CN103609438A - 一种马尾藻组织培养的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种马尾藻组织培养的方法，包括制备无菌外植体和将外植体接种于诱导培养基上诱导丝状愈伤组织形成，诱导温度为18-20℃；马尾藻假根于0.5%的聚维酮处理3min，然后于1-5%的次氯酸钠溶液中消毒5-10min可以获得无菌成活的外植体；1LPESI培养基中添加KT0.1-1mg、NAA1-2mg、蔗糖30g、琼脂7g，高温高压灭菌10-20min后有利于马尾藻形成愈伤组织；先黑暗再光照的培养方式有利于愈伤组织的诱导和增殖。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种马尾藻组织培养的方法。
背景技术
马尾藻是一种大型经济褐藻，藻体长度最大可达7 m以上，马尾藻形成的自然藻场蕴藏着丰富的生物资源，是鱼类、虾蟹类良好的繁育场所，是海洋生产力最高的生态系统之一。 马尾藻富含糖类、脂类、蛋白质、维生素、矿物质和多种人体必需的微量元素，其开发利用前景非常广阔。马尾藻是一种多年生海藻，由于生长速度快、生物量大以及在浅海生态环境中重要的生态服务功能，可作为“蓝色碳汇”、藻场重建、生态系统环境修复、人工鱼礁和海洋牧场重要的构建物种之一，具有巨大的经济效益、生态效益和社会效益。
马尾藻的种质资源比较匮乏，目前主要通过有性繁殖途径进行人工育种，繁殖时间比较长，且需要大量的种藻作为采孢子的来源，目前马尾藻的商业养殖尚不普及，主要以自然资源作为种质来源，不能为人工育种提供稳定、充足的种藻来源。
植物组织培养技术不但可以在短时间内繁殖出大量的愈伤组织或者丛生芽，且再生的植株与原始植株没有遗传差异性；而愈伤组织可以继代增殖形成新的愈伤组织，愈伤组织也可以诱导形成芽或根从而形成新的植株，此种繁殖方法的繁殖系数很高，可以达到事半功倍的效果，是最有效的植物培养方法。而马尾藻的组织培养技术目前还不成熟，还没有成功的方法可以稳定的形成大量的愈伤组织或者丛生芽。
发明内容
针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种马尾藻组织培养的方法，以马尾藻的假根作为外植体，诱导愈伤组织形成，为马尾藻提供丰富的种质资源。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：
一种马尾藻组织培养的方法，包括如下步骤：以马尾藻的假根作为外植体，清洗干净后，于0.5%的聚维酮处理3min，然后于1-5%的次氯酸钠溶液中消毒5-10min；将消毒后的外植体用无菌过滤海水清洗干净后切成长度为0.3-0.5mm的切段，将切段接种于添加激素的固体PESI培养基中，先于全黑暗、18℃条件下培养7d，然后移入光照强度为3000-4000Lx、光照时间为12h、温度为20℃的条件下继续培养20-30d至愈伤组织形成。
进一步的，所述的培养基的配置方法为，1L PESI培养基中添加KT 0.1-1mg、NAA1-2mg、蔗糖30g、琼脂7g，高温高压灭菌10-20min。
优选的，所述的1L PESI培养基中添加KT 0.5 mg、NAA 1.5 mg。
进一步的，所述的次氯酸钠的浓度为2-4%，消毒时间为7-9min。
优选的，所述的次氯酸钠的浓度为3%，消毒时间为8min。
本发明的有益效果是：
首次成功的以马尾藻假根作为外植体诱导愈伤组织形成，愈伤组织呈丝状，且愈伤组织的诱导率可以达到72%，愈伤组织可以增殖从而形成新的愈伤组织，既可以作为丛生芽诱导的载体，还可以为马尾藻提供充足的种质资源。
具体实施方式
以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果：
实施例1：
以马尾藻的假根作为外植体，清洗干净后，于0.5%的聚维酮处理3min，然后于3%的次氯酸钠溶液中消毒8min；将消毒后的外植体用无菌过滤海水清洗干净后切成长度为0.3-0.5mm的切段；将切段接种于固体PESI培养基中，1L PESI培养基中添加KT 0.1mg、NAA1mg、蔗糖30g、琼脂7g；先于全黑暗、18℃条件下培养7d，然后移入光照强度为3000-4000Lx、光照时间为12h、温度为20℃的条件下继续培养28d至愈伤组织形成；共接种100块假根切块，100块组织块中有58块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为58%。
实施例2：
以马尾藻的假根作为外植体，清洗干净后，于0.5%的聚维酮处理3min，然后于3%的次氯酸钠溶液中消毒8min；将消毒后的外植体用无菌过滤海水清洗干净后切成长度为0.3-0.5mm的切段；将切段接种于固体PESI培养基中，1L PESI培养基中添加KT 1mg、NAA2mg、蔗糖30g、琼脂7g；先于全黑暗、18℃条件下培养7d，然后移入光照强度为3000-4000Lx、光照时间为12h、温度为20℃的条件下继续培养28d至愈伤组织形成；共接种100块假根切块，100块组织块中有69块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为69%。
实施例3：
以马尾藻的假根作为外植体，清洗干净后，于0.5%的聚维酮处理3min，然后于3%的次氯酸钠溶液中消毒8min；将消毒后的外植体用无菌过滤海水清洗干净后切成长度为0.3-0.5mm的切段；将切段接种于固体PESI培养基中，1L PESI培养基中添加KT 0.1mg、NAA2mg、蔗糖30g、琼脂7g；先于全黑暗、18℃条件下培养7d，然后移入光照强度为3000-4000Lx、光照时间为12h、温度为20℃的条件下继续培养28d至愈伤组织形成；共接种100块假根切块，100块组织块中有60块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为60%。
实施例4：
以马尾藻的假根作为外植体，清洗干净后，于0.5%的聚维酮处理3min，然后于3%的次氯酸钠溶液中消毒8min；将消毒后的外植体用无菌过滤海水清洗干净后切成长度为0.3-0.5mm的切段；将切段接种于固体PESI培养基中，1L PESI培养基中添加KT 1mg、NAA1mg、蔗糖30g、琼脂7g；先于全黑暗、18℃条件下培养7d，然后移入光照强度为3000-4000Lx、光照时间为12h、温度为20℃的条件下继续培养28d至愈伤组织形成；共接种100块假根切块，100块组织块中有65块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为65%。
实施例5：
以马尾藻的假根作为外植体，清洗干净后，于0.5%的聚维酮处理3min，然后于3%的次氯酸钠溶液中消毒8min；将消毒后的外植体用无菌过滤海水清洗干净后切成长度为0.3-0.5mm的切段；将切段接种于固体PESI培养基中，1L PESI培养基中添加KT 0.5mg、NAA1.5mg、蔗糖30g、琼脂7g；先于全黑暗、18℃条件下培养7d，然后移入光照强度为3000-4000Lx、光照时间为12h、温度为20℃的条件下继续培养28d至愈伤组织形成；共接种100块假根切块，100块组织块中有72块外植体上有愈伤组织形成，愈伤组织诱导率为72%。
上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种马尾藻组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：以马尾藻的假根作为外植体，清洗干净后，于0.5%的聚维酮处理3min，然后于1-5%的次氯酸钠溶液中消毒5-10min；将消毒后的外植体用无菌过滤海水清洗干净后切成长度为0.3-0.5mm的切段，将切段接种于添加激素的固体PESI培养基中，先于全黑暗、18℃条件下培养7d，然后移入光照强度为3000-4000Lx、光照时间为12h、温度为20℃的条件下继续培养20-30d至愈伤组织形成。
2.根据权利要求1所述的马尾藻组织培养的方法，其特征在于，所述的培养基的配置方法为：1L PESI培养基中添加KT 0.1-1mg、NAA1-2mg、蔗糖30g、琼脂7g，高温高压灭菌10-20min。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的马尾藻组织培养的方法，其特征在于，所述的1L PESI培养基中添加KT 0.5 mg、NAA 1.5 mg。
4.根据权利要求1所述的马尾藻组织培养的方法，其特征在于，所述的次氯酸钠的浓度为2-4%，消毒时间为7-9min。
5.根据权利要求1或权利要求4所述的马尾藻组织培养的方法，其特征在于，所述的次氯酸钠的浓度为3%，消毒时间为8min。
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