CN103479807B - 一种用于脑保护的组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于脑保护的组合物，它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：漆树提取物2～9份、葡萄籽提取物1～7份、银杏叶提取物1～5份、α-硫辛酸1～3份、N-乙酰-L-酪氨酸1～3份、卵磷脂1份。本发明还公开了前述组合物的制备方法和用途。本发明将葡萄籽提取物、漆树提取物、银杏叶提取物、α-硫辛酸、N-乙酰-L-酪氨酸、卵磷脂组合使用，具有明显的脑保护作用，可用于治疗和/或预防局灶性脑缺血造成的脑损伤，应用前景良好。

Description

一种用于脑保护的组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种用于脑保护的组合物及其制备方法和用途。

背景技术

缺血再灌注可使自由基的生成增加而发生损害，而脑组织神经细胞对自由基的损伤尤为敏感。脑缺血可使细胞膜磷脂分解，并生成大量自由基。血管再通或侧枝循环建立后，提供的氧超出组织对氧的利用率，产生大量的氧自由基。自由基与脂质、蛋白质及核酸发生反应，引起一系列过氧化损伤。线粒体作为细胞内的主要产能场所，对缺血缺氧极为敏感，线粒体功能障碍可引起神经细胞的死亡及凋亡。因此，抗自由基的氧化作用对脑的保护至关重要。

葡萄籽原花青素是从葡萄籽中提取出的一种含有大量酚羟基的多酚化合物，主要成分是儿茶素类、原花青素类。大量体外实验证明，葡萄籽原花青素具有很强的抗氧化性和清除自由基的能力。在小鼠不完全缺血的模型上观察到，葡萄籽原花青素能明显延长小鼠的存活时间，提高小鼠耐缺氧能力，进一步证明了葡萄籽花青素对脑缺氧、缺血及再灌注损伤具有保护作用（吴秀香，葡萄籽原花青素对小鼠脑缺血,再灌注及缺氧性损伤的影响[J].中国康复医学杂志，2006,21(2):145-148.）。

漆黄素（fiestin）是一种天然四羟基黄酮类物质，主要来源于漆树科植物木蜡树等植物的提取物，另外在各种水果（如草莓、橘子、葡萄等）和蔬菜（如西红柿、洋葱等）中也发现有少量的漆黄素存在。同其它黄酮类物质一样，漆黄素也有很强的抗氧化作用，有助于延缓衰老，提高记忆力。漆黄素可以直接作为抗氧化剂起作用，并增强细胞内的主要的抗氧化剂——谷胱甘肽的含量，并且可以在氧化应激状态下维持线粒体的功能，此外还能抑制小胶质细胞的炎性反应、脂氧合酶的活性，通过这一些列的作用，对脑细胞起保护作用（Pamela Maher,Modulation of multiple pathways involved in themaintenance of neuronal function during aging by fisetin.Genes&Nutrition,2009,4(4):297-307.）。

银杏为银杏科植物，其叶有重要的药用价值。银杏叶提取物主要成分为黄酮类和萜类内酯化合物，两者有协同作用，可扩张血管、增加血流量，改善心脑血管循环，在缺氧情况下，可护脑和心肌细胞。有研究报道，银杏叶提取物具有显著的缺血后脑保护作用（王小珊等，银杏叶提取物对缺血再灌注鼠脑保护作用的研究[J].临床神经病学杂志，2006年1期；周兰兰等，银杏叶提取物改善反复脑缺血再灌注小鼠血液流变学的作用[J].中国现代应用药学，2000年2期）。

α-硫辛酸（alpha lipoic acid）是一种既具水溶性又具脂溶性的维生素类的物质。α-硫辛酸含有双硫五元环结构，电子密度很高，具有显著的亲电子性和与自由基反应的能力，因此它具有抗氧化性，此外，硫辛酸的巯基很容易进行氧化还原反应，故可保护巯基酶免受重金属离子的毒害。有实验研究证实，α-硫辛酸能显著降低颅脑创伤患者S100β蛋白和NSE水平，改善预后，对脑损伤有保护作用（尹光明等，α-硫辛酸对颅脑创伤患者脑损害的影响[J]，中国实用医刊，2010年18期）。

N-乙酰-L-酪氨酸是一种能被人体快速吸收和生物转化的酪氨酸，L-酪氨酸在体内能参与了多种儿茶酚胺类神经递质如多巴胺、去甲肾上腺素等的合成，这些神经递质能够维持正常的脑神经功能。(HA Tyrrell,Tyrosine:FoodSupplement or Therapeutic Agent?Journal of Nutritional and EnvironmentalMedicine,1998,8(4):349-359.)。

卵磷脂属于一种混合物，是存在于动物组织以及卵黄之中的一组黄褐色的油脂性物质，其构成成分包括磷脂、胆碱、脂肪酸、甘油、糖脂、甘油三酸脂以及磷脂，被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。脑神经细胞中卵磷脂的含量约占其质量的17%～20%。卵磷脂的充分供应保证充分的“胆碱”与人体内的“乙酰”合成为“乙酰胆碱”，“乙酰胆碱”是大脑内的一种信息传导物质，从而提高脑细胞的活性化程度，提高记忆与智力水平。卵磷脂具有乳化、分解油脂的作用，可增进血液循环，改善血清脂质，清除过氧化物，使血液中胆固醇及中性脂肪含量降低，减少脂肪在血管内壁的滞留时间，促进粥样硬化斑的消散，防止由胆固醇引起的血管内膜损伤。服用卵磷脂对高血脂和高胆固醇具有显著的功效，因而可预防和治疗动脉硬化症（高血压、心肌梗塞、脑溢血）。

现未见将漆树提取物、葡萄籽提取物、银杏叶提取物、α-硫辛酸、N-乙酰-L-酪氨酸、卵磷脂联合用于治疗和/或预防脑损伤的报道。

发明内容

本发明的目的是提供了一种用于脑保护的组合物。本发明的另一目的是提供了该组合物的制备方法和用途。

本发明提供了一种用于脑保护的组合物，它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

漆树提取物2～9份、葡萄籽提取物1～7份、银杏叶提取物1～5份、α-硫辛酸1～3份、N-乙酰-L-酪氨酸1～3份、卵磷脂1份。

进一步优选地，它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

漆树提取物4～9份、葡萄籽提取物3～7份、银杏叶提取物2～5份、α-硫辛酸1～3份、N-乙酰L-酪氨酸1～3份、卵磷脂1份。

更一步优选地，它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

漆树提取物8份、葡萄籽提取物7份、银杏叶提取物5份、α-硫辛酸2份、N-乙酰L-酪氨酸1份、卵磷脂1份。

其中，所述的葡萄籽提取物中原花青素含量为30%（w/w）；所述的漆树提取物中漆黄素含量为40%（w/w）；所述的银杏叶提取物中银杏黄酮含量≥24%（w/w）、银杏内酯含量≥6%（w/w）；α-硫辛酸纯度≥98%、N-乙酰-L-酪氨酸纯度≥98%、卵磷脂纯度≥98%。

本发明组合物是由漆树提取物、葡萄籽提取物、银杏叶提取物、α-硫辛酸、N-乙酰-L-酪氨酸、卵磷脂为活性成分，加上药学或食品中可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

其中，所述的制剂是口服制剂。

其中，所述的口服制剂是微乳液、胶囊剂、软胶囊剂、片剂或丸剂。

本发明还提供了一种制备所述的组合物的方法，它包括如下步骤：

a、按照前述重量配比，称取各原料；

b、加上药学或食品中可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。

本发明还提供了所述的组合物在制备脑保护药物或保健食品中的用途。

其中，所述的药物或保健食品是治疗和/或预防局灶性脑缺血造成的脑损伤的药物或保健食品。

本发明药物将漆树提取物、葡萄籽提取物、银杏叶提取物、α-硫辛酸、N-乙酰-L-酪氨酸、卵磷脂组合使用，具有明显脑保护作用，可用于治疗和/或预防局灶性脑缺血造成的脑损伤，具有良好的临床应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1实施例1制备的微乳剂的粒径分布图

图2本发明组合物对大鼠局灶性脑缺血后脑梗死面积的影响

图3本发明组合物对大鼠局灶性脑缺血后S100β表达水平的影响

图4本发明组合物对大鼠局灶性脑缺血后NSE表达水平的影响

图5本发明组合物与其单一有效成分对大鼠局灶性脑缺血后脑梗死面积的影响

图6本发明组合物与其单一有效成分对大鼠局灶性脑缺血后S100β表达水平的影响

图7本发明组合物与其单一有效成分对大鼠局灶性脑缺血后NSE表达水平的影响

具体实施方式

实验材料：

葡萄籽提取物，购自南京泽朗医药科技有限公司，其中原花青素含量为30%（w/w）；

漆树提取物，购自南京泽朗医药科技有限公司，其中漆黄素含量为40%（w/w）；

银杏叶提取物，购自徐州恒凯银杏制品有限公司，其中银杏黄酮含量≥24%（w/w）、银杏内酯含量≥6%（w/w）；

α-硫辛酸购自西安金绿生物工程技术有限公司，纯度≥98%；

N-乙酰-L-酪氨酸，购自鄂州市恒通伟业化工有限公司，纯度≥98%；卵磷脂，购自上海锐麟生物科技有限公司，纯度≥98%。

实施例1本发明微乳剂的制备

组合物配比：（每100ml微乳剂中的含量）

将上述比例混合物24g，先加入100mL的PEG400，混合，加入200mL大豆油，于70℃恒温搅拌混匀，然后加入60mL聚山梨酯80、50mL丙三醇以、1500ml的水，再于70℃恒温搅拌得油相，然后搅拌将油相匀速滴入适量水中，通过乳化分散得到微乳制剂，加水调整终体积至2L。微乳制剂的粒径表征如图1所示。

实施例2本发明微乳剂的制备

组合物配比：（每100ml微乳剂中的含量）

制备方法同实施例1。

实施例3本发明微乳剂的制备

组合物配比：（每100ml微乳剂中的含量）

制备方法同实施例1。

实施例4本发明微乳剂的制备

组合物配比：（每100ml微乳剂中的含量）

制备方法同实施例1。

实施例5本发明微乳剂的制备

组合物配比：（每100ml微乳剂中的含量）

制备方法同实施例1。

实施例6本发明胶囊剂的制备

组合物配比：（每粒胶囊剂中的含量）

称取上述混合物，加入淀粉、硬脂酸镁、微晶纤维素制粒，加入明胶和二氧化硅装胶囊，即得胶囊剂。

实施例7本发明软胶囊的制备

组合物配比：（每粒软胶囊剂中的含量）

称取上述混合物，与大豆油、大豆卵磷脂等混合基质按1:1.2混合，加热熔溶，混匀后得软胶囊内容物；

胶皮的制备：按明胶：水：甘油1:0.8：0.4的比例，先将明胶和水放入容器中，加热至80℃，不断搅拌使之溶解，然后加入甘油继续搅拌，待完全溶解后停止加热，自然冷却至室温后作软胶囊材；

将上述所得的内容物和软胶囊材在软胶囊压制机上压制，经清洗、干燥、灭菌、包装即得软胶囊。

实施例8：本发明片剂的制备

组合物配比：（每粒片剂中的含量）

称取上述混合物，加入适量淀粉浆过筛混匀后制得湿粒，湿粒烘干后再过筛，然后加入0.6～3%的硬脂酸镁压片，即得片剂。

实施例9：本发明丸剂的制备

组合物配比：（每粒丸剂中的含量）

称取上述混合物，充分粉碎后过六至七号筛，混匀，然后加入蒸馏水泛丸，干燥，即得丸剂。

以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明组合物对大鼠局灶性脑缺血的作用

1、实验方法

成年雄性SD大鼠60只（购于成都达硕生物科技有限公司），200～250g，分为对照组（生理盐水）、组合物1组（实施例1制备微乳剂）、组合物2组（实施例2制备微乳剂）、组合物3组（实施例3制备微乳剂）、组合物4组（实施例4制备微乳剂）和组合物5组（实施例5制备微乳剂），每组10只。实验前7天，各组动物每天灌胃给药2.5毫升。

实验时，戊巴比妥钠麻醉动物（30mg/kg），采用线栓大脑中动脉制备局灶性脑缺血模型，缺血30分钟后，开放再灌注24小时。

完成后，处死大鼠，各组取脑组织，部分行2mm冠状切片，TTC染色后，用Image Pro图像分析软件处理分析，计算脑梗死面积；部分行组织匀浆，取上清液，商用ELISA试剂盒测定S100β及神经元特异性烯醇化酶（NSE）的含量。所有数据都以均数±标准差表示，并行单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001vs.对照组；P<0.05vs.组合物2组。

2、实验结果

实验结果如图2～图4所示，与对照组比较，各实施例制备的微乳剂均可显著抑制大鼠局灶性脑缺血损伤后脑梗死面积（图2），以及大脑中S100β（图3）和NSE表达（图4），其中，组合物1组、组合物2组、组合物3组的抑制程度高于组合物4组和组合物5组，组合物2组的抑制程度略高于其余组合物组。

实验结果表明，本发明组合物对局灶性脑缺血损伤都具有明显的保护作用，其中，实施例1～3制备的组合物较优，实施例2制备的组合物最优。

试验例2本发明组合物对大鼠局灶性脑缺血的作用

1、实验方法

成年雄性SD大鼠56只（购于成都达硕生物科技有限公司），200～250g，分为7组，每组8只。实验前7天，动物每天分别灌胃给药2.5毫升生理盐水（对照组）、漆树提取物（12mg/mL）、葡萄籽提取物（12mg/mL）、银杏叶提取物（12mg/mL）、α-硫辛酸（12mg/mL）、N-乙酰-L-酪氨酸（12mg/mL）、卵磷脂（12mg/mL）和实施例2制备微乳剂（组合物组）。

实验时，戊巴比妥钠麻醉动物（30mg/kg），采用线栓大脑中动脉制备局灶性脑缺血模型，缺血30分钟后，开放再灌注24小时。

完成后，处死大鼠，各组取脑组织，部分行2mm冠状切片，TTC染色后，用Image Pro图像分析软件处理分析，计算脑梗死面积；部分行组织匀浆，取上清液，商用ELISA试剂盒测定S100β及神经元特异性烯醇化酶（NSE）的含量。所有数据都以均数±标准差表示，并行单因素方差分析，P<0.05表示差异有统计学意义。*P<0.05，**P<0.01和***P<0.001vs.对照组；N.S.：与对照组无显著性差异；P<0.05，P<0.01和|P<0.001vs.组合物组。

2、实验结果

实验结果如图5、图6、图7所示，与对照组比较，除卵磷脂外，单独使用漆树提取物、葡萄籽提取物、银杏叶提取物、α-硫辛酸或N-乙酰-L-酪氨酸，均可在一定程度上抑制大鼠局灶性脑缺血损伤后脑梗死面积（图5），以及大脑中S100β（图6）和NSE表达（图7）；形成组合物后，对脑梗死面积、大脑中S100β和NSE表达的抑制效果更显著（P<0.05）。

实验结果表明，本发明组合物可以有效治疗和/或预防局灶性脑缺血造成的脑损伤，并且，与各组分单独使用相比，相同剂量下，本发明药物组合物的脑保护效果更优，说明本发明组合物各组分发挥了协同增效的作用。

综上，本发明组合物具有良好的脑保护效果，可用于治疗和/或预防局灶性脑缺血造成的脑损伤，临床应用前景良好。

Claims (10)

1.一种用于脑保护的组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

漆树提取物2～9份、葡萄籽提取物1～7份、银杏叶提取物1～5份、α-硫辛酸1～3份、N-乙酰-L-酪氨酸1～3份、卵磷脂1份；

所述漆树提取物中漆黄素的含量为40％(w/w)；所述葡萄籽提取物中原花青素的含量为30％(w/w)；所述银杏叶提取物中银杏黄酮的含量≥24％(w/w)、银杏内酯含量≥6％(w/w)；所述α-硫辛酸的纯度≥98％、所述N-乙酰-L-酪氨酸的纯度≥98％、所述卵磷脂的纯度≥98％。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

漆树提取物4～9份、葡萄籽提取物3～7份、银杏叶提取物2～5份、α-硫辛酸1～3份、N-乙酰-L-酪氨酸1～3份、卵磷脂1份。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂：

漆树提取物8份、葡萄籽提取物7份、银杏叶提取物5份、α-硫辛酸2份、N-乙酰-L-酪氨酸1份、卵磷脂1份。

4.一种用于脑保护的药物制剂，其特征在于：它是以权利要求1-3任意一项所述的组合物为活性成分，加上药学或食品中可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

5.根据权利要求4所述的制剂，其特征在于：所述制剂是口服制剂。

6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于：所述口服制剂是微乳剂、胶囊剂、片剂、丸剂。

7.根据权利要求6所述的制剂，其特征在于：所述的胶囊剂为软胶囊剂。

8.一种制备权利要求1-7任意一项所述组合物的方法，它包括如下步骤：

a、按权利要求1-7任意一项所述重量配比，称取各原料；

b、加上药学或食品中可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。

9.权利要求1-7任意一项所述的组合物在制备脑保护药物或保健食品中的用途。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述的药物或保健食品是治疗和/或预防局灶性脑缺血造成的脑损伤的药物或保健食品。