H32N4O3S, 445.2268; found, 445.2287.
2-7. (2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-3-(1-carbamimidoylpiperidin-4-yl)-1-oxopropan-2-yl)-4-methylpen-tanamide (3).
(2S)-2-acetamido-N-(1-(benzo[d]thiazol-2-yl)-1-oxo-3-(piperidin-4-yl)propan-2-yl)- 4-methylpentan-amide (58 mg, 0.13 mmol)이 포함된 DMF (2 mL) 용액을 아르곤 대기하에서 DIPEA (0.15 mL, 0.91 mmol) 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반한 후 감암 농축하였다. 잔유물을 diethyl ether에 적가한 후 농축한 후 용매를 제거하여 조생성물을 획득하였다. 조생성물을 역상 HPLC (eluting with water containing 0.1% FA/acetonitrile containing 0.1% FA, 95:5 to 50:50)로 정제하여 화합물 3을 65% 수율로 수득하였다. 1 H NMR (300 MHz, CD3OD): δ ppm 8.23-8.15 (m, 1H), 8.12 (dd, J = 1.3 and 6.4 Hz, 1H), 7.69-7.56 (m, 2H), 5.85-5.66 (m, 1H), 4.41 (dd, J = 6.6 and 8.2 Hz, 1H), 3.89 (t, J = 14.5 Hz, 2H), 3.18-2.98 (m, 2H), 2.16-1.90 (m, 2.5H), 1.98 (s, 3H), 1.90-1.71 (m, 2.5H), 1.71-1.59 (m, 1H), 1.58-1.48 (m, 2H), 1.46-1.23 (m, 2H), 0.94 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.90 (dd, J = 1.8 and 6.2 Hz, 3H). 13 C NMR (75 MHz, CD3OD): δ ppm 192.76, 192.51, 173.89, 173.71, 172.05, 171.98, 164.22, 164.15, 156.22, 153.39, 153.35, 136.97, 127.92, 127.09, 125.36, 125.04, 122.77, 122.37, 52.92, 52.09, 45.60, 45.55, 40.37, 36.95, 36.73, 32.27, 32.16, 31.61, 30.16, 24.55, 24.41, 21.86, 21.05, 20.96, 20.68, 20.62. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C24H34N6O3S, 487.2486; found, 487.2509.
3. 사이클로헥실구아니딘(cyclohexylguanidine) 유도체 합성
사이클로헥실구아니딘 유도체의 합성 방법은 도 3과 같다.
3-1. 3-(4-(2,3-Bis((benzyloxy)carbonyl)guanidino)cyclohexyl)-2-((tert-butoxycarbonyl)amino)propanoic acid (32).
N-(tert-butoxycarbonyl)-4-nitro-L-phenylalanine (161 mg, 0.52 mmol, 1.0 eq)이 포함된 methanol/acetic acid (3 mL, 1:1, v/v) 용액에 PtO2 (12 mg, 0.05 mmol, 0.1 eq)을 혼합하였다. 반응 혼합물을 50 psi의 수소가스 하에서 24시간 동안 Parr Hydrogenation Apparatus을 이용하여 교반하였다. 반응 혼합물은 셀라이트를 통해 여과하고 감압 농축시켰다. 이어서, 반응 혼합물에 N,N'-bis(barbobenzoxy)-1H-pyrazole-1-carboxamidine (216 mg, 0.57 mmol, 1.1 eq) 및 DMF (3 mL)을 첨가하였다. 그리고, 반응 혼합물에 아르곤 대기하 실온에서 triethylamine (0.11 mL, 0.78 mmol, 1.5 eq)을 첨가하고 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 증발시키고 물과 EtOAc 사이에 분배시켰다. 조합된 유기층을 수집하고, MgSO4로 건조하고, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔유물은 실리카겔에서 flash column chromatography (eluting with CH2Cl2/methanol, 100:1 to 11:1, v/v) 을 이용하여 정제하고 무색 고체 생성물을 획득하였다 (198 mg, 0.33 mmol, 64% yield). (Mol. Pharmacol. 2011, 80, 585-597.)
3-2. Benzyl N-[{[(benzyloxy)carbonyl]amino}({[4-(2-{[(tert-butoxy)carbonyl]amino}-2-[methoxy(methyl) carbamoyl]ethyl)cyclohexyl]amino})methylidene]carbamate (33).
화합물 33은 방법 A에 따라서 89% 수율로 수득하였다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 11.78 (s, 1H), 8.58 (d, J = 7.9 Hz, 0.5H), 8.19 (d, J = 8.1 Hz, 0.5H), 7.43-7.23 (m, 10H), 5.16 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 5.13-5.04 (m, 3H), 4.73 (brs, 1H), 4.27 (m, 0.5H), 3.95 (m, 0.5H), 3.77 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 3.19 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 2.02 (m, 2H), 1.89-1.50 (m, 5H), 1.43 (s, 9H), 1.39-0.95 (m, 4H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 163.90, 163.87, 155.66, 155.21, 155.07, 154.01, 153.87, 136.93, 136.92, 134.69, 134.63, 128.75, 128.68, 128.54, 128.40, 128.38, 128.18, 128.09, 128.06, 127.86, 79.59, 68.04, 67.09, 61.57, 49.64, 48.44, 46.61, 40.08, 39.03, 33.12, 32.59, 32.42, 32.32, 32.18, 30.42, 29.69, 29.38, 29.10, 28.73, 28.36, 26.91. HRMS (ESI): [M+Na]+ calculated for C33H45N5O8, 662.3160; found, 662.3174.
3-3. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-{[(tert-butoxy)carbonyl]amino}-3-oxopropyl]cyclohexyl}ami-no)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (34).
화합물 34는 방법 B에 따라서 85% 수율로 수득하였다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 11.79 (s, 1H), 8.20 (dd, J = 1.4 and 7.0 Hz, 2H), 7.98 (dd, J = 1.4 and 7.1 Hz, 1H), 7.63-7.50 (m, 2H), 7.43-7.27 (m, 10H), 5.64 (brs, 0.5H), 5.27 (d, J = 8.3 Hz, 0.5H), 5.15 (d, J = 10.7 Hz, 4H), 3.97 (m, 1H), 2.24-1.97 (m, 3H), 1.95-1.71 (m, 2H), 1.70-1.47 (m 3H), 1.45 (s, 9H), 1.31-1.05 (m, 4H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 194.50, 163.91, 163.86, 155.22, 153.88, 153.59, 137.23, 136.94, 134.69, 128.76, 128.69, 128.41, 128.39, 128.06, 127.95, 127.86, 127.11, 125.87, 122.34, 80.02, 68.06, 67.11, 54.75, 49.61, 40.19, 33.63, 32.54, 32.40, 32.08, 30.49, 29.70, 28.32. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C38H43N5O7S, 714.2956; found, 714.2955.
3-4. Benzyl N-({[(benzyloxy)carbonyl]amino}({[4-(2-{[(tert-butoxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-(1,3-thiazol -2-yl)propyl)cyclohexyl]amino})methylidene)carbamate (35).
화합물 35는 방법 B에 따라서 85% 수율로 수득하였다. The product can be afforded by general procedure B in 85% yield. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.77 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.57 (d, J = 7.4 Hz, 0.5H), 8.19 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 8.05 (dd, J = 3.0 and 9.5 Hz, 1H), 7.70 (dd, J = 2.6 and 7.6 Hz, 1H), 7.42-7.27 (m, 10H), 5.49 (brs, 1H), 5.24 (t, J = 9.9 Hz, 1H), 5.17 (d, J = 1.1 Hz, 2H), 5.12 (s, 2H), 4.31-4.24 (m, 0.5H), 3.99-3.91 (m, 5H), 2.15-2.05 (m, 1H), 2.04-1.86 (1H), 1.85-1.76 (m, 1H), 1.76-1.68 (m, 1H), 1.68-1.54 (m, 3H), 1.44 (s, 10H), 1.24-1.07 (m, 3H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 192.90, 164.63, 163.91, 163.88, 155.49, 155.21, 155.08, 154.00, 153.88, 145.21, 145.17, 136.94, 136.92, 134.69, 134.62, 128.77, 128.70, 128.42, 128.40, 128.11, 128.07, 127.88, 126.68, 79.88, 68.06, 68.04, 67.11, 60.40, 54.69, 49.62, 40.19, 33.61, 32.56, 32.39, 32.09, 30.49, 29.71, 29.36, 29.11, 28.72, 28.33, 26.91. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C34H41N5O7S, 664.2799; found, 664.2770.
3-5. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-[(2S)-2-acetamido-4-methylpentanamido]-3-oxopropyl]cycl-ohexyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (36).
화합물 36은 방법 D를 이용하여 무색의 고체형태로 수득하였으며, 수율은 76%이다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 11.76 (brs, 1H), 8.58 (d, J = 6.9 Hz, 0.3H), 8.27-8.16 (m, 1H), 8.12 (brs, 0.3H), 8.04-7.93 (m, 1H), 7.93-7.83 (m, 0.3H), 7.65-7.45 (m, 2H), 7.43-7.27 (m, 10H), 7.21-7.08 (m, 0.5H), 6.96-6.79 (m, 0.5H), 6.09 (dd, J = 8.3 and 22.4 Hz, 0.5H), 5.89-5.73 (m, 0.5H), 5.19-5.04 (m, 4H), 4.97-4.48 (m, 0.5H), 4.34-4.17 (0.5H), 2.37-2.16 (m, 1H), 2.14-1.97 (m, 4H), 1.93-1.37 (m, 11H), 1.18-1.08 (m, 3H), 1.00-0.92 (m, 3H), 0.92-0.86 (m, 3H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C41H48N6O7S, 769.3378; found, 769.3378.
3-6. Benzyl N-({[(benzyloxy)carbonyl]amino}[(4-{2-[(2S)-2-acetamido-4-methylpentanamido]-3-oxo-3-(1,3-thiazol-2-yl)propyl}cyclohexyl)amino]methylidene)carbamate (37).
화합물 37은 방법 D를 이용하여 무색의 고체형태로 수득하였으며, 수율은 80%이다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.59 (d, J = 7.2 Hz, 0.4H), 8.21 (d, J = 7.9 Hz, 0.6H), 8.10-8.02 (m, 1H), 7.72 (dt, J = 3.0 and 8.1 Hz, 1H), 7.43-7.32 (m, 9H), 7.30 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.26-6.91 (m, 1H), 6.33-6.23 (m, 1H), 5.76-5.64 (m, 1H), 5.20-5.11 (m, 4H), 4.63-4.51 (m, 1H), 4.29 (brs, 0.4H), 3.96 (brs, 0.6H), 2.10-1.98 (m, 5H), 1.91-1.82 (m, 1H), 1.82-1.73 (m, 1H), 1.73-1.45 (m, 7H), 1.45-1.29 (m, 1H), 1.26-1.06 (m, 2H), 1.00-0.94 (m, 3H), 0.93-0.89 (m, 3H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C37H46N6O7S, 719.3221; found, 719.3207.
3-7. (2S)-N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidocyclohexyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamido-4-methylpentanamide (4).
화합물 4는 방법 E를 통해 44% 수율로 획득하였다. 1 H NMR (300 MHz, CD3OD): δ ppm 8.17 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.68-7.53 (m, 2H), 5.81-5.64 (m, 1H), 4.51-4.36 (m, 1H), 3.83-3.67 (m, 0.5H), 3.67-3.56 (m, 0.5H), 2.17-1.99 (m, 1H), 1.95 (s, 2.5H), 1.92 (s, 0.5H), 1.89-1.74 (m, 2H), 1.74-1.58 (m, 4H), 1.57-1.48 (2H), 1.34-1.17 (m, 3H), 1.11 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 0.99-0.78 (m, 6H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C25H36N6O3S, 501.2642; found, 501.2647.
3-8. (2S)-N-[3-(4-carbamimidamidocyclohexyl)-1-oxo-1-(1,3-thiazol-2-yl)propan-2-yl]-2-acetamido-4-meth-ylpentanamide (5).
화합물 4는 방법 E를 통해 20% 수율로 획득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.19-8.00 (m, 2H), 5.83 (brs, 2H), 5.67 (t, J = 10.3 Hz, 0.8H), 4.52-4.40 (m, 0.8H), 4.36 (t, J = 7.4 Hz, 0.1H), 4.29 (t, J = 7.4 Hz, 0.1H), 2.06 (brs, 1H), 2.00 (d, J = 7.6 Hz, 3H), 1.96 (s, 3H), 1.86-1.54 (m, 8H), 1.53-1.24 (m, 3H), 1.03-0.84 (m, 6H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C21H34N6O3S, 451.2486; found, 451.2477.
4. 구아니디노페닐알라닌(guanidinophenylalanine) 유도체 합성
구아니디노페닐알라닌 합성 방법은 도 4와 같다.
4-1. 3-(4-(2,3-Bis((benzyloxy)carbonyl)guanidino)phenyl)-2-((tert-butoxycarbonyl)amino)propanoic acid (38).
건조 methanol (4 mL)에 녹인 N-(tert-butoxycarbonyl)-4-nitro-L-phenylalanine (133 mg, 0.43 mmol) palladium on carbon (5 mg, 0.04 mmol, 0.1 eq) 을 첨가하고 수소가스(50psi) 하에서 3시간 동안 Parr Hydrogenation Apparatus를 이용하여 교반하였다. 혼합물을 셀라이트로 여과하고 감압농축하였다. 반응 혼합물에 N,N'-bis(barbobenzoxy)-1H-pyrazole -1-carboxamidine (195 mg, 0.52 mmol, 1.2 eq) 및 CH2Cl2 (3 mL)을 첨가하였다. 그리고 아르곤 대기 하에서 triethylamine (0.09 mL, 0.65 mmol, 1.5 eq)을 첨가하고 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물은 물과 CH2Cl2 사이에 분배하고 1N HCL로 중화하였다. 혼합 유기층을 수집하고 MgSO4로 건조 후 여과하고 감압농축하였다. 잔유물은 실리카겔상에서 flash column chromatography (eluting with CH2Cl2/methanol, 100:1 to 11:1, v/v)로 정제하였고, 화합물 38은 86% 수율로 수득하였다 (218 mg, 0.37 mmol, 86% yield). 1 H NMR (300 MHz, CD3OD): δ ppm 7.38 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.35-7.20 (m, 10H), 7.14 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 5.12 (s, 4H), 4.30-4.12 (m, 1H), 3.15-3.02 (m, 1H), 2.93-2.76 (m, 1H), 1.32 (s, 9H). 13 C NMR (75 MHz, CD3OD): δ ppm 175.77, 156.30, 153.65, 135.08, 134.70, 129.50, 128.18, 127.95, 122.56, 78.98, 67.70, 55.66, 37.03, 27.35. HRMS: [M+H]+ calculated for C31H34N4O8, 591.2449; found, 591.2473.
4-2. Benzyl N-({[(benzyloxy)carbonyl]amino}({[4-(2-{[(tert-butoxy)carbonyl]amino}-2-[methoxy(methyl)car-bamoyl]ethyl)phenyl]amino})methylidene)carbamate (39).
화합물 39는 방법 A에 따라 90% 수율로 수득하였다. 1 H NMR (300 MHz, CDCl3): δ ppm 11.92 (s, 1H), 10.24 (s, 1H), 7.52 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.46-7.28 (m, 10H), 7.16 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 5.24 (s, 2H), 5.20 (brs, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.94 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 3.69 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 3.04 (dd, J = 5.9 and 13.6 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 7.1 and 13.5 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H). 13 C NMR (75 MHz, CDCl3): δ ppm 172.16, 163.83, 155.21, 153.94, 153.55, 136.59, 135.02, 134.48, 133.72, 129.91, 128.76, 128.56, 128.43, 128.06, 127.98, 122.49, 79.64, 68.48, 67.40, 61.60, 51.51, 38.14, 32.09, 28.35. HRMS: [M+H]+ calculated for C33H39N5O8, 634.2871; found, 634.2894.
4-3. Bnzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-{[(tert-butoxy)carbonyl]amino}-3-oxopropyl]phenyl}amino) ({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (40).
화합물 40은 방법 B에 따라서 89% 수율로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.89 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.59 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.44-7.25 (m, 10H), 7.08 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.86 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.14 (s, 2H), 3.43 (dd, J = 3.3 and 13.4 Hz, 1H), 3.21 (dd, J = 6.2 and 13.1 Hz, 1H), 1.41 (s, 9H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 192.91, 163.83, 155.12, 153.94, 153.61, 153.48, 137.27, 136.60, 135.25, 134.47, 132.97, 130.05, 128.93, 128.77, 128.58, 128.43, 128.07 128.05, 127.98, 127.19, 126.86, 126.66, 125.88, 124.11, 122.46, 122.43, 122.06, 80.00, 68.51, 67.44, 57.53, 38.07, 29.72, 28.34. HRMS: [M+H]+ calculated for C38H37N5O7S, 708.2486; found, 708.2497.
4-4. Benzyl N-({[(benzyloxy)carbonyl]amino}({[4-(2-{[(tert-butoxy)carbonyl]amino}-3-oxo-3-(1,3-thiazol-2-yl)propyl)phenyl]amino})methylidene)carbamate (41).
화합물 41은 방법 B에 따라서 90% 수율로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.89 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.06 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.48 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.42-7.26 (m, 10H), 7.05 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 5.75-5.65 (m, 1H), 5.29-5.17 (m, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.14 (s, 2H), 3.42-3.28 (m, 1H), 3.12 (dd, J = 6.6 and 13.6 Hz, 1H), 1.40 (s, 9H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 191.33, 164.63, 163.83, 155.11, 153.94, 153.51, 145.23, 136.59, 135.18, 134.46, 133.10, 130.00, 128.92, 128.76, 128.57, 128.43, 128.08, 127.98, 126.81, 122.47, 79.91, 68.51, 67.43, 57.45, 38.04, 29.72, 28.32. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C34H35N5O7S, 658.2330; found, 658.2332.
4-5. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-[(2S)-2-acetamido-4-methylpentanamido]-3-oxopropyl]phe-nyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (42).
화합물 42는 방법 D에 따라서 수율 60%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.87 (s, 1H), 10.19 (d, J = 20.9 Hz, 1H), 8.24 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 5.0 and 7.7 Hz, 1H), 7.64-7.53 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.42-7.26 (m, 10H), 7.11 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 6.96 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 6.87 (d, J = 7.7 Hz, 0.5H), 6.12-6.00 (m, 1H), 5.91 (d, J = 8.3 Hz, 0.5H), 5.85 (d, J = 8.3 Hz, 0.5H), 5.24 (s, 2H), 5.17-5.06 (m, 2H), 4.51-4.39 (m, 1H), 3.52 (dd, J = 5.1 and 14.1 Hz, 0.5H), 3.46 (dd, J = 5.0 and 14.2Hz, 0.5H), 3.22 (dd, J = 7.4 and 14.3 Hz, 0.5H), 3.14 (dd, J = 7.7 and 14.1 Hz, 0.5H), 1.96 (d, J = 16.7 Hz, 3H), 1.69-1.37 (m, 3H), 0.89-0.84 (m, 6H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C41H42N6O7S, 736.2908; found, 736.2941.
4-6. Benzyl N-({[(benzyloxy)carbonyl]amino}[(4-{2-[(2S)-2-acetamido-4-methylpentanamido]-3-oxo-3(1,3-thiazol-2-yl)propyl}phenyl)amino]methylidene)carbamate (43).
화합물 43은 방법 D에 따라서 하얀색 고상 형태로 획득하였다(58% yield). 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.87 (s, 1H), 10.18 (d, J = 22.8 Hz, 1H), 8.04 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 11.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.43-7.17 (m, 12H), 7.09 (dd, J = 7.8 and 18.3 Hz, 2H), 6.39-6.21 (m, 1H), 5.97-5.85 (m, 1H), 5.22 (s, 2H), 5.19-5.06 (m, 2H), 4.54-4.42 (m, 1H), 3.45-3.31 (m, 1H), 3.13-3.03 (m, 1H), 1.93 (d, J = 4.4 Hz, 3H), 1.63-1.32 (m, 3H), 0.84 (brs, 6H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 190.52, 190.40, 172.07, 171.79, 170.42, 170.31, 164.48, 163.81, 163.78, 153.90, 153.85, 153.52, 145.25, 136.55, 136.46, 135.22, 134.95, 134.47, 133.29, 133.18, 130.06, 129.97, 128.93, 128.77, 128.59, 128.48, 128.45, 128.18, 128.10, 128.02, 127.02, 122.98, 122.57, 68.52, 67.41, 56.45, 56.32, 51.61, 51.44, 41.15, 41.10, 40.61, 40.56, 37.96, 37.64, 29.72, 24.72, 24.67, 23.11, 22.83, 22.81, 22.77, 22.21. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C37H40N6O7S, 713.2752; found, 713.2780.
4-7. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-(2-acetamidoacetamido)-3-oxopropyl]phenyl}amino) ({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (44).
화합물 44는 방법 D에 따라서 수율 61%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.53 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.44-7.26 (m, 12H), 7.14 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 6.56 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 6.06 (q, J = 5.2 and 7.6 Hz, 1H), 5.22 (s, 2H), 5.11 (s, 2H), 3.90 (dd, J = 5.4 and 16.4 Hz, 1H), 3.78 (dd, J = 5.2 and 16.4 Hz, 1H), 3.48 (dd, J = 4.9 and 14.1 Hz, 1H), 3.16 (dd, J = 7.7 and 14.1 Hz, 1H), 1.94 (s, 3H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 191.93, 171.03, 169.10, 163.64, 163.58, 153.89, 153.53, 137.28, 136.35, 135.07, 134.44, 133.26, 130.04, 128.94, 128.77, 128.59, 128.48, 128.23, 128.17, 128.13, 127.28, 125.90, 123.16, 122.44, 68.56, 67.50, 56.49, 43.39, 37.73, 22.87. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C37H34N6O7S, 707.2282; found, 707.2298.
4-8. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-[(2S)-2-acetamido-3-phenylpropanamido]-3-oxopropyl]ph-enyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (45).
화합물 45는 방법 D에 따라서 수율 62%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.86 (s, 1H), 10.18 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 8.22 (dd, J = 3.1 and 8.0 Hz, 1H), 7.99 (dd, J = 8.0 and 11.6 Hz, 1H), 7.63-7.53 (m, 2H), 7.45-7.30 (m, 10H), 7.28 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.22 (t, J = 7.3 Hz, 0.5H), 7.16 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 7.11-7.06 (m, 0.5H), 6.97 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.62 (dd, J = 4.7 and 7.7 Hz, 1H), 6.10 (d, J = 7.8 Hz, 0.5H), 6.04-5.97 (m, 1H), 5.95-5.90 (m, 0.5H), 5.23 (s, 2H), 5.13 (s, 1H), 5.12 (d, J = 12 Hz, 0.5H), 5.06 (d, J = 12.4 Hz, 0.5H), 4.71-4.62 (m, 1H), 3.44-3.38 (m, 0.5H), 3.27-3.18 (m, 1H), 3.10-2.92 (m, 2.5H), 1.93 (d, J = 2.4 Hz, 3H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 191.65, 191.29, 170.52, 170.32, 170.12, 170.05, 163.78, 163.61, 163.58, 153.92, 153.72, 153.50, 153.47, 137.25, 137.23, 136.54, 136.45, 135.35, 135.11, 134.44, 132.81, 132.36, 129.98, 129.87, 129.30, 129.20, 128.93, 128.77, 128.61, 128.57, 128.44, 128.18, 128.14, 128.10, 128.07, 128.01, 127.26, 127.13, 126.88, 125.91, 125.87, 122.87, 122.58, 122.43, 68.52, 67.41, 56.62, 56.38, 54.61, 54.32, 38.11, 38.89, 37.91, 37.70, 23.19, 23.17. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C44H40N6O7S, 797.2752; found, 797.2771.
4-9. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-[(2S)-2-acetamido-3-(4-hydroxyphenyl)propanamido]-3-oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (46).
화합물 46는 방법 D에 따라서 수율 50%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.23 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 8.0 and 11.7 Hz, 1H), 7.64-7.54 (m, 2H), 7.43-7.22 (m, 10H), 7.04 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 8.2 and 15.1 Hz, 2H), 6.92-6.85 (m, 2H), 6.82 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.69 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.65 (brs, 1H), 6.62 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.02-5.96 (m, 0.5H), 5.88-5.81 (m, 0.5H), 5.36-5.26 (m, 2.5H), 5.22-5.05 (m, 2.5H), 4.57-4.45 (m, 1H), 3.42 (dd, J = 4.6 and 14.3 Hz, 0.4H), 3.35 (dd, J = 3.9 and 14.6 Hz, 0.6H), 3.16-3.05 (m, 1H), 2.96-2.75 (m, 2H), 1.92 (s, 1.3H), 1.89 (s, 1.7H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 190.94, 190.70, 172.03, 171.62, 163.30, 163.16, 155.56, 153.82, 153.43, 137.32, 137.27, 130.79, 130.52, 130.30, 130.19, 129.36, 128.90, 128.68, 128.54, 128.34, 127.41, 126.80, 125.88, 125.23, 122.48, 115.94, 115.75, 69.98, 69.37, 69.18, 56.61, 56.28, 55.89, 55.19, 37.42, 37.30, 36.95, 22.32. HRMS (ESI): [M+Na]+ calculated for C44H40N6O8S, 835.2521; found, 835.2529.
4-10. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-[(2S)-2-acetamido-3-methylbutanamido]-3-oxopropyl]phen-yl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (47)
화합물 47는 방법 D에 따라서 수율 57%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.87 (brs, 1H), 10.20 (s, 1H), 8.24 (dd, J = 5.6 and 7.9 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 4.6 and 7.7 Hz, 1H), 7.64-7.54 (m, 2H), 7.46 (dd, J = 8.4 and 12.2 Hz, 2H), 7.42-7.27 (m, 10H), 7.10 (dd, J = 8.3 and 13.4 Hz, 2H), 6.68 (d, J = 7.7 Hz, 0.5H), 6.63 (d, J = 7.7 Hz, 0.5H), 6.12-6.05 (m, 1H), 6.04 (dd, J = 8.6 and 13.1 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.13 (s, 2H), 4.32-4.22 (m, 1H), 3.47 (dt, J = 5.0 and 14.3 Hz, 1H), 3.26-3.18 (m, 1H), 2.03-2.00 (m, 1H), 1.98 (d, J = 4.6 Hz, 3H), 0.83 (dd, J = 6.8 and 19.0 Hz, 6H). HRMS (ESI): [M+Na]+ calculated for C40H40N6O7S, 771.2571; found, 771.2588.
4-11. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-[(2S)-2-acetamidohexanamido]-3-oxopropyl]phenyl}amin-o)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (48).
화합물 48는 방법 D에 따라서 수율 78%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.24 (dd, J = 8.0 and 12.3Hz, 1H), 8.00 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64-7.53 (m, 2H), 7.45-7.27 (m, 13H), 7.24-7.18 (m, 1H), 7.15 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.90 (d, J = 7.5 Hz, 0.5H), 6.76 (d, J = 7.6 Hz, 0.5H), 6.18-6.02 (m, 2H), 5.34-5.23 (m, 2H), 5.19-5.09 (m, 2H), 4.30 (brs, 0.5H), 4.10 (brs, 0.5H), 3.65-3.51 (m, 1H), 3.18-3.09 (m, 1H), 1.92 (s, 1.5H), 1.86 (s, 1.5H), 1.77-1.67 (m, 1H), 1.55-1.42 (m, 1H), 1.25-1.14 (m, 4H), 0.86-0.78 (m, 3H). HRMS (ESI): [M+Na]+ calculated for C41H42N6O7S, 785.2728; found, 785.2727.
4-12. Benzyl N-[({4-[3-(1,3-benzothiazol-2-yl)-2-[(2R)-2-acetamido-4-methylpentanamido]-3-oxopropyl]phe-nyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (49).
화합물 49는 방법 D에 따라서 수율 58%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.23 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.99 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.61-7.5 (m, 1H), -7.55 (m, 1H), 7.48 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.42-7.29 (m, 11H), 7.11 (dd, J = 1.8 and 8.4 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 7.8 Hz, 0.5H), 6.94 (d, J = 7.3, 0.5H), 6.08-6.03 (m, 1H), 5.94 (dd, J = 7.8 and 27.0 Hz, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.13 (s, 1H), 5.12 (q, J = 12.0 and 31.2 Hz, 1H), 4.48-4.43 (m, 1H), 3.51 (dd, J = 5.4 and 14.4 Hz, 0.5H), 3.46 (dd, J = 5.4 and 14.1 Hz, 0.5H), 3.21 (dd, J = 7.2 and 14.4 Hz, 0.5H), 3.14 (dd, J = 7.8 and 14.4 Hz, 0.5H), 1.97 (s, 1.6H), 1.94 (s, 1.4H), 1.63-1.48 (m, 2H), 1.44-1.39 (m, 0.5H), 1.37-1.32 (0.5H), 0.87 (dd, J = 3.0 and 6.6 Hz, 3H), 0.85 (d, J = 6.0 Hz, 3H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C41H41N6NaO7S, 785.2728; found, 785.2744.
4-13. (2S)-N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamido-4-methylpentanamide (6).
화합물 6는 방법 E에 따라서 수율 69%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.27 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.69 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.65 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 8.0 and 15.2 Hz, 2H), 7.26 (dd, J = 8.0 and 20.4 Hz, 2H), 5.94 (dd, J = 4.4 and 9.5 Hz, 0.5H), 5.89 (dd, J = 4.3 and 9.8 Hz, 0.5H), 4.41-4.26 (m, 1H), 3.63-3.53 (m, 1H), 3.14-3.04 (m, 1H), 1.94 (d, J = 14.5 Hz, 3H), 1.69-1.36 (m, 3H), 0.98-0.91 (m, 6H). HRMS: [M+H]+ calculated for C25H30N6O3S, 495.2173; found, 495.2184.
4-14. (2S)-N-[3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxo-1-(1,3-thiazol-2-yl)propan-2-yl]-2-acetamido-4-methylpentanamide (7).
화합물 7은 방법 E에 따라서 수율 36%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.17 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 7.9 and 16.8 Hz, 2H), 7.22 (dd, J = 8.3 and 11.0 Hz, 2H), 5.83 (dt, J = 4.1 and 9.7 Hz, 1H), 4.37 (t, J = 7.7 Hz, 0.5H), 4.29 (dd, J = 6.5 and 8.6 Hz, 0.5H), 3.56-3.46 (m, 1H), 3.04-2.95 (m, 1H), 1.97 (s, 1.5H), 1.93 (s, 1.5H), 1.69-1.59 (m, 0.5H), 1.56-1.47 (m, 1.5H), 1.47-1.41 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.5 Hz, 1.5H), 0.92 (dd, J = 4.0 and 6.4 Hz, 3H), 0.87 (d, J = 6.4 Hz, 1.5H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 190.23, 190.05, 173.56, 173.44, 171.80, 164.52, 156.79, 156.76, 145.03, 144.92, 136.93, 133.37, 133.26, 130.70, 130.62, 130.56, 127.52, 127.39, 125.36, 125.27, 56.59, 56.54, 56.50, 52.03, 51.91, 51.71, 51.62, 36.62, 36.50, 36.43, 24.49, 24.38, 21.93, 21.87, 20.53. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C21H28N6O3S, 445.2016; found, 445.2019.
4-15. N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamidoaceta-mide (8).
화합물 8은 방법 E에 따라서 수율 42%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.28 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.16d, J = 7.8Hz, 1H), 7.72-7.63 (m, 2H), 7.43 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.02 (dd, J = 4.4 and 9.5 Hz, 1H), 3.83 (q, J = 16.7 and 26.4 Hz, 2H), 3.57 (dd, J = 4.4 and 14.0 Hz, 1H), 3.07 (dd, J = 9.6 and 14.0 Hz, 1H), 1.98 (s, 3H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 191.75, 172.34, 170.27, 164.08, 156.74, 153.44, 137.06, 136.72, 133.40, 130.66, 130.46, 128.06, 127.20, 125.34, 125.21, 125.18, 122.42, 56.55, 41.99, 36.68, 20.93. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C21H22N6O3S, 439.1547; found, 439.1559.
4-16. (2S)-N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamido-3-phenylpropanamide (9).
화합물 9은 방법 E에 따라서 수율 33%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.27 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 8.19-8.15 (m, 1H), 7.72-7.62 (m, 2H), 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.26-7.09 (m, 7H), 5.97-5.89 (m, 1H), 4.63-4.56 (m, 1H), 3.55-3.46 (m, 1H), 3.12-3.01 (m, 2H), 2.86-2.73 (m, 1H), 1.86 (d, J = 13.9 Hz, 3H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C28H28N6O3S, 529.2016; found, 529.2016.
4-17. (2S)-N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamido-3-(4-hydroxyphenyl)propanamide (10)
화합물 10은 방법 E에 따라서 수율 37%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.27 (dd, J = 3.3 and 8.1 Hz, 1H), 8.16 (dd, J = 3.7 and 7.8 Hz, 1H), 7.72-7.62 (m, 2H), 7.41 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.20 (dd, J = 2.3 and 8.4 Hz, 2H), 7.03-6.96 (m, 2H), 6.70-6.65 (m, 1H), 6.62-6.58 (m, 1H), 5.96-5.89 (m, 1H), 4.55-4.50 (m, 1H), 3.52 (dd, J = 4.6 and 14.0 Hz, 0.5H), 3.48 (dd, J = 4.7 and 14.1 Hz, 0.5H), 3.12-3.04 (m, 1H), 2.95 (dt, J = 6.1 and 13.4 Hz, 1H), 2.76-2.66 (m, 1H), 1.89 (s, 1.7H), 1.86 (s, 1.3H). HRMS (ESI): [M+Na]+ calculated for C28H28N6O4S, 567.1785; found, 567.1811.
4-18. (2S)-N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamido-3-methylbutanamide (11).
화합물 11은 방법 E에 따라서 수율 40%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.27 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 7.64 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.49-7.43 (m, 2H), 7.23 (dd, J = 8.4 and 13.4 Hz, 2H), 6.02-5.92 (m, 1H), 4.13 (dd, J = 7.7 and 14.5 Hz, 1H), 3.63-3.53 (m, 1H), 3.11-3.03 (m, 1H), 2.05-1.97 (m, 1H), 1.97 (s, 1.2 H), 1.94 (s, 1.8H), 0.93 (dd, J = 6.8 and 12.8 Hz, 4H), 0.82 (dd, J = 6.8 and 13.1 Hz, 2H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 191.83, 172.55, 172.42, 171.93, 171.76, 164.16, 156.74, 153.43, 137.04, 136.85, 133.31, 132.27, 130.76, 130.67, 128.09, 127.12, 125.45, 125.30, 125.18, 122.46, 122.37, 58.92, 58.75, 56.57, 56.46, 30.17, 20.82, 18.25, 17.33. HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C24H28N6O3S, 481.2016; found, 481.2035.
4-19. (2S)-N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamido-exanamide (12).
화합물 12은 방법 E에 따라서 수율 50%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.27 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.71-7.62 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 7.9 and 10.9 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 8.4 and 11.4 Hz, 2H), 5.95 (dd, J = 4.0 and 9.4 Hz, 0.5H), 5.90 (dd, J = 4.4 and 9.9 Hz, 0.5H), 4.27 (dd, J = 5.8 and 8.6 Hz, 0.5H), 4.22 (dd, J = 5.6 and 8.6 Hz, 0.5H), 3.57 (dt, J = 4.2 and 13.6 Hz, 1H), 3.13-3.05 (m, 1H), 1.94 (d, J = 15.7Hz, 3H), 1.76-1.61 (m, 1H), 1.61-1.46 (m, 1H), 1.34-1.19 (m, 4H), 0.88-0.81 (m, 3H). HRMS (ESI): [M+H]+ calculated for C25H30N6O3S, 495.2173; found, 495.2175.
4-20. (2R)-N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamido-4-methylpentanamide (13).
화합물 13은 방법 E에 따라서 수율 20%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.71 (d, J = 8.2 Hz, 0.2H), 8.38 (d, J = 8.1 Hz, 0.2H), 8.27 (d, J = 8.2 Hz, 0.8H), 8.16 (d, J = 8.2 Hz, 0.8H), 8.09 (d, J = 7.1 Hz, 0.5H), 7.72-7.62 (m, 2H), 7.44 (dd, J =8.3 and 16.1 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 8.3 and 11.8 Hz, 2H), 5.97-5.92 (m, 0.5H), 5.91-5.85 (m, 0.5H), 4.41-4.33 (m, 0.5H), 4.33-4.26 (m, 0.5H), 3.58 (dt, J = 4.6and 14.0 Hz, 1H), 3.13-3.04 (m, 1H), 1.95 (s, 1.7H), 1.93 (s, 1.3H), 1.66-1.58 (m, 0.5H), 1.53-1.36 (m, 2.5H), 0.91 (d, J = 6.6 Hz, 1.5H), 0.88 (dd, J = 3.7 and 6.5 Hz, 2.5H), 0.83 (d, J = 6.3 Hz, 2H). HRMS: [M+H]+ calculated for C25H30N6O3S, 495.2173; found, 495.2178.
4-21. (2S)3{3[({[(benzyloxy)carbonyl]amino}({[(benzyloxy)carbonyl]imino})methyl)amino]phenyl}2{[(tertbutoxy)carbonyl]amino}propanoic acid (59).
화합물 59는 화합물 3-(4-(2,3-Bis((benzyloxy)carbonyl)guanidino)phenyl)-2-((tert-butoxycarbonyl)amino)propanoic acid와 동일한 방법에 따라서 수율 60%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 7.53 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44-7.26 (m, 12H), 7.09 (d, J = 7.6, 1H), 5.22 (brs, 4H), 4.38-4.25 (m, 1H), 3.19 (dd, J = 4.6 and 13.9 Hz, 1H), 2.93 (dd, J = 8.9 and 13.9 Hz, 1H), 1.38 (s, 9H). HRMS: [M+H]+ calculated for C31H34N4O8, 591.2449; found, 591.2467.
4-22. Benzyl N({[(benzyloxy)carbonyl]amino}({3[(2S)2{[(tertbutoxy)carbonyl]amino}2[methoxy(methyl)carbamoyl]ethyl]phenyl}amino)methylidene)carbamate (60).
화합물 60은 방법 A에 따라서 수율 58%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.90 (s, 1H), 10.24 (s, 1H), 7.53 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.42-7.27 (m, 11H), 7.25 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.19-5.10 (m, 3H), 4.91 (brs, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 3.04 (dd, J = 7.1 and 12.7 Hz, 1H), 2.84 (dd, J = 7.1 and 12.7 Hz, 1H), 1.39 (s, 9H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 172.09, 166.86, 155.19, 153.95, 153.58, 137.66, 136.53, 136.38, 134.49, 128.98, 128.93, 128.77, 128.60, 128.44, 128.16, 128.01, 126.45, 123.28, 121.09, 79.64, 68.51, 67.44, 61.56, 38.65, 28.35, 28.30. HRMS: [M+H]+ calculated for C33H39N5O8, 634.2871; found, 634.2898.
4-23. Benzyl N[({3[3(1,3benzothiazol2yl)2{[(tertbutoxy)carbonyl]amino}3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (61).
화합물 61은 방법 B에 따라서 수율 83%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.88 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.21 (d, J = 8.0Hz, 1H), 7.95 (d, = 7.9 Hz, 1H), 7.62-7.50 (m, 3H), 7.42-7.25 (m, 10H), 7.24-7.16 (m, 2H), 7.00-6.90 (m, 1H), 5.87 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 5.40-5.29 (m, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.12 (s, 2H), 3.44 (dd, J = 4.7 and 13.7 Hz, 1H), 3.15 (dd, J = 7.3 and 13.6 Hz, 1H), 1.40 (s, 9H). 13 C NMR (150 MHz, CDCl3): δ ppm 192.95, 163.83, 155.15, 153.93, 153.62, 153.57, 137.59, 136.98, 136.57, 136.35, 134.51, 129.30, 129.15, 128.90, 128.73, 128.53, 128.32, 128.14, 128.06, 127.93, 127.28, 127.06, 126.77, 126.45, 125.94, 125.82, 123.54, 123.39, 122.49, 122.32, 121.66, 121.45, 80.02, 68.53, 68.36, 67.44, 67.29, 67.11, 57.56, 57.36, 38.47, 28.60, 28.41, 28.21, 28.02. HRMS: [M+H]+ calculated for C38H37N5O7S, 708.2486; found, 708.2496.
4-24. Benzyl N[({3[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2S)2acetamido4methylpentanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (62).
화합물 62는 방법 D에 따라서 수율 46%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.23 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.98 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.62-7.53 (m, 2H), 7.52-7.26 (m, 14H), 7.06-6.97 (m, 2H), 6.16-6.05 (m, 1H), 6.04-5.95 (m, 1H), 5.26 (s, 2H), 5.14 (s, 2H), 4.46-4.31 (m, 1H), 3.64-3.48 (m, 1H), 3.22-3.08 (m, 1H), 1.90 (s, 1.5H), 1.80 (s, 1.5H), 1.59-1.42 (m, 2H), 1.41-1.31 (m, 1H), 0.85-0.81 (m, 6H). HRMS: [M+H]+ calculated for C41H42N6O7S, 736.2908; found, 763.2945.
4-25. Benzyl N[({4[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2S)2acetamidopentanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (63).
화합물 63은 방법 D에 따라서 수율 72%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.24 (dd, J = 8.2 and 17.4 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 8.4 and 10.7 Hz, 1H), 7.64-7.53 (m, 2H), 7.47-7.27 (m, 14H), 7.18 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 8.1 Hz, 0.5H), 6.78 (d, J = 8.7 Hz, 0.5H), 6.29 (d, J = 7.9 Hz, 0.5H), 6.23 (d, J = 6.5 Hz, 0.5H), 6.20-6.14 (m, 0.5H), 6.07-6.01 (m, 0.5H), 5.39-5.25 (m, 2H), 5.22-5.09 (m, 2H), 4.27 (q, J = 7.1 Hz, 0.5H), 3.98 (brs, 0.5H), 3.72-3.64 (m, 0.5H), 3.57 (dd, J = 4.9 and 14.1 Hz, 0.5H), 3.16-3.04 (m, 1H), 1.91 (s, 1.5H), 1.81 (s, 1.5H), 1.73-1.62 (m, 1H), 1.54-1.39 (m, 1H), 1.30-1.17 (m, 2H), 0.84 (dt, J = 3.1 and 7.3 Hz, 3H). HRMS: [M+Na]+ calculated for C40H41N6O7S, 771.2571; found, 771.2550.
4-26. Benzyl N[({4[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2S)2acetamidobutanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (64).
화합물 64는 방법 D에 따라서 수율 44%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.86 (brs, 1H), 10.20 (brs, 1H), 8.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 8.03-7.96 (m, 1H), 7.64-7.53 (m, 2H), 7.45 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.43-7.27 (m, 12H), 7.15-7.08 (m, 2H), 6.91 (dd, J = 8.0 and 21. 6 Hz, 1H), 6.18 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 6.13-6.03 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.13 (s, 2H), 4.33 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 3.54-3.45 (m, 1H), 3.25-3.12 (m, 1H), 1.95 (s, 3H), 1.84-1.76 (m, 1H), 1.59-1.48 (m, 1H), 0.83 (dt, J = 7.4 and 20.8 Hz, 3H). HRMS: [M+Na]+ calculated for C39H38N6O7S, 757.2415; found, 757.2419.
4-27. Benzyl N[({4[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2S)2acetamidopropanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (65).
화합물 65는 방법 D에 따라서 수율 64%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.25 (dd, J = 7.0 and 7.6 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 2.8 and 7.5 Hz, 1H), 7.64-7.54 (m, 2H), 7.46 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.43-7.27 (m, 11H), 7.11 (dd, J = 8.4 and 14.8 Hz, 2H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 0.5H), 6.93 (d, J = 8.0 Hz, 0.5H), 6.20 (dd, J = 7.5 and 15.8 Hz, 1H), 6.12-6.01 (m, 1H), 5.24 (s, 2H), 5.16-5.05 (m, 2H), 4.51-4.40 (m, 1H), 3.58-3.45 (m, 1H), 3.26-3.07 (m, 1H), 1.93 (d, J = 21.2 Hz, 3H), 1.28 (d, J = 7.1 Hz, 1.5H), 1.20 (d, J = 7.0 Hz, 1.5H). HRMS: [M+H]+ calculated for C38H36N6O7S, 721.2439; found, 721.2464.
4-28. Benzyl N[({4[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2S)2acetamido4(methylsulfanyl)butanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (66).
화합물 66은 방법 D에 따라서 수율 66%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.24 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 8.00 (dd, J = 6.1 and 7.2 Hz, 1H), 7.65-7.53 (m, 2H), 7.45 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.43-7.25 (m, 12H), 7.19 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.11-6.97 (m, 1H), 6.41 (dd, J = 7.4 and 23.2 Hz, 1H), 6.12-6.02 (m, 1H), 5.32-5.22 (m, 2H), 5.18-5.08 (m, 2H), 4.56-4.43 (m, 1H), 3.55 (dt, J = 4.7 and 14.0 Hz, 1H), 3.17-3.08 (m, 1H), 2.52-2.44 (m, 1H), 2.43-2.37 (m, 0.5H), 2.34-2.27 (m, 0.5H), 2.03 (d, J = 5.5 Hz, 3H), 2.00-1.94 (m, 1H), 1.92 (d, J = 12.0 Hz, 3H), 1.88-1.78 (m, 1H). HRMS: [M+Na]+ calculated for C40H40N6O7S2, 803.2292; found, 803.2297.
4-29. Benzyl N[({4[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2S)2acetamido3methylpentanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (67).
화합물 67은 방법 D에 따라서 수율 55%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.87 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 8.24 (dd, J = 4.3 and 7.4 Hz, 1H), 7.99 (t, J= 7.1 Hz, 1H), 7.62-7.50 (m, 2H), 7.49-7.27 (m, 12H), 7.16-7.06 (m, 2H), 6.88-6.66 (m, 1H), 6.18-6.01 (m, 2H), 5.23 (s, 2H), 5.13 (s, 2H), 4.47-4.26 (m, 1H), 3.51-3.41 (m, 1H), 3.27-3.14 (m, 1H), 1.97 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 1.49-1.27 (m, 2H), 1.12-0.96 (m, 1H), 0.89-0.75 (m, 6H). HRMS: [M+H]+ calculated for C41H42N6O7S+, 763.2908; found, 763.2881.
4-30. Benzyl N[({4[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2S)3cyclohexyl2acetamidopropanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (68).
화합물 68은 방법 D에 따라서 수율 30%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.87 (d, J = 4.0 hz, 1H), 10.19 (d, J = 23.3 Hz, 1H), 8.24 (t, J = 8.9 Hz, 1H), 7.99 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.64-7.53 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40-7.26 (m, 10H), 7.10 (dd, J = 6.3 and 8.3 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 8.3 Hz, 0.5H), 6.90 (d, J = 7.9 Hz, 0.5H), 6.10-6.00 (m, 1H), 5.93 (d, J = 8.2 Hz, 0.5H), 5.87 (d, J = 8.1 Hz, 0.5H), 5.23 (s, 2H), 5.16-5.06 (m, 2H), 4.52-4.43 (m, 1H), 3.53-3.42 (m, 1H), 3.26-3.12 (m, 1H), 1.95 (d, J = 20.2 Hz, 3H), 1.76-1.55 (m, 6H), 1.44-1.29 (m, 1H), 1.27-1.05 (m, 4H), 0.95-0.77 (m, 2H). HRMS: [M+Na]+ calculated for C44H46N6O7S, 825.3041; found, 825.3032.
4-31. Benzyl N[({4[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2S)2acetamido3(1Hindol3yl)propanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (69).
화합물 69는 방법 D에 따라서 수율 64%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 11.98 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 9.41 (s, 0.8H), 9.29 (s, 0.2H), 8.21 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.66-7.50 (m, 2H), 7.46-7.33 (m, 7H), 7.25-7.15 (m, 6H), 7.12-7.03 (m, 2H), 6.94 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.46 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 6.23 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 6.03-5.92 (m, 2H), 5.26 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 5.19-5.06 (m, 2H), 4.86-4.77 (m, 1H), 3.43-3.12 (m, 2H), 2.97-2.85 (m, 1H), 2.71 (dd, J = 9.9 and 14.5 Hz, 1H), 2.02 (s, 1H), 1.97 (s, 2H). HRMS: [M+H]+ calculated for C46H41N7O7S, 836.2861; found, 836.2901.
4-32. Benzyl N[({4[3(1,3benzothiazol2yl)2[(2R)2acetamido3phenylpropanamido]3oxopropyl]phenyl}amino)({[(benzyloxy)carbonyl]amino})methylidene]carbamate (70).
화합물 70은 방법 D에 따라서 수율 70%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CDCl3): δ ppm 8.22 (t, J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.63-7.54 (m, 2H), 7.44-7.38 (m, 6H), 7.37 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.33-7.27 (m, 3H), 7.25-7.18 (m, 3H), 7.17-7.03 (m, 5H), 6.75-6.63 (m, 1H), 6.28 (brs, 0.5H), 6.11 (brs, 0.5H), 6.05-5.91 (m, 1H), 5.36-5.22 (m, 2H), 5.19-5.01 (m, 2H), 4.58-4.48 (m, 0.5H), 4.38 (brs, 0.5H), 3.47 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.15-2.86 (m, 3H), 2.17 (s, 3H). HRMS: [M+Na]+ calculated for C44H40N6O7S, 819.2571; found, 819.2582.
4-33. (2S)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(3carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]2acetamido4methylpentanamide (50).
화합물 50은 방법 E에 따라서 수율 60%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.24 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.69-7.58 (m, 2H), 7.38 (q, J = 7.9 Hz, 1H), 7.33-7.22 (m, 2H), 7.17-7.10 (m, 1H), 5.97-5.89 (m, 1H), 4.36-4.25 (m, 1H), 3.60-3.52 (m, 1H), 3.05 (dt, J = 10.1 and 13.4 Hz, 1H), 1.90 (d, J = 3.7 Hz, 3H), 1.59-1.32 (m, 3H), 0.89-0.80 (m, 6H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 193.05, 192.87, 174.82, 173.21, 173.08, 165.53, 165.50, 158.08, 158.03, 154.77, 154.76, 140.66, 140.62, 138.39, 136.28, 136.15, 131.12, 131.06, 130.02, 129.93, 129.40, 129.37, 128.55, 128.54, 127.57, 127.39, 127.16, 126.51, 124.83, 124.77, 123.79, 57.83, 57.74, 53.24, 53.12, 41.66, 38.09, 37.93, 25.77, 23.22, 23.15, 22.36, 22.32, 22.04, 21.98. HRMS: [M+H]+ calculated for C25H30N6O3S, 495.2173; found, 495.2190.
4-34. (2S)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(4carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]2acetamidopentanamide (51).
화합물 51은 방법 E에 따라서 수율 42%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.27 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72-7.62 (m, 2H), 7.45 (dd, J = 8.5 and 10.7 Hz, 2H), 7.23 (dd, J = 8.4 and 12.0 Hz, 2H), 5.99-5.89 (m, 1H), 4.32-4.20 (m, 1H), 3.58 (dt, J = 4.4 and 14.0 Hz, 1H), 3.13-3.03 (m, 1H), 1.94 (d, J = 14.6 Hz, 3H), 1.74-1.45 (m, 2H), 1.42-1.17 (m, 2H), 0.92-0.82 (m, 3H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 193.23, 193.04, 174.72, 174.57, 173.25, 173.15, 165.53, 165.51, 158.18, 158.15, 154.81, 154.80, 138.42, 138.31, 134.78, 134.71, 132.19, 132.11, 132.05, 132.00, 129.41, 129.38, 128.57, 128.55, 126.78, 126.69, 126.57, 126.54, 126.53, 124.16, 123.80, 58.01, 58.00, 54.81, 54.58, 37.85, 37.58, 35.07, 34.86, 22.34, 22.26, 20.08, 19.96, 13.98, 13.96. HRMS: [M+H]+ calculated for C24H28N6O3S, 481.2016; found, 495.2030.
4-35. (2S)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(4carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]2acetamidobutanamide (52).
화합물 52는 방법 E에 따라서 수율 50%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.26 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.70-7.61 (m, 2H), 7.44 (dd, J = 8.2 and 10.7 Hz, 2H), 7.22 (dd, J = 8.3 and 10.5 Hz, 2H), 6.00-5.91 (m, 1H), 4.24-4.13 (m, 1H), 3.57 (dt, J = 4.3 and 14.3 Hz, 1H), 3.11-3.02 (m, 1H), 1.94 (d, J = 15.0 Hz, 3H), 1.81-1.67 (m, 1H), 1.65-1.52 (m, 1H), 0.94 (t, J = 7.4 Hz, 1.2H), 0.84 (t, J = 7.4 Hz, 1.8H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 193.26, 193.08, 174.55, 174.37, 173.33, 173.21, 165.53, 158.19, 154.83, 138.43, 138.31, 138.21, 134.80, 134.72, 132.10, 132.04, 129.43, 129.40, 128.57, 126.83, 126.77, 126.71, 126.54, 123.81, 57.98, 57.96, 56.42, 56.18, 37.91, 37.68, 26.25, 26.01, 22.35, 22.26, 10.66, 10.53. HRMS: [M+H]+ calculated for C23H26N6O3S, 467.1860; found, 467.1882.
4-36. (2S)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(4carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]2acetamidopropanamide (53).
화합물 53은 방법 E에 따라서 수율 50%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.23 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.14-8.09 (m, 1H), 7.67-7.58 (m, 2H), 7.39 (dd, J = 8.4 and 10.0 Hz, 2H), 7.19 (dd, J = 8.5 and 9.8 Hz, 2H), 5.95-5.88 (m, 1H), 4.33-4.20 (m, 1H), 3.54 (dt, J = 4.4 and 13.8 Hz, 1H), 3.04 (dd, J = 13.9 Hz, 1H), 1.90 (d, J = 12.5 Hz, 3H), 1.27 (d, J = 7.2 Hz, 1.5H), 1.21 (d, J = 7.2 Hz, 1.5H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 193.22, 193.05, 175.26, 175.18, 173.09, 172.98, 165.49, 158.20, 158.15, 154.81, 138.41, 138.22, 138.10, 134.81, 134.73, 132.10, 132.05, 131.96, 129.42, 129.41, 128.58, 126.83, 126.76, 126.70, 126.65, 126.55, 123.80, 58.00, 57.92, 50.64, 50.28, 37.98, 37.79, 22.35, 22.26, 17.81, 17.75. HRMS: [M+H]+ calculated for C22H24N6O3S, 453.1703; found, 453.1721.
4-37. (2S)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(4carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]2acetamido4(methylsulfanyl)butanamide (54).
화합물 54는 방법 E에 따라서 수율 8%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3CN/D2O = 1:1, v/v): δ ppm 8.80 (dd, J = 5.9 and 7.1 Hz, 1H), 8.70 (dd, J = 3.8 and 7.7 Hz, 1H), 8.29-8.17 (m, 2H), 7.90 (dd, J = 8.3 and 12.3 Hz, 2H), 7.74 (dd, J = 8.1 and 17.9 Hz, 2H), 6.43-6.34 (m, 1H), 4.91-4.85 (m, 1H), 4.09-3.97 (m, 1H), 3.68-3.55 (m, 1H), 3.00-2.79 (m, 2H), 2.51 (d, J = 7.3 Hz, 3H), 2.44 (d, J = 5.8 Hz, 3H), 2.41-2.55 (m, 2H). 13 C NMR (150 MHz, CD3CN/D2O = 1:1, v/v): δ ppm 192.22, 192.11, 172.39, 172.21, 163.85, 163.79, 161.32, 161.08, 155.96, 155.91, 152.81, 136.58, 136.20, 136.05, 132.74, 132.69, 130.70, 130.56, 128.36, 127.54, 125.51, 125.35, 125.02, 122.66, 56.33, 56.31, 52.36, 52.06, 36.11, 35.84, 30.49, 30.46, 28.96, 28.92, 21.41, 21.37, 13.82, 13.80. HRMS: [M+H]+ calculated for C23H28N6O3S2, 513.1737; found, 513.1749.
4-38. (2S)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(4carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]2acetamido3methylpentanamide (55).
화합물 55는 방법 E에 따라서 수율 22%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.24 (dd, J = 2.6 and 7.8 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69-7.58 (m, 2H), 7.46-7.40 (m, 2H), 7.24-7.17 (m, 2H), 5.98-5.87 (m, 1H), 4.32-4.12 (m, 1H), 3.61-3.49 (m, 1H), 3.09-3.00 (m, 1H), 1.96-1.89 (m, 3H), 1.83-1.69 (m, 1H), 1.48-1.17 (m, 1H), 1.16-1.03 (m, 1H), 0.89-0.72 (m, 6H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 193.22, 193.06, 174.14, 173.42, 165.54, 158.18, 154.80, 138.40, 138.38, 138.37, 138.25, 138.21, 134.77, 134.71, 132.10, 132.09, 132.00, 129.39, 129.36, 128.54, 126.80, 126.75, 126.64, 126.52, 123.79, 59.49, 59.13, 58.43, 58.41, 58.13, 58.03, 58.00, 57.89, 38.06, 37.87, 37.75, 37.72, 37.39, 27.18, 27.14, 25.80, 25.66, 22.39, 22.37, 22.31, 15.78, 14.86. HRMS: [M+H]+ calculated for C25H30N6O3S, 495.2173; found, 495.2186.
4-39. (2S)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(4carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]3cyclohexyl2acetamidopropanamide (56).
화합물 56은 방법 E에 따라서 수율 55%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.23 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.67 (m, 2H), 7.40 (dd, J = 8.3 and 14.6 Hz, 2H), 7.20 (dd, J = 8.3 and 14.2 Hz, 2H), 5.93-5.83 (m, 1H), 4.38-4.26 (m, 1H), 3.57-3.48 (m, 1H), 3.10-3.01 (m, 1H), 1.91 (d, J =14.8 Hz, 3H), 1.70-1.57 (m, 5H), 1.51-1.34 (m, 2H), 1.24-1.07 (m, 4H), 0.90-0.78 (m, 2H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 193.13, 192.98, 175.04, 173.20, 173.07, 165.51, 158.18, 158.15, 154.79, 154.77, 138.41, 138.38, 138.24, 138.21, 134.78, 134.69, 132.17, 132.12, 132.03, 131.93, 129.40, 129.37, 128.55, 128.53, 126.76, 126.72, 126.64, 126.56, 126.54, 123.78, 57.99, 57.93, 52.64, 52.42, 40.38, 40.18, 37.74, 37.48, 35.19, 35.18, 34.68, 34.60, 33.52, 33.30, 27.49, 27.25, 27.22, 27.10, 27.05, 22.36, 22.29. HRMS: [M+H]+ calculated for C28H34N6O3S, 535.2486; found, 535.2494.
4-40. (2S)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(4carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]2acetamido3(1Hindol3yl)propanamide (57).
화합물 57은 방법 E에 따라서 수율 20%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.24 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 8.14 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 7.71-7.60 (m, 2H), 7.52 (dd, J = 7.8 and 14.9 Hz, 1H), 7.35-7.20 (m, 2H), 7.14 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.11-6.97 (m, 4H), 5.95-5.80 (m, 1H), 4.68-4.58 (m, 1H), 3.48-3.32 (m, 1H), 3.24-3.15 (m, 1H), 3.07-2.96 (m, 2H), 1.88 (d, J = 10.9 Hz, 3H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 192.92, 192.62, 174.14, 173.98, 173.15, 165.48, 158.10, 154.79, 138.43, 138.05, 137.99, 137.96, 137.80, 134.73, 134.68, 132.18, 132.04, 131.96, 129.43, 129.40, 128.76, 128.67, 128.59, 128.55, 126.68, 126.61, 126.57, 124.51, 124.48, 123.80, 123.78, 122.48, 122.31, 119.86, 119.70, 119.27, 119.12, 112.37, 112.28, 110.85, 110.79, 58.00, 57.77, 55.78, 55.72, 38.19, 37.81, 28.88, 28.76, 22.44, 22.36. HRMS: [M+H]+ calculated for C30H29N7O3S, 568.2125; found, 568.2154.
4-41. (2R)N[1(1,3benzothiazol2yl)3(4carbamimidamidophenyl)1oxopropan2yl]2acetamido3phenylpropanamide (58).
화합물 58은 방법 E에 따라서 수율 24%로 수득하였다. 1 H NMR (600 MHz, CD3OD): δ ppm 8.30-8.24 (m, 1H), 8.18-8.13 (m, 1H), 7.72-7.61 (m, 2H), 7.44-7.13 (m, 9H), 5.93 (dt, J = 4.8 and 9.3 Hz, 1H), 4.60 (dd, J = 5.9 and 8.7 Hz, 1H), 3.56-3.45 (m, 1H), 3.13-3.01 (m, 2H), 2.87-2.74 (m, 1H), 1.86 (d, J = 13.0 Hz, 3H). 13 C NMR (150 MHz, CD3OD): δ ppm 192.97, 192.92, 173.78, 173.55, 173.10, 172.99, 165.50, 165.47, 158.12, 154.80, 138.51, 138.48, 138.44, 138.33, 138.26, 138.06, 138.00, 134.81, 134.73, 132.13, 132.04, 130.15, 130.11, 129.44, 129.35, 128.58, 127.78, 127.70, 126.71, 126.66, 126.59, 126.56, 123.81, 57.90, 57.84, 56.07, 56.02, 38.74, 38.60, 38.00, 37.70, 22.33, 22.25. HRMS: [M+H]+ calculated for C28H28N6O3S, 529.2016; found, 529.2018.
[실시예: 형광을 이용한 헵신 저해능 평가]
헵신은 세린 프로타아제의 일종으로 Boc-QAR-AMC를 기질로 한다. 따라서, 형광분광광도계를 이용하여 AMC(7-amino-4-methylcoumarin)의 여기 380 nm 및 방출 460 nm의 형광 변화를 측정하여 헵신의 기질 분해 능력을 평가할 수 있다. 이에, 화합물 1 내지 13의 헵신 억제 효능을 평가하기 위하여, 화합물 1 내지 13 (10 nM ~ 10 μM)을 DMSO에 희석하고 96-웰 플레이트에 활성화된 헵신(# 4776-SE-010, R & D Systems, Minneapolis, Minnesota)과 혼합하였다. 헵신은 제조사의 권장에 따라 Tris 완충액에 5.5배 희석하고 37℃에서 24시간 배양한 후 글리세롤로 50% 희석하여 사용하였다.
화합물 1 내지 13의 최종 처리 농도는 DMSO가 2%로 이하로 유지하였고, Hepsin에 대한 최종 분석 농도는 TNC 버퍼 (25mM Tris, 150mM NaCl, 5mM CaCl2, 0.01 % Triton X-100, pH 8)에서 0.3nM 이었다. 실온에서 30분간 인큐베이션 (incubation) 한 후에, 반응액에 헵신과 기질(# ES014, R & D Systems, Minneapolis, Minnesota)을 넣어준 후 30 분, 60분, 120분에 최대 여기 380 nm와 최대 방출 460 nm 형광분광광도계를 이용하여 측정하였다. 최종 기질 농도는 최종 반응 부피(100 μL)에서 150 μM 이었다.
GraphPad Prism 버전 6.04 소프트웨어 프로그램 (GraphPad Software, San Diego, CA, www.graphpad.com)을 사용하여 평균 반응 속도 대 억제제 농도의 플롯에서 억제제 IC50을 결정하기 위해 4 개의 매개 변수 곡선 맞춤이 사용하였으며, IC50은 3가지 개별 실험 결정의 평균을 나타낸다. Ki 값은 Cheng 및 Prusoff 방정식을 사용하여 계산하였다 (Ki = IC50 / (1 + [S] / Km)).
화합물 NO. Hepsin K i value
(nM, at 2 h)		 Matriptase K i value
(nM, at 2 h)		 Hepsin/Matriptase
Selectivity Index
1 >10,000 >10,000 -
2 >10,000 >10,000 -
3 >10,000 >10,000 -
4 505 ± 39 >10,000 >20
5 2110 ± 1200 >10,000 >4.7
6 50.5 ± 12.2 1120 ± 57.6 22
7 527 ± 92 >10,000 >19
8 2450 ± 501 46.2 ± 2.2 0.02
9 357 ± 101 488 ± 88.3 1.4
10 129 ± 21.1 398 ± 49.4 3.1
11 162 ± 10.0 465 ± 109 2.9
12 302 ± 15.6 396 ± 11.8 1.3
13 151 ± 11.8 2780 ± 138 18
50 >10,000 >10,000 -
51 333 ± 41.7 421 ± 8.0 1.3
52 453 ± 38.0 312 ± 48.9 0.7
53 1720 ± 355 69.0 ± 1.5 0.04
54 296 ± 26.5 306 ± 15.5 1.0
55 287 ± 48.9 2346 ± 656 8.2
56 539 ± 66.5 3020 ± 975 5.6
57 149 ± 9.2 211 ± 19.6 1.4
58 551 ± 37.5 529 ± 92.7 1.0
상기 표 1로 확인되는 바와 같이, 화합물 1 내지 13, 50 내지 58은 헵신의 활성을 억제함을 알 수 있으며, 특히 화합물 6 은 하기 식의 화합물로 헵신의 활성부위에 강력하게 결합하여 그 활성 억제 효능이 현저하게 높음을 알 수 있었다.
Figure 112022095872111-pat00060
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (11)

  1. 하기 화학식의 (2S)-N-[1-(1,3-벤조티아졸-2-일)-3-(4-카르바미미드아미도페닐)-1-옥소프로판-2-일]-2-아세트아미도-4-메틸펜탄아미드((2S)-N-[1-(1,3-benzothiazol-2-yl)-3-(4-carbamimidamidophenyl)-1-oxopropan-2-yl]-2-acetamido-4-methylpentanamide)를 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물로, 상기 암은 헵신 과발현 암종으로서, 난소암, 유방암, 자궁암, 신장암, 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
    Figure 112022095872111-pat00061
  2. 제1항에 따른 화합물 또는 이의 염을 유효성분으로 포함하는 암 진단용 약학적 조성물.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 화합물 또는 이의 염은 형광 또는 방사선 표지된 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 암은 헵신 과발현 암종으로서, 난소암, 유방암, 자궁암, 신장암, 및 전립선암으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 암인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 염을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암의 전이 가능성 예측을 위한 정보제공방법.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
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