CN103555624A - 一株固氮地衣芽孢杆菌及其用途 - Google Patents
一株固氮地衣芽孢杆菌及其用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一株固氮地衣芽孢杆菌及其用途。该固氮地衣芽孢杆菌是地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.8345。本发明所提供的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345安全无害，环境友好，能够在作物根际定殖，具有很高的固氮潜能，用于农业生产增产效果显著，在小麦、水稻、玉米等粮食作物拌种剂，蔬菜工厂化育苗接种剂，果树抗病叶面喷施菌剂，重茬障碍土壤修复，中低产田培肥改良，固氮微生物菌剂和生物有机肥生产应用中具有广阔前景。
Description
技术领域
本发明涉及一株固氮地衣芽孢杆菌及其用途。
背景技术
氮肥是农业生产中最重要的生产资料之一。生产化学氮肥消耗大量能源，占生产总成本的70％～80％。近年来能源日趋紧张，化肥生产用煤价格飚升导致化学氮肥价格上涨，农民难以承受，反响强烈。化学氮肥在提高作物产量、保障我国粮食安全方面发挥了巨大作用，但是不合理施氮已经形成了严重的面源污染，造成一系列的严重危害，如太湖蓝藻事件令人触目惊心。城市地下水硝酸盐污染已经对饮用水安全造成了威胁。
大气中含有78%的氮素，但其存在形式是分子态氮气，动植物不能直接利用，自然界只有某些原核微生物具有直接利用大气中氮气的能力，将其还原成氨，这就是生物固氮作用。选用高效固氮微生物菌种工厂化生产制成菌剂，或进一步与其它富含植物营养的物料复合加工成生物制品，应用于农业生产，可以提供作物氮素营养，改善作物根际生态环境，提高土壤生物肥力性状，这就是通常所说的固氮微生物菌剂或固氮微生物肥料。生物氮肥具有多种优势：①生物氮肥由可再生的生化制剂和活体微生物组成，可以再生，不存在资源枯竭问题，是可持续发展农资产品。②生物氮肥是环境友好型肥料，其生产和使用过程均不产生三废等污染性物质，而且能改善土壤理化性质，提高土壤肥力，是生态农业农资产品。③生物氮肥生产耗能少、成本低，其成本仅为等效化学氮肥的20％～40％，可以为国家节省大量的煤炭和石油等能源战略物资。④使用生物氮肥可以显著降低农业生产成本，提高农产品品质，提升土壤肥力，使农民受益，促进社会和谐发展。
菌种是微生物肥料生产应用的基础。目前，限制我国微生物肥料行业发展的瓶颈就是高效菌种，农业生产迫切需要能够高效固氮的生产用菌株。
发明内容
本发明的目的是提供一株具有固氮作用的细菌。
本发明提供的细菌是地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007，该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.8345。
下述任一种地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345的相关产品也属于本发明的保护范围：
A、含有所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345的菌剂；
B、含有所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或A所述菌剂的栽培植物拌种剂，所述栽培植物采用种子繁殖法进行繁殖；
C、含有所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或A所述菌剂的生物有机肥；
D、含有所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或A所述菌剂的蔬菜工厂化育苗接种剂；
E、含有所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或A所述菌剂的果树叶面喷施剂。
上述相关产品中，A所述菌剂的活性成份可为所述的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345，也可还含其他物质，如其他固氮菌株。所述菌剂还可包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体为矿物材料、生物材料或高分子化合物；所述矿物材料为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述生物材料为各类作物的秸秆、松壳、稻草、花生壳、玉米粉、豆粉、淀粉、草炭和动物的粪便中的至少一种；所述高分子化合物为聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水；所述有机溶剂为癸烷和/或十二烷。所述菌剂中，所述活性成分可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述菌剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
上述相关产品中，A所述菌剂具体可为下述A1）-A6）中任一的菌剂：
A1）用于生物固氮的菌剂；
A2）提高栽培植物的产量和/或品质的菌剂；
A3）促进植物生长的菌剂；
A4）产生固氮酶的菌剂；
A5）生荒地改良培肥的菌剂；
A6）防止栽培植物重茬病害和/或土传病害的菌剂。
所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345在制备上述相关产品中的应用也属于本发明的保护范围。
所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述相关产品的下述任一种应用也属于本发明的保护范围：
1）在提高栽培植物的产量和/或品质中的应用；
2）在蔬菜工厂化育苗中的应用；
3）在生产固氮酶中的应用；
4）在促进植物生长中的应用；
5）在生荒地改良中的应用；
6）在提高土壤肥力中的应用。
本发明还提供了利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345栽培植物的方法。
本发明所提供的栽培植物的方法，为下述N1或N2的方法:
N1、包括将所述栽培植物的种子用B所述拌种剂进行拌种后进行种植；
N2、包括对秧苗或扦插枝条采用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或A所述菌剂进行蘸根后进行种植。
本发明还提供了利用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345进行施肥的方法。
本发明所提供的施肥方法，为下述M1、M2或M3的方法：
M1、包括向栽培植物的土壤中施入地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述相关产品；
M2、包括向栽培植物的植株表面喷施地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述相关产品；
M3、包括向栽培植物的土壤中随水冲施地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述相关产品。
上文中，所述栽培植物可为小麦、水稻、玉米、甘蔗或甘薯等农作物。
上述在提高栽培植物的产量和/或品质中的应用和上述栽培植物的方法中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂的用量可为每亩大于等于1010cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345，如每亩1011cfu-1012cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。在本发明的一个实施方式中，所述地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂作为拌种剂对小麦进行拌种，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂的用量为每亩1011cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。在本发明的另一个实施方式中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂在玉米四叶期到六叶期作为追肥施入土壤中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂的用量为每亩施入1012cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。在本发明的又一个实施方式中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂对水稻进行拌种并施入土壤中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂的用量为每亩施入1011cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。在本发明的再一个实施方式中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345或所述菌剂施入甘蔗土壤中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂的用量为每亩施入1012cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。在本发明的再一个实施方式中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂施入甘薯土壤中，所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345或所述菌剂的用量为每亩施入1012cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。
培养所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345的方法和制备所述相关产品的方法也属于本发明的保护范围。
本发明所提供的培养所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345的方法，包括将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345在用于培养地衣芽孢杆菌的培养基中培养的步骤。
本发明所提供的制备所述相关产品的方法，包括将所述地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345作为所述相关产品的组分。
所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345是从农田土壤中分离的固氮菌，该菌株固氮酶活性为85.583nmol C2H4/h·mg蛋白，统计分析极显著高于微生物肥料常用生产菌种圆褐固氮菌ACCC11103。本发明所提供的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345安全无害，环境友好，能够在作物根际定殖，具有很高的固氮潜能，用于农业生产增产效果显著，在小麦、水稻、玉米等粮食作物拌种剂，蔬菜工厂化育苗接种剂，果树抗病叶面喷施菌剂，重茬障碍土壤修复，中低产田培肥改良，固氮微生物菌剂和生物有机肥生产应用中具有广阔前景。
保藏说明
菌种名称：地衣芽孢杆菌
拉丁名：(Bacillus licheniformis)
菌株编号：BF007
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2013年10月16日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.8345
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所用的培养基如下，使用前均在115℃条件下灭菌20分钟：
固氮菌富集培养液ACCC55：蔗糖10g、K2HPO4·3H2O0.5g、NaCl0.2g、CaCO31g、MgSO4·7H2O0.2g、用蒸馏水定容至1000ml、pH7.0～7.2。
改良的ACCC55固氮菌固体培养基：蔗糖10g、K2HPO4·3H2O0.5g、NaCl0.2g、CaCO31g、MgSO4·7H2O0.2g、酵母膏0.5g、琼脂15-20g，用蒸馏水定容至1000ml，pH7.0～7.2。
无氮培养基：蔗糖10g，NaCl0.12g，K2HPO4·3H2O0.5g，CaCO31g，MgSO4·7H2O0.2g，用蒸馏水定容至1000ml，pH7.2。
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl5g、琼脂15-20g，用蒸馏水定容至1000ml，pH7.2。
改良固氮培养基：蔗糖10g、K2HPO4·3H2O0.5g、NaCl0.2g、CaCO31g、MgSO4·7H2O0.2g、酵母膏0.5g、蒸馏水1000ml、琼脂15-20g，pH7.0～7.2。
下述实施例中所用的圆褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）ACCC11103（参见“孙建光等.高效固氮芽孢杆菌筛选及其生物学特性.中国农业科学，2009,42(6):2043-2051”）。公众可从中国农业科学院农业资源与农业区划研究所获得该菌株，以重复本申请的实验。
实施例1、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345的分离与鉴定
一、作物根际固氮菌BF007的富集与分离
取10g土样（采自中国山西省临汾市小麦根际）放入90ml无菌水中摇床振荡20min制成混浊液，吸取5ml放入30ml固氮菌富集培养液ACCC55中，100rpm，28℃进行摇床振荡培养，72h后换新鲜培养液继续培养。重复培养3次后进行固氮芽孢菌分离。吸取1ml上述固氮菌富集培养物放到9ml无菌水中制成10-1稀释度，继续稀释制成10-2、10-3、10-4、10-5稀释度的菌悬液，在100℃沸水中加热10min，冷却后每个稀释度取0.1ml涂布在无氮培养基平板上，29℃静置培养。2～3d待菌落形成后，在改良的ACCC55固氮菌培养基平板上用平板划线法进行菌种纯化。将分离纯化所得的其中一个菌株命名为作物根际固氮菌BF007。
二、作物根际固氮菌BF007的鉴定
从以下几个方面鉴定步骤一分离纯化并筛选得到的作物根际固氮菌BF007：
1、形态学鉴定
将处于对数生长期且菌落大小稳定，上述步骤一分离并纯化得到的作物根际固氮菌BF007进行单菌落状态描述，主要包括菌落的大小、颜色、透明度、湿润度、菌落表面状态（是否平坦、突起、褶皱、凹陷等）、菌落边缘状态（是否整齐、不规则、放射状等）。
对于处于对数生长期的所述作物根际固氮菌BF007，经涂片染色后采用光学显微镜观察菌体的形态。
结果表明，上述步骤一分离并纯化得到的作物根际固氮菌BF007在牛肉膏蛋白胨培养基上菌落扁平、边缘不整齐、白色、表面粗糙皱褶，24h后菌落直径约3mm；菌体杆状0.8μm×(1.5～3.5）μm，革兰氏阳性，形成芽孢，孢囊不膨大。
2、生理生化特征分析
参考《常见细菌系统鉴定手册》（东秀珠，蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册.北京:科学出版社，2011.）和《微生物学实验》（沈萍,范秀容,李广武.微生物学实验(第三版).北京:高等教育出版社,1999.）测定上述作物根际固氮菌BF007的生理生化特征。
所述作物根际固氮菌BF007的生理生化特征测定结果如下表1。
表1.作物根际固氮菌BF007的生理生化特征
注：+表示阳性，-表示阴性。
3、16s rDNA序列同源性分析
常规方法培养上述步骤一分离纯化得到的作物根际固氮菌BF007，提取菌株的总DNA作为基因扩增模板，以细菌16s rDNA通用引物，27f：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′，1492r：5′-TACCTTGTTACGACTT-3′进行PCR反应。反应体系采用上海生物工程有限公司PCR扩增试剂盒。反应程序为：95℃变性30s、55℃退火1min、72℃延伸2min，共30个循环。DNA测序由北京三博远志生物技术公司完成，序列拼接及相似性分析使用DNAStar软件完成，基因比对通过美国国家生物技术信息中心NCBI数据库（http://www.ncbi.nlm.nih.gov）和EzTaxon在线完成。
PCR基因扩增得到菌株BF007的16S rDNA基因片段约1.4kb，测定序列后与NCBI和EzTaxon数据库中已公开的16S rDNA序列进行在线同源性比对，结果显示BF007与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)ATCC14580T（GenBank登录号AE017333）同源性最高，达到99.379%。
作物根际固氮菌BF007的16s rDNA序列详见序列表中序列1。
4、生长特性分析
进行了菌株最适温度和最适pH生长实验。采用无氮培养基，分别在4℃、28℃、37℃、60℃培养、观察、记录菌株的温度适应性，每个处理3次重复。调整酸度分别为pH4、pH5、pH6、pH7、pH8、pH9、pH10，每个处理3次重复，培养、观察、记录菌株生长的最适pH。
结果表明，所述作物根际固氮菌BF007的最适生长温度为29℃，最适生长pH为pH7～8。
鉴于上述形态、生理生化特征分析和16s rDNA序列同源性分析结果，将步骤一分离纯化得到的作物根际固氮菌BF007鉴定为细菌域芽孢杆菌亚群芽孢杆菌科（Bacillaceae）芽孢杆菌属（Bacillus)地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。该地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007已于2013年10月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编号为CGMCC No.8345。
实施例2、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345固氮酶活性测定
对实施例1所得到的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345进行固氮酶活性测定，具体方法如下所述：在15×150mm螺口玻璃管中加入5mL改良固氮培养基制成斜面，接种地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345，28℃培养。以微生物肥料常用生产菌种圆褐固氮菌（Azotobacterchroococcum）ACCC11103为阳性对照，不接种空白斜面为阴性对照，设3个重复。培养72h后，换橡胶塞，注入乙炔气体使终浓度为10%，用医用胶布密封，继续培养72h，取100μL反应气体，用气相色谱仪测定乙烯生成量，根据以下公式计算菌株的固氮酶活性。固氮酶活性（nmol/mg·h）=C2H4nmol/[菌体蛋白量（mg）×反应时间（h）]，其中C2H4nmol=1000×C2H4体积（μl）×273×P/[22.4×(273+t℃)×760]，其中P为气压（mm汞柱），t为反应温度。
其中，菌体蛋白含量测定方法如下所述：用5mL生理盐水将试管斜面上的菌苔洗入离心管中，收集菌体，向菌体中加入3mL0.5M的NaOH沸水煮沸5min，加入3mL0.5M的HCl混合，离心后取上清1.0mL，加入5mL考马斯亮蓝溶液，在漩涡混合器上混合，显色3min，测定595nm处的吸光值A595，根据牛血清白蛋白标准曲线计算菌体蛋白含量。
结果显示，筛选到的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345的固氮酶活性为85.583nmol C2H4/h·mg蛋白，统计分析极显著高于微生物肥料常用生产菌种圆褐固氮菌ACCC11103的固氮酶活性25.100nmol C2H4/h·mg蛋白。这一结果表明，本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345具有很高的固氮潜能，在小麦、水稻、玉米拌种剂，蔬菜工厂化育苗接种剂，固氮微生物菌剂和生物有机肥生产中具有广阔的应用前景。
实施例3、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345的生物安全性测定
按照《微生物肥料生物安全通用技术准则》(NY1109-2006)采用实验动物小鼠进行急性经口毒性试验。实验动物为清洁级昆明种小鼠，由军事医学科学院实验动物中心提供，20只，体重18-21g。动物饲养环境为室温18-25℃，相对湿度40-70％RH，群笼饲养，10只/笼。饲料来源为军事医学科学院实验动物中心。
将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345接种于肉汤培养基，培养48h后，用无菌接种环刮取菌苔悬浮于生理盐水中，调整菌液浓度至2.0×108cfu/m1。该受试物比重为1.0g/ml。按“一次最大限度试验”要求，选健康成年小鼠20只，雌、雄各半，剂量设计为l0g/kgBW，按0.lml/10gBW经口灌胃给予受试物。灌胃前动物隔夜禁食，自由饮水。灌胃后给予正常饮食，观察14d，记录中毒体征及死亡情况。
试验结果如表2和表3所示：
表2受试样品对小鼠体重的影响
表3急性毒性观察
经过14d的实验、观察，受试物对小鼠急性经口半数致死量大于l0g/kgBW。实验期间，实验动物生长正常，未见中毒体征及死亡，解剖未见异常。根据《微生物肥料生物安全通用技术准则》(NY1109-2006)急性毒性分级标准判定，实验结论为：地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345为实际无毒。
实施例4、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345液体菌剂的制备
液体发酵培养基：牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCl5g、玉米浆15g、硫酸铵10g、葡萄糖25g、甘露醇15g、磷酸氢二钾5g、硫酸镁5g，用蒸馏水定容至1000ml，pH7.2。115℃条件下灭菌20分钟。向该液体发酵培养基中接入地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345，29℃发酵培养48h，制成液体菌剂。该液体菌剂中，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345的含量为5×108cfu／ml。
实施例5、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345的农田应用效果
一、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345提高小麦的产量和品质
2012年10月至2013年6月在山西省临汾市乔李镇南麻村进行了小麦（品种为济麦22号）种植田间试验，实验采用随机区组设计，三个区组，每个区组设两个小区，每个小区的面积为1亩（1亩为667m2），一个小区为实验区，另一个小区为对比试验区。实验区中，用实施例4的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345液体菌剂500ml拌种小麦13kg，播种面积667m2，菌剂的用量为每亩2.5×1011cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。对比实验区不拌种不使用菌剂，其他农业措施相同。结果显示，采用地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂拌种的小麦，收获时植株呈金黄色，籽粒饱满，产量为615kg／667m2；采用相同农业措施但不拌种的对比试验，收获时植株呈苍白色，只有部分籽粒饱满，产量为515kg／667m2。在本项试验中，采用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂拌种，使小麦增产100kg／667m2，增产19.42％，而且小麦籽粒饱满，色泽佳，品质明显提高。可见，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345在小麦生产中具有广阔的应用前景。
二、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345提高玉米的产量和品质
2012年6月至2012年10月在山西省临汾市乔李镇南麻村进行了玉米（品种为郑单958）田间种植试验，该试验田前茬作物为小麦。实验采用随机区组设计，三个区组，每个区组设两个小区，每个小区的面积为1亩（1亩为667m2），一个小区为实验区，另一个小区为对比试验区。实验区中，在玉米四叶期到六叶期，每667m2用实施例4的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345液体菌剂3000ml随水冲施，菌剂的用量为每亩1.5×1012cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。对比试验区不使用菌剂，其他农业措施相同。结果显示，施用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂的玉米，产量为720kg／667m2；采用相同农业措施但使用菌剂的对比试验，产量为565kg／667m2。在本项试验中，施用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂，使玉米增产155kg／667m2，增产27.43％，按照市场价2.02元／kg，667m2增收300余元。可见，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345在玉米生产中具有广阔的应用前景。
三、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345提高水稻的产量和品质
2012年5月至2012年10月在南宁市武鸣县罗圩镇进行了水稻（品种为特优838）田间种植试验。实验采用随机区组设计，三个区组，每个区组设两个小区，每个小区的面积为1亩（1亩为667m2），一个小区为实验区，另一个小区为对比试验区。实验区中，每667m2稻田用实施例4的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345液体菌剂100ml进行拌种，然后在苗床上使用900ml实施例4的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345液体菌剂稀释100倍进行喷淋，菌剂的用量为每亩5×1011cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。对比试验区不施用菌剂，其他农业措施相同。结果显示，施用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂的水稻产量为660kg／667m2，出米率为76%；采用相同农业措施但不使用菌剂的对比试验产量为550kg／667m2，出米率为70%。在本项试验中，施用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂，使水稻增产110kg／667m2，相当于增产20.00％，出米率提高6%，而且水稻病虫害少，农药用量少，大米口感好。可见，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345在水稻生产中具有广阔的应用前景。
四、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345在甘蔗上的应用实例
2012年1月至2012年12月在南宁市武鸣县罗圩镇进行了甘蔗田间试验。实验采用随机区组设计，三个区组，每个区组设两个小区，每个小区的面积为1亩（1亩为667m2），一个小区为实验区，另一个小区为对比试验区。实验区中，上一年甘蔗收割后，地表喷施实施例4的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345液体菌剂5000ml/667m2，菌剂的用量为每亩2.5×1012cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345；对比试验区不使用菌剂，其他农业措施相同。结果显示，施用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂的甘蔗产量为6600kg／667m2；采用相同农业措施但不施用菌剂的对比试验产量5200kg／667m2。在本项试验中，施用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂，使甘蔗增产1400kg／667m2，增产26.92％，而且糖度增加1.5度，经济效益十分可观。可见，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345在甘蔗生产中具有广阔的应用前景。
五、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345提高甘薯的产量和品质
2012年4月至2012年10月在河南省南阳市唐河县进行了田间甘薯种植试验。实验采用随机区组设计，三个区组，每个区组设两个小区，每个小区的面积为1亩（1亩为667m2），一个小区为实验区，另一个小区为对比试验区。实验区中，移栽红薯（甘薯）苗时将实施例4的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345液体菌剂稀释100倍倒入红薯苗根部复土，菌剂用量3000ml/667m2，即每亩1.5×1012cfu所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345。对比试验区不施用菌剂，其他农业措施相同。结果显示，施用地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂的红薯产量为3600kg／667m2；采用相同农业措施但不施用菌剂的对比试验产量为2700kg／667m2。在本项试验中，施用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345菌剂，使红薯增产900kg／667m2，增产33.33％，而且红薯病害少，外观均匀，表面光滑，卖相好，经济效益十分可观。可见，地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345在红薯生产中具有广阔的应用前景。
Claims (9)
1.地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.8345。
2.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌的相关产品，为下述任一种：
A、含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345的菌剂；
B、含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345或A所述菌剂的栽培植物拌种剂，所述栽培植物采用种子繁殖法进行繁殖；
C、含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345或A所述菌剂的生物有机肥；
D、含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345或A所述菌剂的蔬菜工厂化育苗接种剂；
E、含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345或A所述菌剂的果树叶面喷施剂。
3.根据权利要求2所述的相关产品，其特征在于：A所述菌剂为下述A1）-A6）中任一的菌剂：
A1）用于生物固氮的菌剂；
A2）提高栽培植物的产量和/或品质的菌剂；
A3）促进植物生长的菌剂；
A4）产生固氮酶的菌剂；
A5）生荒地改良培肥的菌剂；
A6）防止栽培植物重茬病害和/或土传病害的菌剂。
4.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345在制备权利要求2或3所述相关产品中的应用。
5.权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345或权利要求2或3所述相关产品的下述任一种应用：
1）在提高栽培植物的产量和/或品质中的应用；
2）在蔬菜工厂化育苗中的应用；
3）在生产固氮酶中的应用；
4）在促进植物生长中的应用；
5）在生荒地改良中的应用；
6）在提高土壤肥力中的应用。
6.栽培植物的方法，为下述N1或N2的方法:
N1、包括将所述栽培植物的种子用权利要求2中B所述的拌种剂进行拌种后进行种植；
N2、包括对秧苗或扦插枝条采用权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345或权利要求2或3中A所述菌剂进行蘸根后进行种植。
7.施肥方法，为下述M1、M2或M3的方法：
M1、包括向栽培植物的土壤中施入权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345或权利要求2或3所述相关产品；
M2、包括向栽培植物的植株表面喷施权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345或权利要求2或3所述相关产品；
M3、包括向栽培植物的土壤中随水冲施权利要求1所述的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BF007CGMCC No.8345或权利要求2或3所述相关产品。
8.培养权利要求1所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345的方法，包括将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCCNo.8345在用于培养地衣芽孢杆菌的培养基中培养的步骤。
9.制备权利要求2或3所述相关产品的方法，包括将权利要求1所述地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BF007CGMCC No.8345作为所述相关产品的组分。
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