CN104345143A - 提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法 - Google Patents

提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104345143A
CN104345143A CN201310343210.6A CN201310343210A CN104345143A CN 104345143 A CN104345143 A CN 104345143A CN 201310343210 A CN201310343210 A CN 201310343210A CN 104345143 A CN104345143 A CN 104345143A
Authority
CN
China
Prior art keywords
working fluid
alkaline phosphatase
human iga
secondary antibody
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201310343210.6A
Other languages
English (en)
Inventor
朱京山
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BEIJING H & J NOVOMED Co Ltd
Original Assignee
BEIJING H & J NOVOMED Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BEIJING H & J NOVOMED Co Ltd filed Critical BEIJING H & J NOVOMED Co Ltd
Priority to CN201310343210.6A priority Critical patent/CN104345143A/zh
Publication of CN104345143A publication Critical patent/CN104345143A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供一种提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，包括根据抗人IgA碱性磷酸酶自身特点配制相应的酶标二抗工作液；其改进之处是，在所述配制好的酶标二抗工作液中依次加入下列物质：（1）加入低浓度高分子聚合物，使加入的高分子聚合物溶解于配制好的酶标二抗工作液中；（2）在加入高分子聚合物的酶标二抗工作液中再加入抗人IgA碱性磷酸酶，进行搅拌，使其充分溶解，得到提升抗人IgA碱性磷酸酶活性的酶标二抗工作液；通过加入低浓度的高分子聚合物达到提高抗人IgA碱性磷酸酶的反应活性，提高检测灵敏度的效果。

Description

提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法
技术领域
本发明涉及生物体外诊断试剂的制备，尤其涉及一种提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法。
背景技术
目前，免疫学检测技术及其产品已广泛应用于重大传染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤标志物、食品安全及优生优育等众多检测领域，在这些检测技术如酶联免疫吸附试验，酶联免疫斑点法试验，胶体金快速检测试验中，酶是检测中必不可少的重要环节。目前酶的应用都是根据酶自身的特点。如亲和力，酸碱度等选择相应的酶标二抗工作液，在很多检测中容易受到外界实验环境的干扰，导致漏检，有的试验中酶的反应时间较长，不利于临床上推广。所用酶标二抗与待检样品中抗体的结合速度，成为试剂盒产品性能中灵敏度的关键。因此，有待研究提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法。
发明内容
本发明的主要目的在于克服现有产品存在的上述缺点，而提供一种提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，通过加入低浓度的高分子聚合物达到提高抗人IgA碱性磷酸酶的反应活性，提高检测灵敏度的效果。
本发明的目的是由以下技术方案实现的。
本发明提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，包括根据抗人IgA碱性磷酸酶自身特点配制相应的酶标二抗工作液；其特征在于，在所述配制好的酶标二抗工作液中依次加入下列物质：（1）加入低浓度高分子聚合物，使加入的高分子聚合物溶解于配制好的酶标二抗工作液中；（2）在加入高分子聚合物的酶标二抗工作液中再加入抗人IgA碱性磷酸酶，进行搅拌，使其充分溶解，得到提升抗人IgA碱性磷酸酶活性的酶标二抗工作液。
前述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，其中，所述配制好的酶标二抗工作液中加入的高分子聚合物重量百分比浓度为1±0.5%，且该高分子聚合物为聚乙二醇6000或聚乙烯吡咯烷酮K30。
前述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，其中，所述酶标二抗工作液为含有蛋白的磷酸缓冲液或者磷酸盐缓冲液（PBS）。
前述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，其中，所述在加入高分子聚合物的酶标二抗工作液中再加入的抗人IgA碱性磷酸酶的重量百分比浓度为0.06%。
本发明权利要求1所述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法在酶联免疫吸附试验、酶联免疫斑点法试验或者胶体金快速检测试验中的应用。
本发明提高抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法的有益效果，本发明通过加入低浓度的高分子聚合物而改变酶标二抗工作液中的成分，使抗人IgA碱性磷酸酶能够结合更多的特异性抗体，从而有效提高抗人IgA碱性磷酸酶的反应活性。低浓度的高分子聚合物可以促进抗人IgA碱性磷酸酶与待检样品中的IgA碰撞几率，提高抗人IgA碱性磷酸酶和IgA结合速度，同时又避免了非特异性反应。
附图说明
图1为本发明酶标二抗工作液中加入聚乙二醇6000后的抗EA-IgA试验结果。
图中标号说明：
1、2、3、4、5为EA-IgA阳性样本；
6、7、8为EA-IgA阴性样本。
A行是使用本发明的方法配制的酶标二抗工作液的检测结果。
B行是使用现有技术方法配制的酶标二抗工作液的检测结果。
具体实施方式
本发明提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，包括根据抗人IgA碱性磷酸酶自身特点配制相应的酶标二抗工作液；其改进之处在于，在所述配制好的酶标二抗工作液中依次加入下列物质：（1）加入低浓度高分子聚合物，使加入的高分子聚合物溶解于配制好的酶标二抗工作液中；（2）在加入高分子聚合物的酶标二抗工作液中再加入抗人IgA碱性磷酸酶，进行搅拌，使其充分溶解，得到提升抗人IgA碱性磷酸酶活性的酶标二抗工作液。
本发明提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，其中，所述配制好的酶标二抗工作液中加入的高分子聚合物重量百分比浓度为1±0.5%，且该高分子聚合物为聚乙二醇6000或聚乙烯吡咯烷酮K30。所述酶标二抗工作液为含有蛋白的磷酸缓冲液或者磷酸盐缓冲液（PBS）。所述在加入高分子聚合物的酶标二抗工作液中再加入的抗人IgA碱性磷酸酶的重量百分比浓度为0.06%。
本发明权利要求1所述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法在酶联免疫吸附试验、酶联免疫斑点法试验或者胶体金快速检测试验中的应用。
实施例：
A、配制酶标二抗工作液，该酶标二抗工作液为含有蛋白的磷酸缓冲液；
B、在上述酶标二抗工作液加入重量百分比浓度为0.5%的聚乙二醇6000，搅拌，使其充分溶解；
C、再向加入聚乙二醇6000的酶标二抗工作液中加入重量百分比浓度为0.06/%的抗人IgA碱性磷酸酶，搅拌，使其充分溶解；得到提升抗人IgA碱性磷酸酶活性的酶标二抗工作液。
如图1所示，1-5号为EA-IgA阳性样本，6-8号为EA-IgA阴性样本。
A行是使用本发明的方法的检测结果，B行是使用现有技术的检测结果。阴性样本斑块中间无显色条带，阳性样本斑块中间显色条带越深，说明样本的阳性程度越强，对于同一份阳性样本来说，显色条带越深说明检测灵敏度水平越高。由附图可以清楚地看出，在5份EA-IgA阳性样本中，经过本发明方法处理过酶标二抗的检测结果显色条带比现有技术的检测结果显色条带明显加深，而3份EA-IgA阴性的检测结果两种方法一致。结果说明，本发明处理方法可有效提高提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的反应活性，提高检测灵敏度水平。
本实施例中未将进行说明的内容为现有技术，故，不再进行赘述。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (5)

1.一种提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，包括根据抗人IgA碱性磷酸酶自身特点配制相应的酶标二抗工作液；其特征在于，在所述配制好的酶标二抗工作液中依次加入下列物质：（1）加入低浓度高分子聚合物，使加入的高分子聚合物溶解于配制好的酶标二抗工作液中；（2）在加入高分子聚合物的酶标二抗工作液中再加入抗人IgA碱性磷酸酶，进行搅拌，使其充分溶解，得到提升抗人IgA碱性磷酸酶活性的酶标二抗工作液。
2.根据权利要求1所述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，其特征在于，所述配制好的酶标二抗工作液中加入的高分子聚合物重量百分比浓度为1±0.5%，且该高分子聚合物为聚乙二醇6000或聚乙烯吡咯烷酮K30。
3.根据权利要求1所述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，其特征在于：所述酶标二抗工作液为含有蛋白的磷酸缓冲液或者磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.根据权利要求1所述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法，其特征在于：所述在加入高分子聚合物的酶标二抗工作液中再加入的抗人IgA碱性磷酸酶的重量百分比浓度为0.06%。
5.一种如权利要求1所述的提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法在酶联免疫吸附试验、酶联免疫斑点法试验或者胶体金快速检测试验中的应用。
CN201310343210.6A 2013-08-08 2013-08-08 提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法 Pending CN104345143A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310343210.6A CN104345143A (zh) 2013-08-08 2013-08-08 提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310343210.6A CN104345143A (zh) 2013-08-08 2013-08-08 提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN104345143A true CN104345143A (zh) 2015-02-11

Family

ID=52501196

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310343210.6A Pending CN104345143A (zh) 2013-08-08 2013-08-08 提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104345143A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112098654A (zh) * 2020-09-15 2020-12-18 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胃蛋白酶原i/ii测定试剂盒及其制备方法
CN114921430A (zh) * 2022-05-27 2022-08-19 桂林理工大学 一种基于大分子和蛋白质相互作用的酶活性增强的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1036080A (zh) * 1988-03-23 1989-10-04 广东省肇庆地区第一人民医院 表面抗原的快速检测法
CN1434297A (zh) * 2003-01-24 2003-08-06 武汉大学 一种快速检测风疹病毒抗体的酶免疫学方法
CN1460857A (zh) * 2003-06-10 2003-12-10 陈睿锋 牛病毒性腹泻病毒抗体间接elisa检测方法
CN1715920A (zh) * 2004-06-30 2006-01-04 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 血清或血浆样品稀释液及其应用
CN101949923A (zh) * 2010-09-16 2011-01-19 上海交通大学 软骨藻酸的酶联免疫试剂盒及其检测方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1036080A (zh) * 1988-03-23 1989-10-04 广东省肇庆地区第一人民医院 表面抗原的快速检测法
CN1434297A (zh) * 2003-01-24 2003-08-06 武汉大学 一种快速检测风疹病毒抗体的酶免疫学方法
CN1460857A (zh) * 2003-06-10 2003-12-10 陈睿锋 牛病毒性腹泻病毒抗体间接elisa检测方法
CN1715920A (zh) * 2004-06-30 2006-01-04 中国人民解放军军事医学科学院野战输血研究所 血清或血浆样品稀释液及其应用
CN101949923A (zh) * 2010-09-16 2011-01-19 上海交通大学 软骨藻酸的酶联免疫试剂盒及其检测方法

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112098654A (zh) * 2020-09-15 2020-12-18 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胃蛋白酶原i/ii测定试剂盒及其制备方法
CN112098654B (zh) * 2020-09-15 2023-07-18 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种胃蛋白酶原i/ii测定试剂盒及其制备方法
CN114921430A (zh) * 2022-05-27 2022-08-19 桂林理工大学 一种基于大分子和蛋白质相互作用的酶活性增强的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Redmile-Gordon et al. A comparison of two colorimetric assays, based upon Lowry and Bradford techniques, to estimate total protein in soil extracts
Wang et al. based antibiotic sensor (PAS) relying on colorimetric indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay for quantitative tetracycline and chloramphenicol detection
Wilson et al. Fifth-generation digital immunoassay for prostate-specific antigen by single molecule array technology
Jang et al. Simultaneous quantification of Plasmodium antigens and host factor C-reactive protein in asymptomatic individuals with confirmed malaria by use of a novel multiplex immunoassay
Fujii et al. Serological surveillance development for tropical infectious diseases using simultaneous microsphere-based multiplex assays and finite mixture models
CN106980022B (zh) 基于靶标蛋白诱导dna酶循环生成的均相免疫分析方法
Wang et al. Simultaneously fluorescence detecting thrombin and lysozyme based on magnetic nanoparticle condensation
Downs et al. Correlation of serum and dried blood spot results for quantitation of Schistosoma circulating anodic antigen: a proof of principle
CN104345143A (zh) 提高酶标工作液抗人IgA碱性磷酸酶活性的工艺方法
Martins et al. Long‐term serological follow‐up of blood donors with an HTLV‐Indeterminate Western Blot: Antibody Profile of Seroconverters and Individuals With False Reactions
Ju et al. Impact of environmental pollutant cadmium on the establishment of a Cancer stem cell population in breast and hepatic Cancer
CN108333536B (zh) 基于纵向弛豫时间信号读出的磁传感器及其构建方法、用途
Lucas et al. Development and validation of a Luminex assay for detection of a predictive biomarker for PROSTVAC-VF therapy
Funk et al. Indirect enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Brucella melitensis-specific antibodies in goat milk
CN105988003A (zh) 一种全程c反应蛋白测定试剂盒及其应用
Tang et al. Digital multimeter-based immunosensing strategy for sensitive monitoring of biomarker by coupling an external capacitor with an enzymatic catalysis
CN103869077A (zh) 提升包被抗原反应活性的工艺方法
Zeehaida et al. A study on the usefulness of Techlab Entamoeba histolytica II antigen detection ELISA in the diagnosis of amoebic liver abscess (ALA) at Hospital Universiti Sains Malaysia (HUSM), Kelantan, Malaysia.
CN103558398B (zh) 一种抗肝素干扰的缺血修饰白蛋白检测试剂
CN104237501B (zh) 一种抗体修饰的纳米银及其试剂盒与应用
May et al. Use of whole blood for analysis of disease-associated biomarkers
Möslein et al. Analysis of the statistical value of various commercially available stool tests-a comparison of one stool sample in correlation to colonoscopy
CN107219216A (zh) 一种化学发光免疫检测婴儿米粉中黄曲霉毒素b1的方法
CN104561266A (zh) 广州管圆线虫的实时荧光pcr检测方法及试剂盒
CN102818825A (zh) 一种检测食品中违禁添加剂酸性橙ⅱ的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20150211