CN1036080A - 表面抗原的快速检测法 - Google Patents

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冼德汉
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Abstract

一种表面抗原的快速检查法，它涉及的是一种化 学反应的检查方法，本发明是在传统的Elisa检查方 法的基础上，在反应的过程中加入了促结液及促酶稀 释液，使反应明显加快，灵敏度提高的一种新的方 法。此方法不但用于检测乙型肝炎表面抗原，也用于 其它免疫复合物的检查，它的优点在于明显提高了工 作效率，同时能控制抗原抗体的解离。

Description

一种表面抗原的检测方法。它所涉及的是化学试验的一种检测方法，也就是如何利用一种较快捷的方法检测乙型肝炎的表面抗原。
目前人们检测乙型肝炎表面抗原通用的有放射免疫法及传统的Elisa检测法，放射免疫法其优点是快捷，灵敏度高。但上述检查对人体有损害，国际上已限制使用。Elisa检测法是采用一种叫Elisa试剂盒，内有一块聚苯乙烯小孔，经抗体包被后，加入检测标本，置37-40℃水浴中孵育4小时，即可使抗原抗体结合为表面抗原复合物呈桔红色。用本法反应简单，准确率也较高。但本方法的不足之处在于费时较长，同时当抗原抗体互相作用生成免疫复合物的同时也有部分免疫复合物在解离成游离的抗原和抗体，因此影响了反应的速度及灵敏度。
在检测乙型肝炎表面抗原的时候，为了节省时间，同时在整个化学反应过程中不使已生成的免疫复合物被解离成抗原及抗体。本发明的目的就是在反应过程中采用了加入一种不带电荷的直链大分子多糖，分子量在6000的聚乙二醇作为反应的促结液及酶稀释液的方法，从而克服了现有技术的不足之处。
本发明的技术特点是通过以下步骤完成的：用传统的Elisa试剂盒的聚苯乙烯板小孔载体经抗体包被后加入检测标本，再加入6%聚乙二醇促结液，混匀后置37-45℃水浴中孵育15-20分钟，最佳温度为43℃标本中的抗原在聚乙二醇的作用下，可迅速与载体的抗体结合成免疫复合物（包被抗HBs+HBsAg (6%聚乙二醇)/() 抗HBs·HBsAg），经洗涤后，再加入4%聚乙二醇促酶稀释液，置37-45℃，最佳43℃水浴中孵育15-20分钟，即生成双抗体夹心的酶联免疫复合物（抗HBs·HBsAg+ (抗HBs-HRP)/(4%聚乙二醇) 抗HBs-HBsAg-抗HBs-HRP）。再加入邻苯二胺为底物即生成桔红色的表面抗原抗体复合物。整个过程历时40-60分钟。
为了进一步叙述本发明的技术特征，下面以实施例加以说明：操作方法：包被用抗HBs 0.1毫升/孔，4℃24小时，洗涤三次，在吸水纸上扣干，加样，每孔0.1毫升，并没阳性对照孔，阴性对照孔，空白对照孔。每孔加6%促结液，混匀置37-45℃20分钟，最佳43℃，洗涤三次扣干，加酶标记物及4%酶稀释液，每孔0.1毫升置37-45℃，最佳43℃20分钟，洗涤5次，每次加满洗涤液即停留1分钟，倾去扣干。最后每孔加底物0.1毫升。结果判断：目测法阴性为无色或极淡粉红色，阳性为桔红色。比色法（波长492nm）先用空白校零点，然后读取各孔光密度值， (样品OD值)/(阴性平均OD值) ≥2.1判断阳性，否者为阴性。
放射免疫、传统Elisa法、快速检查法的比较：
例数 放射免疫 传统Elisa法 快速法
76例 40（＋） 30（＋） 37（＋）
阳性率 52.6% 39.5% 48.7%
注“+”为乙型肝炎表面抗原阳性的标本。
本发明的优点是在传统的Elisa试剂盒的基础上，在化学反应的过程中加入了促结液及促酶稀释液，此两种液体均为聚乙二醇，它为一种不带电荷的直链大分子多糖，分子量在6000，可促进抗原决定基团与载体抗体的结合点互相结合，并能抑制免疫复合物解离，促进免疫复合物进一步聚合，故反应时间短，又能提高试剂盒的灵敏度等优点。本方法不但能用于检查乙型肝炎表面抗原，也能用于其它免疫复合物的检查。

Claims (3)

1、一种表面抗原的快速检测法，它是在已配制好的聚苯乙烯板小孔经抗体包被后，加入检测标本，放置37-40℃水浴中孵育4-5小时而生成抗原抗体复合物(抗HBs-HRP)呈桔红色，本发明的特征在于：在加入聚乙二醇(PEG)促结液混匀后置37-45℃水浴中孵育15-20分钟，标本中的抗原在聚乙二醇的作用下，可迅速与载体的抗体结合成免疫复合物（抗HBs+HBsAg (PEG)/() 抗HBs·HBsAg)，经洗涤后，再加入促酶稀释液置37-45℃水浴中孵育15-20分钟，即生成双抗体夹心的酶联免疫复合物(抗HBs·HBsAg+ (抗HBs-HRP)/(PEG) 抗HBs-HBsAg-抗HBs-HRP)再加入邻苯二胺底物液即生成桔红色。整个过程历时40-60分钟。
2、根据权利要求1所述的表面抗原快速检测法，其特征在于水浴中的最佳温度为43℃。
3、根据权利要求1所述的表面抗原快速检查法，其特征在于促结液为6%聚乙二醇，促酶稀释液为4%聚乙二醇。
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