CN103520244B - 平卧菊三七提取物在制备防治肝脏损伤制剂中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域，更具体涉及一种平卧菊三七提取物在制备治疗或预防肝脏损伤制剂中的应用。本发明将平卧菊三七的茎或叶提取物应用于酒精、药物或毒物引起的肝脏损伤的治疗或预防，取得了显著的效果，疗效确定、无毒副作用，而且提取方法易于实施，应用前景广阔。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，更具体涉及一种平卧菊三七提取物在制备治疗或预防肝脏损伤制剂中的应用。
背景技术
肝损伤是临床常见的危害人类健康的病因之一。肝损伤是因肝脏受到外界伤害性因素的入侵，从而引起的肝脏受损。肝损伤分为病理性肝损伤和化学性肝损伤。化学性肝损伤是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括酒精、环境中的化学毒物及某些药物。病源防不胜防，肝脏易受损伤，且难以发现。肝损伤若任其恶化发展，最终会转变为肝硬化，甚至恶化为肝癌，最终无法挽救。因此建议肝脏已受损人群应早期控制病情，防止肝脏状况继续恶化；健康人群也应提高警惕，积极预防。
平卧菊三七（GynuraProcumbens(Lour.)Merr）是菊科菊三七属的植物。分布于越南、泰国、印度尼西亚和非洲以及中国的广东、海南、贵州、云南、江西等地。在我国平卧菊三七被批准为新资源食品（卫生部公告2012年第8号），可作为蔬菜食用；在马来西亚，平卧菊三七是一种传统食物和药物，被称为“sambung nyawa”，用于治疗糖尿病、癌症、肾病和高血压。目前没有将平卧菊三七用于治疗肝损的相关报道。再者，平卧菊三七叶是传统的药用和使用部位，其茎在习惯上常被扔弃，而没有被用作食物或药物。
本发明将平卧菊三七用于肝损治疗，开发了平卧菊三七的新用途，并且在效果上取得了成功，平卧菊三七可以有效防治酒精、药物和毒物引起的肝脏损伤。本发明将满足广大病人的需要，预计会有很好的经济效益和社会效益。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于开发中药材平卧菊三七的新用途，提供一种平卧菊三七提取物在制备防治肝脏损伤制剂中的应用。本申请的发明人多年来一直致力于肝损的临床治疗和植物活性成分的研究工作。长期的研究和大量的实验结果证实，与现有的主流疗法相比，平卧菊三七提取物对肝损的预防和治疗具有效果好、无副作用、价格便宜等优势。本发明中，护肝制剂治疗肝损的机制在于：①抗炎，降低炎症引起的肝细胞凋亡和坏死程度；②加速肝细胞再生，促进已经受损的肝组织修复。上述两种机制叠加在一起，有效地保护了肝脏。
本发明通过将平卧菊三七的茎或叶提取物作用多种经典的肝损模型，实验结果确证了本发明技术方案的可行性。
所述提取物的制备方法如下：取平卧菊三七的干燥茎或叶称重后粉碎，每次加入7-10体积/重量（L/kg）倍的50-85v/v%乙醇，80-100℃下回流提取0.5-2h，共提取3次，合并提取液并浓缩干燥得干浸膏。
与现有技术相比，本发明具有以下优点和效果：
1、扩展了平卧菊三七的新用途；
2、变废为宝，将习惯中不用于食用或药用的平卧菊三七茎加以利用；
3、平卧菊三七保肝效果显著，可以有效保护肝脏；
4、平卧菊三七使用中未发现毒副作用，源自天然，更易为患者接受。
附图说明
图1平卧菊三七茎提取物降低DEN所致肝损小鼠的转氨酶活性。
n=8，空白对照组，□；DEN模型组，■；平卧菊三七治疗组1，平卧菊三七治疗组2，与空白对照组相比，***P<0.001；与DEN模型组比，##P<0.01。与空白对照组相比，DEN模型组转氨酶水平明显升高（P<0.001），说明造模成功。与DEN模型组相比，护肝制剂治疗组的转氨酶水平均有一定的降低，说明平卧菊三七茎提取物一定程度上保护了肝细胞免受DEN损伤。
图2平卧菊三七茎提取物降低DEN引起的肝脏组织病理学改变。
HE染色，放大400倍，图中标尺的长度为50μm。A、B、C和D分别表示空白对照、DEN模型、平卧菊三七治疗组1和2。DEN模型组肝脏可见大量的细胞坏死和脂肪空泡；而与DEN模型组相比，平卧菊三七治疗组的肝脏细胞坏死和脂肪空泡程度均明显减轻。
图3平卧菊三七茎提取物降低醋氨酚引起的肝脏病理学改变。
HE染色，放大200倍，图中标尺的长度为100μm。A、B、C、D和E分别表示空白对照、醋氨酚模型、平卧菊三七治疗组1、2和3。醋氨酚模型组肝脏可见大面积肝细胞坏死；而与醋氨酚模型组相比，平卧菊三七治疗组肝脏的肝细胞受损程度明显减轻。
图4平卧菊三七茎提取物降低酒精所致肝损小鼠的转氨酶活性
n=15，空白对照组，□；酒精模型组，■；平卧菊三七治疗组1，平卧菊三七治疗组2，平卧菊三七治疗组3，与空白对照（100%）相比，酒精模型组小鼠血清中谷丙转氨酶活性（168%，P<0.001）显著提高；而与酒精模型组相比，平卧菊三七治疗组2和3中的谷丙转氨酶活性剂量降低，其中平卧菊三七治疗组3中谷丙转氨酶活性显著降低（126%，P<0.05）。
图5平卧菊三七茎提取物降低酒精引起的肝脏病理学改变。
HE染色，放大400倍，图中标尺的长度为100μm。A、B、C、D和E分别表示空白对照、酒精模型、平卧菊三七治疗组1、2和3。酒精模型组肝脏可见肝细胞坏死（←，细胞核溶解）和脂肪化（▲，肝细胞空泡）；而与酒精模型组相比，平卧菊三七治疗组的肝细胞坏死程度明显减轻。
图6平卧菊三七茎提取物降低酒精所致肝损小鼠的甘油三酯沉积
n=15，空白对照组，□；酒精模型组，■；平卧菊三七治疗组1，平卧菊三七治疗组2，平卧菊三七治疗组3，与空白对照（2.9mM/g蛋白）相比，酒精模型组肝脏甘油三酯明显增加（7.0mM/g蛋白，P<0.001）；而与酒精模型组相比，平卧菊三七1、2和3治疗组甘油三酯含量均降低，分别为4.8mM/g蛋白（P<0.05）、5.6mM/g蛋白（P=0.083）、4.9mM/g蛋白（P<0.01）。
具体实施方式
下面申请人将结合具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的详细说明。应理解，以下内容不应以任何方式被理解为对本发明权利要求书请求保护范围的限制。
实施例1提取物的制备
1、平卧菊三七茎提取物的制备：
平卧菊三七产自广东，取干燥茎称重后粉碎，每次加入10体积/重量倍（L/kg）的80v/v%乙醇，85℃下回流提取1h，共提取3次，合并提取液并浓缩干燥，干浸膏（密度1.40g/L）得率约为18.5%。
2、平卧菊三七叶提取物的制备：
平卧菊三七产自广东，取干燥叶称重后粉碎，每次加入10体积/重量倍（L/kg）的50v/v%乙醇，90℃下回流提取0.5h，共提取3次，合并提取液并浓缩干燥，干浸膏（密度1.40g/L）得率约为17.1%。
以下为应用实施例。
实施例2
实施例1制备的平卧菊三七茎提取物对二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)诱导的小鼠肝脏损伤的治疗作用：
雄性昆明小鼠，分为4组：空白对照组、DEN模型组、平卧菊三七治疗组1、平卧菊三七治疗组2，每组8只动物。DEN模型组、平卧菊三七治疗组1、平卧菊三七治疗组2，每周1次经口给予DEN（165mg/kg），共8周，造DEN模型，平卧菊三七治疗组1和组2分别给予50mg/kg、200mg/kg实施例1制备的平卧菊三七茎提取物，每天1次，连续给一个星期后，眼球取血，处死动物后取肝脏。血样离心制得血清，用于测定谷丙转氨酶活性，肝脏经过10%福尔马林固定，HE染色后，进行病理组织形态学观察。
与空白对照小鼠血清中谷丙转氨酶活性（100%）相比，DEN模型组小鼠血清中谷丙转氨酶活性显著提高（239%，P<0.001）；而与DEN模型组相比，平卧菊三七治疗组的谷丙转氨酶活性降低，其中200mg/kg平卧菊三七治疗组降至135%（P<0.01），提示平卧菊三七茎提取物可以在一定程度上保护肝脏，减小DEN对肝细胞的损伤（结果见图1）；肝脏病理组织形态学的检测结果也证实了这一点，与空白对照相比，DEN模型组肝脏可见大量的细胞坏死和脂肪空泡；而与DEN模型组相比，平卧菊三七治疗组的肝脏细胞坏死和脂肪空泡程度均明显减轻，再次提示平卧菊三七可以在一定程度上保护肝脏，减小DEN对肝脏的损伤（结果见图2）。
实施例3
实施例1制备的平卧菊三七茎提取物对醋氨酚诱导的小鼠肝脏损伤的治疗作用：
雄性昆明小鼠，分为5组：空白对照组、醋氨酚模型组、平卧菊三七治疗组1、平卧菊三七治疗组2，平卧菊三七治疗组3，每组8只动物。平卧菊三七治疗组1、平卧菊三七治疗组2，平卧菊三七治疗组3分别灌胃给予50、100、200mg/kg的实施例1制备的平卧菊三七茎提取物，空白对照组、醋氨酚模型组给予等量的生理盐水。灌胃后，醋氨酚模型组、平卧菊三七治疗组1、平卧菊三七治疗组2，平卧菊三七治疗组3立即腹腔注射300mg/kg醋氨酚，空白对照组腹腔注射等量的生理盐水；24h后眼球取血，处死动物后取肝脏。肝脏经过10%福尔马林固定，HE染色后，进行病理组织形态学观察。
与空白对照相比，醋氨酚模型组肝脏可见大面积坏死；而与醋氨酚模型组相比，平卧菊三七治疗组肝细胞受损程度明显减轻，提示平卧菊三七可以在一定程度上保护肝脏，减小醋氨酚对肝脏的损伤（结果见图3）。
实施例4
实施例1制备的平卧菊三七茎提取物对酒精诱导的急性小鼠肝脏损伤的治疗作用：
雄性昆明小鼠，分为5组：空白对照组、酒精模型组、平卧菊三七治疗组1、平卧菊三七治疗组2，平卧菊三七治疗组3，每组15只动物。酒精模型组灌胃给予5g/kg的乙醇（乙醇来自56°白酒，北京红星股份有限公司监制），平卧菊三七治疗组1、平卧菊三七治疗组2，平卧菊三七治疗组3分别灌胃12.5、25、50mg/kg的实施例1制备的平卧菊三七茎提取物（干浸膏直接溶于56°白酒中给药，白酒用量同酒精模型组），空白对照组给予等量的生理盐水。每12h灌1次，共3次，最后1次灌胃4h后，眼球取血，处死动物后取肝脏。血样离心制得血清，用于测定谷丙转氨酶活性，部分肝脏匀浆，测定甘油三酯的含量，部分肝脏经过10%福尔马林固定，HE染色后，进行病理组织形态学观察。
与空白对照（100%）相比，酒精模型组小鼠血清中谷丙转氨酶活性（168%，P<0.001）显著提高；而与酒精模型组相比，平卧菊三七治疗组2和3中的谷丙转氨酶活性降低，其中平卧菊三七治疗组3中谷丙转氨酶活性显著降低（126%，P<0.05），提示平卧菊三七茎提取物可以在一定程度上保护肝脏，减轻乙醇对肝脏的损伤（结果见图4）；肝脏病理组织形态学的检测结果也证实了这一点，与空白对照相比，酒精模型组肝脏可见大量肝细胞坏死（细胞核溶解）和脂肪化（肝细胞空泡）；而与酒精模型组相比，平卧菊三七治疗组的肝细胞坏死程度明显减轻，再次提示平卧菊三七可以在一定程度上保护肝脏，减轻乙醇对肝脏的损伤（结果见图5）。脂肪化的程度可以从图中6甘油三酯的结果加以分析，与空白对照（2.9mM/g蛋白）相比，酒精模型组肝脏甘油三酯明显增加（7.0mM/g蛋白，P<0.001）；而与酒精模型组相比，平卧菊三七各治疗组甘油三酯含量均降低，提示平卧菊三七茎提取物可以在一定程度阻止乙醇导致的脂肪肝。
实施例5
实施例1制备的平卧菊三七叶提取物对脂多糖诱导炎症的抑制作用
35mm培养皿中培养从小鼠肝脏中分离的Kupffer细胞，给予10ng/mL脂多糖（LPS）刺激，并分别加入1、10、100μg/mL的实施例1制备的平卧菊三七叶提取物。4h后提取细胞RNA，检测TNF-αmRNA水平，用GAPDH作为内参，结果发现：与正常对照（100%）相比，LPS使得TNF-αmRNA水平显著提高（212%，P<0.001），而与LPS模型对照组相比，1、10、100μg/mL的平卧菊三七叶提取物显著抑制了TNF-αmRNA水平，分别是183%（P<0.05）、159%（P<0.001）、107%（P<0.001）。此结果表明，本发明中平卧菊三七叶提取物也具有抑制肝脏炎症的作用。
Claims (5)
1.一种平卧菊三七提取物在制备治疗或预防肝脏损伤制剂中的应用；
所述平卧菊三七取茎或叶；
所述肝脏损伤为酒精、药物或毒物引起的肝脏损伤；
所述提取物为50-85v/v%乙醇提取物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肝脏损伤为二乙基亚硝胺引起的肝脏损伤。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肝脏损伤为醋氨酚引起的肝脏损伤。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肝脏损伤为酒精引起的肝脏损伤。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肝脏损伤为脂多糖引起的肝脏损伤。
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