CN103478261A - 一种婴幼儿配方奶粉 - Google Patents

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刘宁
李萌
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Heilongjiang Huadan Dairy Co.,Ltd.
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本发明公开了一种婴幼儿配方奶粉，是在原有婴幼儿配方的基础上添加了VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽。本发明通过体外模拟婴儿胃肠部消化来探究所得的肽段的序列，进而将其应用于婴儿食品中，生产一种适合婴幼儿的奶粉。

Description

一种婴幼儿配方奶粉
技术领域
本发明涉及一种婴幼儿配方奶粉。
背景技术
母乳是婴儿最主要的食品，因为其营养丰富并且有大量的抑菌物质，所以婴儿食用起来既营养又安全。母乳中有大量的优质蛋白质，主要包括酪蛋白和乳清蛋白，而酪蛋白中以β-酪蛋白为主。人们对于牛乳β-酪蛋白的研究较多，尤其是其酶解之后得到的功能性肽段的作用以及作用方式，根据其功能主要可以将肽段概括成五类，包括血压调节肽，阿片肽，抑菌肽，免疫调节肽，酪蛋白磷酸肽，他们在人体内可以发挥不同的功能。目前对于酪蛋白活性肽的研究多数集中于牛乳的β-酪蛋白，而且由于酪蛋白磷酸肽可以促进钙离子的吸收从而促进人成骨细胞的生长，这点与人体的生长发育密切相关，所以大部分人致力于牛乳的酪蛋白磷酸肽这方面，在功能的基础之上，进一步找出了酪蛋白磷酸肽在Caco2细胞与HT-29细胞中作用的通路。但对于人乳中功能肽段的研究很少，目前只发现了54—59肽段（VEPIPY）来源于文献Immunostimulating hexapeptide from human casein:amino acid sequence,synthesisand biological properties；YPSFQ阿片肽来源于文献Biologically Active Peptides from MilkProteins with Emphasis on Two Examples Concerning Antithrombotic and ImmunomodulatlngActivities他们能够刺激抗体的分泌，在人体内起到免疫调节的作用。但并未指出获得该片段的具体方法：如酶的活性以及酶解时间。
对于肽段功能研究是为了将其应用于食品之中而且主要是婴儿食品，β酪蛋白是乳制品中主要的蛋白质，β酪蛋白被酶解后会得到很多不同的肽段，模拟婴儿体内的条件对人乳β-酪蛋白进行酶解，能够得到在婴儿体内真正被吸收的序列。但是婴儿体内的消化系统并未发育健全，酶的分泌量以及活性要比成年人低很多，所以同样的蛋白质进入人体后在成年人体内的水解程度与在婴儿体内的水解程度是不同的，也就是说得到的肽段的序列是不同的。
发明内容
本发明提供了一种婴幼儿配方奶粉，在原有婴幼儿配方的基础上添加了VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽。
上述VEPIPY免疫活性肽的添加量为0.50～0.60mg/100g。
优选VEPIPY免疫活性肽的添加量为0.55mg/100g。
上述YPSFQ阿片肽的添加量为0.50～0.60mg/100g。
优选YPSFQ阿片肽的添加量为0.55mg/100g。
本发明的配方为：亚油酸1855mg/100g、α亚麻酸301mg/100g、二十二碳六烯酸6877ug/100g、花生四烯酸14.0mg/100g、碳水化合物53.1g/100g、膳食纤维201mg/100g、维生素A471ug/100g、维生素D7.2ug/100g、维生素E4.81mg/100g、维生素K126.3ug/100g、维生素B1351ug/100g、维生素B2385ug/100g、维生素B6≥241ug/100g、维生素B12≥1.2ug/100g、维生素C46.1mg/100g、烟酸2807ug/100g、叶酸30ug/100g、泛酸2045ug/100g、生物素14.0ug/100g、胆碱43.1mg/100g、钠≤381mg/100g、锌3.41mg/100g、硒12.0ug/100g、碘44ug/100g、铜251ug/100g、锰40～441ug/100g、磷451mg/100g、钾461mg/100g、镁40.1mg/100g、钙561mg/100g、铁7.42mg/100g、低聚糖421mg/100g、卵磷脂192mg/100g、核苷酸16mg/100g、牛磺酸28mg/100g、肌醇40mg/100g、左旋肉碱8.6mg/100g、氯≤902mg/100g，又添加了0.50～0.60mg/100g的VEPIPY免疫活性肽和0.50～0.60mg/100g的YPSFQ阿片肽，其余为蛋白质和脂肪。
有益效果：本发明是先在体外条件下模拟婴儿肠道对β-酪蛋白进行酶解，测定所得肽段的序列，发现婴儿并不能将β-酪蛋白水解为VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽，因此向婴幼儿配方奶粉中添加这两种活性肽，在人体内起到免疫调节的同时刺激抗体的分泌。
附图说明
图1体外模拟婴儿胃消化酶解结束样本质谱检测图谱。
图2体外模拟婴儿肠消化酶解结束样本质谱检测图谱。
图3体外模拟婴儿肠消化酶解结束后煮沸与未煮沸灭酶样品质谱检测对比图谱。
具体实施方式
材料与试剂
人乳，采自黑龙江省汉族人乳；尿素，Solarbio公司；胃蛋白酶，Sigma公司；胰蛋白酶，Sigma公司；氯化钠，天津市科密欧化学试剂开发中心；盐酸，天津市科密欧化学试剂开发中心；95%乙醇(v/v)，美莱生物技术有限公司；过硫酸铵(AP)，天津市科密欧化学试剂开发中心。
仪器与设备
分析天平，离心机，上蛋白纯化仪，漩涡振荡器，水浴锅，Delta320型pH计，ziptip C18层析柱，蛋白质纯化仪AKTA purifer100，真空冷冻干燥机，AB4700MALDI TOF/TOF串联质谱仪。
实施例1：体外模拟胃消化及序列的测定
1)体外模拟婴儿胃消化
取5mg人乳β-酪蛋白溶于2mL PBS溶液中配制成β-酪蛋白溶液，用1M HCl将溶液pH调至3.0，向β-酪蛋白溶液中按照每毫克蛋白对应2400U胃蛋白酶酶活的比例向溶液中加入胃蛋白酶，立即将溶液放入37℃培养箱中反应2h，反应结束后将溶液放在沸水中煮5min灭掉酶活后取出。
2)酶解后用MALDI-TOF体外模拟胃消化的肽段
用MALDI-TOF在离子源加速电压为20kV，激光波长337nm，激光频率200Hz，离子延迟提取时间（Pulse ion extraction，PIE）330ns，质谱信号单次扫描累加2000次的条件下，扫描质量范围m/z400～m/z5000的体外模拟胃消化的肽段。
（3）体外模拟婴儿胃消化的结果
由图1可知，在加入胃蛋白酶后，在pH为3.0的条件下，人乳β-酪蛋白被消化成了分子量大小不等的肽段，根据分子量不同参照已有的氨基酸序列，使用STryspin检索，可得到与已知序列匹配的序列，序列结果如表1所示。
表1体外模拟婴儿胃消化所得肽段序列
Figure BDA0000372113400000031
（4）用DNASTAR软件进行模拟成人胃消化
根据NCBI上已有的人乳β-酪蛋白的一级序列在DNASTAR中建立人乳β-酪蛋白的相关数据，然后模拟胃蛋白酶的酶切位点对人乳β-酪蛋白进行酶切。根据模拟结果，得到软件模拟成人胃消化的肽段序列如表2所示。
表2软件模拟成人胃消化所得肽段序列
Figure BDA0000372113400000032
Figure BDA0000372113400000041
由上述结果可知，体外模拟婴儿胃消化所得肽段序列为ykqkvekvkhedqqqge，而软件模拟成人胃消化得到的肽段包括vepipy免疫活性肽，由此看出在婴儿体外模拟胃消化不能获得与已知功能相匹配的肽段，而软件模拟成年人的胃消化系统能够得到与已知功能肽段相匹配的活性肽，这是由于婴儿的消化系统没有发育健全，其分泌的消化酶活性远远低于成年人的缘故。
实施例2：体外模拟肠消化及序列的测定
（1）体外模拟婴儿肠消化
取5mg人乳β-酪蛋白溶于2mL PBS溶液中配制成β-酪蛋白溶液，用1M HCl将溶液pH调至7.0，,向β-酪蛋白溶液中按照每毫克蛋白对应120U胰蛋白酶酶活的比例向溶液中加入胰蛋白酶，立即将溶液放入37℃培养箱中反应1.5h，反应结束后将溶液放在沸水中煮5min灭掉酶活后取出。
（2）酶解后用MALDI-TOF体外模拟肠消化的肽段
用MALDI-TOF在离子源加速电压为20kV，激光波长337nm，激光频率200Hz，离子延迟提取时间（Pulse ion extraction，PIE）330ns，质谱信号单次扫描累加2000次的条件下，扫描质量范围m/z400～m/z6000的体外模拟肠消化的肽段。
（3）体外模拟婴儿肠消化的结果
由图2可知，在加入胰蛋白酶后，在pH为7.0的条件下，人乳β-酪蛋白被消化成了分子量大小不等的肽段，根据分子量不同参照已有的氨基酸序列，使用STryspin检索，可得到与已知序列匹配的序列，序列结果如表3所示。
表3体外模拟婴儿肠消化所得肽段序列
（4）用DNASTAR软件进行模拟成人肠消化
根据NCBI上已有的人乳β-酪蛋白的一级序列在DNASTAR中建立人乳β-酪蛋白的相关数据，然后模拟胰蛋白酶的酶切位点对人乳β-酪蛋白进行酶切。
根据模拟结果，得到软件模拟成人肠消化的肽段序列如表4所示。
表4软件模拟成人肠消化所得肽段序列
Figure BDA0000372113400000051
由上述结果可知，体外模拟婴儿肠消化所得肽段序列为qkvekvk、fdpqipk、dtvytkgrvmpvlksptipf，而软件模拟成人肠消化得到的肽段包括ypsfq阿片肽，由此看出在婴儿体外模拟肠消化不能获得与已知功能相匹配的肽段，而软件模拟成年人的肠消化系统能够得到与已知功能肽段相匹配的活性肽，这是由于婴儿的消化系统没有发育健全，其分泌的消化酶活性远远低于成年人的缘故。
实施例3：体外模拟婴儿肠消化后煮沸与未煮沸灭酶样品对比的结果
由图3可知，样本煮沸和不煮沸之间存在部分差异，煮沸后在m/z1900～2500范围内（虚线范围）出现了一些明显的肽段峰，说明煮沸过程中有新的肽段产生。
实施例4:一种体外模拟婴幼儿消化系统获得人乳β-酪蛋白功能肽段的方法
具体步骤如下：
(1)体外模拟婴儿胃部消化：取1g人乳β-酪蛋白溶于1mL超纯水中，在37℃下加入酶活2400U的胃蛋白酶，将反应液放在摇床上，置于培养箱中反应2小时后，沸水煮5min灭酶活，用质谱法测定并还原所得肽段的序列。
(2)体外模拟婴儿小肠消化：取1g人乳β-酪蛋白溶于1mL超纯水中，在37℃下加入酶活120U的胰蛋白酶，将反应液放在摇床上，置于培养箱中反应1.5h后，沸水煮5min灭酶活，用质谱法测定并还原所得肽段的序列。
根据序列分析结果，本发明未发现与已知功能肽段相匹配的活性肽，而软件模拟成年人的消化系统能够得到与已知功能肽段相匹配的活性肽，这是由于婴儿的消化系统没有发育健全，其分泌的消化酶活性远远低于成年人的缘故。
VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽，在调节免疫系统的生长的同时刺激抗体的分泌，在人体内起到免疫调节的作用。因为成人的消化系统比较完善，所以足以将β-酪蛋白消化为VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽的片段。
根据研究结果可知，未发现VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽，而且并未发现与其他已知功能肽段相匹配的活性肽，所以即使婴儿食用母乳并在体内消化后也无法获得已知功能的活性肽，所以我们建议在婴幼儿配方食品中加入VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽，以达到在婴儿体内发挥调节免疫系统的生长和刺激抗体分泌功能的目的。
实施例5
一种婴幼儿配方奶粉，在原有婴幼儿配方的基础上添加了VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽。
一种婴幼儿配方奶粉的配方为：能量2006kJ/100g、亚油酸1855mg/100g、α亚麻酸301mg/100g、二十二碳六烯酸6877ug/100g、花生四烯酸14.0mg/100g、碳水化合物53.1g/100g、膳食纤维201mg/100g、维生素A471ug/100g、维生素D7.2ug/100g、维生素E4.81mg/100g、维生素K126.3ug/100g、维生素B1351ug/100g、维生素B2385ug/100g、维生素B6≥241ug/100g、维生素B12≥1.2ug/100g、维生素C46.1mg/100g、烟酸2807ug/100g、叶酸30ug/100g、泛酸2045ug/100g、生物素14.0ug/100g、胆碱43.1mg/100g、钠≤381mg/100g、锌3.41mg/100g、硒12.0ug/100g、碘44ug/100g、铜251ug/100g、锰40～441ug/100g、磷451mg/100g、钾461mg/100g、镁40.1mg/100g、钙561mg/100g、铁7.42mg/100g、低聚糖421mg/100g、卵磷脂192mg/100g、核苷酸16mg/100g、牛磺酸28mg/100g、肌醇40mg/100g、左旋肉碱8.6mg/100g、氯≤902mg/100g，又添加了0.50mg/100g的VEPIPY免疫活性肽和0.50mg/100g的YPSFQ阿片肽，其余为蛋白质和脂肪。
实施例6
一种婴幼儿配方奶粉，其配方为：能量2006kJ/100g、亚油酸1855mg/100g、α亚麻酸301mg/100g、二十二碳六烯酸6877ug/100g、花生四烯酸14.0mg/100g、碳水化合物53.1g/100g、膳食纤维201mg/100g、维生素A471ug/100g、维生素D7.2ug/100g、维生素E4.81mg/100g、维生素K126.3ug/100g、维生素B1351ug/100g、维生素B2385ug/100g、维生素B6≥241ug/100g、维生素B12≥1.2ug/100g、维生素C46.1mg/100g、烟酸2807ug/100g、叶酸30ug/100g、泛酸2045ug/100g、生物素14.0ug/100g、胆碱43.1mg/100g、钠≤381mg/100g、锌3.41mg/100g、硒12.0ug/100g、碘44ug/100g、铜251ug/100g、锰40～441ug/100g、磷451mg/100g、钾461mg/100g、镁40.1mg/100g、钙561mg/100g、铁7.42mg/100g、低聚糖421mg/100g、卵磷脂192mg/100g、核苷酸16mg/100g、牛磺酸28mg/100g、肌醇40mg/100g、左旋肉碱8.6mg/100g、氯≤902mg/100g，又添加了0.55mg/100g的VEPIPY免疫活性肽和0.55mg/100g的YPSFQ阿片肽，其余为蛋白质和脂肪。
实施例7
一种婴幼儿配方奶粉，其配方为：能量2006kJ/100g、亚油酸1855mg/100g、α亚麻酸301mg/100g、二十二碳六烯酸6877ug/100g、花生四烯酸14.0mg/100g、碳水化合物53.1g/100g、膳食纤维201mg/100g、维生素A471ug/100g、维生素D7.2ug/100g、维生素E4.81mg/100g、维生素K126.3ug/100g、维生素B1351ug/100g、维生素B2385ug/100g、维生素B6≥241ug/100g、维生素B12≥1.2ug/100g、维生素C46.1mg/100g、烟酸2807ug/100g、叶酸30ug/100g、泛酸2045ug/100g、生物素14.0ug/100g、胆碱43.1mg/100g、钠≤381mg/100g、锌3.41mg/100g、硒12.0ug/100g、碘44ug/100g、铜251ug/100g、锰40～441ug/100g、磷451mg/100g、钾461mg/100g、镁40.1mg/100g、钙561mg/100g、铁7.42mg/100g、低聚糖421mg/100g、卵磷脂192mg/100g、核苷酸16mg/100g、牛磺酸28mg/100g、肌醇40mg/100g、左旋肉碱8.6mg/100g、氯≤902mg/100g，又添加了0.60mg/100g的VEPIPY免疫活性肽和0.60mg/100g的YPSFQ阿片肽，其余为蛋白质和脂肪。

Claims (8)

1.一种婴幼儿配方奶粉，其特征在于，在原有婴幼儿配方的基础上添加了VEPIPY免疫活性肽和YPSFQ阿片肽。
2.根据权利要求1所述婴幼儿配方奶粉，其特征在于，所述VEPIPY免疫活性肽的添加量为0.50～0.60mg/100g。
3.根据权利要求2所述婴幼儿配方奶粉，其特征在于，所述VEPIPY免疫活性肽的添加量为0.55mg/100g。
4.根据权利要求1所述婴幼儿配方奶粉，其特征在于，所述YPSFQ阿片肽的添加量为0.50～0.60mg/100g。
5.根据权利要求4所述婴幼儿配方奶粉，其特征在于，所述YPSFQ阿片肽的添加量为0.55mg/100g。
6.根据权利要求1所述婴幼儿配方奶粉，其特征在于，所述VEPIPY免疫活性肽的添加量为0.50～0.60mg/100g，YPSFQ阿片肽的添加量为0.50～0.60mg/100g。
7.根据权利要求6所述婴幼儿配方奶粉，其特征在于，所述VEPIPY免疫活性肽的添加量为0.55mg/100g，YPSFQ阿片肽的添加量为0.55mg/100g。
8.根据权利要求1所述婴幼儿配方奶粉，其特征在于，具体组成如下：亚油酸1855mg/100g、α亚麻酸301mg/100g、二十二碳六烯酸6877ug/100g、花生四烯酸14.0mg/100g、碳水化合物53.1g/100g、膳食纤维201mg/100g、维生素A471ug/100g、维生素D7.2ug/100g、维生素E4.81mg/100g、维生素K126.3ug/100g、维生素B1351ug/100g、维生素B2385ug/100g、维生素B6≥241ug/100g、维生素B12≥1.2ug/100g、维生素C46.1mg/100g、烟酸2807ug/100g、叶酸30ug/100g、泛酸2045ug/100g、生物素14.0ug/100g、胆碱43.1mg/100g、钠≤381mg/100g、锌3.41mg/100g、硒12.0ug/100g、碘44ug/100g、铜251ug/100g、锰40～441ug/100g、磷451mg/100g、钾461mg/100g、镁40.1mg/100g、钙561mg/100g、铁7.42mg/100g、低聚糖421mg/100g、卵磷脂192mg/100g、核苷酸16mg/100g、牛磺酸28mg/100g、肌醇40mg/100g、左旋肉碱8.6mg/100g、氯≤902mg/100g、VEPIPY免疫活性肽0.50～0.60mg/100g、YPSFQ阿片肽0.50～0.60mg/100g，其余为蛋白质和脂肪。
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