CN103476760A

CN103476760A - 作为bace1和/或bace2抑制剂的1,4-氧氮杂*

Info

Publication number: CN103476760A
Application number: CN2012800091194A
Authority: CN
Inventors: 汉斯·希尔珀特; 罗伯特·纳尔基齐昂
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG; Siena Biotech SpA
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG; Siena Biotech SpA
Priority date: 2011-02-18
Filing date: 2012-02-13
Publication date: 2013-12-25
Anticipated expiration: 2032-02-13
Also published as: US20130040936A1; US8815841B2; JP2014508751A; WO2012110459A1; CA2822534A1; RU2013139998A; EP2675796A1; BR112013020536A2; CN103476760B; KR20140019353A; US20140323469A1; MX2013008056A

Abstract

本发明涉及下式的化合物或其药用盐，其中R¹至R³如本文所述。这些化合物是BACE1和/或BACE2抑制剂，并且可以用作药物，用于治疗性和/或预防性治疗疾病，例如阿尔茨海默病、糖尿病、尤其是II型糖尿病，以及其他代谢性疾病。

Description

作为BACE1和/或BACE2抑制剂的1,4-氧氮杂*

发明背景

阿尔茨海默病(AD)是中枢神经系统的神经变性疾病并且导致中年以上人口中的进行性痴呆的产生。其临床症状是记忆、认知、暂时和局部定向、判断和推理的损害，以及严重的情绪紊乱。目前还没有可以预防该疾病或其进展或稳定地逆转其临床症状的有效治疗。在所有具有高预期寿命的社会中AD成为主要的健康问题，并且也成为这些社会健康体系的显著经济负担。

AD的特征在于中枢神经系统(CNS)中的2个主要病理学特征：淀粉样蛋白斑块的出现和神经元纤维缠结(Hardy等，The amyloid hypothesisof Alzheimer′s disease：progress and problems on the road to therapeutics(阿尔兹海默病的淀粉样蛋白假说：通向治疗之路的进展和问题)，Science.2002Jul19；297(5580)：353-6，Selkoe，Cell biology of the amyloid β-proteinprecursor and the mechanism of Alzheimer′s disease(淀粉样蛋白β-蛋白前体的细胞生物学和阿尔茨海默病的机制)，Annu Rev Cell Biol.1994；10：373-403)。在唐氏综合征(三体性21)患者中通常也发现有这两个病理学特征，其在早期也显示出类似AD的症状。神经元纤维缠结是微管结合蛋白τ(MAPT)的细胞内聚集体。淀粉样蛋白斑块出现在细胞外空间；它们的主要组分为Aβ-肽。后者是源于β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)经由一系列蛋白裂解步骤的一组蛋白水解片段。已经识别出数种形式的APP，其中最大量的是695、751和770个氨基酸长度的蛋白质。它们都经由不同的剪接产生于一个基因。Aβ-肽源自与APP相同的结构域但是在它们的N-和C-端不同，主要物种为40和42个氨基酸长度。存在强烈暗示聚集的Aβ-肽是AD的发病机理中的必需分子的数个证据链：1)由Aβ-肽形成的淀粉样蛋白斑块是AD病理学的不变部分；2)Aβ-肽对于神经元是有毒的；3)在家族性阿尔茨海默病(FAD)中，在致病基因APP、PSN1、PSN2上的突变导致增加水平的Aβ-肽和早期大脑淀粉样变性；4)表达了这种FAD基因的转基因小鼠展现出带有与人类疾病的很多类似处的病理学。Aβ-肽由APP通过名为β-和γ-分泌酶的2个蛋白水解酶的连续作用产生。β-分泌酶首先将在跨膜结构域(TM)外侧大约28个氨基酸的APP细胞外结构域断开以产生含有TM-和细胞质结构域(CTFβ)的APP的C端片段。CTFβ是γ-分泌酶的底物，其在TM内的数个相邻位置裂解以产生Aβ肽和细胞质片段。γ-分泌酶是至少4个不同蛋白质的复合物，其催化亚基非常类似早老素蛋白(PSEN1、PSEN2)。β-分泌酶(BACE1，Asp2；BACE表示β位APP裂解酶)是通过跨膜结构域锚定至膜中的天冬氨酰蛋白酶(Vassar等，Beta-secretase cleavage of Alzheimer′s amyloid precursor proteinby the transmembrane aspartic protease BACE(跨膜天冬氨酸蛋白酶BACE对阿尔茨海默淀粉样蛋白前体蛋白的β-分泌酶裂解)，Science.1999Oct22；286(5440)：735)。它在人类机体的很多组织中被表达，但是其水平在CNS中尤其高。BACE1基因在小鼠中的基因消除清楚地显示其活性对于导致Aβ-肽的产生的APP加工是重要的，在没有BACE1的情况下不产生Aβ-肽(Luo等，Mice deficient in BACE1，the Alzheimer′s beta-secretase，havenormal phenotype and abolished beta-amyloid generation(阿尔茨海默β-分泌酶，BACE1缺陷小鼠具有正常的表型，并且消除了β-淀粉样蛋白的产生)，Nat Neurosci.2001Mar；4(3)：231-2，Roberds等，BACE knockout mice arehealthy despite lacking the primary beta-secretase activity in brain：implications for Alzheimer′s disease therapeutics(BACE基因敲除小鼠是健康的，尽管大脑中缺少基本的β-分泌酶活性：提示阿尔茨海默病的治疗方法)，Hum Mol Genet.2001Jun1；10(12)：1317-24)。通过基因工程表达人类APP基因并在衰老过程中形成广泛淀粉样蛋白斑块和阿尔茨海默病样病理学的小鼠，当通过将BACE1等位基因之一基因消除降低β-分泌酶活性时不再表现为这样(McConlogue等，Partial reduction of BACE1hasdramatic effects on Alzheimer plaque and synaptic pathology in APPTransgenic Mice(BACE1的部分减少对APP转基因小鼠中的阿尔茨海默斑块和突触病理学具有极大的影响).J Biol Chem.2007Sep7；282(36)：26326)。因此推测BACE1活性的抑制剂可以是可用于AD治疗干预的药剂。

本发明的目标因此是提供与本领域已知的化合物相比具有增强的治疗和药理学性质的选择性BACE1抑制剂。这种化合物可用作治疗活性物质，尤其是在阿尔茨海默病的控制或预防中。此外，β-淀粉样蛋白斑块在神经组织(例如，大脑)中、上或周围的形成，或形成和沉积通过阻断Aβ由APP或APP片段产生而被这种化合物抑制。

II型糖尿病(T2D)是由胰岛素抗性以及胰腺β-细胞分泌胰岛素不足导致血糖控制不良及高血糖而引起的(M Prentki和CJ Nolan，“Islet beta-cellfailure in type2diabetes(II型糖尿病中的胰岛β-细胞衰竭).”J.Clin.Investig.2006，116(7)，1802-1812)。T2D患者罹患微血管及大血管疾病以及多种相关并发症(包括糖尿病性肾病变，视网膜病变及心血管疾病)的风险增加。2000年，估计有一亿七千一百万人患有该病，且预计到2030年，该数字将加倍(S Wild，G Roglic，A Green，R.Sicree和H King，“Globalprevalence of diabetes(糖尿病的全球患病率)”，Diabetes Care2004，27(5)，1047-1053)，从而使该疾病成为一大健康问题。T2D发病率的上升与全世界人口日益增加的久坐生活习惯及高能量食物摄取相关(P Zimmet，KGMM Alberti和J Shaw，“Global and societal implications of the diabetesepidemic(糖尿病流行的全球和社会因素)”Nature2001，414，782-787)。

β细胞衰竭以及由此引起的胰岛素分泌明显降低及高血糖，标志着T2D的发作。当前的大部分治疗都不防止作为显性T2D特征的β细胞量丧失。然而，近期利用GLP-1类似物胃泌素及其他药物进行的研究显示，有可能实现β细胞的保存和增殖，引起葡萄糖耐量的改善并减缓进展至显性T2D(LL Baggio和DJ Drucker，“Therapeutic approaches to preserveislet mass in type2diabetes(用于保留II型糖尿病中胰岛质量的治疗措施)”，Annu.Rev.Med.2006，57，265-281)。

Tmem27已被确定为促进β细胞增殖(P Akpinar，S Kuwajima，JKrützfeldt，M Stoffel，“Tmem27：A cleaved and shed plasma membraneprotein that stimulates pancreaticβcell proliferation(Tmem27：刺激胰岛β-细胞增殖的裂解和脱落的质膜蛋白)”，Cell Metab.2005，2，385-397)及胰岛素分泌(K Fukui，Q Yang，Y Cao，N Takahashi等，“The HNF-1targetCollectrin controls insulin exocytosis by SNARE complex formation(HNF-1靶标Collectrin通过形成SNARE复合体控制胰岛素的胞吐作用)”，CellMetab.2005，2，373-384)的蛋白质。Tmem27是一种从β细胞表面组成性脱落的42kDa的膜糖蛋白，由全长细胞Tmem27降解而来。在糖尿病的饮食诱发肥胖DIO模型中，转基因小鼠中Tmem27的过度表达增加了β-细胞量并改善葡萄糖耐量。此外，在啮齿动物β细胞增殖试验(例如使用INS1e细胞)中敲除Tmem27的siRNA降低了增殖速率，表明Tmem27在控制β-细胞量方面的作用。

在相同的增殖试验中，BACE2抑制剂也增加增殖。然而，BACE2抑制与Tmem27siRNA敲除结合产生较低的增殖速率。因此，推断BACE2是与Tmem27的降解相关的蛋白酶。此外，在体外，BACE2裂解基于Tmem27序列的肽。密切相关的蛋白酶BACE1不会裂解此肽，且仅选择性抑制BACE1不会增强β细胞的增殖。

接近的同源物BACE2为一种膜结合的天冬氨酰蛋白酶且与Tmem27共同位于人类胰腺的β细胞中(G Finzi，F Franzi，C Placidi，F Acquati等，“BACE2is stored in secretory granules of mouse and rat pancreatic betacells(BACE2储存在小鼠和大鼠胰腺β细胞的分泌性颗粒中)”，UltrastructPathol.2008，32(6)，246-251)。还知道其能够降解APP(I Hussain，D Powell，D Howlett，G Chapman等，“ASP1(BACE2)cleaves the amyloid precursorprotein at theβ-secretase site(ASP1(BACE2)裂解β-分泌酶部位处的淀粉样蛋白前体蛋白)”Mol Cell Neurosci.2000，16，609-619)，IL-1R2(P Kuhn，EMarjaux，A Imhof，B De Strooper等，“Regulated intramembrane proteolysisof the interleukin-1receptor II by alpha-，beta-，and gamma-secretase(通过α-、β-和γ-分泌酶调节白介素-1受体II的膜内蛋白水解)”J.Biol.Chem.2007，282(16)，11982-11995)以及ACE2。能够降解ACE2的能力表明了BACE2在高血压控制中可能的作用。

因此，有人提出抑制BACE2，利用在糖尿病前期及糖尿病患者中保存及恢复β-细胞量并刺激胰岛素分泌的潜能，来作为对T2D的治疗。由此，本发明的目的在于提供具有与本领域已知的化合物相比具有增强的治疗和药理学特性的选择性BACE2抑制剂。此类化合物可用作治疗活性物质，尤其用于治疗和/或预防与抑制BACE2有关的疾病，如II型糖尿病。

此外，β-淀粉样肽在神经组织(例如，大脑)之中，之上或周围的形成或者形成和沉积被本发明的化合物抑制，即抑制由APP或APP片段产生Aβ。

此外BACE1和/或BACE2抑制剂可以用于治疗下列疾病：IBM(包涵体肌炎)(Vattemi G.等，Lancet.2001Dec8；358(9297)：1962-4)、唐氏综合征(Barbiero L.等，Exp Neurol.2003Aug；182(2)：335-45)、威尔逊病(Sugimoto I.等，J Biol Chem.2007Nov30；282(48)：34896-903)、惠普尔病(Desnues B.等，Clin Vaccine Immunol.2006Feb；13(2)：170-8)、脊髓小脑性共济失调1型和脊髓小脑性共济失调7型(Gatchel J.R.等，Proc Natl Acad Sci USA2008Jan29；105(4)：1291-6)、皮肌炎(Greenberg S.A.等，Ann Neurol.2005Can；57(5)：664-78以及Greenberg S.A.等，Neurol2005Can；57(5)：664-78)、卡波西肉瘤(Lagos D.等，Blood，2007Feb15；109(4)：1550-8)、多形性胶质母细胞瘤(E-MEXP-2576，http://www.ebi.ac.uk/microarray-as/aer/result？queryFor＝ PhysicalArrayDesign&aAccession＝A-MEXP-258)、类风湿性关节炎(Ungethuem U.等，GSE2053)、肌萎缩侧索硬化(Koistinen H.等，MuscleNerve.2006Oct；34(4)：444-50和Li Q.X.等，Aging Cell.2006Apr；5(2)：153-65)、亨廷顿病(Kim Y.J.等，Neurobiol Dis.2006Can；22(2)：346-56。Epub2006Jan19以及Hodges A.等，Hum Mol Genet.2006Mar15；15(6)：965-77。Epub2006Feb8)、多发性骨髓瘤(Multiple Mieloma)(KiharaY.等，Proc Natl Acad Sci U S A.2009Dec22；106(51)：21807-12)、恶性黑色素瘤(Talantov D.等，Clin Cancer Res.2005Oct15；11(20)：7234-42)、舍格伦综合征(Basset C.等，Scand J Immunol.2000Mar；51(3)：307-11)、红斑狼疮(Grewal P.K.等，Mol Cell Biol.2006，Jul；26(13)：4970-81)、巨噬细胞肌筋膜炎(Macrophagic myofasciitis)、幼年特发性关节炎、肉芽肿关节炎、乳腺癌(Hedlund M.等，Cancer Res.2008Jan15；68(2)：388-94以及Kondoh K.等，Breast Cancer Res Treat.2003Mar；78(1)：37-44)、胃肠疾病(Hoffmeister A.等，JOP.2009Sep4；10(5)：501-6)、自身免疫性/炎性疾病(Woodard-Grice A.V.等，J Biol Chem.2008Sep26；283(39)：26364-73.Epub2008Jul23)、类风湿性关节炎(Toegel S.等，Osteoarthritis Cartilage.2010Feb；18(2)：240-8.Epub2009Sep22)、炎症反应(Lichtenthaler S.F.等，J Biol Chem.2003Dec5；278(49)：48713-9.Epub2003Sep24)、动脉血栓形成(Merten M.等，Z Kardiol.2004Nov；93(11)：855-63)、心血管疾病如心肌梗塞和卒中(Maugeri N.等，Srp Arh Celok Lek.2010Jan；138Suppl1：50-2)以及格雷夫斯病(

J.等，Thyroid.2005Jul；15(7)：645-52)。

发明领域

本发明涉及具有BACE1和/或BACE2抑制性质的2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，它们的制备，含有它们的药物组合物和它们作为治疗活性物质的用途。

尤其是，本发明涉及式I的化合物，或者它们的药用盐

其中R¹至R³如下所述。

本发明的化合物具有Asp2(β-分泌酶，BACE1或膜天冬氨酸蛋白酶-2(Memapsin-2))抑制活性并且因此可以在特征在于升高的β-淀粉样蛋白水平和/或β-淀粉样蛋白低聚物和/或β-淀粉样蛋白斑块以及进一步的沉积物的疾病和病症，尤其是阿尔茨海默病的治疗性和/或预防性治疗中使用。此外，式I的化合物具有BACE2抑制活性并且因此可以在疾病和病症如2型糖尿病和其他代谢性疾病的治疗性和/或预防性治疗中使用。

发明详述

本发明的目标因此是具有BACE1和/或BACE2抑制性质的新的式I的化合物，它们的制备，包含本发明的化合物的药物，这种药物的生产以及，式I的化合物在疾病如阿尔茨海默病和2型糖尿病的治疗或预防中的用途。

除非另有说明，否则使用以下定义来说明及限定用于描述本发明的各种术语的含义及范围。

术语“卤素”，单独或与其他基团组合，是指氟、氯、溴和碘，特别是氟(F)。

术语“酰胺基(amidyl)”，单独或与其他基团组合，是指-C(＝O)-NH₂。

术语“C_1-7烷基”，单独或与其他基团组合，表示具有1至7个碳原子的直链或支链烷基，尤其是具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，更特别地具有1至4个碳原子的直链或支链烷基。直链及支链C_1-7烷基的实例为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、异构戊基、异构己基和异构庚基，尤其是甲基(Me)和乙基(Et)。更特别是甲基。

术语“C_1-7-烷氧基”，单独或与其他基团组合，是指基团R’-O-，其中R’为如前文所定义的C_1-7-烷基。C_1-7-烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基及叔丁氧基，优选为甲氧基(MeO)。

术语“C_3-7-环烷基”，单独或与其他基团组合，是指3至7个环碳原子的一价饱和单环或双环烃基，尤其是3至5个环碳原子的一价饱和单环烃基。双环意指由具有两个共同碳原子的两个饱和碳环构成，即分隔两个环的桥是单键或者一个或两个碳原子的链。特别的C_3-7-环烷基是单环的。实例是环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。双环环烷基的实例是双环[2.2.1]庚基，双环[2.2.2]辛基或金刚烷基。特别的“C_3-7-环烷基”是环丙基。

术语“杂芳基”，单独或与其他基团组合，是指具有单个的4至8元环或包含6至14，特别是6至10个环原子的多个稠合环并且含有1、2或3个各自选自N、O和S，尤其是N和O的杂原子的芳族碳环基，在该基团中至少一个杂环环是芳香性的。“杂芳基”的实例包括苯并呋喃基、苯并咪唑基、1H-苯并咪唑基、苯并嗪基、苯并唑基、苯并噻嗪基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、呋喃基、咪唑基、吲唑基、1H-吲唑基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异唑基、唑基、吡嗪基、吡唑基(pyrazolyl，pyrazyl)、1H-吡唑基、吡唑并[1，5-a]吡啶基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、四唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、6，7-二氢-5H-[1]氮茚基等。特别的“杂芳基”是吡啶基、唑基、吡嗪基和噻唑基。特别是吡啶-2-基、唑-4-基、吡嗪-2-基和噻唑-2-基。

术语“C_2-7-炔基”，单独或与其他基团组合，是指2至7个碳原子的，尤其是2至4个碳原子的一价直链或支链饱和烃基，并且包含一个、两个或三个三键。C_2-7-炔基的实例包括乙炔基、丙炔基、丙-2-炔基、异丙炔基和正丁炔基。特别是乙炔基和丙炔基。

术语“C_1-7-烷氧基-C_2-7-炔基”，单独或与其他基团组合，是指经由如本文定义的“C_2-7-炔基”连接的如本文定义的“C_1-7-烷氧基”。特别是3-甲氧基-丙-1-炔基。

术语“C_3-7-环烷基-C_2-7-炔基”，单独或与其他基团组合，是指经由如本文定义的“C_2-7-炔基”连接的如本文定义的“C_3-7-环烷基”。特别是环丙基乙炔基。

术语“C_3-7-环烷基-C_1-7-烷氧基”，单独或与其他基团组合，是指经由如本文定义的“C_1-7-烷氧基”连接的如本文定义的“C_3-7-环烷基”。特别是环丙基甲氧基。

术语“C_3-7-环烷基-C_1-7-烷基”，单独或与其他基团组合，是指经由如本文定义的“C_1-7-烷基”连接的如本文定义的“C_3-7-环烷基”。特别是环丙基甲基。

术语“C_1-7-烷基-S-”，单独或与其他基团组合，是指经由-S-连接的如本文定义的C_1-7-烷基。

术语“偶联剂”是指选自由以下各项组成的组的试剂：碳二亚胺或脲盐，例如N，N’-羰基二咪唑(CDI)、N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺-盐酸盐(EDCI)、四氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲(TBTU)和六氟磷酸1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3-氧化物(HATU)。

术语“在碱性条件下”，是指在碱，尤其是烷基胺如二异丙基乙胺(DIEA)或三乙胺(TEA)，或叔胺如N-甲基吗啉或4-(二甲基氨基)-吡啶的存在下。

术语“三嗪衍生物”例如是指氯化4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2基)-4-甲基-吗啉。

术语“质子溶剂”是指具有如在羟基中与氧结合的氢，或如在胺基中与氮结合的氢的溶剂，该氢是可离解的。实例是醇，尤其是乙醇或甲醇。

术语“极性溶剂”是指其电荷非均衡地分布在分子内的分子。实例包括水和醇，尤其是甲醇。

术语“温和氧化剂”是指例如叔丁基过氧化氢。

术语“氧盐”是指含有氧([H₃O⁺])作为阳离子的盐。

术语“铵盐”是指含有铵([NH₄ ⁺])作为阳离子的盐。

术语“药用盐”是指适合与人类和动物的组织接触使用的盐。与无机和有机酸的合适的盐的实例为，但是不限于：乙酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、盐酸、乳酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、硝酸、磷酸、对甲苯磺酸、琥珀酸、硫磺酸、硫酸、酒石酸、三氟乙酸等。术语“药用载体”和“药用辅助物质”是指与制剂的其他成分相容的载体和辅助物质如稀释剂或赋形剂。

术语“药物组合物”包括包含预定量或比例的特定成分的产品，以及通过组合特定量的特定成分直接地或间接地得到的任何产品。优选它包括包含一种或多种活性组分，和任选的包含惰性成分的载体的产品，以及由任何两种以上的成分的组合、复合或聚集，或者由一种或多种成分的分解，或由一种或多种成分的其他类型的反应或相互作用直接地或间接地得到的任何产物。

术语“抑制剂”表示与特定受体的特定配体竞争、减少或防止该特定受体与该特定配体的结合或者减少或防止特定蛋白的功能的抑制的化合物。

术语“半最大抑制浓度”(IC₅₀)是指在体外获得生物过程的50％抑制所需的特定化合物的浓度。可以将IC₅₀值对数地转换为pIC₅₀值(-log IC₅₀)，其中较大的值表示指数地增加的潜力。IC₅₀值不是绝对值而依赖于试验条件例如所采用的浓度。可以将IC₅₀值使用Cheng-Prusoff公式转换为绝对抑制常数(Ki)(Biochem.Pharmacol.(1973)22：3099)。术语“抑制常数”(Ki)是指特定抑制剂对受体的绝对结合亲和性。其使用竞争结合测定测量，并且等于如果不存在竞争配体(例如放射性配体)特定抑制剂将占据受体的50％的情况下的浓度。可以将Ki值对数地转换为pKi值(-logKi)，其中较大的值表示指数地增加的潜力。

“治疗有效量”意指当被给药于受试者用于治疗疾病状态时，足以实现对于疾病状态的这种治疗的化合物的量。“治疗有效量”将依赖于化合物、所治疗的疾病状态、所治疗的疾病的严重性、受试者的年龄和相对健康状况、给药的路线和形式、主治医师或兽医师的判断以及其他因素而变化。

术语“如本文所定义的”和“如本文所描述的”当涉及变量时通过引用结合变量的最宽泛定义以及如果有的话，优选的、更优选的和最优选的定义。

当涉及化学反应时术语“处理”、“接触”和“反应”意指在合适的条件下加入或混合两种以上的试剂以制备所示和/或所需的产物。应该明白产生所示和/或所需产物的反应可能不一定直接得自最初加入的两种试剂的组合，即，在混合物中可能产生最终导致所示和/或所需产物的形成的一种或多种中间体。术语“芳族的”是指如文献中所定义的芳香性的传统概念，尤其是在IUPAC-Compendium of Chemical Terminology，2nd，A.D.McNaught&A.Wilkinson(Eds).Blackwell Scientific Publications，Oxford(1997)中所定义。

术语“药用赋形剂”是指在配制药物产品中使用的不具有治疗活性并且无毒的任意成分，如崩解剂、粘合剂、填充剂、溶剂、缓冲剂、张度剂、稳定剂、抗氧化剂、表面活性剂或润滑剂。

式I化合物还可被溶剂化，例如被水合。溶剂化可在制备方法的过程中实现，或可例如因最初无水形式的式I化合物的吸湿性而产生(水合)。术语“药用盐”还包括生理学可接受的溶剂化物。

“异构体”为具有相同分子式但性质或其原子结合顺序或其原子空间排列不同的化合物。其原子空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。不互为镜像的立体异构体称为“非对映异构体”，为不可重叠镜像的立体异构体称为“对映异构体”，有时也称为光学异构体。连接四个不同取代基的碳原子称为“手性中心”。当在化学结构中存在手性碳时，意图是该结构包括与该手性碳相关的所有立体异构体。

所有单独的实施方案可以组合。

本发明涉及式I的化合物

其中

R¹是H或F；

R²是C_1-7-烷基；并且

R³是-(C＝O)-R⁴或R⁵，其中

R⁴是被选自由C_3-7-环烷基-C_1-7-烷氧基-、C_3-7-环烷基-C_2-7-炔基-、C_1-7-烷氧基-C_2-7-炔基-、未取代的杂芳基、未取代的C_3-7-环烷基和C_1-7-烷基-S-组成的组的一个取代基取代的杂芳基，或者

R⁴是被一个卤素和一个酰胺基取代的杂芳基；

R⁵是C_3-7-环烷基-C_1-7-烷基-；

或其药用盐。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中

R¹是F；

R²是Me；并且

R³是-(C＝O)-R⁴，其中

R⁴是被选自由C_3-7-环烷基-C_1-7-烷氧基-、C_3-7-环烷基-C_2-7-炔基-、C_1-7-烷氧基-C_2-7-炔基-组成的组的一个取代基取代的吡啶基，或者

R⁴是被一个F和一个酰胺基取代的吡啶基；

或其药用盐。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R¹是F，R²是Me，R³是-(C＝O)-R⁴并且R⁴是3-氟-5-酰胺-吡啶-2-基、6-(环丙基甲氧基)-吡啶-2-基、5-(环丙基乙炔基)-吡啶-2-基或5-(3-甲氧基丙-1-炔基)-吡啶-2-基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R¹是F。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R¹是H。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R²是Me。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R²是Et。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R³是C_3-7-环烷基-C_1-7-烷基-。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R³是环丙基-CH₂-。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，所述式I的化合物是(5R，6R)-5-[5-(环丙基甲基-氨基)-2-氟-苯基]-6-氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R³是-(C＝O)-R⁴。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被卤素和一个酰胺基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被一个F和一个酰胺基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，所述式I的化合物是(R)-N2-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂-5-基)-4-氟苯基)-3-氟吡啶-2，5-二甲酰胺甲酸盐。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被选自由C_3-7-环烷基-C_1-7-烷氧基-、C_3-7-环烷基-C_2-7-炔基-、C_1-7-烷氧基-C_2-7-炔基-、未取代的杂芳基和未取代的C_3-7-环烷基组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被选自由C_3-7-环烷基-C_1-7-烷氧基-组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被选自由C_3-7-环烷基-C_2-7-炔基-组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被选自由C_1-7-烷氧基-C_2-7-炔基-组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被选自由未取代的杂芳基组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被选自由未取代的噻唑-2-基组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被选自由未取代的C_3-7-环烷基组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被选自由未取代的环丙基组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，所述式I的化合物选自由以下各项组成的组：

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-6-(环丙基甲氧基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(噻唑-2-基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(环丙基乙炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂-5-基)-4-氟苯基)-5-环丙基吡啶甲酰胺甲酸盐，和

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂-5-基)-4-氟苯基)-5-(3-甲氧基丙-1-炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，所述式I的化合物是(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-6-(环丙基甲氧基)吡啶甲酰胺甲酸盐。

-5-基)-4-氟苯基)-5-(噻唑-2-基)吡啶甲酰胺甲酸盐。

-5-基)-4-氟苯基)-5-(环丙基乙炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐。

-5-基)-4-氟苯基)-5-环丙基吡啶甲酰胺甲酸盐。

-5-基)-4-氟苯基)-5-(3-甲氧基丙-1-炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被C_1-7-烷基-S-取代的吡嗪基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被甲基-S-取代的吡嗪基。

-5-基)-4-氟苯基)-5-(甲硫基)吡嗪-2-甲酰胺甲酸盐。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被C_3-7-环烷基取代的唑基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，其中R⁴是被环丙基取代的唑基。

一个特定的实施方案是如本文所述的式I的化合物，所述式I的化合物是(R)-N-(3-(3-氨基-5-乙基-6，6-二氟-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-环丙基唑-4-甲酰胺。

(R)-N2-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-3-氟吡啶-2，5-二甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-6-(环丙基甲氧基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(环丙基乙炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(3-甲氧基丙-1-炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐，和

(5R，6R)-5-[5-(环丙基甲基-氨基)-2-氟-苯基]-6-氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺。

(R)-N2-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-3-氟吡啶-2，5-二甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-6-(环丙基甲氧基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂-5-基)-4-氟苯基)-5-(环丙基乙炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐，和

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(3-甲氧基丙-1-炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐。

一个特定的实施方案是一种用于制备如本文定义的式I的化合物的方法，所述方法包括：

a)使式II的胺与式III的羧酸在偶联剂的存在下在碱性条件下或在三嗪衍生物的帮助下反应以获得式Ia的化合物

其中R¹、R²和R⁴如本文定义，或者备选地，

b)使式II的胺与式IV的化合物在乙酸和三乙酰氧基硼氢化钠的存在下反应以获得式Ib的化合物，

其中R是氢或C_1-7-烷基，并且其中R¹、R²、R³和R⁵与本文所定义的相同。

本发明还涉及可以根据如之前所述的方法获得的如本文所述的式I的化合物。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物和药用载体和/或赋形剂。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述式I的化合物用于作为药物使用。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述式I的化合物用于在阿尔茨海默病和/或II型糖尿病的治性疗和/或预防性治疗中使用。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述式I的化合物用于在阿尔茨海默病的治疗性和/或预防性治疗中使用。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述式I的化合物用于在2型糖尿病的治疗性和/或预防性治疗中使用。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述化合物用于作为治疗活性物质使用，所述治疗活性物质用于治疗性和/或预防性治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)、动脉血栓形成、自身免疫性/炎性疾病、癌症如乳腺癌、心血管疾病如心肌梗塞和卒中、皮肌炎、唐氏综合征、胃肠疾病、多形性胶质母细胞瘤、格雷夫斯病、亨廷顿病、包涵体肌炎(IBM)、炎症反应、卡波西肉瘤、科斯特曼病、红斑狼疮、巨噬细胞肌筋膜炎、幼年特发性关节炎、肉芽肿关节炎、恶性黑色素瘤、多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、舍格伦综合征、脊髓小脑性共济失调1型、脊髓小脑性共济失调7型、惠普尔病或威尔逊病。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述式I的化合物用于药物的制备，所述药物用于阿尔茨海默病和/或2型糖尿病的治疗性和/或预防性治疗。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述式I的化合物用于药物的制备，所述药物用于阿尔茨海默病的治疗性和/或预防性治疗。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述式I的化合物用于药物的制备，所述药物用于2型糖尿病的治疗和/或预防性治疗。

本发明的特定实施方案涉及一种用于治疗性和/或预防性治疗可以通过抑制BACE1和/或BACE2活性而改善的疾病，尤其是用于治疗阿尔茨海默病和2型糖尿病的方法，所述方法包括将治疗活性量的如本文所描述的式I的化合物给药至人类或动物。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述式I的化合物用于在药物的制备中使用，所述药物用于在阿尔茨海默病和/或2型糖尿病的治疗性和/或预防性治疗中使用。

本发明的特定实施方案涉及如本文所定义的式I的化合物，所述化合物用于作为治疗活性物质使用，所述治疗活性物质用于以下疾病的治疗性和/或预防性治疗：肌萎缩侧索硬化(ALS)、动脉血栓形成、自身免疫性/炎性疾病、癌症如乳腺癌、心血管疾病如心肌梗塞和卒中、皮肌炎、唐氏综合征、胃肠疾病、多形性胶质母细胞瘤、格雷夫斯病、亨廷顿病、包涵体肌炎(IBM)、炎症反应、卡波西肉瘤、科斯特曼病、红斑狼疮、巨噬细胞肌筋膜炎、幼年特发性关节炎、肉芽肿关节炎、恶性黑色素瘤、多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、舍格伦综合征、脊髓小脑性共济失调1型、脊髓小脑性共济失调7型、惠普尔病或威尔逊病。

本发明的特定实施方案涉及用于制备药物的如本文所定义的式I的化合物，所述药物用于阿尔茨海默病和/或2型糖尿病的治疗性和/或预防性治疗。

本发明的特定实施方案涉及一种用于治疗性和/或预防性治疗可以通过抑制BACE1和/或BACE2活性而改善的疾病，尤其是用于治疗阿尔茨海默病和2型糖尿病的方法，所述方法包括将治疗活性量的根据权利要求1至17中的任一项所述的式I的化合物给药至人类或动物。

本发明的特定实施方案涉及及一种用于治疗性和/或预防性治疗可以通过抑制BACE1和/或BACE2活性而改善的疾病，尤其是用于肌萎缩侧索硬化(ALS)、动脉血栓形成、自身免疫性/炎性疾病、癌症如乳腺癌、心血管疾病如心肌梗塞和卒中、皮肌炎、唐氏综合征、胃肠疾病、多形性胶质母细胞瘤、格雷夫斯病、亨廷顿病、包涵体肌炎(IBM)、炎症反应、卡波西肉瘤、科斯特曼病、红斑狼疮、巨噬细胞肌筋膜炎、幼年特发性关节炎、肉芽肿关节炎、恶性黑色素瘤、多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、舍格伦综合征、脊髓小脑性共济失调1型、脊髓小脑性共济失调7型、惠普尔病或威尔逊病的治疗的方法，所述方法包括将治疗活性量的根据权利要求1至17中的任一项所述的式I的化合物给药至人类或动物。

如上文所述，本发明的式I化合物可用于糖尿病患者中以及葡萄糖耐量降低或处于糖尿病前期状态的非糖尿病患者中，保存和恢复β-细胞功能以及刺激胰岛素分泌。它们可以用于治疗1型糖尿病或者延迟或阻止2型糖尿病患者对于胰岛素疗法的需求。式I化合物进一步可用于改善通常发生在糖尿病或糖尿病前期患者中的高胰岛素血症(hyperinsulinemia)，以及降低代谢综合征相关的风险，它们也可用于治疗血管疾病例如高血压。

因此，“可以通过抑制BACE2活性而改善的疾病”的表述是指诸如代谢疾病和心血管疾病的疾病，尤其是糖尿病、更尤其为2型糖尿病、妊娠性糖尿病、空腹葡萄糖受损、葡萄糖耐量降低、胰岛素抗性、糖尿病前期、代谢综合征、1型糖尿病、糖尿病并发症包括糖尿病性肾病变、糖尿病性视网膜病变和糖尿病性神经病变、慢性肾病、血脂异常、动脉粥样硬化、心肌梗塞、高血压，以及其它代谢病和心血管疾病。

尤其是，表述‘可以通过抑制BACE2活性而改善的疾病’涉及糖尿病，尤其是2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、糖尿病前期、代谢综合征和高血压。更具体地，表述‘与BACE2活性的抑制相关的疾病’是指糖尿病，尤其是2型糖尿病。

式I的化合物可以含有一个以上不对称中心，并且因此可以作为以下形式存在：外消旋化合物、外消旋混合物、单一对映体、非对映异构体混合物和单独的非对映异构体。取决于分子上不同取代基的性质，可以存在另外的不对称中心。每个这种不对称中心将独立地产生两个光学异构体，并且意图是以混合物形式和作为纯的或部分提纯的化合物的所有可能的光学异构体和非对映异构体均包含在本发明的范围内。本发明意欲涵盖这些化合物的所有这种同分异构形式。可以如本领域中所公知的通过本文所公开的方法的适当修改形式实现这些非对映体的独立合成或它们的层析分离。可以通过晶体产物或晶体中间体的x射线晶体学确定它们的绝对立体化学，如果需要，将其用含有已知绝对构型的不对称中心的试剂衍生化。如果需要，可以将该化合物的外消旋混合物分离以将单独的对映体分离。可以通过本领域已知的方法进行分离，如化合物的外消旋混合物与对映体纯化合物的偶联以形成非对映异构体混合物，之后通过标准方法分离单独的非对映异构体，如分级结晶或层析。

更详细地，根据本发明的式I化合物可以通过下文给出的方法和步骤制备。制备式I化合物的一些典型步骤将在方案A(R¹²＝H、Br或NO₂)中描述。

可以与T.P.Tang和J.A.Ellman，J.Org.Chem.1999，64，12类似地，通过使芳基酮和亚磺酰胺，例如烷基亚磺酰胺，最优选(R)-(+)-叔丁基亚磺酰胺在路易斯酸诸如烷醇钛(IV)，更优选乙醇钛(IV)的存在下，在诸如醚，例如二乙醚或更优选THF的溶剂中缩合，来制备通式A2的亚磺酰亚胺。

亚磺酰亚胺A2向亚磺酰胺酯A3转化是如Tang和Ellman所述，通过手性定向基团以立体选择方式进行。亚磺酰亚胺A2可以和烯醇钛反应，该烯醇钛是由例如乙酸烷基酯，优选乙酸乙酯、LDA和氯化三异丙氧基钛在低温下，优选在-78℃下在诸如醚，例如二乙醚或更优选THF的溶剂中产生的。备选地亚磺酰胺酯A3可以由亚磺酰亚胺A2通过溴乙酸酯衍生物和锌粉，任选地在氯化铜(I)的存在下，在溶剂如醚，例如二乙醚或更优选THF中，在0至70℃，优选23℃的温度的列福马茨基反应制备。

可以将亚磺酰胺酯A3通过用碱性氢化物，优选硼氢化锂或氢化铝锂在溶剂如醚，例如二乙醚或更优选THF中还原所述乙酯而还原至醇A4。

醇A4至腈A5的烷基化可以用合适的弱碱，优选氧化银(I)在溶剂如THF或CH₂Cl₂，更优选CH₂Cl₂中在烷基化催化剂如碘化四丁基铵的存在下完成。

腈A5中手性定向基团的水解得到氨基腈A6，这可利用无机酸，例如硫酸或优选盐酸在溶剂诸如醚，例如二乙醚或更优选1，4-二烷中实现。

氨基氧氮杂

A7可以通过氨基腈A6和三甲基铝在溶剂如二甲苯，优选甲苯中的反应来制备。

方案A

A7中引入硝基以得到A8最好根据涉及硫酸和硝酸的标准步骤在低温，优选在0℃进行。

氨基氧氮杂

A8中的硝基还原为苯胺A9可以通过使用催化剂如Pd/C在质子溶剂，如醇，优选乙醇或甲醇中的氢化完成。

苯胺A9和羧酸的酰胺偶联得到酰胺Ia可以用碳二亚胺，例如DCC或EDCI在溶剂如二氯甲烷中或者尤其是用三嗪衍生物，氯化4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2基)-4-甲基-吗啉在醇尤其是甲醇中实现。

目标胺Ib可以经由苯胺A9和羰基化合物的还原胺化制备，所述还原胺化用硼氢化物还原剂，例如硼氢化钠，优选三乙酰氧基硼氢化钠和弱酸，例如乙酸在溶剂如四氢呋喃或二氯甲烷中进行。

式I化合物可形成药用盐。术语“药用盐”是指保留游离碱或游离酸的生物有效性及特性的盐，其在生物学上或其他方面不会不合需要。式I化合物的药用盐优选是与生理上相容的无机酸，诸如盐酸，硫酸，亚硫酸或磷酸，或与有机酸，诸如甲磺酸，乙磺酸，对甲苯磺酸，甲酸，乙酸，丙酸，乙醇酸，丙酮酸，草酸，乳酸，三氟乙酸，柠檬酸，富马酸，马来酸，丙二酸，酒石酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，琥珀酸或水杨酸，形成的酸加成盐。此外，可通过无机碱或有机碱与该游离酸加成，制备药用盐。衍生自无机碱的盐包括，但不限于，钠盐，钾盐，锂盐，铵盐，钙盐，镁盐及其类似盐。衍生自有机碱的盐包括，但不限于，以下各碱的盐：伯胺，仲胺及叔胺；取代的胺，包括天然存在的取的代胺，环状胺，及碱性离子交换树脂，诸如异丙胺，三甲胺，二乙胺，三乙胺，三丙胺，乙醇胺，赖氨酸，精氨酸，N-乙基哌啶，哌啶，聚胺(polymine)树脂等。式I化合物还可以两性离子的形式存在。式I化合物的特别的药用盐是酸加成盐，诸如盐酸盐，甲酸盐或三氟乙酸盐。特别是甲酸盐(甲酸的盐)。

与酸形成的相应药用盐可以通过本领域技术人员已知的标准方法获得，例如通过将式I的化合物溶解在合适的溶剂如例如二烷或THF中，并且加入合适量的相应的酸。产物通常可以通过过滤或通过色谱分离。式I的化合物至与碱形成的药用盐的转化可以通过用这种碱处理这种化合物进行。形成这种盐的一个可能的方法是例如通过将1/n当量的碱盐如例如M(OH)_n，其中M＝金属或铵阳离子并且n＝氢氧化物阴离子的数目，加入至该化合物在合适的溶剂(例如乙醇、乙醇-水混合物、四氢呋喃-水混合物)中的溶液，并且通过蒸发或冷冻干燥移除溶剂。特别的盐是盐酸盐、甲酸盐和三氟乙酸盐。

在它们的制备未在实施例中描述的情况下，式I的化合物以及所有中间体产物可以根据类似的方法或根据本文给出的方法制备。原材料是可商购的，本领域中已知的或可以通过本领域已知的或与其类似的方法制备。

将明白的是本发明中通式I的化合物可以在官能团处衍生以提供能够在体内转化回母体化合物的衍生物。

药理学测试

式I的化合物和它们的药用盐拥有有价值的药理学特性。已经发现本发明的化合物与BACE1和/或BACE2活性的抑制有关。按照在下文中给出的测试研究该化合物。

细胞学Aβ降低测定：

使用稳定地转染有表达人APP wt基因(APP695)的cDNA的载体的人HEK293细胞以在细胞学测定中评定化合物的效能。将细胞种植在96孔微量滴定板上，在细胞培养基(Iscove，添加10％(v/v)胎牛血清，谷氨酰胺，青霉素/链霉素)中，至约80％汇合，并添加以10x浓度在1/10体积的不带FCS的含有8％DMSO(DMSO的最终浓度保持在0.8％v/v)的培养基中的化合物。在湿润的培养箱中在37℃和5％CO₂温育18-20小时之后，收获培养基上清液用于Aβ40浓度的测定。将96孔ELISA板(例如，NuncMaxiSorb)用特异性识别Aβ40的C端末端的单克隆抗体(Brockhaus等，NeuroReport9，1481-1486；1998)包被。在用例如1％BSA阻断非特异性结合位点并洗涤之后，将培养基上清液与辣根过氧化物酶偶联的Aβ检测抗体(例如，抗体4G8、Senetek、Maryland Heights、MO)一起以合适的稀释度加入，并温育5至7小时。随后将微量滴定板的孔用含有0.05％Tween20的三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水彻底洗涤，并将试验物用在柠檬酸缓冲溶液中的四甲基联苯胺/H₂O₂显色。在用一体积的1N H₂SO₄终止反应之后，将反应物在ELISA读数仪上在450nm波长测量。由用已知量的纯Aβ肽获得的标准曲线计算培养基上清液中Aβ的浓度。

通过测量细胞TMEM27裂解的BACE抑制测定：

该测定使用抑制Ins1e大鼠细胞系中人TMEM27被内源性细胞BACE2裂解并从细胞表面脱落至培养基中(之后在ELISA试验中检测)的原理。BACE2的抑制以剂量相关的方式防止裂解和脱落。

稳定的细胞系“INS-TMEM27”表示具有以多西环素依赖的方式可诱导表达(使用TetOn体系)全长hTMEM27的源自INS1e的细胞系。在整个实验中，将细胞在RPMI1640+Glutamax(Invitrogen)青霉素/链霉素、10％胎牛血清、100mM丙酮酸盐、5mMβ-巯基乙醇，100微克/ml G418和100微克/ml潮霉素中培养，并在标准CO₂细胞孵箱中在37℃不贴壁培养生长。

将INS-TMEM27细胞接种在96孔板中。培养2天之后，以测定所需要的浓度范围加入BACE2抑制剂，并且在进一步培养两小时之后，加入多西环素至500ng/ml的最终浓度。将细胞进一步温育46小时并收获上清液用于检测脱落的TMEM27。

使用ELISA测定(使用一对小鼠抗人TMEM27抗体，针对TMEM27的细胞外结构域)用于培养基中TMEM27的检测。使用ELISA读数用标准曲线拟合软件如用于Excel电子数据表程序的XLFit对每个抑制剂浓度计算BACE2抑制的EC₅₀。

在上述测定中根据式I的优选化合物具有优选5nM至50μM，更优选5nM至1μM的抑制活性(IC₅₀)。

例如，以下化合物在上述测定中显示以下IC₅₀值：

药物组合物

式I化合物和药用盐可以用作治疗活性物质，例如以药物制剂的形式。该药物制剂可以口服服用，例如，以片剂、包衣片剂、糖锭剂、硬和软明胶胶囊、溶液、乳剂或混悬剂形式。然而，也可以通过直肠实现给药，例如，以栓剂的形式，或者经肠胃外给药，例如，以针剂的形式。

可以将式I的化合物及其药用盐与制药学惰性的、无机或有机的载体进行加工用于制备药物制剂。例如，可以使用乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等作为用于片剂、包衣片剂、糖锭和硬明胶胶囊的载体。适用于软明胶胶囊的载体是例如植物油、蜡、脂肪以及半固体和液体多元醇等。然而，取决于活性成分的性质，在软明胶胶囊的情况下经常不需要载体。用于制备溶液和糖浆的适合的载体是例如水、多元醇、甘油、植物油等。适用于栓剂的载体是，例如，天然或硬化油、蜡、脂肪和半液体或液体多元醇等。

此外，药物制剂可以含有药用助剂物质如防腐剂、增溶剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、增香剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以含有其它在治疗学上有价值的物质。

含有式I的化合物或其药用盐以及治疗惰性载体的药物也是本发明的一个目标，与用于其制备的方法一样，所述方法包括将一种或多种式I的化合物和/或其药用盐以及，如果需要，一种或多种其他有治疗价值的物质与一种或多种治疗惰性载体一起制成盖仑给药形式。

剂量可以在宽范围内变化，当然，在每个具体病例中必须根据个体需求而调节。在口服给药的情形中，用于成人的剂量可以从约0.01mg/天变化至约1000mg/天，尤其是约1至500mg/天的式I的化合物或相应量的其药用盐。取决于疾病的严重程度和化合物的精确药代动力学分布，该日剂量可以以单一剂量给药或以分开的剂量给药，并且此外，当需要时，也可以超过该上限。

以下实施例说明本发明，但不对其进行限制，而是仅作为其示例。根据本发明的组合物的实例为：

实施例A

以通常方式制造具有以下组成的片剂：

成分

mg/片

	5	25	100	500
					式I的化合物	5	25	100	500
乳糖无水DTG	125	105	30	150
					Sta-Rx1500	6	6	6	60
微晶纤维素	30	30	30	450
					硬脂酸镁	1	1	1	1
总计	167	167	167	831

表1：可能的片剂组成

制造过程：

1.将成分1、2、3和4混合，并用纯水粒化。

2.将颗粒在50℃下干燥。

3.使颗粒通过合适的研磨设备。

4.加入成分5并混合三分钟；在合适的压机上压缩。

实施例B-1

制备具有以下组成的胶囊：

表2：可能的胶囊成分组成

制造过程：

1.将成分1、2和3在合适的混合机中混合30分钟。

2.加入成分4和5，并混合3分钟。

3.填充至合适的胶囊中。

将式I的化合物、乳糖和玉米淀粉首先在混合机中混合，并且之后在粉碎机中混合。将混合物送回混合机，将滑石加入其中并充分混合。将混合物通过机器填充至合适的胶囊中，例如硬明胶胶囊。

实施例B-2

制备具有以下组成的软明胶胶囊：

成分	mg/胶囊
		式I的化合物	5
黄蜡	8
		氢化大豆油	8
部分氢化的植物油	34
		大豆油	110
总计	165

表3：可能的软明胶胶囊成分组成

成分	mg/胶囊
		明胶	75
甘油85％	32
		Karion83	8(干物质)
二氧化钛	0.4
		氧化铁黄	1.1
总计	116.5

表4：可能的软明胶胶囊组成

制造过程

将式I的化合物溶解在其他成分的温暖熔体中，并将混合物填充至适当大小的软明胶胶囊中。根据一般程序处理所填充的软明胶胶囊。

实施例C

制备以下组成的栓剂：

成分	mg/栓剂
		式I的化合物	15
栓剂块	1285
		总计	1300

表5：可能的栓剂组成

制造过程

将栓剂块在玻璃或钢容器中熔化，充分混合并冷却至45℃。随即，将细粉化的式I的化合物加入其中并搅拌直至其完全分散。将混合物倒入合适大小的栓剂模具中，放置冷却，之后将栓剂从模具移出并单独地包装在蜡纸或金属箔中。

实施例D

制备以下组成的针剂：

成分	mg/针剂
		式I的化合物	3
聚乙二醇400	150
		乙酸	适量至pH5.0
针剂用水	至1.0ml

表6：可能的针剂组成

制造过程

将式I的化合物溶解在聚乙二醇400和注射用水(部分)的混合物中。将pH通过乙酸调节至5.0。通过加入余量的水将体积调节至1.0ml。将溶液过滤，使用适当过量装入小瓶中并灭菌。

实施例E

制造以下组成的小药囊：

成分	mg/小药囊
		式I的化合物	50
乳糖，细粉	1015
		微晶纤维素(AVICEL PH102)	1400
羧甲基纤维素钠	14
		聚乙烯吡咯烷酮K30	10
硬脂酸镁	10
		香味添加剂	1
总计	2500

表7：可能的小药囊组成

制造过程

将式I的化合物与乳糖、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混合，并且用聚乙烯吡咯烷酮在水中的混合物造粒。将颗粒与硬脂酸镁和香味添加剂混合，并装入小药囊中。

实施例

总则：

MS：在Perkin-Elmer SCIEX API300上用正或负离子喷雾(ISP或ISN)法或在Finnigan MAT SSQ7000光谱仪上用电子轰击法(EI，70eV)测量质谱(MS)。

缩写：

DCC＝N，N’-二异丙基-碳二亚胺、DCE＝1，2-二氯乙烷、DCM＝二氯甲烷、DIEA＝二异丙基乙胺、DMAc＝二甲基乙酰胺、DMAP＝4-二甲基氨基吡啶、DMF＝N，N-二甲基甲酰胺、DMSO＝二甲亚砜、EDCI＝N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐、HATU＝六氟磷酸1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-3-氧化物、HCl＝氯化氢、HPLC＝高效液相色谱、LDA＝二异丙基氨基锂、MS＝质谱、NMR＝核磁共振、TEA＝三乙胺、TBME＝叔丁基甲基醚和THF＝四氢呋喃。

为说明本发明提供以下实施例。它们不应被认为是作为本发明的范围的限定，而仅作为其代表。

中间体1-(2-氟-5-硝基-苯基)-丙-1-酮A1A的合成

向冷却至-30℃的1-(2-氟-苯基)-丙-1-酮(99mmol)在浓硫酸(80ml)中的溶液在20分钟内缓慢地加入发烟硝酸(8ml)，并将溶液在-30℃搅拌15分钟。将混合物缓慢地倒入搅拌下的200ml的水和400g冰的混合物。将水相用乙酸乙酯萃取，将有机层再次用水和NaHCO₃1M水溶液萃取。将有机层在Na₂SO₄上干燥、蒸发并将残留物通过在二氧化硅上使用庚烷和乙酸乙酯的混合物作为洗脱剂层析纯化以提供纯硝基中间体J。MS(ISP)：m/z＝198.1[M+H]+。

中间体亚磺酰亚胺A2的合成

一般程序

向(R)-(+)-叔丁基亚磺酰胺(66mmol)在THF(350ml)中的溶液相继加入酮A1(72.6mmol)和乙醇钛(IV)(132mmol)，并将溶液在回流温度搅拌5h。将混合物冷却至22℃，用盐水(400ml)处理，将悬浮液搅拌10分钟并在硅藻土(dicalite)上过滤。分离各层，将水层用乙酸乙酯萃取，将合并的有机层用水洗涤、干燥并在真空中浓缩。将残留物通过在二氧化硅上使用环己烷/乙酸乙酯层析纯化，以给出纯亚磺酰亚胺A2。

中间体A2A

起始于1-(2-氟苯基)-乙酮，获得产物(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(2-氟苯基)-(E)-亚乙基]-酰胺，为淡褐色油。MS(ISP)：m/z＝242.3[M+H]⁺。

中间体A2B

起始于1-(2-氟-苯基)-丙-1-酮，获得产物2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(2-氟-苯基)-丙-(E)-亚基]-酰胺，为淡黄色油。MS：m/z＝256.2[M+H]⁺。

中间体亚磺酰胺酯A3的合成

一般程序：

在干燥的装置中，将新鲜活化的锌粉(1.63g，24.9mmol)在无水THF(70ml)中的悬浮液在惰性气氛下加热至回流。将亚磺酰亚胺A2(24.9mmol)和溴乙酸酯(24.9mmol)在无水THF(15ml)中的溶液在15分钟的期间内滴加，并将悬浮液加热至回流5h。将冷却的混合物在饱和NH₄Cl水溶液与乙酸乙酯之间分配，将有机层干燥并蒸发。将粗材料通过使用庚烷/乙酸乙酯的急骤层析纯化以给出亚磺酰胺酯A3。

中间体A3A和A3B

起始于(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(2-氟苯基)-(E)-亚乙基]-酰胺和2-溴-2-氟乙酸乙酯，获得较快洗脱的次要异构体(2S，3R)-3-((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺基)-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯(中间体A3A)，为暗褐色油。MS(ISP)：m/z＝348.2[M+H]⁺。

第二级分含有较慢洗脱的主要异构体(2R，3R)-3-((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺基)-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯(中间体A3B)，为褐色油。MS(ISP)：m/z＝348.2[M+H]⁺。

中间体A3C

起始于(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(2-氟苯基)-(E)-亚乙基]-酰胺，获得产物(R)-2，2-二氟-3-(2-氟-苯基)-3-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-丁酸乙酯，为淡黄色油。MS：m/z＝366.1[M+H]⁺。

中间体A3D

起始于2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[1-(2-氟-苯基)-丙-(E)-亚基]-酰胺，获得产物(R)-2，2-二氟-3-(2-氟-苯基)-3-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-戊酸乙酯，为无色油。MS：m/z＝380.2[M+H]⁺。

中间体亚磺酰胺醇A4的合成

一般程序：

将亚磺酰胺酯A3(12.7mmol)在无水THF(50ml)中的溶液在0℃用硼氢化锂(25.3mmol)处理，并且在0℃继续搅拌4h。将反应混合物通过加入乙酸(2ml)和水(50ml)猝灭，用乙酸乙酯萃取，并将有机层干燥并蒸发。将残留物通过在二氧化硅上使用正庚烷和乙酸乙酯的混合物层析纯化，以给出纯中间体亚磺酰胺醇A4。

中间体A4A

起始于(2R，3R)-3-((R)-1，1-二甲基乙基亚磺酰胺基)-2-氟-3-(2-氟苯基)丁酸乙酯，获得产物(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(1R，2R)-2-氟-1-(2-氟-苯基)-3-羟基-1-甲基-丙基]-酰胺，为淡红色结晶。MS(ISP)：m/z＝306.1[M+H]⁺。

中间体A4B

起始于(R)-2，2-二氟-3-(2-氟-苯基)-3-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-丁酸乙酯，获得产物2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-2，2-二氟-1-(2-氟-苯基)-3-羟基-1-甲基-丙基]-酰胺，为白色固体。MS(ISP)：m/z＝324.2[M+H]⁺。

中间体A4C

起始于(R)-2，2-二氟-3-(2-氟-苯基)-3-((R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰基氨基)-戊酸乙酯，获得产物2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-1-乙基-2，2-二氟-1-(2-氟-苯基)-3-羟基-丙基]-酰胺，为白色固体。MS(ISP)：m/z＝338.1[M+H]⁺。

中间体亚磺酰胺腈A5

一般程序：

向亚磺酰胺醇A4(4.1mmol)在二氯甲烷(23ml)中的溶液在22℃相继加入2-溴乙腈(6.2mmol)、氧化银(I)(1.9g)和碘化四丁基铵(0.30g)，并且继续搅拌2h。将悬浮液过滤，将滤液用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，将有机层干燥并蒸发，以给出粗亚磺酰胺腈A5，将其在不进一步提纯的情况下使用。

中间体A5A

起始于(R)-2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(1R，2R)-2-氟-1-(2-氟-苯基)-3-羟基-1-甲基-丙基]-酰胺，获得产物(R)-N-((2R，3R)-4-(氰基甲氧基)-3-氟-2-(2-氟苯基)丁-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，为淡黄色油。MS(ISP)：m/z＝345.2[M+H]⁺。

中间体A5B

起始于2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-2，2-二氟-1-(2-氟-苯基)-3-羟基-1-甲基-丙基]-酰胺，获得产物2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-3-氰基甲氧基-2，2-二氟-1-(2-氟-苯基)-1-甲基-丙基]-酰胺，为淡黄色油。MS(ISP)：m/z＝363.2[M+H]⁺。

中间体A5C

起始于2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-1-乙基-2，2-二氟-1-(2-氟-苯基)-3-羟基-丙基]-酰胺，获得产物2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-3-氰基甲氧基-1-乙基-2，2-二氟-1-(2-氟-苯基)-丙基]-酰胺，为淡黄色油。MS(ISP)：m/z＝377.3[M+H]⁺。

中间体氨基腈A6的合成

一般程序：

将亚磺酰胺腈A5(4.25mmol)在1，4-二烷(20ml)中的溶液用HCl在1，4-二烷中的溶液(4M，5.3ml)处理，并且在22℃继续搅拌1h。将混合物用乙酸乙酯稀释，用饱和Na₂CO₃水溶液洗涤，将有机层干燥并蒸发。将粗材料在二氧化硅上使用正庚烷/乙酸乙酯提纯，以给出纯氨基腈A6。

中间体A6A

起始于(R)-N-((2R，3R)-4-(氰基甲氧基)-3-氟-2-(2-氟苯基)丁-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺，获得产物2-((2R，3R)-3-氨基-2-氟-3-(2-氟苯基)丁氧基)乙腈，为淡黄色油。MS(ISP)：m/z＝241.1[M+H]⁺。

中间体A6B

起始于2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-3-氰基甲氧基-2，2-二氟-1-(2-氟-苯基)-1-甲基-丙基]-酰胺，获得产物[(R)-3-氨基-2，2-二氟-3-(2-氟-苯基)-丁氧基]-乙腈，为淡黄色油。MS(ISP)：m/z＝259.1[M+H]⁺。

中间体A6C

起始于2-甲基-丙烷-2-亚磺酸[(R)-3-氰基甲氧基-1-乙基-2，2-二氟-1-(2-氟-苯基)-丙基]-酰胺，获得产物[(R)-3-氨基-2，2-二氟-3-(2-氟-苯基)-戊氧基]-乙腈，为淡黄色油。MS：m/z＝273.1[M+H]⁺。

中间体1，4-氧氮杂

A7的合成

一般程序：

向氨基腈A6(2.20mmol)在甲苯(38ml)中的溶液在22℃加入AlMe₃在甲苯中的溶液(2M，1.2ml)，并将混合物加热至80℃持续1h。将混合物冷却至0℃，用饱和Na₂CO₃水溶液稀释并将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥、蒸发并将残留物在NH₂-二氧化硅上使用正庚烷/乙酸乙酯通过层析纯化，以给出纯1，4-氧氮杂

A7。

中间体A7A

起始于2-((2R，3R)-3-氨基-2-氟-3-(2-氟苯基)丁氧基)乙腈，获得产物(5R，6R)-6-氟-5-(2-氟苯基)-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-3-胺，为淡黄色固体。MS(ISP)：m/z＝241.2[M+H]⁺。

中间体A7B

起始于[(R)-3-氨基-2，2-二氟-3-(2-氟-苯基)-丁氧基]-乙腈，获得产物(R)-6，6-二氟-5-(2-氟-苯基)-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，为白色固体。MS(ISP)：m/z＝259.1[M+H]⁺。

中间体A7C

起始于[(R)-3-氨基-2，2-二氟-3-(2-氟-苯基)-戊氧基]-乙腈，获得产物(R)-5-乙基-6，6-二氟-5-(2-氟-苯基)-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，为褐色油。MS：m/z＝273.1[M+H]⁺。

中间体硝基苯A8

一般程序：

向中间体1，4-氧氮杂

A7(1.2mmol)在硫酸(5.0ml)中的溶液在0℃在20分钟的期间内加入红色发烟硝酸(1.9mmol)并且继续搅拌30分钟。将溶液缓慢地滴加至冰/水(60ml)中，通过加入4N NaOH水溶液将pH调节至9并用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥、蒸发并将残留物在二氧化硅-NH₂上使用正庚烷/乙酸乙酯通过层析纯化，以给出硝基苯A8。

中间体A8A

起始于(5R，6R)-6-氟-5-(2-氟苯基)-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-3-胺，获得产物(5R，6R)-6-氟-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，为浅黄色固体。MS(ISP)：m/z＝286.2[M+H]⁺。

中间体A8B

起始于(R)-6，6-二氟-5-(2-氟-苯基)-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂-3-基胺，获得产物(R)-6，6-二氟-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂-3-基胺，为白色固体。MS(ISP)：m/z＝304.1[M+H]⁺。

中间体A8C

起始于(R)-5-乙基-6，6-二氟-5-(2-氟-苯基)-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，获得产物(R)-5-乙基-6，6-二氟-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，为浅黄色固体。MS：m/z＝318.1[M+H]⁺。

中间体苯胺A9的合成

一般程序：

将中间体硝基苯A8(1.0mmol)在乙醇(9ml)和Pd/C(10％，100mg)中的悬浮液在22℃和大气压力氢化2h。将悬浮液过滤并将残留物蒸发以给出粗苯胺A10，将其在不进一步提纯的情况下使用。

中间体A9A

起始于(5R，6R)-6-氟-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，获得产物(5R，6R)-5-(5-氨基-2-氟苯基)-6-氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-3-胺，为浅黄色固体。MS(ISP)：m/z＝256.3[M+H]⁺。

中间体A9B

起始于(R)-6，6-二氟-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，获得产物(R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，为白色固体。MS(ISP)：m/z＝274.1[M+H]⁺。

中间体A9C

起始于(R)-5-乙基-6，6-二氟-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，获得产物(R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-乙基-6，6-二氟-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺，为浅黄色固体。MS：m/z＝288.1[M+H]⁺。

酰胺Ia由苯胺A9的合成

一般程序：

向酸(0.16mmol)在MeOH(1ml)中的溶液在22℃加入氯化4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2基)-4-甲基-吗啉(0.19mmol)并在0℃继续搅拌30分钟。向混合物加入苯胺A9(0.15mmol)在MeOH(2ml)中的溶液，并在0℃继续搅拌2h。将混合物用饱和Na₂CO₃水溶液稀释，将MeOH蒸发并将水溶液用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥、蒸发并将残留物在制备型HPLCRP18柱上使用水/HCOOH(99.9∶0.1)-＞MeOH的梯度提纯以给出甲酸盐，或者使用水/NEt₃(99.9∶0.1)-＞CH₃CN的梯度提纯以给出酰胺Ia的游离碱。

胺Ib由苯胺A9通过还原胺化的合成

一般程序：

向苯胺A9(0.1mmol)在二氯甲烷(0.7ml)中的溶液在22℃相继加入羰基化合物(0.11mmol)、乙酸(0.2mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.14mmol)，并将混合物的搅拌继续18h。将混合物用水(1ml)稀释，将有机层用饱和NaHCO₃水溶液洗涤、干燥并蒸发。将残留物在二氧化硅-NH₂柱上使用二氯甲烷通过层析纯化，以给出胺Ib。

实施例1

(R)-N2-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-3-氟吡啶-2，5-二甲酰胺甲酸盐

(R)-5-(5-氨基-2-氟苯基)-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-3-胺(中间体A9B)和5-氨基甲酰基-3-氟-吡啶-2-甲酸(根据Hori，A.等，国际专利申请公开号WO2009151098制备)的偶联产生标题化合物，为灰白色无定形物。MS(ISP)：m/z＝440.2[M+H]⁺。

实施例2

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂-5-基)-4-氟苯基)-6-(环丙基甲氧基)吡啶甲酰胺甲酸盐

-3-胺(中间体A9B)和6-环丙基甲氧基-吡啶-2-甲酸的偶联产生标题化合物，为灰白色无定形物。MS(ISP)：m/z＝449.2[M+H]⁺。

如下获得6-环丙基甲氧基-吡啶-2-甲酸：

将6-氯-吡啶-2-甲酸(9.46mmol)在无水二甲亚砜(5ml)中的溶液用环丙基-甲醇(14.1mmol)处理，之后用粉末氢氧化钾(37.8mmol)处理。之后将反应混合物在微波炉中在100℃照射90分钟。对于后处理，将反应混合物用柠檬酸水溶液(10％，pH4-5)猝灭，之后用乙酸乙酯(5x30ml)萃取，接着用甲醇和二氯甲烷的混合物(20％；5x100ml)萃取。将合并的有机层用盐水(200ml)洗涤、干燥并减压蒸发。残留物的冻干产生6-氯-吡啶-2-甲酸，为棕色固体(理论值的48％)MS(ISP)：m/z＝195.0[M+H]⁺。

实施例3

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(噻唑-2-基)吡啶甲酰胺甲酸盐

(R)-5-(5-氨基-2-氟苯基)-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂-3-胺(中间体A9B)和5-噻唑-2-基-吡啶-2-甲酸(根据Suzuki，Y.等，国际专利申请公开号WO2009091016制备)的偶联产生标题化合物，为灰白色无定形物。MS(ISP)：m/z＝462.2[M+H]⁺。

实施例4

(R)-N-(3-(3-氨基-5-乙基-6，6-二氟-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-环丙基唑-4-甲酰胺

(R)-5-(5-氨基-2-氟-苯基)-5-乙基-6，6-二氟-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺(中间体A9C)和5-环丙基-唑-4-甲酸的偶联产生标题化合物，为白色固体。MS：m/z＝423.2[M+H]⁺。

实施例5

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(甲硫基)吡嗪-2-甲酰胺甲酸盐

-3-胺(中间体A9B)和5-甲硫基-吡嗪-2-甲酸(根据Suzuki，Y.等，国际专利申请公开号WO2009091016制备)的偶联产生标题化合物，为灰白色固体。MS(ISP)：m/z＝426.1[M+H]⁺。

实施例6

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(环丙基乙炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐

-3-胺(中间体A9B)和5-环丙基乙炔基-吡啶-2-甲酸(根据Suzuki，Y.等，国际专利申请公开号WO2009091016制备)的偶联产生标题化合物，为灰白色固体。MS(ISP)：m/z＝443.3[M+H]⁺。

实施例7

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-环丙基吡啶甲酰胺甲酸盐

-3-胺(中间体A9B)和5-环丙基-吡啶-2-甲酸(根据Suzuki，Y.等，国际专利申请公开号WO2009091016制备)的偶联产生标题化合物，为无定形淡黄色材料。MS(ISP)：m/z＝419.2[M+H]⁺。

实施例8

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(3-甲氧基丙-1-炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐

-3-胺(中间体A9B)和5-(3-甲氧基-丙-1-炔基)-吡啶-2-甲酸(根据Suzuki，Y.等，国际专利申请公开号WO2009091016制备)的偶联，产生标题化合物，为白色固体。MS(ISP)：m/z＝410.2[M+H]⁺。

实施例9

(5R，6R)-5-(5-(环丙基甲基氨基)-2-氟苯基)-6-氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-3-胺

(5R，6R)-5-(5-氨基-2-氟苯基)-6-氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-3-胺(中间体A9A)和环丙烷甲醛的还原胺化产生标题化合物，为无色固体。MS：m/z＝310.4[M+H]⁺。

Claims

1.式I的化合物

其中

R¹是H或F；

R²是C_1-7-烷基；并且

R³是-(C＝O)-R⁴或R⁵，其中

R⁴是被选自由以下各项组成的组的一个取代基取代的杂芳基：C_3-7-环烷基-C_1-7-烷氧基-、C_3-7-环烷基-C_2-7-炔基-、C_1-7-烷氧基-C_2-7-炔基-、未取代的杂芳基、未取代的C_3-7-环烷基和C_1-7-烷基-S-，或

R⁴是被一个卤素和一个酰胺基取代的杂芳基；

R⁵是C_3-7-环烷基-C_1-7-烷基-；

或其药用盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹是F。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹是H。

4.根据权利要求1-3中的任一项所述的化合物，其中R²是Me。

5.根据权利要求1-3中的任一项所述的化合物，其中R²是Et。

6.根据权利要求1-5中的任一项所述的化合物，其中R³是C_3-7-环烷基-C_1-7-烷基-。

7.根据权利要求1-5中的任一项所述的化合物，其中R³是环丙基-CH₂-。

8.根据权利要求7所述的化合物，所述化合物是(5R，6R)-5-[5-(环丙基甲基-氨基)-2-氟-苯基]-6-氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-[1，4]氧氮杂

-3-基胺。

9.根据权利要求1-5中的任一项所述的化合物，其中R³是-(C＝O)-R⁴。

10.根据权利要求9所述的化合物，其中R⁴是被卤素和一个酰胺基取代的吡啶基。

11.根据权利要求9所述的化合物，所述化合物是(R)-N2-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-3-氟吡啶-2，5-二甲酰胺甲酸盐。

12.根据权利要求9所述的化合物，其中R⁴是被选自由C_3-7-环烷基-C_1-7-烷氧基-、C_3-7-环烷基-C_2-7-炔基-、C_1-7-烷氧基-C_2-7-炔基-、未取代的杂芳基和未取代的C_3-7-环烷基组成的组的一个取代基取代的吡啶基。

13.根据权利要求12所述的化合物，所述化合物选自由以下各项组成的组：

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-6-(环丙基甲氧基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(噻唑-2-基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(环丙基乙炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐，

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-环丙基吡啶甲酰胺甲酸盐，和

(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(3-甲氧基丙-1-炔基)吡啶甲酰胺甲酸盐。

14.根据权利要求9所述的化合物，其中R⁴是被C_1-7-烷基-S-取代的吡嗪基。

15.根据权利要求14所述的化合物，所述化合物是(R)-N-(3-(3-氨基-6，6-二氟-5-甲基-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-(甲硫基)吡嗪-2-甲酰胺甲酸盐。

16.根据权利要求9所述的化合物，其中R⁴是被C_3-7-环烷基取代的唑基。

17.根据权利要求16所述的化合物，所述化合物是(R)-N-(3-(3-氨基-5-乙基-6，6-二氟-2，5，6，7-四氢-1，4-氧氮杂

-5-基)-4-氟苯基)-5-环丙基唑-4-甲酰胺。

18.一种用于制备如权利要求1至21中的任一项所述的式I的化合物的方法，所述方法包括：

其中R¹、R²和R⁴如权利要求1中所定义，或备选地，

b)使式II的胺与式IV的化合物在乙酸和三乙酰氧基硼氢化钠的存在下反应以获得式Ib的化合物

其中R是氢或C_1-7-烷基，且其中R¹、R²、R³和R⁵如权利要求1中所定义。

19.药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至17中的任一项所述的式I的化合物和药用载体和/或赋形剂。

20.根据权利要求1至17中的任一项所述的式I的化合物，所述式I的化合物用作药物。

21.根据权利要求1至17中的任一项所述的式I的化合物，所述式I的化合物用于阿尔茨海默病和/或2型糖尿病的治疗性和/或预防性治疗。

22.根据权利要求1-17中的任一项所述的式I的化合物，所述式I的化合物用作治疗活性物质，所述治疗活性物质用于以下疾病的治疗性和/或预防性治疗：肌萎缩侧索硬化(ALS)、动脉血栓形成、自身免疫性/炎性疾病、癌症如乳腺癌、心血管疾病如心肌梗塞和卒中、皮肌炎、唐氏综合征、胃肠疾病、多形性胶质母细胞瘤、格雷夫斯病、亨廷顿病、包涵体肌炎(IBM)、炎症反应、卡波西肉瘤、科斯特曼病、红斑狼疮、巨噬细胞肌筋膜炎、幼年特发性关节炎、肉芽肿关节炎、恶性黑色素瘤、多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、舍格伦综合征、脊髓小脑性共济失调1型、脊髓小脑性共济失调7型、惠普尔病或威尔逊病。

23.根据权利要求1至17中的任一项所述的式I的化合物用于药物制备的用途，所述药物用于阿尔茨海默病和/或2型糖尿病的治疗性和/或预防性治疗。

24.一种用于治疗性和/或预防性治疗可以通过抑制BACE1和/或BACE2活性而改善的疾病的方法，尤其是用于治疗阿尔茨海默病和2型糖尿病的治疗的方法，所述方法包括将治疗活性量的根据权利要求1至17中的任一项所述的式I的化合物给药至人类或动物。

25.一种用于治疗性和/或预防性治疗可以通过抑制BACE1和/或BACE2活性而改善的疾病的方法，尤其是用于肌萎缩侧索硬化(ALS)、动脉血栓形成、自身免疫性/炎性疾病、癌症如乳腺癌、心血管疾病如心肌梗塞和卒中、皮肌炎、唐氏综合征、胃肠疾病、多形性胶质母细胞瘤、格雷夫斯病、亨廷顿病、包涵体肌炎(IBM)、炎症反应、卡波西肉瘤、科斯特曼病、红斑狼疮、巨噬细胞肌筋膜炎、幼年特发性关节炎、肉芽肿关节炎、恶性黑色素瘤、多发性骨髓瘤、类风湿性关节炎、舍格伦综合征、脊髓小脑性共济失调1型、脊髓小脑性共济失调7型、惠普尔病或威尔逊病的治疗的方法，所述方法包括将治疗活性量的根据权利要求1至17中的任一项所述的式I的化合物给药至人类或动物。

26.如上所述的本发明。