CN103563997B - 含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂,在每L浓度为1010~1011个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入有效成分,所述有效成分由以下重量的成分组成:咪鲜胺1~10毫克、双胍三辛烷基苯磺酸盐1~10毫克、嘧霉胺1~10毫克、咯菌腈1~10毫克;所述生防酵母为红冬孢酵母Rhodosporidium paludigenum Fell & Tallman:保藏于英国国际真菌研究所国际农业与生物中心基因资源保藏中心,保藏号为IMI 394084。本发明能在大幅度降低化学杀菌剂使用量的前提下,有效控制柑橘的采后病害,具有重要的应用推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及果实采后病害防治技术领域,更具体的是一种控制柑橘果实采后病害的保鲜技术。
背景技术
由各种病原真菌引起的柑橘果实采后病害占柑橘果实总损耗的50%左右。目前,国内外控制柑橘采后病害的主要措施仍然是依赖于化学杀菌剂。化学杀菌剂具有作用机理明确、效果稳定等优点,所以直到现在仍然是控制采后病害的主要方法之一。中国发明专利(申请号200910028802.2,一种柑橘保鲜剂)提供了可控制柑橘病害的多种化学杀菌剂,包括甲基托布津,多菌灵。中国发明专利(申请号200910028804.1)提供了可控制柑橘病害的化学杀菌剂,包括2,4-D钠盐,托布津。中国发明专利(申请号201110209305.X)提供了可控制柑橘病害的多种化学杀菌剂,包括醚菌酯、唑菌胺脂、肟菌酯、烯肟菌酯等。
由于传统上长期广泛使用一种杀菌剂会引起严重的病原微生物耐药性问题,不仅导致杀菌剂的效力降低,而且会增强提高杀菌剂的使用量的需求和开发新型杀菌剂的需求。但是开发一个新型杀菌剂的成本很高,在欧美大约需要1.84~2亿美元的开发经费。
咪鲜胺(Prochloraz)类杀菌剂,双胍三辛烷基苯磺酸盐(Iminoctadine tris)类杀菌剂,嘧霉胺(Pyrimethanil)类杀菌剂和咯菌腈(Fludioxonil)类杀菌剂是目前可用于果实防腐保鲜的化学杀菌剂。
酵母菌株Rhodosporidium p aludigenum Fell & Tallman是一株从海洋中分离得到的新型果实病害生防酵母。中国发明授权专利《一株水果蔬菜的生物保鲜剂及其制备方法》,专利号200610155209.0,公开了一种基于红冬孢酵母和尼泊金乙酯钠或尼泊金丁酯钠制备水果蔬菜的生物杀菌剂的方法。中国发明授权专利《用于果蔬采后病害生物防治的海洋酵母及其制备方法和用途》,专利号ZL 200610155062.5,公开了一种用海洋酵母菌株Rhodosporidium p aludigenum Fell & Tallman抑制链格孢、灰葡萄孢、扩展青霉、指状青霉、多毛孢等多种果蔬采后主要真菌病害的生物防治方法。中国发明授权专利《一种海洋酵母的用途和相应微生物燃料电池及制备方法》公开了一种利用红冬孢酵母制备微生物燃料电池的方法。中国发明申请专利《一种防治果蔬病害的生物保鲜剂及其制备方法》,申请号200910095643.8,公开了一种基于红冬孢酵母和羧甲基纤维素钠等物质防治果蔬病害的生物保鲜方法。中国发明申请专利《海洋酵母 Rhodosporidum paludigenum Fell&Tallman 的专用甘蔗糖蜜培养基》,申请号2010101485270,公开了一种海洋酵母Rhodosporidum paludigenum Fell&Tallman液体培养的方法。中国发明申请专利《海洋酵母 Rhodosporidum paludigenum Fell&Tallman 的真空冷冻干燥制》,申请号2010101400817,公开了一种红冬孢酵母活性干粉制备的方法。中国发明申请专利《一种诱导提高海洋红冬孢酵母对果实病害防治效力的方法》,申请号201010551754.8,公开了一种利用几丁质物质诱导提高红冬孢酵母生防效力的方法。中国申请发明专利《基于海洋生防酵母拮抗活性的柑橘生物防腐保鲜剂》(申请号201110111211.9)提供了一种红冬孢酵母悬浮液和氯化钙防治柑橘病害的技术。中国申请发明专利《基于红冬孢酵母和果实激发子活性的柑橘生物保鲜剂》(申请号201110112540.5)提供了一种红冬孢酵母悬浮液和水杨酸(SA)、生长素(IBA)防治柑橘病害的技术。此外,中国申请发明专利《基于三种生防酵母拮抗活性的柑橘生物防腐保鲜剂》(申请号201110111499.X)提供了一种罗伦隐球酵母悬浮液、粘红酵母悬浮液和红冬孢酵母悬浮液防治柑橘果实病害的技术;中国申请发明专利《柑橘生物防腐保鲜剂》(申请号201110111499.X)提供了一种由罗伦隐球酵母悬浮液、粘红酵母悬浮液、红冬孢酵母悬浮液、水杨酸(SA)、生长素(IBA)、和氯化钙防治柑橘果实病害的技术;中国申请发明专利《基于酵母、碳酸氢钠和激发子活性的柑橘生物保鲜剂》(申请号201110114068.9)提供了一种由罗伦隐球酵母悬浮液、粘红酵母悬浮液、红冬孢酵母悬浮液、碳酸氢钠、吲哚丁酸和水杨酸防治柑橘果实病害的技术。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种基于低剂量化学杀菌剂和红冬孢酵母复合使用的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂。
为了解决上述技术问题,本发明提供一种含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂,在每L浓度为1010~1011 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入有效成分,有效成分由以下重量的成分组成:
生防酵母为红冬孢酵母Rhodosporidium paludigenum Fell & Tallman:保藏于英国国际真菌研究所(International MycologicalInstitute)国际农业与生物中心基因资源保藏中心(CABI GeneticResource Collection),保藏号为IMI 394084 。
作为本发明的含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂的改进:
在每L浓度为1010~1011 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含有1~10 毫克咪鲜胺的咪鲜胺类杀菌剂、含有1~10 毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的双胍三辛烷基苯磺酸盐类杀菌剂、含有1~10 毫克嘧霉胺的嘧霉胺类杀菌剂以及含有1~10 毫克咯菌腈的咯菌腈类杀菌剂。
作为本发明的含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂的进一步改进:
在每L浓度为1011 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入有效成分,所述有效成分由以下含量的成分组成:
作为本发明的含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂的进一步改进:
在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入有效成分,所述有效成分由以下含量的成分组成:
本发明是一种基于低剂量化学杀菌剂复合使用控制柑橘采后病害的技术。本发明实际使用时,每L浓度为1010~1011 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含有1~10 毫克咪鲜胺的咪鲜胺(Prochloraz)类杀菌剂、含有1~10 毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的双胍三辛烷基苯磺酸盐(Iminoctadine tris)类杀菌剂,含有1~10 毫克嘧霉胺的嘧霉胺(Pyrimethanil)类杀菌剂以及含有1~10 毫克咯菌腈的咯菌腈(Fludioxonil)类杀菌剂;从而获得本发明所述的化学杀菌剂。
本发明所提供的基于咪鲜胺、双胍三辛烷基苯磺酸盐、嘧霉胺、咯菌腈和红冬孢酵母Rhodosporidium paludigenum Fell & Tallman配合使用的柑橘果实病害控制技术,与单一使用化学杀菌剂相比,能降低化学杀菌剂原使用浓度20到100倍以上,从而大幅度降低使用化学杀菌剂可能存在的潜在的危害,而且由于所使用的低剂量杀菌剂组合中包含了多种杀菌剂的类型,也将大幅度降低病原菌产生抗药性的可能性。此外由于所使用浓度的大幅度降低,也能大幅度的降低使用化学杀菌剂的成本。因此,本发明具有安全性高、操作简便、成本低廉、效果显著等优点,具有良好的实际应用前景和价值。
红冬孢酵母菌体活化程序(属于公知技术)为:把斜面保存的酵母菌接种到灭菌NYDA斜面培养基中,25℃下培养48小时,相同条件下重复传代培养两次。固体活化好的酵母菌接种到灭菌NYDB液体培养基中,25℃、150 rpm条件下培养36小时。NYDA斜面培养基组成为:牛肉膏6~8 g/L,酵母粉5 g/L,葡萄糖10 g/L,琼脂20 g/L,余量为水,NYDB液体培养基组成为不添加琼脂的NYDA培养基。
红冬孢酵母菌体制备程序(属于公知技术)为:液体培养后的酵母发酵液3000 rpm下离心10分钟收集菌体,并用无菌水洗涤酵母菌体两次以除去培养基,然后用无菌水重新悬浮酵母细胞,并用血球计数板计数后调整成浓度为1010~1011 个细胞/升的酵母细胞悬浮液。
本发明的化学杀菌剂实际使用时,将上述化学杀菌剂对采前柑橘果实进行表面喷洒(果实表面润湿即可)或采后浸泡1~5分钟的方法,可防治柑橘果实的青霉病。后续的包装和存储同现有技术。
综上所述,本发明提供了基于低剂量杀菌剂和红冬孢酵母复合使用的柑橘果实采后防腐保鲜技术。本发明提供的保鲜技术能在大幅度降低化学杀菌剂使用量的前提下,有效控制柑橘的采后病害,具有重要的应用推广价值。
具体实施方式
实验1 低剂量杀菌剂和红冬孢酵母组合对控制椪柑果实青霉病的影响
1、实验材料:
果实为柑橘,品种为椪柑。病原菌:指状青霉。
所使用杀菌剂为:
扑霉灵,咪鲜胺(Prochloraz)类杀菌剂,剂型为悬浮剂,购自以色列马克西姆化学公司,正常使用推荐浓度为250-500mg/kg。
百可得,双胍三辛烷基苯磺酸盐(Iminoctadine tris)类杀菌剂,剂型为40%可湿性粉剂,购自大日本油墨化学工业株式会社,正常使用推荐浓度为200-400mg/kg。
施加乐(Scale),嘧霉胺(Pyrimethanil)类杀菌剂,剂型为悬浮剂,购自拜耳作物科学公司,正常使用推荐浓度为1000-1500倍液。
适乐时,咯菌腈(Fludioxonil)类杀菌剂,剂型为悬浮剂,购自瑞士先正达作物保护有限公司,正常使用推荐浓度为1:167-250。
每L浓度为1010~1011 细胞/升的生防酵母细胞悬浮液。
2、处理:
(1)、水果预处理:选取外观整齐、无病虫害的果实,先用自来水清洗,然后再浸入0.1%(质量浓度)的次氯酸钠溶液中消毒2分钟,取出,再用自来水冲洗干净,洗去残余次氯酸钠,晾干备用。
(2)、防腐保鲜实验:用灭菌的打孔器在水果腰部穿刺均一的3mm深×6mm宽的伤口。在每个伤口处对应的加入以下任意一种溶液(即,每种处理组的所得物)30μl:
1)处理1,空白对照:即水处理。
2)处理2,对比例:每升水中加入含有10毫克咪鲜胺的扑霉灵。
3)处理3,对比例:每升水中加入含有10毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得。
4)处理4,对比例:每升水中加入含有10毫克嘧霉胺的施加乐。
5)处理5,对比例:每升水中加入含有10毫克咯菌腈的适乐时。
6)处理6,对比例:浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液。
7)处理7,对比例:浓度为1011 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液。
8)处理8,对比例:浓度为1012 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液。
9)处理9,在每L水中加入含10毫克咪鲜胺的扑霉灵、含10毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含10毫克嘧霉胺的施加乐、含10毫克咯菌腈的适乐时。
10)处理10,本发明:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含10毫克咪鲜胺的扑霉灵、含10毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含10毫克嘧霉胺的施加乐、含10毫克咯菌腈的适乐时。
11)处理11,本发明:在每L浓度为1011 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含10毫克咪鲜胺的扑霉灵、含10毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含10毫克嘧霉胺的施加乐、含10毫克咯菌腈的适乐时。
12)处理12,对比例:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含14毫克咪鲜胺的扑霉灵、含14毫克嘧霉胺的施加乐、含14毫克咯菌腈的适乐时。
13)处理13,对比例:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含14毫克咪鲜胺的扑霉灵、含14毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含14毫克嘧霉胺的施加乐。
14)处理14,对比例:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含14毫克咪鲜胺的扑霉灵、含14毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含10毫克咯菌腈的适乐时。
15)处理15,对比例:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含14毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含14毫克嘧霉胺的施加乐、含14毫克咯菌腈的适乐时。
16)处理16,对比例:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含15毫克咪鲜胺的扑霉灵、含5毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含10毫克嘧霉胺的施加乐、含10毫克咯菌腈的适乐时。
17)处理17,对比例:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含5毫克咪鲜胺的扑霉灵、含15毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含10毫克嘧霉胺的施加乐、含10毫克咯菌腈的适乐时。
18)处理18,对比例:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含10毫克咪鲜胺的扑霉灵、含10毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含5毫克嘧霉胺的施加乐、含15毫克咯菌腈的适乐时。
19)处理19,对比例:在每L浓度为1010 个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入含10毫克咪鲜胺的扑霉灵、含10毫克双胍三辛烷基苯磺酸盐的百可得、含15毫克嘧霉胺的施加乐、含5毫克咯菌腈的适乐时。
以上处理完成2小时后(即,加入处理组2小时后),取5×104cfu/ml的指状青霉菌悬液30μl,接种在每个水果伤口处。将这些处理过的水果放在400×300×200mm塑料筐中,用PE保鲜膜进行覆盖密封,保持95%的相对湿度。并将其于25℃下保藏。定时对果实伤口病害发生率和病斑直径进行观察和统计。结果以平均发病率(%)和平均病斑直径(mm)表示。每处理重复3次,每个重复6个果实。整个实验重复3次。
3、结果:如表1所示,当有效浓度在10毫克/升时,咪鲜胺、双胍三辛烷基苯磺酸盐、嘧霉胺和咯菌腈单独均不能产生对该病害的抑制作用(处理2、3、4、5)。正常使用浓度的红冬孢酵母对病害的控制效力也非常有限(处理6、7),只有在使用最高浓度时(红冬孢酵母1012个细胞/升)对该病害才有显著的抑制作用(处理8)。
而浓度分别为10毫克/升的咪鲜胺、双胍三辛烷基苯磺酸盐、嘧霉胺和咯菌腈单低剂量杀菌剂组合能在处理后第3天降低发病率近60个百分点,在处理后第4天降低发病率近40个百分点(处理9)。
但是本发明提供的咪鲜胺、双胍三辛烷基苯磺酸盐、嘧霉胺和咯菌腈单低剂量杀菌剂组合与红冬孢酵母细胞悬浮液组合(处理10、11)能对椪柑青霉病病害的发生和发展产生强烈的抑制:当与低浓度红冬孢酵母(1010个细胞/升)复合使用时,在处理后第3天的发病率仅为(13.3±6.7)%,到处理后第4天的发病率仅为(33.3±6.7)%,均优于最高使用浓度的红冬孢酵母(1010个细胞/升)的效果(处理10);当与较高浓度红冬孢酵母(1011细胞/升)复合使用时,在处理后第3天的发病率仅为(6.7±6.7)%,到处理后第4天的发病率仅为(13.3±6.7)%(处理11)。
根据处理12~处理19,我们能得知:在与低浓度红冬孢酵母复合使用时,无论是在保持杀菌剂总剂量不变的前提下去掉1种杀菌剂成分,或是在保持杀菌剂总剂量不变的前提下调整任何两种杀菌剂的比例,对椪柑病害的控制效力均不如本发明提供的杀菌剂组合及其配比。
因此本发明提供的方法抑制病害的效力非常显著,且能大幅度降低杀菌剂的使用量。
表1 对椪柑果实青霉病抑制效果的对比表
最后,还需要注意的是,以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然,本发明不限于以上实施例,还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形,均应认为是本发明的保护范围。
Claims (3)
1.含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂,其特征是:在每L浓度为1010~1011个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入有效成分,所述有效成分由以下重量的成分组成:
咪鲜胺 10毫克;
双胍三辛烷基苯磺酸盐 10毫克;
嘧霉胺 10毫克;
咯菌腈 10毫克;
所述生防酵母为红冬孢酵母Rhodosporidium paludigenum Fell&Tallman:保藏于英国国际真菌研究所(International Mycological Institute)国际农业与生物中心基因资源保藏中心(CABI Genetic Resource Collection),保藏号为IMI 394084。
2.根据权利要求1所述的含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂,其特征是:在每L浓度为1011个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入有效成分,所述有效成分由以下重量的成分组成:
咪鲜胺 10毫克;
双胍三辛烷基苯磺酸盐 10毫克;
嘧霉胺 10毫克;
咯菌腈 10毫克。
3.根据权利要求1所述的含有生防酵母的用于控制柑橘采后病害的化学杀菌剂,其特征是:在每L浓度为1010个细胞/升的生防酵母细胞悬浮液中加入有效成分,所述有效成分由以下重量的成分组成:
咪鲜胺 10毫克;
双胍三辛烷基苯磺酸盐 10毫克;
嘧霉胺 10毫克;
咯菌腈 10毫克。
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