CN103512970A - 采用特征性指示物鉴别动物源性地沟油的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及采用特征性指示物鉴别动物源性地沟油的方法，确立了动物源性地沟油的特征性指示物，并制定了该特征性指示物衍生化产物的判定指标。油脂样品经过简单的前处理、仪器分析和系统的数据统计，然后再依据该方法中提出的判定指标，对食用油中是否掺杂动物源性地沟油进行判定。该发明具有操作简单、准确率高、特异性强、易于推广的优点。

Description

采用特征性指示物鉴别动物源性地沟油的方法

技术领域

本发明涉及采用特征性指示物鉴别动物源性地沟油的方法，该方法提出了用于区分动物源性地沟油的特异性指示物，并制定了相应的判断依据。该方法的建立将有助于改善我国在地沟油鉴定方面的现状，弥补现有地沟油鉴定方法的不足，提高鉴别方法的准确性和特异性。

背景技术

地沟油是一个泛指概念，是对各类劣质油的统称，一般包括潲水油、煎炸废油、食品及相关企业产生的废弃油脂等。它主要包括三类：（1）餐厨垃圾：将下水道中的油腻漂浮物或饭店的剩饭剩菜（即泔水）经过简单加工、提炼油；（2）各类肉及肉制品加工废弃物等非食品原料：劣质猪肉、猪内脏、猪皮加工提炼油；（3）废弃油脂：用于油炸食品的油使用超过一定次数后，再被重复使用或往其中添加一些新油后重新使用的油。前两类地沟油均属于动物源性地沟油，目前在地沟油市场中占据较大的分量。这些地沟油经过脱色、水洗、除臭后经不法商贩销售流入市场，可以获取巨额的利润。但是食用地沟油对人体的身体健康存在较多危害，例如消化不良、腹胀、腹泻，甚至引发各种癌症。因此，不仅需要加大执法、监管力度进一步规范食用油市场，还需要开发一种准确、可靠地鉴别食用油中是否掺杂动物源性地沟油的方法，这是我国现阶段迫切需要解决的问题。

目前，用于地沟油鉴定的指标主要包括：胆固醇（陈红等.超高效液相色谱三重四极杆质谱法测定火锅油、潲水油及地沟油中胆固醇含量.中国食品卫生杂志,2011,23(5):429-32;郭涛等.高效液相色谱法测胆固醇含量鉴别地沟油.食品科学,2009,30(22):286-9;张蕊等.测定胆固醇含量鉴别地沟油的研究.中国油脂,2006,31(5):65-7；周永生等.固相萃取-气相色谱-质谱联用检测地沟油中胆固醇.色谱,2012,30(2):207-10)、电导率（王飞艳等.基于电导率的地沟油快速定性与半定量分析.食品科学,2011,32(18):304-7；周智慧等.电导率法快速鉴别食用油品质.中国油脂,2011,36(10):64-6；朱锐,王督,杨小京,何东平.电导率测定在鉴别食用植物油掺伪应用研究.粮食与油脂,2008,8:42-3)、特定基因、多环芳烃等。然而，现有的这些鉴定指标在实际应用时存在较多的缺陷，其中特异性差、灵敏度低是主要的问题。因此，确立一种准确、可靠、特异性的指示物，制定该指示物的准确指标限值，并建立用于鉴别食用油中是否掺杂动物源性地沟油的特异性新方法，对于我国进一步完善新技术标准、开展有效地抽样检测、健全监管政策具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于寻找用于区分动物源性地沟油的特征性指示物，制定相应的判定指标，并开发一种操作简单、准确、可靠、特异性强的鉴别方法，从而判定食用油中是否掺杂动物源性地沟油。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

a）样品前处理：取0.02-0.15g待测食用油，加入50-200μL 1-5mol/L衍生化试剂，然后再向其中加入0.1-1.0mL正己烷，并进行充分震荡，最后静置分层。所述食用油为食用植物油；

衍生化试剂为强碱（如氢氧化钾）或者强酸（如浓硫酸）的醇溶液；强碱为氢氧化钾、氢氧化钠或甲醇钠；强酸为浓硫酸；醇为甲醇或乙醇。

b)仪器分析：气相色谱与多维气相色谱的结合、或气相色谱与气相色谱串联质谱的结合作为分析手段，实现脂肪酸衍生化产物之间的有效分离。选择其中一种相对稳定、含量适中的脂肪酸衍生化产物作为参考物，并确定用于动物源性地沟油鉴别的特征性指示物。设定仪器分析条件，分别对特征性指示物和参考物进行检测分析。

特征指示物是指在动、植物油中含量差别较大、能够反映动物油特征的脂肪酸，如异构十五碳脂肪酸、或异构十七碳脂肪酸；参考物可以为饱和直链十五碳脂肪酸或十七碳脂肪酸的甲酯化或乙酯化产物。

c)数据统计：

先由气相色谱面积归一化法计算参考物的相对含量；再借助多维气相色谱或气相色谱串联质谱，记录特征性指示物衍生化产物和参考物的峰面积或者峰高，计算其峰面积或者峰高的比值。然后结合参考物的相对含量，计算特征指示物衍生化产物的相对含量。

d)结果判断：步骤d中的判据指标是根据特征指示物的衍生化产物在植物油、动物油以及地沟油中的相对含量进行制定的。植物油为玉米油、大豆油、花生油、芝麻油、菜籽油、葵花油、橄榄油、稻米油、红花油、芥花籽油、坚果油、小麦胚芽油中的一种或二种以上混合；动物油为牛油、羊油、猪油。

异构十五碳脂肪酸甲酯的指标为0.3-0.5ppm，异构十七碳脂肪酸的指标为3.5-5.0ppm。当该特征性指示物衍生化产物的含量超过判定指标时，即判定该食用油中掺杂了动物源性地沟油。反之，则未掺杂动物源性地沟油。

本发明具有如下优点：

（1）操作简单：前处理过程仅需要简单的衍生化处理

（2）准确率高：可以准确地区分动物源性地沟油

（3）特异性强：特征性指示物的衍生化产物作为动物源性地沟油的特异性指标，在甄别该类地沟油时具有特异性的识别作用。

（4）便于推广：分析仪器比较普遍，常规分析实验室具备该条件。

具体实施方式

实施例1：

分别取0.06g猪油、鸡油、牛油、羊油等动物油样品置于一次性聚四氟乙烯管中，然后分别向其中加入150L 2mol/L氢氧化钾的甲醇溶液，再分别加入1mL正己烷，充分震荡后，静置分层。分别取上层清夜1L进气相色谱和多维气相色谱进行分析。仪器分析完毕，采用归一化法对数据进行处理，记录气相色谱上饱和直链十五碳脂肪酸酸甲酯的相对含量（M0）。然后结合多维气相色谱仪中异构十五碳脂肪酸甲酯和饱和直链十五碳脂肪酸甲酯的峰面积比值（A1/A0），计算出不同动物油中异构十五碳脂肪酸甲酯的相对含量（M1），M1=A1/A0×M0。

从表1中可以看出，不同动物油中异构十五碳脂肪酸甲酯的相对含量较大，超过580ppm。即使对于掺杂了0.01%牛油的豆油样品来说，其相对百分含量也超过0.5ppm。由此可见，当食用油中掺杂了动物源性地沟油后，异构十五碳脂肪酸甲酯的相对含量明显提高。

表1为本发明中判定指标的确定依据

表1动植物油中异构十五碳脂肪酸甲酯的含量

实施例2：

分别取0.06g豆油、调和油、橄榄油、花生油、玉米油等植物油样品置于一次性聚四氟乙烯管中，然后分别向其中加入150L 2mol/L氢氧化钾的甲醇溶液，再分别加入1mL正己烷，充分震荡后，静置分层。分别取上层清夜1μL进气相色谱和多维气相色谱进行分析。仪器分析完毕，采用归一化法对数据进行处理，记录气相色谱上饱和直链十五碳脂肪酸酸甲酯的相对含量（M0）。然后结合多维气相色谱仪中异构十五碳脂肪酸甲酯和饱和直链十五碳脂肪酸甲酯的峰面积比值（A1/A0），计算出不同动物油中异构十五碳脂肪酸甲酯的相对含量（M1），M1=A1/A0×M0。

从表1中可以看出，不同植物油中异构十五碳脂肪酸甲酯的相对含量均较小（<0.2）。对比表1中动、植物油中含有的异构十五碳脂肪酸甲酯的差别，可得出如下结论：即在掺杂有动物源性地沟油的食用油中，异构十五碳脂肪酸甲酯的含量较大。考虑到棕榈油的干扰，将判定指标定为：当异构十五碳脂肪酸甲酯的含量超过0.5ppm时，即判定食用油中掺杂了动物源性地沟油。

实施例3：

分别取0.06g不同来源的油样，置于一次性聚四氟乙烯管中，然后分别向其中加入150μL 2mol/L氢氧化钾的甲醇溶液，再分别加入1mL正己烷，充分震荡后，静置分层。分别取上层清夜1μL进气相色谱和多维气相色谱进行分析。仪器分析完毕，采用归一化法对数据进行处理，记录气相色谱上饱和直链十五碳脂肪酸酸甲酯的相对含量（M0）。然后结合多维气相色谱仪中异构十五碳脂肪酸甲酯和饱和直链十五碳脂肪酸甲酯的峰面积比值（A1/A0），计算出不同动物油中异构十五碳脂肪酸甲酯的相对含量（M1），M1=A1/A0×M0。

根据上述判定依据，结合测定的结果，可得出以下结论：1#、4#、5#油样中异构十五碳脂肪酸甲酯的相对含量低于0.5ppm,判断为阴性，即样品中未掺杂动物源性地沟油；其余样品中异构十五碳脂肪酸甲酯的含量明显超过0.5ppm,判断为阳性，即样品中掺杂了动物源性地沟油。上述判断结果与实际样品信息匹配准确度高，表明该方法可以特异性地鉴别食用油中是否掺杂动物源性地沟油。

表2为采用本发明方法，鉴别食用油中是否掺杂动物源性地沟油的结果。

阳性表示掺杂动物源性地沟油的食用油；阴性表示未掺杂动物源性地沟油的食用油

Claims (7)

1.采用特征性指示物鉴别动物源性地沟油的方法，其特征在于:

油脂样品经过简单的前处理、仪器分析和系统的数据统计，然后再依据该方法中针对特征性指示物衍生化产物制定的判定指标，对食用油中是否掺杂动物源性地沟油进行判定;具体流程如下：

a）样品前处理：选择衍生化试剂对待测食用油样进行衍生，然后向其中加入正己烷，并进行充分震荡，最后静置分层；

所述食用油为食用植物油；

b)仪器分析：将气相色谱与多维气相色谱或气相色谱串联质谱技术联合使用作为分析手段，实现脂肪酸衍生化产物之间的有效分离；

其中，选择一种相对稳定、含量适中的脂肪酸衍生化产物作为参考物，并确定用于动物源性地沟油鉴别的特征性指示物；

设定仪器分析条件，分别对特征性指示物和参考物进行检测分析;

c)数据统计：

先由气相色谱面积归一化法计算参考物的相对含量；

再借助多维气相色谱或气相色谱串联质谱，记录特征性指示物衍生化产物和参考物的峰面积或者峰高，并计算出特征性指示物衍生化产物和参考物峰面积或者峰高的比值；然后结合参考物的相对含量，计算特征指示物衍生化产物的相对含量；

d)结果判断：依据确立的特征指示物衍生化产物的判定指标，对食用油中是否掺杂动物源性地沟油进行判定；当该特征指示物衍生化产物的含量超过判定指标时，即判定该食用油中掺杂了动物源性地沟油；反之，则未掺杂动物源性地沟油。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中取0.02-0.15g待测食用油样，加入50-200μL 1-5mol/L衍生化试剂，然后再向其中加入0.1-1.0mL正己烷，并进行充分震荡，最后静置分层。

3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于：衍生化试剂是指强碱或者强酸的醇溶液;其中强碱为氢氧化钾、氢氧化钠或甲醇钠；强酸为浓硫酸；醇为甲醇或乙醇。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中特征指示物是指在动、植物油中含量差别较大、能够反映动物油特征的脂肪酸，如异构十五碳脂肪酸或异构十七碳脂肪酸；参考物可以为饱和直链十五碳脂肪酸或十七碳脂肪酸的甲酯化或乙酯化产物。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d中的判据指标是根据特征指示物的衍生化产物在植物油、动物油以及地沟油中的相对含量进行制定的。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤d中异构十五碳脂肪酸甲酯的指标为0.3-0.5ppm，异构十七碳脂肪酸甲酯的指标为3.5-5.0ppm。

7.按照权利要求1或5所述的方法，其特征在于：植物油为玉米油、大豆油、花生油、芝麻油、菜籽油、葵花油、橄榄油、稻米油、红花油、芥花籽油、坚果油、小麦胚芽油中的一种或二种以上混合。