CN103487378A - 一种基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测dna的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法，具体是将DNA修饰的金纳米棒与待检测DNA混合进行退火反应；检测圆二色光谱，当检测到退火后相比退火前在600-800nm波段出现正负对称圆二色光谱的信号增强时，说明金纳米棒发生聚集，待检测DNA与金纳米棒上修饰的DNA完全互补或者互补并含有粘性末端。本发明的方法相比于基于纳米材料的紫外可见吸收光谱检测DNA的方法，信号更强，检出限低；而且检测方法简单，重复性好。

Description

一种基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法
技术领域
本发明涉及应用纳米技术检测DNA的领域，尤其涉及一种基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法。
背景技术
DNA（Deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸）承担着生物体的遗传信息，在生物遗传中起到不可替代的作用，每一种生物的核酸序列都是独一无二的。因此在诊断和识别各种疾病时，对于细菌、病毒、病原体的核酸序列的检测就显得尤为重要。现有的PCR技术可以将部分DNA序列进行复制，信号放大，在灵敏度方面代表了检测的极限。
贵金属纳米粒子在尺寸小于电子平均自由程时，光照射条件下，粒子表面导带的自由电子谐振产生表面等离子共振效应（Surface Plasmon Resonance，SPR）。金纳米棒具有两个表面等离子共振吸收峰，短轴吸收峰（TSPR）和长轴吸收峰（LSPR）。当贵金属表面连有手性分子时，能够诱导出贵金属纳米粒子的手性信号。当金纳米棒在手性分子的诱导下聚集时，会出现特有的圆二色信号。
基于纳米技术的DNA检测手段在定位、可视化和多重检测等方面具有不可比拟的优势。目前，已有相关研究报道，比如文献Elghanian,R.等人(1997).Selective colorimetric detection of polynucleotides based on the distance-dependentoptical properties of gold nanoparticles.Science277(5329):1078-1081.；Park,S.-J等人(2002).Array-Based Electrical Detection of DNA with Nanoparticle Probes.Science,295(5559):1503-1506.;和He,L.等人(2000).Colloidal Au-EnhancedSurface Plasmon Resonance for Ultrasensitive Detection of DNA Hybridization.Journal of the American Chemical Society122(38):9071-9077均公开了基于纳米材料的DNA检测手段，但是目前基于纳米材料的DNA检测手段大多利用紫外可见吸收光谱进行检测，存在信号变化不明显及检出限高等问题。
发明内容
针对目前基于纳米材料的DNA检测手段存在信号变化不明显及检出限高的问题，本发明的目的在于提供一种基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法，该方法相比于基于纳米材料的紫外可见吸收光谱检测DNA的方法，信号更强，检出限低。
本发明人经过深入地研究发现，将金纳米棒用巯基DNA（SH-DNA）修饰后与待检测DNA序列进行培养，检测圆二色光谱信号；当待检测DNA序列与修饰到金纳米棒上的SH-DNA序列互补时，可在600-800nm波长处观察到正负对称的圆二色信号的明显变化，否则无明显变化，从而完成了本发明。
本发明提供以下技术方案：
一种基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法：将DNA修饰的金纳米棒与待检测DNA混合进行退火反应；检测圆二色光谱，当检测到退火后相比退火前在600-800nm波段出现正负对称圆二色光谱的信号增强时，说明金纳米棒发生聚集，待检测DNA与金纳米棒上修饰的DNA完全互补或者互补并含有粘性末端。
本发明是基于互补DNA退火杂交引起金纳米棒聚集，从而导致600-800nm波段出现正负对称圆二色光谱的信号增强的现象，而完成的发明。因此，对于金纳米棒的修饰方式不作特别限定，目前已有的任何能够将DNA修饰到金纳米棒上的技术，以及未来开发出来的任何能够将DNA修饰到金纳米棒上的技术均可以用来为本发明提供DNA修饰的金纳米棒。
虽然如此，本发明还是提供了一种特别的DNA修饰的金纳米棒，即巯基DNA修饰的金纳米棒，所述巯基与金通过共价键连接将DNA修饰在金纳米棒上；优选地，所述巯基修饰在DNA的3’末端。
本发明提供的基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法中，所述退火温度范围可以是从60-90℃任一温度（例如60℃、62℃、64℃、66℃、68℃、70℃、72℃、74℃、76℃、78℃、80℃、82℃、84℃、86℃、88℃或90℃）降至20-50℃任一温度（例如20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃、34℃、36℃、38℃、40℃、42℃、44℃、46℃、48℃或50℃），优选为从60℃降至20℃。
本发明提供的基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法中，所述DNA修饰的金纳米棒与待检测DNA的摩尔比可以是1:10-200，例如1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:80、1:90、1:100、1:110、1:120、1:130、1:140、1:150、1:160、1:170、1:180、1:190或1:200，优选为1:50-100。
优选地，所述DNA修饰的金纳米棒的浓度为0.6-0.8nM，例如0.6nM、0.62nM、0.64nM、0.66nM、0.68nM、0.70nM、0.72nM、0.74nM、0.76nM、0.78nM或0.8nM。
本发明对DNA修饰的金纳米棒与待检测DNA混合进行退火反应环境不作特别限定，只要能够提供退火反应的适宜条件即可。虽然如此，本发明还是特别提供一种退火反应的溶液环境为含0.25M氯化钠（NaCl）、0.05%十二烷基磺酸钠（SDS）和0.05M磷酸缓冲溶液（PBS）且pH为7.4的溶液。
本发明提供一种巯基DNA修饰的金纳米棒的制备方法，包括：
（a）制备金纳米棒；
（b）用SH-DNA修饰步骤（a）得到的金纳米棒，离心分离得到巯基DNA修饰的金纳米棒；
优选地，步骤（a）得到的金纳米棒的长径比为2.0-3.0；
优选地，步骤（b）中金纳米棒与SH-DNA的摩尔比为1：（8000-12000）。
根据本发明，对制备金纳米棒的方法没有特别的限定，只要能够得到金纳米棒即可，可为本领域所常用的各种方法。但在本发明中，优选金晶种合成法（Chem.Mater.2003,15,1957-1962）得到金纳米棒。
本发明步骤（a）金晶种合成法制备金纳米棒具体包括：
（a1）在30℃条件下，将十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）和四氯金酸（HAuCl4）水溶液混合，加入新制备的硼氢化钠（NaBH4）溶液，得到金晶种，熟化时间可以是2-4h。
优选地，HAuCl4、NaBH4、十六烷基三甲基溴化铵和水的摩尔比可以是1:（2-3）:（200-400）:（200-250）。
（a2）将十六烷基三甲基溴化铵、HAuCl4和AgNO3溶液混合均匀，加入抗坏血酸溶液，1-2min后加入所述金晶种，在30℃的恒温水浴中静置生长，得到所述金纳米棒。
优选地，按总反应体积10mL计，加入金晶种的量为10-14μL。
优选地，HAuCl4、十六烷基三甲基溴化铵、AgNO3、抗坏血酸和水的摩尔比为1：（180-220）：（0.1-0.2）：（1-2）：（900-1100），从得到的金纳米棒的均一性方面来考虑，更优选为1：（190-210）：（0.12-0.13）：（1.2-1.3）：（950-1050）。在本发明中，通过调节硝酸银的用量，可以得到不同长径比的金纳米棒。
在本发明中，对HAuCl4、CTAB、AgNO3以及水进行混合的方式没有特别的限定，可以为本领域常用的各种方式。例如可以将CTAB、HAuCl4、AgNO3和水直接进行混合，也可以预先用水分别将CTAB、HAuCl4和AgNO3溶解后，再进行混合。
在本发明中，对上述得到的金纳米棒溶液用去离子水离心清洗2次（10000r/min，20min），最后再重新分散到去离子水中，即得到金纳米棒的溶液。
本发明步骤（b）中所使用的所述步骤（a）制备的金纳米棒的浓度可以是0.6-0.8nM，例如0.6nM、0.62nM、0.64nM、0.66nM、0.68nM、0.70nM、0.72nM、0.74nM、0.76nM、0.78nM或0.8nM。
本发明中，对于SH-DNA修饰金纳米棒的方法没有特别的限定，只要能够得到SH-DNA修饰的金纳米棒即可，可以为本领域所常用的各种方法。但在本发明中优选盐熟化法修饰金纳米棒，具体可以是：
（b1）向步骤（a）制备的金纳米棒的溶液中，加入SH-DNA共培养12-48h、优选24h，然后加入SDS溶液和pH7.4的磷酸缓冲溶液，于室温下存放5-8天、优选7天后，然后分6-10次、优选8次加入NaCl溶液，每次间隔2-6h、优选4h。
在优选的情况下，金纳米棒的浓度为0.6-0.8nM，金纳米棒与SH-DNA的摩尔比为1:8000-12000；加入的SDS与磷酸缓冲液混合液的体积为300-320μL/1mL金纳米棒溶液，其中SDS的质量分数为0.04-0.05%，磷酸缓冲液的浓度为0.05M；加入的NaCl浓度为1M，每次加入的体积为30-40μL，共加入8次，每次时间间隔为4-6小时。
（b2）将步骤（b1）所得的混合液离心（可以离心两次，每次10000r/min，3min），去除未修饰在金纳米棒表面的SH-DNA，将沉淀重新分散到含有NaCl和SDS溶液的pH7.4的磷酸缓冲溶液中，得到SH-DNA修饰的金纳米棒溶液。
在优选的情况下，每1mL原混合液离心分离后重新分散至1-1.2mL上述三组分液中，其中NaCl的浓度为0.2-0.3M、优选0.25M，SDS的质量分数为0.04-0.05%、优选0.05%，磷酸缓冲液的浓度为0.05M。
本发明中，待检测DNA可以带有或不带粘性末端。当待检测DNA与SH-DNA修饰的金纳米棒上的序列互补时，无论待检测DNA带或不带粘性末端，都能够引起金纳米棒的聚集，得到检出信号。
上述水可以为蒸馏水和/或去离子水等，所有药品均为分析纯及以上纯度。
本发明中，根据本发明的上述方法得到的互补DNA链段的检出信号为600-800nm波段出现的正负对称的圆二色光谱信号。
本发明的有益效果为：本发明基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法相比于基于纳米材料的紫外可见吸收光谱检测DNA的方法，信号更强，检出限低；而且检测方法简单，重复性好。
附图说明
图1为本发明的实施例1中得到的长轴吸收峰为700nm、长径比为3.0的金纳米棒的透射电子显微镜图；
图2为本发明的实施例1中DNA链段A序列DNA的紫外可见吸收光谱和圆二色光谱图（左箭头指示圆二色光谱曲线，右箭头指示紫外可见吸收光谱曲线）；
图3为本发明的实施例1中得到的退火后SH-DNA链段A修饰的金纳米棒与DNA链段C的紫外可见吸收光谱和圆二色光谱图（左箭头指示圆二色光谱曲线，右箭头指示紫外可见吸收光谱曲线）；
图4为本发明的实施例1得到的聚集后的金纳米棒的扫描电子显微镜图；
图5为本发明的实施例2得到的退火后SH-DNA链段A修饰的金纳米棒与DNA链段D的紫外可见吸收光谱和圆二色光谱图（左箭头指示圆二色光谱曲线，右箭头指示紫外可见吸收光谱曲线）；
图6为本发明的实施例3得到的退火后SH-DNA链段A修饰的金纳米棒与DNA链段E的紫外可见吸收光谱和圆二色光谱图（左箭头指示圆二色光谱曲线，右箭头指示紫外可见吸收光谱曲线）；
图7为本发明的实施例4中得到的退火后SH-DNA链段A修饰的金纳米棒与不同浓度DNA链段C的紫外可见吸收光谱和圆二色光谱图（左箭头指示圆二色光谱曲线，右箭头指示紫外可见吸收光谱曲线）；
图8为本发明的实施例5中得到的不同退火温度下SH-DNA链段A修饰的金纳米棒与DNA链段C的紫外可见吸收光谱和圆二色光谱图（左箭头指示圆二色光谱曲线，右箭头指示紫外可见吸收光谱曲线）；
图9为本发明的实施例6中得到的长径比为2.8的金纳米棒的透射电子显微镜照片；
图10为本发明的实施例6中得到的长径比为2.1的金纳米棒的透射电子显微镜照片；
图11为发明的实施例6中得到的退火后SH-DNA链段A修饰不同长径比的金纳米棒与DNA链段C的紫外可见吸收光谱和圆二色光谱图（左箭头指示圆二色光谱曲线，右箭头指示紫外可见吸收光谱曲线）；
图12为本发明的实施例7中得到的退火后SH-DNA链段B修饰的金纳米棒与DNA链段F的紫外可见吸收光谱和圆二色光谱图（左箭头指示圆二色光谱曲线，右箭头指示紫外可见吸收光谱曲线）。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解，以下实施例仅为本发明的优选实施例，以便于更好地理解本发明，因而不应视为限定本发明的范围。对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂厂商购买得到的。
以下实施例中离心采用台式高速离心机（XiangYi H-1650）；透射电子显微镜照片采用六硼化镧透射电子显微镜（Tecnai G220S-TWIN）得到；扫描电镜图采用冷场发射扫描电子显微镜（Hitachi S-4800）得到；紫外可见吸收光谱采用紫外可见光谱仪（Hitachi U-3010）得到；圆二色光谱采用圆二色光谱仪（JascoJ-810spectropolarimeter）得到。
实施例1
（1）制备金纳米棒
在30℃条件下，向7.5mL浓度为100mM的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）中加入250μL浓度为10mM的HAuCl4，再加入1.65mL去离子水，搅拌均匀后迅速加入0.6mL浓度为10mM的NaBH4溶液（所用的NaBH4溶液新鲜配制并在冰水浴中恒温），搅拌2min后，熟化2-4h，得到用于生长金纳米棒的金晶种。
将10mL浓度为100mM的CTAB与500μL浓度为10mM的HAuCl4混合均匀；然后，依次加入60μL浓度为10mM的AgNO3，60μL浓度为100mM的抗坏血酸，12μL熟化2-4h的金晶种，混匀后，在30℃恒温水浴中静置生长12h，得到含有金纳米棒的溶液。
用去离子水对所得的金纳米棒进行离心清洗2次（10000r/min，20min），最后分散到去离子水中。将所得的金纳米棒采用透射电镜（TEM）观察形貌，如图1所示，所得的金纳米棒平均长度为42nm，平均宽度为14nm，平均长径比为3.0。
（2）金纳米棒SH-DNA修饰
取1mL金纳米棒溶液，浓度为0.7nM，向其中加入74μL浓度为100μM的SH-DNA链段A（5’-AAGAATTTATAAGCAGAAAAAAAAAAAA-3’-SH，SEQ IDNO：1，在序列的3’末端修饰巯基）。经过24h培养之后，加入155μL0.1%SDS（十二烷基磺酸钠）溶液和155μL0.1M的pH=7.4的磷酸缓冲溶液，在室温下存放7天后，向其中加入1M NaCl溶液，每次加入32.5μL，共8次，时间间隔为4h。
将上述所得混合液离心两次（10000r/min，3min），除去未修饰在金纳米棒表面的SH-DNA，重新分散到1mL含有0.25M NaCl、0.05%SDS的0.05M pH=7.4的磷酸缓冲溶液中，得到SH-DNA修饰的金纳米棒溶液。
（3）DNA链段的圆二色光谱检测
取0.5mL链段A修饰的金纳米棒溶液，加入1.5mL含有0.25M NaCl、0.05%SDS的0.05M pH=7.4的磷酸缓冲溶液中。将1.5μL浓度为100μM的与链段A互补、带有粘性末端的DNA链段C（5’-TTTTTTTTTTTTCTGCTTATAAATTCTTGCGC-3’，SEQ ID NO：3）加入SH-DNA修饰的金纳米棒溶液中，混合后在60℃退火，使其形成DNA双链结构，立即进行紫外可见吸收光谱和CD光谱测试。如图2所示，为带有粘性末端的DNA链段C的紫外可见吸收光谱与CD光谱图。如图3所示，为DNA链段A修饰的金纳米棒与互补链C混合、退火后的紫外可见吸收光谱与CD光谱图。从图3可以看出，当体系从60℃退火到20℃时，700nm附近的紫外吸收峰强度降低，金纳米棒发生聚集；在对应的波段，CD信号出现了明显的变化：金纳米棒的长轴吸收峰所对应的CD峰变成两个对称的峰，分别在750nm和670nm处，CD信号大大增强，并且形成正负对称信号。与紫外可见吸收光谱相比，CD光谱变化更为明显，更适宜于目标DNA的检测。将聚集后的金纳米棒采用扫描电镜（SEM）观察形貌，如图4所示，金纳米棒呈现无规聚集状态。
实施例2
按照实施例1的方法制备金纳米棒并用SH-DNA链段A修饰，不同的是，将DNA链段C换成同浓度、与链段A互补并不带粘性末端的DNA链段D（5’-TTTTTTTTTTTTCTGCTTATAAATTCTTA-3’，SEQ ID NO：4）。退火后，进行紫外可见吸收光谱和CD光谱测试。如图5所示，为DNA链段A修饰的金纳米棒与不含粘性末端的互补链D混合、退火后的紫外可见吸收光谱与CD光谱图。从图5可以看出，当体系从60℃退火到20℃时，金纳米棒不发生聚集，CD信号无变化。原因在于：DNA链段D与链段A互补配对后在其3’多出一个A碱基，因此它们互相之间不能形成配对关系，不能引起金纳米棒聚集；而DNA链段C与链段A互补配对后在其3’多出GCGC4个碱基，它们互相之间能够形成配对关系，引起金纳米棒聚集。
实施例3
按照实施例1的方法制备金纳米棒并用SH-DNA链段A修饰，不同的是，将DNA链段C换成同浓度、与链段A完全互补（不带粘性末端）的DNA链段E（5’-TTTTTTTTTTTTCTGCTTATAAATTCTT-3’，SEQ ID NO：5）。退火后，进行紫外可见吸收光谱和CD光谱测试。如图6所示，为DNA链段A修饰的金纳米棒与完全互补链E混合、退火后的紫外可见吸收光谱与CD光谱图。从图6可以看出，当体系从60℃退火到20℃时，700nm附近的紫外吸收峰强度降低，金纳米棒发生聚集；在对应的波段，CD信号出现了明显的变化：金纳米棒的长轴吸收峰所对应的CD峰变成两个对称的峰，分别在720nm和620nm处，CD信号大大增强，并且形成正负对称信号。
实施例4
按照实施例1的方法制备金纳米棒并用SH-DNA链段A修饰，不同的是，改变待检测DNA链段C的浓度分别为50nM、75nM和100nM。即将1.0μL、1.5μL或2.0μL浓度为100μM的与链段A互补、带有粘性末端的DNA链段C加入SH-DNA修饰的金纳米棒溶液中。混合后在60℃退火，使其形成DNA双链结构，立即进行紫外可见吸收光谱和CD光谱测试。如图7所示，从图中可以看出，CD信号随着互补DNA链段C的浓度增加而增加，当待检测DNA浓度低至50nM时，仍有很强烈的CD信号，能够检测出与金纳米棒上所修饰的DNA序列互补、带有粘性末端的DNA序列。相比于紫外可见吸收光谱，CD光谱对DNA浓度的变化更为敏感，能够更好的检测出体系中的DNA浓度。
实施例5
按照实施例1的方法制备金纳米棒并用SH-DNA链段A修饰，不同的是，改变DNA混合后的退火温度，分别由60℃退火至50℃、40℃、30℃和20℃，然后进行紫外可见吸收光谱和CD光谱测试。如图8所示，从图中可以看出，随着退火温度的升高，CD检出信号变弱，但是仍然能够检出互补DNA链段C。
实施例6
按照实施例1的方法制备金纳米棒并用SH-DNA链段A修饰，不同的是，在制备金纳米棒的过程中，改变AgNO3的浓度，分别加入55μL和45μL浓度为10mM的AgNO3，最终得到长径比分别为2.8和2.1的金纳米棒。如图9所示，为制备的长径比为2.8的金纳米棒。如图10所示，为制备的长径比为2.1的金纳米棒。如图11所示，为退火后的紫外可见吸收光谱和CD光谱。从图中可以看出，改变金纳米棒的长径比并不影响DNA的检测。当带有粘性末端的待检测DNA与金纳米棒上修饰的DNA序列互补时，CD光谱上仍然能够得到正负对称信号，达到DNA序列检测的目标。
实施例7
按照实施例1的方法制备金纳米棒并用SH-DNA链段修饰，不同的是，使用巯基DNA链段B（5’-ATGCTCAACTCTTAGGACAAAAAAAAAA-3’-SH，SEQID NO：2，在序列的3’末端修饰巯基）修饰金纳米棒。将与链段B互补并带有粘性末端、DNA链段F（5’-TTTTTTTTTTGTCCTAAGAGTTGAGCATGCGC-3’，SEQ ID NO：6）按照终浓度为75nM的量加入SH-DNA链段B修饰的金纳米棒溶液中。在60℃退火至20℃后，进行紫外可见吸收光谱和CD光谱测试。如图12所示，为DNA链段B修饰的金纳米棒与带有粘性末端的互补链F混合、退火后的紫外可见吸收光谱与CD光谱图。从图12可以看出，当体系从60℃退火到20℃时，紫外吸收峰强度降低，金纳米棒发生聚集；在对应的波段，CD信号出现了明显的变化：金纳米棒的长轴吸收峰所对应的CD峰变成两个对称的峰，CD信号大大增强，并且形成正负对称信号。
根据实施例1-7可知，无论待检测DNA序列是否带有粘性末端，采用本发明的方法均能够对DNA序列进行检测；并且，通过实施例4-6可以看出，当改变所使用的金纳米棒的长径比、待检测DNA的浓度和退火温度时，均可以得到明显的正负对称的CD光谱检出信号。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细特征以及详细方法，但本发明并不局限于上述详细特征以及详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细特征以及详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明选用组分的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种基于金纳米棒聚集的圆二色光谱检测DNA的方法，其特征在于，所述方法为：将DNA修饰的金纳米棒与待检测DNA混合进行退火反应；检测圆二色光谱，当检测到退火后相比退火前在600-800nm波段出现正负对称圆二色光谱的信号增强时，说明金纳米棒发生聚集，待检测DNA与金纳米棒上修饰的DNA完全互补或者互补并含有粘性末端。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA修饰的金纳米棒是巯基DNA修饰的金纳米棒，所述巯基与金通过共价键连接将DNA修饰在金纳米棒上；
优选地，所述巯基修饰在DNA的3’末端。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述退火温度范围为从60-90℃任一温度降至20-50℃任一温度，优选为从60℃降至20℃。
4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述DNA修饰的金纳米棒与待检测DNA的摩尔比为1:10-200，优选为1:50-100；
优选地，所述DNA修饰的金纳米棒的浓度为0.6-0.8nM。
5.根据权利要求1至4任一项所述的方法，其特征在于，所述DNA修饰的金纳米棒与待检测DNA混合进行退火反应的溶液环境为含0.25M NaCl、0.05%SDS和0.05M磷酸缓冲溶液且pH为7.4的溶液。
6.根据权利要求1至5任一项所述的方法，其特征在于，所述DNA修饰的金纳米棒是通过如下方法制得的：
（a）制备金纳米棒；
（b）用SH-DNA修饰步骤（a）得到的金纳米棒，离心分离得到巯基DNA修饰的金纳米棒；
优选地，步骤（a）得到的金纳米棒的长径比为2.0-3.0；
优选地，步骤（b）中金纳米棒与SH-DNA的摩尔比为1：（8000-12000）。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤（a）具体为：
（a1）在30℃条件下，将十六烷基三甲基溴化铵和HAuCl4水溶液混合，加入新制备的NaBH4溶液，得到金晶种；
（a2）将十六烷基三甲基溴化铵、HAuCl4和AgNO3溶液混合均匀，加入抗坏血酸溶液，1-2min后加入所述金晶种，在30℃的恒温水浴中静置生长，得到所述金纳米棒。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（a1）中，HAuCl4、NaBH4、十六烷基三甲基溴化铵和水的摩尔比为1:（2-3）:（200-400）:（200-250）；
优选地，步骤（a2）中，HAuCl4、十六烷基三甲基溴化铵、AgNO3、抗坏血酸和水的摩尔比为1：（180-220）：（0.1-0.2）：（1-2）：（900-1100），更优选为1：（190-210）：（0.12-0.13）：（1.2-1.3）：（950-1050）；
优选地，步骤（a2）中，按总反应体积10mL计，加入金晶种的量为10-14μL。
9.根据权利要求6至8任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤（b）中所使用的所述步骤（a）制备的金纳米棒的浓度为0.6-0.8nM。
10.根据权利要求6至9任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤（b）具体为：
（b1）向步骤（a）制备的金纳米棒的溶液中，加入SH-DNA共培养12-48h、优选24h，然后加入SDS溶液和pH7.4的磷酸缓冲溶液，于室温下存放5-8天、优选7天后，然后分6-10次、优选8次加入NaCl溶液，每次间隔2-6h、优选4h；
（b2）将步骤（b1）所得的混合液离心，去除未修饰在金纳米棒表面的SH-DNA，将沉淀重新分散到含有0.25M NaCl和0.05%SDS溶液的pH7.4的0.05M磷酸缓冲溶液中，得到SH-DNA修饰的金纳米棒溶液。
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