CN103619345A - 皇冠提取物、提取方法和它作为胆固醇酯转移酶蛋白质（cetp）抑制剂的用途 - Google Patents

皇冠提取物、提取方法和它作为胆固醇酯转移酶蛋白质（cetp）抑制剂的用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了用于本发明的目的的被称为DLBS1449的皇冠提取物和/或包括所述皇冠提取物的草药馏分和药物制剂。根据本发明教导的草药提取物有效用于抑制胆固醇酯转移酶蛋白质（CETP）的表达和活性，增加HDL胆固醇水平，降低LDL胆固醇水平，而不升高血压，因此所述提取物被进一步用于动脉粥样硬化的治疗中。

Description

皇冠提取物、提取方法和它作为胆固醇酯转移酶蛋白质(CETP)抑制剂的用途
技术领域
本发明涉及用于本发明的目的的被称为DLBS1449的皇冠的提取物，包含提取方法及该提取物的生物活性，所述提取物显示出针对胆固醇酯转移酶蛋白质（CETP）表达和活性的抑制活性。
背景技术
胆固醇酯转移酶蛋白质（CETP）为74-kDa的糖蛋白，并具有疏水特性1。该蛋白主要在肝脏中合成，并分泌到血浆中。此外，CETP还在淋巴、脂肪组织、心、肾和小肠中以较低浓度表达2。CETP在胆固醇逆转运（RCT）过程中起作用，其中，该蛋白介导高密度脂蛋白（HDL）颗粒中的胆固醇酯向低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）颗粒中的甘油三酯的转换1,3-5。许多先前的研究显示CETP促进胆固醇酯在LDL颗粒中积聚的过程，这造成了抑制对来自血液循环的胆固醇的去除过程4。在流行病学研究中报道了，具有遗传性CETP缺陷的主体具有更高量的HDL胆固醇和更低量的LDL胆固醇。因此，CETP在用于血脂异常和动脉粥样硬化治疗的药物研究中成为潜在的治疗目标。
目前，关于CETP的研究旨在研究CETP活性及它对人类血浆中HDL胆固醇和甘油三酯水平的变化的影响5,6。由CETP表达的下降而引起的高含量的HDL胆固醇非常重要，其中报道HDL胆固醇水平与动脉粥样硬化风险因子存在反向联系7。HDL的防动脉粥样硬化的性质在RCT过程发挥作用，所述RCT过程中，在周围细胞中的过量的胆固醇被分配到肝脏中，以被分泌6。已经生产并研究了一些CETP抑制剂，例如胆固醇酯转移酶蛋白质抑制肽和CETP反义寡脱氧核苷酸（ODN）8,9。然而，这两种抑制剂仍在研究中。此外，已经有被开发到临床试验阶段的作为CETP抑制剂的药物，即torcetrapib。然而，考虑到在服用该药物的患者中高数目的死亡率，该产品在临床试验中未提供正面结果10。进一步研究发现，torcetrapib造成患者血压升高，这导致死亡。
在本发明中教导了一种草本植物皇冠的提取方法和用途。本地已知为神冠果（Mahkota Dewa）的皇冠为印度尼西亚原生植物，通常作为观赏植物存在于庭院中，或作为耐阴植物存在于花园中。令人惊奇地，通过利用它的茎、果肉或叶子，这种植物能够被用作CETP抑制剂。在本发明前，没有任何研究说明如本发明中所要求保护的皇冠提取物作为CETP抑制剂的使用或益处。
发明内容
将在优选的实施方式中说明本发明所提供的目标和/或方案。说明的实施方式用于理解本发明的目的，并不限制能够从本发明的实践中所了解到的变化和/或组合和/或修改的其它实施方式的可能性。将从此处权利要求中详细描述的元素和组合中实现本发明所教导的目标和/或方案。
如在实施方式中所解释并在本申请中被广泛描述的那样，为实现所述方案并与本发明的目的一致，本发明的第一个方面涉及通过在有机溶剂中提取而制备的皇冠提取物，所述皇冠提取物有效作用为胆固醇酯转移酶蛋白质（CETP）抑制剂。
本发明的第二个方面涉及有效增加HDL胆固醇水平并降低LDL胆固醇水平的有效量或剂量的皇冠提取物和/或它的馏分或它的化合物组，所述提取物和/或馏分或化合物组作为单独活性成分或以组合使用。
本发明的第三个方面涉及药物组合物，包括（1）作为单独活性成分或以组合使用的有效量或有效剂量的皇冠的提取物或它的馏分，（2）药学可接受且生理学适合的载剂、赋形剂或添加剂，所述载剂、赋形剂或添加剂作用为CETP抑制剂，但不限于此。
附图说明
这里将描述本发明中的附图说明。
图1为显示0～100μg/ml浓度的DLBS1449对CETP基因表达水平的影响的图。
图2为显示DLBS1449在蛋白水平上对CETP的活性的影响的图。
图3为显示了DLBS1449在蛋白水平上对CETP和ApoA-1的影响的作为免疫印迹结果的蛋白带。
图4为显示DLBS1449处理对CETP转录调节过程中涉及的LXR-α和SREBP-1基因表达的影响的图。
图5为显示DLBS1449处理对胆固醇逆转运（RCT）过程中涉及的LDL-R、SR-B1和ApoB基因表达的影响的图。
图6为显示DLBS1449对CYP11B2基因表达影响的图。
图7为显示DLBS1449对CYP11B1基因表达影响的图。
图8为显示不饱和脂肪酸花生四烯酸和亚油酸以及它们与DLBS1449的组合对CETP基因表达的影响的图。
具体实施方式
将通过提供实施例详细地说明本发明，本发明的范围并未被限制为所提供的实施例。
从皇冠中获得根据本发明的教导的提取物和/或馏分。因此，将说明提取过程和DLBS1449作为CETP抑制剂的影响。
A.皇冠的提取过程
本发明教导了皇冠的提取过程，其中可获得具有作为CETP抑制剂活性的提取物。本发明教导的皇冠的提取过程使用具有有机溶剂的浸化和/或渗透系统。在10-60℃、优选25-50℃的温度，用8至12倍于原料重量的有机溶剂提取皇冠的干切片，优选它的果肉，和/或将所述干切片在萃取器中渗透。用于该过程中的有机溶剂包括但不限于纯态（96%）或具有各种含量的水作为稀释剂的醇类，包括但不限于甲醇和乙醇，有机溶剂的浓度优选为70%至96%。提取过程持续2到6个小时，伴随在60rpm搅拌，或者可调整搅拌速度。通过过滤从浆状物分离液体提取物。为了获得干的提取物，在40至80℃的温度和70至550mbar范围的压力下通过旋转蒸发仪液体蒸发液体提取物，或者可调整所述温度和压力。此外，使用真空炉干燥所述浓缩物2至4个小时，以获得干燥的提取物。用于本发明的目的的干燥的提取物被称为DLBS1449。
已经进一步表征通过本发明中教导的方法获得的DLBS1449，并且结果显示获得的DLBS1449至少包含，例如脂肪酸、皂苷和酚的化合物组，及其它能够起到特定生物效应的次级代谢产物或它们的组合。此外，还使用薄层色谱（TLC）法定量地鉴定DLBS1449。该TLC法使用硅胶板作为固定相，以及氯仿∶甲醇（10∶1）作为移动相。TLC结果显示包含具有Rf0.16～0.35的化合物组的DLBS1449起到特定的生物活性，这在说明书中将进一步说明。
B.DLBS1449对CETP表达和活性的影响
用于本发明的细胞培养物为人类肝癌细胞HepG2，其中CETP主要在肝脏细胞中合成。在添加10%的血清、100μg/ml的青霉素-链霉素抗生素和1mM丙酮酸钠的极限必需α培养基中培养。然后，将这些细胞在37℃、5%CO2中培养24个小时。
方法
对CETP基因表达的体外影响
在六孔板中培养HepG2细胞，直到达到70%的细胞密度。然后进行培养基的改变，使用不含血清的培养基，然后培养24个小时。然后，用0（对照）、25、50、75和100μg/ml浓度的DLBS1449处理这些细胞24个小时。
RNA分离和实时PCR
使用Trizol溶液，根据该溶液所带步骤，分离用DLBS1449处理的HepG2细胞的总RNA。然后用NanoDrop仪器测量总RNA，并用电泳法显示。此外，使用PCR温度循环仪器在已优化的特定条件下通过RT-PCR过程使用具有良好的质量的RNA合成cDNA。
测量CETP活性
使用CETP抑制剂药筛选试剂盒（美国BioVision），根据获自所述试剂盒的手册进行测量。使用的DLBS1449的浓度为0、25、50、75和100μg/ml，重复三次，并且将未加入CETP的DLBS1449的相同的样品用作对照。
结果和讨论
使用PCR的研究显示DLBS1449能够在mRNA水平降低CETP基因表达。当提高DLBS1449的给药水平时，CETP基因表达的降低更大（图1）。如图2显示，除了在mRNA水平降低CETP基因表达，DLBS1449还具有在蛋白水平作为CETP活性抑制剂的能力。该抑制活性为与剂量有关的方式。以前的研究主张CETP抑制是提高HDL胆固醇水平的策略之一5,6。CETP的缺乏使得从HDL到VLDL及LDL胆固醇的胆固醇酯转移过程被抑制，因而减少了VLDL和LDL颗粒的形成，并且提高了HDL水平。其中HDL胆固醇的量提高的这种条件造成了与抑制在动脉壁上的斑或粉瘤的形成有关的抗动脉粥样硬化6。因此，通过如本发明所教导的抑制CETP表达和活性，认为DLBS1449能够提高血液中的HDL胆固醇水平，并且由于LDL胆固醇水平的降低，可防止动脉粥样硬化的可能性。进一步在体内分析了胆固醇水平的提高。
C.DLBS1449对CETP活性、HDL和LDL胆固醇及甘油三酯的体内影响
为了确保DLBS1449给药对CETP活性、HDL、LDL和甘油三酯水平的影响，对雄性新西兰白兔进行体内研究。
方法
将试验动物分成两组，对照组和用DLBS1449处理的处理组。对照组中的兔子未用DLBS1449处理，其它在处理组中的兔子以35mg/1,5kg体重的剂量口服给药DLBS1449。对兔子给药DLBS1449四周。在给药该提取物前后进行CETP活性、HDL和LDL胆固醇和甘油三酯水平的测量。使用的样品为取自每个兔子耳朵的血浆。对于每种影响参数使用特定的试剂盒进行测量。
结果和讨论
如表2显示，研究结果显示对兔子DLBS1449给药4周造成CETP活性降低0.3%，而在对照组中，CETP活性提高5.13%。还发现LDL胆固醇的降低，其中处理组中降低了6.8%，高于对照组中3.2%的降低。从表2还可知，对照兔子中HDL胆固醇水平降低了13.3%；另一方面，在处理的兔子中，HDL胆固醇水平提高了15.9%。此外，发现每个试验动物组中甘油三酯水平提高，然而，处理组中的提高低于对照组，它们分别为3.5%和16.5%。
结果显示DLBS1449能够有效控制兔子血液中的胆固醇水平，其中，HDL水平提高，CETP活性及LDL和甘油三酯的水平降低。该体内研究结果与体内研究结果一致，显示DLBS1449能够被用作CETP抑制剂。
表1试验的兔子的各影响参数的特征和初始水平
表2.用或未用DLBS1449提取物处理的兔子的各个影响参数，例如CETP活性、HDL和LDL胆固醇和甘油三酯水平基于初始水平的百分比变化。
Figure BDA0000397900870000052
D.DLBS1449在蛋白水平上对CETP和ApoA-1的影响
在烧瓶T-75中培养HepG2细胞，直到达到70%的细胞密度。然后用不含血清的培养基替代生长培养基，并培养24个小时，其中，细胞密度达到80-90%。然后用0、50和100μg/ml的DLBS1449处理细胞。
方法
细胞外蛋白分离
收集处理的培养基，并使用具有膜的离心管将最初体积浓缩10倍，所述膜能够基于蛋白的分子量分离蛋白。在这种情况下，使用的膜为能够分离大于和小于10Kda的分子量的蛋白的膜。通过以5000rpm离心15分钟进行分离。收集的蛋白为具有大于10Kda的分子量的蛋白。然后，使用Bradford方法分析浓缩的培养基中的蛋白浓度。使用免疫印迹法的CETP和ApoA-1蛋白分析
然后使用含10%的丙烯酰胺的凝胶根据蛋白的分子量分离蛋白。在100V的电压下进行SDS-PAGE电泳过程150分钟。使用印迹试剂盒将凝胶中的蛋白转移至PVDF（聚偏二氟乙烯）膜，以500mA操作75分钟。在转移过程后，用阻滞缓冲液（在PBS-t缓冲液中5%的脱脂奶）培养该膜2小时。然后，用识别人类ApoA-1和CETP蛋白的多克隆抗体过夜培养该膜。作为内部对照，使用识别微管蛋白的多克隆抗体。然后，继续用识别和结合了先前与ApoA-1和CETP蛋白结合的多克隆抗体的二级抗体继续培养该膜。这个培养过程进行2个小时。然后，向膜上加入发光氨试剂。二级抗体将断裂发光氨试剂中的底物并发光，所发出的光可于暗室中在胶片纸上检测到。
结果和讨论
免疫印迹结果显示DLBS1449能够减少被HepG2细胞分泌到培养基中的CETP蛋白。从图3中可知，CETP蛋白条带随DLBS1449浓度的增加而变细。该结果与显示CETP在mRNA水平表达降低的图1的结果一致。表达降低的越多，就产生越少量的蛋白。
从体内研究结果发现，在DLBS1449处理后，HDL胆固醇的水平提高。因此，还对ApoA-1进行了免疫印迹分析，其中，该蛋白为HDL颗粒的主要部分。图3显示了ApoA-1蛋白的量增加，特别是在100μg/ml的浓度。该结果揭示了HDL胆固醇量的增加是被细胞合成的ApoA-1蛋白水平提高的结果。HDL血浆通过将来自周围组织的胆固醇转移为肝脏中的胆固醇酯(ester cholesteryl)而防止动脉粥样硬化，其中的胆固醇酯将作为胆汁酸被分泌。该路径的第一阶段为ApoA-1接收胆固醇并将其转变为HDL11。因此，ApoA-1的增加是提高的HDL胆固醇水平的一个最重要的因素，而HDL胆固醇水平在动脉粥样硬化的预防中起重要作用。
E.DLBS1449对CETP转录过程、胆固醇转运和血压的影响
方法
该基因分析使用以各浓度的DLBS1449处理的HepG2细胞。从HepG2细胞分离RNA，然后使用定量实时PCR技术分析该RNA，其中，将每种基因表达（LXR-α、SREBP-1、SR-B1、LDL-R、ApoB、CYP11B2和CYP11B1）标准化为作为内部对照基因的肌动蛋白的表达。在这个过程中，使用对于每个基因特异的引物和退火温度。该过程的结果通过使用相对表达计算方法通过实时定量PCR仪器中的软件直接显示。结果和讨论
DLBS1449对调节CETP转录的基因表达的影响
CETP转录通过调节基因调节，所述调节基因影响CETP转录的启动子。在该实验中，发现影响该过程的基因包括肝X受体α（LXR-α）和固醇调节因子结合蛋白-1（SREBP-1）。如图4中显示，DLBS1449处理降低了两种基因的表达。
LXR-α为诱导CETP转录并保持胆固醇逆转运（RCT）过程的细胞核受体12。当该基因结合到类维生素X受体（RXR）时，形成了异源二聚体，其中，该复合体在调节体内胆固醇水平中起重要的作用。在肝脏中，LXR-α通过诱导SREBP-1基因表达介导胆固醇代谢。因此，如该实验中显示，LXR-α基因的降低也将引起SREBP-1基因的降低。
SREBP-1为通过激活其它基因而调控胆固醇合成的转录因子，所述其它基因之一为CETP。SREBP-1基因表达的降低进一步表明了CETP基因表达的降低。这个相互关系表示与将被分配到肝脏中的内质网中过多的胆固醇的量相关的负反馈系统11。以前研究的CETP表达的降低与CETP转录因子表达的降低一致，而CETP转录因子表达的降低造成体内CETP基因自身的抑制或降低。本发明清楚地显示DLBS1449通过在其转录水平上和蛋白合成中抑制CETP而控制胆固醇水平。
DLBS1449对胆固醇转运过程中涉及的基因表达的影响
除了对CETP的影响，还认为DLBS1449能够影响与体内胆固醇代谢有关的其它基因。在这种情况下，进一步研究了DLBS1449对胆固醇分配和对它的构成基因的影响。胆固醇逆转运（RCT）包括胆固醇从细胞转运到动脉壁，通过血浆向肝脏的胆固醇分配及通过胆汁的分泌过程。该过程与促进胆固醇转运的基因相关6。这些基因包括清道夫受体B类1型（SR-B1）、LDL受体（LDL-R）、载脂蛋白B（ApoB）。
实验的结果显示DLBS1449能够控制在胆固醇转运中起作用的基因的水平。从图5可看到，当给药剂量提高（25-100μg/ml）时，SR-B1基因、HDL胆固醇受体的表达降低，而LDL-R基因的基因表达提高。该LDL-R基因表达基因在50μg/ml的DLBS1449时增加最多，达到对照表达的3.4倍，而在75和100μg/ml的更高浓度的DLBS1449中，仍升高了该基因的表达，但分别为对照组的2.6和1.5倍的较低水平（图5）。此外，从图5可知，当给药剂量提高（25-100μg/ml）时，作为LDL胆固醇组分的ApoB基因表达降低。
SR-B1基因表达的降低与血液中HDL的胆固醇水平成反比，其中，HDL代谢的降低因此导致血液中可用的HDL的胆固醇水平的提高。已知SR-B1通过介导LDL代谢过程起作用，但不在降解过程中起作用，也不作用为HDL组分11,13。此外，已经发现一些证据显示有助于RCT过程的CETP活性的降低能够通过SR-B1路径选择性提高HDL代谢。通过降低SR-B1基因表达和CETP活性，从而提高了HDL胆固醇。另一方面，LDL-R基因表达升高和ApoB基因表达下降的情况显示，通过肝脏的LDL胆固醇代谢经由LDL受体提高，并且没有ApoB基因介导的新的LDL颗粒的合成。因此，血液中的胆固醇水平下降。
DLBS1449对CYP11B2和CYP11B1基因的影响
已经进入临床试验阶段的一种CETP抑制剂为torcetrapib。然而，由于服用该药物的患者的高数目的死亡率，该药物无法通过临床试验。患者的死亡由血压的升高引起。一些文献揭示血压的升高是由于CYP11B2和CYP11B1表达及与人类血压相关的醛固酮合成酶量的提高而发生的。CYP11B2和CYP11B1为分别在皮质醇和醛固酮的生物合成的最终阶段作用的两种酶14。为避免相似的现象，分析了DLBS1449对CYP11B2和CYP11B1基因的影响。该实验结果显示DLBS1449能够降低CYP11B2和CYP11B1的基因表达。CYP11B2的基因表达在达到50μg/ml的DLBS1449剂量时降低，并且直至100μg/ml的DLBS1449剂量时，表达水平看来不变（图6），其中表达水平的降低达到正常条件的60%。除此之外，还在用达到100μg/ml的DLBS1449处理的CYP11B1基因中发现了基因表达的降低，其中，所述降低达到75-80%（图7）。因此，得出结论，使CYP11B2和CYP11B1的基因表达降低的根据本发明教导的DLBS1449可安全地用作CETP抑制剂，而不会升高血压。
F.双不饱和脂肪酸和DLBS1449对CETP基因表达的组合影响
已知具有各种链长和不饱和水平的脂肪酸对脂质代谢中酶和蛋白的表达有影响。在该实验中，还研究了双不饱和脂肪酸和它与DLBS1449的组合对CETP基因表达的影响。已知双不饱和脂肪酸能够降低CETP基因表达。在该实验中使用的脂肪酸为花生四烯酸（AA）和亚油酸（LA），其中，这些类型的脂肪酸具有高不饱和水平，已知这对CETP基因的降低具有显著的影响。
方法
在六孔板中培养HepG2细胞，直到达到60%的细胞密度。然后改变培养基，使用不含血清的培养基培养24个小时。然后用4种不同的处理方式处理这些细胞，所述处理方式为30μM的花生四烯酸、30μM的亚油酸、花生四烯酸与75μg/ml的DLBS1449的组合及亚油酸与75μg/ml的DLBS1449的组合。这些处理进行24个小时。
RNA分离和实时定量PCR
使用Trizol溶液，根据该溶液所带步骤，分离用DLBS1449处理的HepG2细胞的总RNA。然后用NanoDrop仪器测量总RNA，并用电泳法显示。此外，使用PCR温度循环仪器在已优化的特定条件下通过RT-PCR过程使用具有良好的质量的RNA合成cDNA。
结果和讨论
在30μM的浓度下，这两种类型的双不饱和脂肪酸，花生四烯酸和亚油酸，能够降低CETP基因的表达，其中，亚油酸产生的降低更多（图8）。当这些不饱和的脂肪酸与75μg/ml的DLBS1449结合时，CETP基因的表达降低得更多（图8）。脂蛋白颗粒中脂肪酸的浓度影响了由CETP介导的胆固醇酯的转移，其中，低浓度的脂肪酸将刺激和提高CETP活性，而在另一方面，脂肪酸浓度提高到最右水平将抑制CETP活性2。
mRNA水平的分析是CETP蛋白分泌过程中的主要决定因素。在该实验中，显示不饱和的脂肪酸降低了CETP在mRNA水平上的表达。如在先前的研究中发现，CETP表达的降低还影响了CETP的大量形成2。除此之外，本发明还教导了不饱和脂肪酸和DLBS1449的结合对CETP基因表达的影响。数据显示双不饱和脂肪酸和DLBS1449之间在降低CETP的基因表达中具有正面联系（图8），其中，通过加入DLBS1449，CETP基因表达呈现更大的降低。
G.组合物、药物制剂和营养品
本发明包括含有效量或剂量的单独或以组合作为活性成分的DLBS1449的药物组合物，其包括药学可接受且生理学适合的载剂材料、赋形剂或添加剂。
如本发明教导，在制备药物组合物的过程中，活性成分DLBS1449可与赋形剂混合或溶于赋形剂中，或与能够被制成胶囊、小袋（sachet）、纸及其它包装材料形式的载剂混合。
如果将药学可接受的赋形剂用作溶剂，该赋形剂可为固体、半固体或液体（口服或注射）的形式，作用为用于活性成分的载剂或介质。因此，根据本发明的药物组合物可以丸剂、胶囊、片剂、粉末、小袋、溶液、糖浆、乳液、悬浮液、泡腾片、凝胶、软膏、乳膏和漱口药、按摩油、栓剂或注射剂的形式制造。除此之外，根据本发明的含DLBS1449的药物组合物还可作为补充剂、维生素，以及食品和饮料产品生产。
一些合适的赋形剂的实例为微晶纤维素、明胶、乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、磷酸钙、硅酸钙及其它。适合本发明教导的配方还可包含润滑剂（例如：滑石、硬脂酸镁、矿物油）、湿润剂、防腐剂、甜味剂和调味剂。
根据本发明的组合物可使用制药工业中已经应用的方法用这样的配方来制造，所述配方在患者服用这样的剂型后使活性成分直接释放、缓释或控释。可将根据本发明的片剂或丸剂涂布以延长提取物的半反应期，从而降低使用的频率。
在将该组合物配制为固体形式，例如片剂的方法中，可将作为活性成分的DLBS1449与赋形剂混合以从根据本发明的组合物形成含均匀混合物的初始配方。初始配方为含均匀分散的DLBS1449活性成分的混合物，因此该配方可根据合适的剂量分配成例如胶囊、片剂或丸剂的形式。
根据本发明，可将额外的保护涂层涂布到片剂或丸剂上，以减小或掩盖来自所述组合物或活性物质DLBS1449的苦味。
根据本发明的教导，有效浓度或剂量的DLBS1449为其中提取物用作CETP抑制剂的浓度或剂量。有效量取决于患者的生理状态（包括体重、年龄和其它因素）；及癌细胞的类型、大小和数量以及其它目标病理状态。可通过将活性成分DLBS1449与水或例如羟丙基纤维素的其它表面活性剂，或其它相容材料混合，从草药配方制备例如饮料的液体剂型。
对于制备草药配方的糖浆剂型，需要前述例如用于生产饮料的材料。然而，对于糖浆制剂，需要其它组分，例如增稠剂、稳定剂和其它。
可通过将活性成分DLBS1449与例如明胶、卡拉胶、果胶、阿拉伯胶、瓜胶和/或其它材料的特定水胶体混合制备例如果冻的半固体制剂
可通过使用活性成分DLBS1449作为对身体健康有重要影响的组分制备例如饼干、面包和蛋糕的固体食物制剂中的草药配方。根据本发明的教导的例如饼干、面包和蛋糕的固体食物制剂实现为使用例如黄油、糖、蛋、盐和其它支持材料的共同制剂。
H.工业应用
DLBS1449的提取物和/或药物组合物可以工业规模用于提取物、干粉提取物和/或药物组合物的生产中，特别是作为以提高HDL胆固醇水平并降低LD的胆固醇水平的CETP抑制剂用于可为固体、半固体或液体的口服药剂或食物和饮料制品。
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Claims (13)

1.一种通过下述方法获得的皇冠提取物和/或所述提取物的馏分或源自所述皇冠提取物的化合物组，所述方法包括：
（a）使用有机溶剂以及在10至60℃的温度下搅拌来提取皇冠，
（b）蒸发在步骤（a）中使用的所述有机溶剂。
2.根据权利要求1所述的提取物，其中提取过程使用有机溶剂，所述有机溶剂包括但不限于具有70%至96%的浓度的乙醇。
3.根据权利要求1所述的提取物，至少包括脂肪酸，以及皂苷和酚及其它次级代谢产物的化合物的组，或其用于特定生物效应的组合。
4.根据权利要求1所述的提取物，单独或以组合作为活性成分，所述提取物以有效量或剂量以抑制CETP基因表达和活性。
5.根据权利要求1所述的提取物，单独或以组合作为活性成分，所述提取物以有效量或剂量提高HDL胆固醇水平。
6.根据权利要求5所述的提取物，其中所述皇冠提取物提高ApoA-1蛋白水平并抑制SR-B1基因表达。
7.根据权利要求1所述的提取物，单独或以组合作为活性成分，所述提取物以有效量或剂量降低LDL胆固醇水平。
8.根据权利要求7所述的提取物，其中所述皇冠提取物提高LDL-R基因表达并抑制ApoB基因表达。
9.根据权利要求1所述的提取物，其中所述皇冠提取物不造成血压升高。
10.根据权利要求9所述的提取物，其中所述提取物抑制CYP11B2和CYP11B1的基因表达。
11.根据权利要求1所述的提取物作为与抑制动脉粥样硬化的形成相关的抗动脉粥样硬化剂在用于制备药物组合物、补充剂、食物或饮料中的用途，所述提取物以有效量存在，以单独形式或组合作为活性成分，其中包括药学可接受且生理学适合的载剂、赋形剂或添加剂。
12.一种药物组合物，所述药物组合物包括以单独形式或组合用作活性成分的根据权利要求1所述的提取物，并包括药学可接受且生理学适合的载剂、赋形剂或添加剂，其中所述药物组合物在无菌或未灭菌的产品中以固体、半固体或液体形式制造。
13.一种用于促进健康益处的食物或饮料产品，包括单独或以组合作为活性成分的根据权利要求1所述的提取物和/或馏分。
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