CN103525737A - 培养红假单胞菌的浓缩培养基及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种液体培养基及其应用，具体是涉及到一种培养红假单胞菌的浓缩培养基及其应用，浓缩培养基的重量百分比组分为0.8-1%(NH4)2SO4、0.1-0.2%MgSO4、4-5%NaHCO3、0.4-0.5%K2HPO4、0.15-0.2%NaCl、0.15-0.2%NaAc、0.03-0.05%FeSO4·7H2O、1-1.5%酵母膏和0.08-0.1%明胶，其余是水，本发明的培养基成本低，培养的菌株繁殖力强，菌数多。

Description

培养红假单胞菌的浓缩培养基及其应用
技术领域
本发明涉及一种液体培养基及其应用，具体是涉及到一种培养红假单胞菌的浓缩培养基及其应用。
背景技术
微生物，在生态系统中发挥重要的作用，几乎参与了地球上所用的生物化学过程。随着技术的发展及研究的深入，微生物被广泛的应用于各个行业，包括各种酶制剂、医药制剂、食品、燃料等等。此外，大量研究表明，环境中，微生物能够降解多种异生物质，包括许多污染物。大量的降解微生物资源被从各种环境中分离出来，其生物降解各种污染物的机制也逐步被阐明。
然而，微生物的应用过程中的一个首要的问题，是如何低成本、高效率的发酵培养，从而获得大量的微生物。现有的技术，都需要较好的无菌操作条件和专门的培养设备。
目前，培养红假单胞菌所采用的培养基主要是MM培养基（NaCl1g/L、CaCl20.5g/L、K2HPO40.5g/L、KH2PO40.5g/L、FeCl30.02g/L、NH4NO31g/L、MgSO4·7H2O0.03g/L，pH7.0-7.2），或者为MMY培养基，即MM培养基添加一定量的有机物如酵母膏、蛋白胨、胰蛋白胨等，且配制好的培养基需要立即高压灭菌，然后在很短的时间内使用，否则，非常容易污染而无法使用，影响了红假单胞菌的培养效率，且培养的细菌总数不多，严重影响了其推广应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种培养红假单胞菌的浓缩培养基和在红假单胞菌发酵中的应用，其能以低成本、方便快捷的操作实现对红假单胞菌高效率培养，培养的细菌总数多。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：
培养红假单胞菌浓缩培养基，重量百分比组分为0.8-1%(NH4)2SO4、0.1-0.2%MgSO4、4-5%NaHCO3、0.4-0.5%K2HPO4、0.15-0.2%NaCl、0.15-0.2%NaAc、0.03-0.05%FeSO4·7H2O、1-1.5%酵母膏和0.08-0.1%明胶，其余是水。调节pH值为6.5-7.5，优选为6.5-7.0。
配制好的浓缩培养基，加入到600-1000ml的透明塑料袋或塑料瓶，并在0.04—0.05Mpa下灭菌20—30分钟。该透明塑料袋或塑料瓶易于存储和运输，使用方便，开袋或瓶，加入9倍体积的水，即可用于接种培养。
本发明还提供一种培养红假单胞菌的浓缩培养基在红假单胞菌发酵中的应用，步骤是，将浓缩培养基稀释，最好是10倍，然后接种红假单胞菌，接种量优选为1%，在光源下培养。本发明得到的红假单胞菌的微生物总数可达3.7亿/mL。
本发明的有益效果是，浓缩后的培养基化学成分浓度高，不易污染，保藏时间长；且所占用体积小，灭菌更加方便彻底。此外，浓缩后的培养基使用方便，培养红假单胞菌生长速率快、使用不受场地限制，降低的了红假单胞菌生产成本。相比现有技术的培养基，本发明的培养基培养的细菌总数多。
具体实施方式
实施例1
培养红假单胞菌浓缩培养基的制备
重量百分比组分为0.8%(NH4)2SO4、0.2%MgSO4、5%NaHCO3、0.4%K2HPO4、0.15%NaCl、0.15%NaAc、0.05%FeSO4·7H2O、1%酵母膏和0.1%明胶，其余是水。用5mol/L NaOH调节pH=7.0。加入到1000ml的透明塑料袋或塑料瓶，并在0.04—0.05Mpa下灭菌20分钟。
实施例2
培养红假单胞菌浓缩培养基的制备
重量百分比组分为1%(NH4)2SO4、0.1%MgSO4、4%NaHCO3、0.5%K2HPO4、0.2%NaCl、0.2%NaAc、0.03%FeSO4·7H2O、1.5%酵母膏和0.08%明胶，其余是水。用6mol/L NaOH调节pH=6.5。加入到1000ml的透明塑料袋或塑料瓶，并在0.04—0.05Mpa下灭菌30分钟。
实施例3
培养红假单胞菌浓缩培养基应用于培养高效降解有机磷和菊酯类农药残留物的沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris），所述沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2012224。
将实施例1制备的培养基，打开瓶盖，加入9倍体积的水，然后接种1%体积的沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）CCTCC No:M2012224，所述沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）CCTCC No:M2012224公开在中国专利申请号为201210394957.X的专利文献中，然后在自然光照或白炽灯（25W）下培养。
表1为沼泽红假单胞菌（Rhodopseudomonas palustris）CCTCC No:M2012224分别在本发明培养基和现有技术的MMY培养基中培养得到的菌数，其他培养条件相同。
表1菌株CCTCC No:M2012224发酵培养菌数（×亿/mL）
Figure BDA0000400637970000021
Figure BDA0000400637970000031
所述MMY培养基组分为MM培养基添加0.1%酵母膏，用5.0mol/L NaOH调节pH=7.0。
表1结果表明，采用本发明的培养基，在自然光照和白炽灯下，菌株CCTCC No:M2012224的微生物总数分别达到2.2亿/mL和3.7亿/mL。高于MMY培养基的微生物总落（分别为1.9亿/mL和3.3亿/mL）。
实施例4
培养红假单胞菌浓缩培养基应用于培养高效降解磺酰脲类残留物的球形红假单胞菌（Rhodopseudomonas sphaeroides），所述球形红假单胞菌（Rhodopseudomonas sphaeroides）保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No:M2010144，公开在中国专利申请号为201010269080.2的专利文献中。
将实施例1制备的培养基，打开瓶盖，加入9倍体积的水，然后接种1%体积的球形红假单胞菌（Rhodopseudomonas sphaeroides）CCTCC No:M2010144，在自然光照或白炽灯（25W）下培养。
表2为球形红假单胞菌（Rhodopseudomonas sphaeroides）CCTCC No:M2010144分别在本发明培养基和现有技术的MMY培养基中培养得到的菌数，其他培养条件相同。
表2菌株CCTCC No:M2010144发酵培养菌数（×亿/mL）
Figure BDA0000400637970000032
所述MMY培养基组分为MM培养基添加0.1%酵母膏，用5.0mol/L NaOH调节pH=7.0。
表2结果表明，采用本发明的培养基，在自然光照和白炽灯下，菌株CCTCC No:M2010144的微生物总数分别达到2.1亿/mL和3.1亿/mL，高于MMY培养基的微生物总落（分别为1.7亿/mL和3.0亿/mL）。
以上仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种培养红假单胞菌的浓缩培养基，其特征是，重量百分比组分为0.8-1%(NH4)2SO4、0.1-0.2%MgSO4、4-5%NaHCO3、0.4-0.5%K2HPO4、0.15-0.2%NaCl、0.15-0.2%NaAc、0.03-0.05%FeSO4·7H2O、1-1.5%酵母膏和0.08-0.1%明胶，其余是水。
2.如权利要求1所述的培养红假单胞菌的浓缩培养基，其特征是pH为6.5-7.5。
3.一种如权利要求1或2所述的培养红假单胞菌的浓缩培养基在红假单胞菌发酵中的应用。
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