CN103565846B - 魟鱼提取物的制备方法及在酒精性肝保护药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
一种魟鱼提取物的制备方法，其特征在于将新鲜魟鱼蒸煮后剔除鱼肉，将软骨用清水冲洗、绞碎，按料液质量比为1:1～1.5加入NaOH溶液，搅拌提取4h，然后用HCl调节pH＝6～7，过滤，滤液中加NaOH调节pH＝8.5～9.0，按料液与复合蛋白酶1000:1的质量比加入复合蛋白酶水解4 h。将水解液80℃加热30min，加入HCl调pH＝2，静置，上层溶液用硅藻土抽滤，加入NaOH调pH＝10.5，双氧水脱色后过滤，滤液加入HCl调pH＝7，滤液减压浓缩至小体积，沉淀干燥后得魟鱼提取物。本发明魟鱼提取物通过增强抗氧化酶的活性，增强机体对过氧化反应产物的清除能力，可用作酒精性肝损伤保护剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种魟鱼提取物的制备方法及其在制备对酒精性肝损伤保护药物中的应用。
背景技术
目前酒精中毒及成瘾已成为全球性问题，长期大量饮酒可引起全身多器官的损害，特别对肝的损害更明显。慢性酒精中毒可导致酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化、纤维化等症状，严重者会发生癌变。目前，对于酒精性肝中毒的治疗，多采用包括氨基酸和葡萄糖输注，多种维生素，维持水、电解质及酸碱平衡等，近年来许多研究人员都力图找到一种能有效预防和保护肝脏以减轻酒精对肝脏损伤作用的药物。
魟鱼又称魔鬼鱼，是于在中生代的侏罗纪（约1.8亿年～1.4亿年前）出现的鲨的同类，和鲨鱼同被归属于软骨鱼类，身体扁平，略呈圆形或菱形，软骨无鳞，其内骨骼全是软骨，对魟鱼提取物的研发具有一定的学术及应用价值。目前对魟鱼提取物的制备方法及其在制备酒精性肝损伤保护药物中的应用研究至今未见有报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种魟鱼提取物的制备方法及其在制备酒精性肝损伤保护药物中的应用，以满足现有技术的上述需求。
一种魟鱼提取物的制备方法，其特征在于将新鲜魟鱼蒸煮后剔除鱼肉，将软骨用清水冲洗、绞碎，按料液质量比为1：1.5 加入NaOH溶液，搅拌提取4 h，然后用HCl调节pH＝6～7，过滤，滤液中加NaOH调节pH＝8.5～9.0，按料液与复合蛋白酶1000:1的质量比加入复合蛋白酶水解4 h。将水解液80℃加热30 min，加入HCl调pH＝3，静置，上层溶液用浮石土抽滤，加入NaOH调pH＝10.5，双氧水脱色后过滤，滤液加入HCl调pH＝7，滤液减压浓缩至小体积，沉淀干燥后得魟鱼提取物。
上述的魟鱼提取物在制备酒精性肝损伤保护药物中的应用。
本发明采用大鼠酒精性肝损伤动物模型测试了制备的魟鱼提取物对谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）的作用。实验表明，本发明魟鱼提取物可使SOD、GSH-PX含量升高，MDA含量明显降低，通过增强抗氧化酶的活性，增强机体对过氧化反应产物的清除能力，从而发挥对酒精性肝损伤保护作用，因此本发明的魟鱼提取物可用作酒精性肝损伤保护剂。
具体实施方式
下面通过实施例和试验例进一步阐述本发明魟鱼提取物的制备，以及其在对酒精性肝损伤保护应用的有益效果。
实施方案
第一步：魟鱼提取物的制备
将新鲜魟鱼蒸煮后剔除鱼肉，将软骨用清水冲洗、绞碎，按料液质量比为1 ∶1.5 加入NaOH溶液，搅拌提取4 h，然用HCl调节pH＝6～7，过滤，滤液中加NaOH调节pH＝8.5～9.0，按料液与复合蛋白酶1000:1的质量比加入复合蛋白酶水解4 h。将水解液80℃加热30 min，加入HCl调pH＝3，静置，上层溶液用浮石土抽滤，加入NaOH调pH＝10.5，双氧水脱色后过滤，滤液加入HCl调pH＝7，滤液减压浓缩至小体积，沉淀干燥后得魟鱼提取物。
第二步：制剂的制备
（1）本发明魟鱼提取物胶囊制剂的制备
分别称取上述步骤制备的魟鱼提取物100mg、淀粉395mg、硬脂酸镁5mg，均匀混合，填充成胶囊。
（2）本发明魟鱼提取物片剂的制备
分别称取上述步骤制备的魟鱼提取物100mg、淀粉295mg、乳糖100mg，均匀混合，用湿法制粒、干燥，整粒后与5mg硬脂酸镁混合，压成片剂。
试验例1：魟鱼提取物治疗酒精性肝损伤作用的药效学研究
1、试验材料
（1）魟鱼
（2）超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）试剂盒及丙二醛（MDA）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所
（3）雄性Wistar大鼠，华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，动物合格证号：SCXK(鄂)2004-0007
2、试验方法：
雄性Wistar大鼠40只，按体重随机分为4组， A组为空白对照组， B组为酒精模型组， C、 D组分别为本发明魟鱼提取物低、高剂量干预组，分别给予50、100 mg·kg-1·d-1灌胃，除空白组外，其余实验动物给予50 %乙醇8 ml·kg-1·d-1灌胃，持续2周；第3周把乙醇剂量递增为12 ml·kg-1·d-1，持续灌胃6周，末次灌胃后禁食不禁水12h，给予戊巴比妥纳麻醉，腹主动脉取血，分离血清，在冰台上取出肝组织，按照试剂盒提供的操作步骤进行测定SOD、GSH-PX 及MDA。
3、实验结果
（1）本发明魟鱼提取物对酒精中毒大鼠血清中GSH-PX、SOD及MDA含量影响
与空白对照组比较，酒精模型组血清中GSH-PX、SOD含量降低MDA含量升高；与酒精模型组比较，本发明魟鱼提取物低、高剂量组均能抑制GSH-PX、SOD的降低及MDA含量的升高。
表1本发明魟鱼提取物对酒精中毒大鼠血清中GSH-PX、SOD及MDA含量影响
| 组别 | GSH-PX(umol·L-1) | SOD(U·ml-1) | MDA(nmol·ml-1) |
| 空白组 | 2263.2±27.0 | 263.4±4.36 | 162.4±12.4 |
| 精模型组 | 1630.2±25.3 | 202.8±10.2 | 203.1.0±15.1 |
| 鱼提取物低 | 1791.4±24.7 | 226.4±20.6 | 176.5±24.8 |
| 高 | 1943.7±27.0 | 235.3±22.7 | 190.0±23.5 |
（2）本发明魟鱼提取物对酒精中毒大鼠肝组织中GSH-PX、SOD、 MDA含量影响
与空白对照组比较，酒精模型组肝组织中GSH-PX、SOD含量降低MDA含量升高；与酒精模型组比较，本发明魟鱼提取物低、高剂量组均能抑制GSH-PX、SOD的降低及MDA含量的升高。
表2本发明魟鱼提取物对酒精中毒大鼠肝组织中GSH-PX、SOD、 MDA含量影响
| 组别 | GSH-PX(umol·L-1) | SOD(U·ml-1) | MDA(nmol·ml-1) |
| 空白组 | 1060.7±22.1 | 293.8±27.9 | 18.6±6.5 |
| 酒精模型组 | 742.8±30.7 | 179.1±16.7 | 28.5±5.3 |
| 魟鱼提取物低 | 803.1±17.3 | 188.7±25.1 | 24.5±5.1 |
| 高 | 876.1±32.7 | 223.3±18.7 | 21.3±3.7 |
试验例2:本发明魟鱼提取物的急性毒性试验
1、试验动物：
昆明种小鼠，体重20±2g，由青岛市药检所实验动物中心提供
2、药物：
本发明的魟鱼提取物
3、试验方法：
根据国家药品监督管理局颁布修订的“中药新药研究技术要求”，对本发明的魟鱼提取物进行急性毒性实验。因受药物浓度及体积限制，无法测定LD50,故进行最大给药量实验。取昆明种小鼠30只，雌性各半，ig，给予胶囊剂中药物1g/mL，每只0.8 mL，即小鼠的最大灌胃体积，用药后观察小鼠活动状态、饮食、粪便、呼吸、体重及死亡情况，连续观察14d.
4、试验结果：
各组小鼠灌胃给药后生长良好，体重增加，行为正常，均未见死亡及明显反应。将动物处死后，肉眼观察各主要脏器无异常现象。
结果表明，本发明的魟鱼提取物最大剂量口服应用，对动物无明显损害，未发现对机体产生的毒性反应，是一种安全可靠的药物。
Claims (2)
1.一种魟鱼提取物的制备方法，其特征在于将新鲜魟鱼蒸煮后剔除鱼肉，将软骨用清水冲洗、绞碎，按料液质量比为1:1.5 加入NaOH溶液，搅拌提取4 h，然用HCl调节pH＝6～7，过滤，滤液中加NaOH调节pH＝8.5～9.0，按料液与复合蛋白酶1000:1的质量比加入复合蛋白酶水解4 h,将水解液80℃加热30 min，加入HCl调pH＝3，静置，上层溶液用浮石土抽滤，加入NaOH调pH＝10.5，双氧水脱色后过滤，滤液加入HCl调pH＝7，滤液减压浓缩至小体积，沉淀干燥后得魟鱼提取物。
2.权利要求1 所述的魟鱼提取物在制备酒精性肝保护药物中的应用。
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| CN105125585A (zh) * | 2015-09-22 | 2015-12-09 | 青岛大学 | 中国魟提取物在酒精性脑损伤保护药物中的应用 |
| CN107569445A (zh) * | 2017-10-20 | 2018-01-12 | 烟台宇诚企业管理咨询有限公司 | 一种基于海洋生物提取物的护发组合物及其制备方法 |
Citations (1)
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| CN101913583A (zh) * | 2010-08-20 | 2010-12-15 | 曹荣军 | 从动物软骨中提取软骨素、胶原蛋白和高钙粉的方法 |
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2013
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Patent Citations (1)
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| CN101913583A (zh) * | 2010-08-20 | 2010-12-15 | 曹荣军 | 从动物软骨中提取软骨素、胶原蛋白和高钙粉的方法 |
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| 硫酸软骨素双酶法生产新工艺;刘宪锋;《中国药业》;20101231(第22期);55-56 * |
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