CN103602665A - 一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法 - Google Patents

一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法。步骤如下：首先将含有大肠杆菌的。质粒注入无菌离心管中；高速离心旋转3分钟；然后颠倒混匀10-15秒；冰浴10分钟，出现白色沉淀物；取上清液，注入另一高温灭菌的离心管；加入2倍提及的饱和粉；缓慢摇晃约一分钟；取上清液再加入等体积的氯仿；高速离心；加入3-4倍提及预热的无水乙醇，静置20分钟；室温沉淀；沉淀物中加入缓冲液即可；提取后的质粒需要在37摄氏度的恒温环境下保存；加入无水乙醇之前需要加入微量RNA。本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，转化效率低，而且可以比较完全的对比目的片段。

Description

一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法
技术领域
本发明涉及一种生化实验室的试验方法，具体来说一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法。 
背景技术
 质粒（Plasmid）是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子（即细胞附殖粒、又胞附殖粒）。大部分的质粒虽然都是环状构形，然而目前也发现有少数的质粒属于线性构形，它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的线粒体等胞器中。天然质粒的DNA长度从数千碱基对至数十万碱基对都有。质粒天然存在于这些生物里面，有时候一个细胞里面可以同时有一种乃至于数种的质粒同时存在。质粒的套数（copy number）在细胞里从单一到数千都有可能。有时有些质粒含有某种抗药基因（如大肠杆菌中就有含有抗四环素基因的质粒）。有一些质粒携带的基因则可以赋予细胞额外的生理代谢能力，乃至于在一些细菌中提高它的致病力。一般来说，质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。它是基因工程最常见的运载体。 
发明内容
为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案： 
一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法，步骤如下：首先将含有大肠杆菌的。质粒注入无菌离心管中；高速离心旋转3分钟；然后颠倒混匀10-15秒；冰浴10分钟，出现白色沉淀物；取上清液，注入另一高温灭菌的离心管；加入2倍提及的饱和粉；缓慢摇晃约一分钟；取上清液再加入等体积的氯仿；高速离心；加入3-4倍提及预热的无水乙醇，静置20分钟；室温沉淀；沉淀物中加入缓冲液即可。
本发明中,提取后的质粒需要在37摄氏度的恒温环境下保存。 
本发明中,加入无水乙醇之前需要加入微量RNA。 
本发明的有益效果是，成本较低、重复性好，转化效率低，而且可以比较完全的对比目的片段。 
具体实施方式
一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法，步骤如下：首先将含有大肠杆菌的。质粒注入无菌离心管中；高速离心旋转3分钟；然后颠倒混匀10-15秒；冰浴10分钟，出现白色沉淀物；取上清液，注入另一高温灭菌的离心管；加入2倍提及的饱和粉；缓慢摇晃约一分钟；取上清液再加入等体积的氯仿；高速离心；加入3-4倍提及预热的无水乙醇，静置20分钟；室温沉淀；沉淀物中加入缓冲液即可。提取后的质粒需要在37摄氏度的恒温环境下保存； 
加入无水乙醇之前需要加入微量RNA。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。 

Claims (3)

1.一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法，其特征在于，步骤如下：首先将含有大肠杆菌的；质粒注入无菌离心管中；高速离心旋转3分钟；然后颠倒混匀10-15秒；冰浴10分钟，出现白色沉淀物；取上清液，注入另一高温灭菌的离心管；加入2倍提及的饱和粉；缓慢摇晃约一分钟；取上清液再加入等体积的氯仿；高速离心；加入3-4倍提及预热的无水乙醇，静置20分钟；室温沉淀；沉淀物中加入缓冲液即可。
2.如权利要求1所述的一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法，其特征在于,提取后的质粒需要在37摄氏度的恒温环境下保存。
3.如权利要求1所述的一种对大肠杆菌质粒进行提取的方法，其特征在于,加入无水乙醇之前需要加入微量RNA。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112957485A (zh) * 2021-02-22 2021-06-15 上海药明生物技术有限公司 一种基于巴氏灭菌的质粒dna灭菌处理方法、所得灭菌质粒dna及应用

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PB01 Publication
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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