CN103464125A

CN103464125A - 新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法及其应用

Info

Publication number: CN103464125A
Application number: CN2013104302256A
Authority: CN
Inventors: 王勇; 赵杰
Original assignee: Tianjin University
Current assignee: Tianjin University
Priority date: 2013-09-18
Filing date: 2013-09-18
Publication date: 2013-12-25
Anticipated expiration: 2033-09-18
Also published as: CN103464125B

Abstract

本发明公开了一种新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，包括两个步骤：首先利用硅烷偶联剂通过醚键在硅胶表面引入叠氮基单取代的环糊精，然后通过一价铜催化的1，3-偶极环加成反应（click chemistry），将炔基取代环糊精键合到叠氮环糊精硅胶表面，进而制备了具有良好协同效应的三唑桥联复式环糊精硅胶手性固定相。该类固定相在液相色谱中展现了对丹磺酰氨基酸，小分子芳香酸和中性消旋体等不用类别药物的优异拆分能力，可作为色谱手性固定相应用于药物手性拆分领域。

Description

新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法及其应用

技术领域

本发明属于药物外消旋体的手性拆分领域，涉及色谱手性固定相，通过自下而上的方式在硅胶表面通过点击化学构建复式环糊精手性分子从而制备出一系列新型环糊精手性固定相，可用于各种色谱技术的药物手性拆分和制备。

背景技术

手性药物已成为当前医药领域的研究热点。许多药物的两个对映异构体在体内的药理活性、代谢过程、速率及毒性等差异显著。单一对映体手性药物不但可以排除无效(不良)对映体引的毒副作用，还能减少代谢负担，提高药物专一性。手性分离是获得单一对映体的有效手段，已成为当前医药领域的热点和难点。在众多的手性分离技术中，应用手性固定相的色谱分析分离技术已被广泛应用于手性药物生产在线分析以及单一对映体药物的规模制备，成为迄今为止应用最为成功的分离手段之一。环糊精手性固定相以其优异的手性选择性以及良好的化学稳定性始终处在该研究领域的前沿。

环糊精具有内部疏水外部亲水的锥形圆筒中空结构，可基于疏水作用、范德华力以及主客体分子间的匹配等与多种无机或有机分子形成稳定的主体-客体包合物，因而被广泛应用于分子识别、分子组装、药物载体、模拟酶以及结构异构和手性化合物的分离。目前环糊精手性固定相的研究主要集中在两方面：键合臂的开发以及新型改性环糊精的合成。新型键合臂的开发是环糊精固定相研究的一个重要方面。Armstrong采用醚键为键合臂首次获得了对反相分离模式稳定的化学键合环糊精固定相并实现了商品化（参见：D.W.Armstrong,US-Patent4539399）。Ng开发了以脲基和胺基作为键合臂的结构可控的衍生环糊精手性固定相（参见美国专利文献US-Patent6017458，6296768，6720285）。中科院大连化物所的梁鑫淼课题组及南京新珞美新型材料有限公司吴小聪等则将β-环糊精通过点击化学的方法接枝到炔基衍生的硅胶表面制备了一种新型三唑键合臂天然环糊精手性固定相（参见中国专利文献CN101745371A和CN102343258A）。

除了键合臂方式，环糊精固定相的拆分能力更大程度上依赖于对环糊精分子进行改性。研究表明，环糊精改性可以改变其疏水空腔的几何型貌，引入π-π键、氢键、疏水作用以及偶极作用力等使环糊精键合固定相表现出更高的立体选择性，并使其能够适应更多的色谱分离模式如：正相、反相以及极性有机相模式。目前比较成功的衍生基团主要包括甲氧基、羟丙基、二硝基苯基（缺电子型）、芳胺甲酰酯（富电子型）以及一些带有手性碳的基团等。北京理工大学周智明及合作者在Ng等人的研究基础上发展了首种化学键合单衍生阳离子环糊精固定相。该课题组还发展了一系列希夫碱单臂衍生环糊精手性固定相并成功地分离了包括二茂铁手性对映体在内的多类手性化合物（Anal.Chim.Acta.2010,678,208-214;Talanta.2011,84,1080-1092）。

综上所述，目前国内外环糊精固定相的研究主要集中在基于功能型键合臂以及新型环糊精衍生物的单层环糊精固定相，已经取得了长足的进步，出现了一系列优秀的环糊精固定相，但仍存在许多问题：首先，具有多重作用位点的新型键合臂的开发相对困难且难以保证其对不同分离条件的稳定性，已开发的功能型键合臂在提高固定相手性识别性能方面能力有限；其次，虽然环糊精改性基团通过引入π-π键、氢键、疏水作用以及偶极作用等很大程度上提高了其手性选择性、拓展了应用空间，但不同的改性环糊精往往只能拆分特定类别的对映体，针对性较强；再次，环糊精改性在引入立体作用基团的同时削弱了天然环糊精羟基的氢键作用，导致其对一些对映体的拆分能力减弱甚至消失。

发明内容

针对现有技术存在的以上问题，本发明提供一种新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法及其应用。本发明制备方法中将性能各异的天然或改性环糊精相结合，通过自下而上地在硅胶表面实现有序、可控地构建复式三唑桥联环糊精双分子层，以提高环糊精固定相的分离性能和分离通量，同时丰富环糊精固定相的结构设计。发展功能复合型环糊精手性固定相是解决目前环糊精固定相发展瓶颈的重要途径，对于实现手性对映体的高通量、高选择性拆分具有重要的意义。一方面，将不同环糊精及其衍生物结合，可以利用各自特殊的手性识别能力，有效提高固定相的分离通量；另一方面，通过功能桥构建环糊精双分子层，可以充分发挥双分子层间以及与桥链的协同作用，显著增强固定相的手性识别能力。高效、高选择性的点击化学接枝方法的出现为可控桥联复式环糊精的设计制备创造了条件，且三唑杂环能够提供氢键、π-π作用位点，有助于加强固定相的拆分能力。这种复式环糊精手性固定相结构如附图1所示，该类固定相由环糊精顶层、三唑桥和环糊精底层组成。

为了解决上述技术问题，本发明新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，其步骤如下：

步骤一、含叠氮基的单取代环糊精和含炔基的单取代环糊精的制备，包括：

1-1）叠氮环糊精的制备：水中加入单-6-对甲基苯磺酰基环糊精和叠氮化钠；所述单-6-对甲基苯磺酰基环糊精和叠氮化钠的摩尔比为1：0.5～1：5，于55～110℃反应10～30小时，然后将反应体系倒入丙酮中析出固体，用丙酮洗涤两次，即得到单-6-叠氮基环糊精；

1-2）炔基环糊精的制备：单-6-对甲基苯磺酰基环糊精与炔丙胺混合，每克单-6-对甲基苯磺酰基环糊精所需的炔丙胺为1～8mL，于40～100℃反应10～30小时，然后将反应体系倒入丙酮中析出固体，用丙酮洗涤两次，即得到单-6-N-炔丙基氨基环糊精；

步骤二、叠氮基环糊精硅胶衍生物的制备，包括：

2-1）叠氮基天然环糊精硅胶衍生物的制备：在有机溶剂中加入氢化钠和由步骤一得到的单-6-叠氮基环糊精，单-6-叠氮基环糊精与氢化钠的摩尔比为1：1～1：20，于室温条件下反应1～5小时，过滤，然后加入硅烷偶联剂于50～120℃条件下反应2～12小时，硅烷偶联剂与叠氮基环糊精的摩尔比为0.5：6，最后加入活化的微球型硅胶，每克微球型硅胶所需硅烷偶联剂的量为1～5mmol，在60～130℃下继续反应12～36小时，用砂芯漏斗过滤，依次用N,N-二甲基甲酰胺、水、乙醇和丙酮洗涤，所得的固体于真空干燥箱中40～80℃条件下干燥，即得叠氮基天然环糊精硅胶衍生物；

2-2）羟基改性叠氮环糊精硅胶衍生物的制备：在有机溶剂中加入苯基异氰酸酯和由步骤2-1）得到的叠氮基天然环糊精硅胶衍生物，每克叠氮基天然环糊精硅胶衍生物所需苯基异氰酸酯的量为0.1～2mmol，在50～120℃下反应8～24小时，用砂芯漏斗过滤，然后分别用吡啶和丙酮各洗涤两次，所得固体于真空干燥箱中40～80℃条件下干燥，即得改性叠氮环糊精硅胶衍生物；

步骤三、click chemistry反应制备三唑桥联复式环糊精固定相，包括：

3-1）催化剂的制备：将碘化亚铜和乙腈依次加入反应瓶中，再向溶液中加入三苯基膦的乙腈溶液，搅拌反应，过滤，用乙腈洗涤，真空干燥得到产物三苯基膦-碘化亚铜配合物，其中三苯基膦与碘化亚铜的摩尔比为1：1～1：2；

3-2）将催化剂、由步骤一得到的炔基环糊精、由步骤二得到的天然叠氮基环糊精硅胶衍生物和改性叠氮基环糊精硅胶衍生物中的一种加入N,N-二甲基甲酰胺中，所用天然叠氮基环糊精硅胶衍生物或改性叠氮基环糊精硅胶衍生物与炔基环糊精的质量比为1：0.1～1：3，炔基环糊精与催化剂摩尔比为1：0.1%～1：0.3%；在40～120℃条件下反应12～48小时，用砂芯漏斗过滤，依次用DMF，丙酮洗涤，所得的固体于真空干燥箱中40～80℃条件下干燥，即得新型三唑桥联复式环糊精手性固定相。

进一步讲，本发明新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，其中，步骤一所用的环糊精为α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精中的一种。

步骤二中，所用的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、甲苯和吡啶中的一种；每克微球型硅胶所用的有机溶剂的量为5～25mL。

步骤2-1）中，所用的硅烷偶联剂有如下结构：

其中，X为-OCH₃或-OCH₂CH₃或-Cl或-Br。

所用的微球型硅胶是全多孔或核壳结构硅胶小球，其粒径为2～40μm，其孔径为

步骤3-1）中，所用的催化剂为碘化亚铜与三苯基膦的配合物。

本发明新型三唑桥联复式环糊精手性固定相应用于各种色谱技术的药物手性拆分中，如：在反相色谱模式下对手性化合物的分离中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明通过功能桥构建环糊精双分子层，可以充分发挥双分子层间以及与桥链的协同作用，显著增强固定相的手性识别能力。是一类分离性能较好的色谱分离材料，可用于分离各类手性化合物。

与现有技术相比，本发明具有显著优点：（1）自下而上的双层环糊精体系在硅胶表面构建了网状结构，大大提高了被分离物质在此网状结构中的保留，各环糊精空腔及桥联臂可产生高度协同，显著提升了固定相的拆分通量；（2）键合反应选择性高，表面键合量大。由于点击化学的反应选择性和反应转化率都很高，在表面反应中表现出较大的优势，可以避免副反应的发生，能够很好地保持硅胶表面环糊精的结构和功能，同时提高表面反应效率；（3）制备过程简单，各步反应条件温和，有利于实现商品化；（4）三唑桥联复式环糊精手性固定相可在宽广的缓冲pH范围同时实现对氨基酸类双性化合物、酸性和中性消旋体药物的广谱高效拆分。

附图说明

图1为本发明新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的结构。

图2为本发明新型三唑桥联复式环糊精手性固定相制备方法示意图。

图3为本发明实施例1制备的环糊精固定相用于分离丹酰戊氨酸的色谱图。

图4为本发明实施例1制备的环糊精固定相用于分离丹酰苯丙氨色谱图。

图5为本发明实施例2制备的环糊精固定相用于分离托品酸的色谱图。

图6为本发明实施例4制备的环糊精固定相用于分离7-甲氧基黄烷酮的色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细地描述。

如图2所示，本发明新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，步骤如下：

1-1）叠氮环糊精的制备：水中加入单-6-对甲基苯磺酰基环糊精和叠氮化钠；所用的单-6-对甲基苯磺酰基环糊精可以是单-6-对甲基苯磺酰基-α-环糊精、单-6-对甲基苯磺酰基-β-环糊精和单-6-对甲基苯磺酰基-γ-环糊精中的一种，所述单-6-对甲基苯磺酰基环糊精和叠氮化钠的摩尔比为1：0.5～1：5，于55～110℃反应10～30小时，然后将反应体系倒入丙酮中析出固体，过滤后用丙酮洗涤两次，干燥处理即得到单-6-叠氮基环糊精；

所得叠氮环糊精的结构可表示为：

1-2）炔基环糊精的制备：单-6-对甲基苯磺酰基环糊精与炔丙胺混合，每克单-6-对甲基苯磺酰基环糊精所需的炔丙胺为1～8mL，于40～100℃反应10～30小时，然后将反应体系倒入丙酮中析出大量白色固体，过滤后用丙酮洗涤两次，干燥处理即得到单-6-N-炔丙基氨基环糊精；

所得炔基环糊精的结构可表示为：

上述所用单-6-对甲基苯磺酰基环糊精的制备属于现有技术，可参照公开号为CNCN102343258A的中国专利文献中记载的内容。

步骤二、叠氮基环糊精硅胶衍生物的制备，包括：

2-1）叠氮基天然环糊精硅胶衍生物的制备：在有机溶剂中加入氢化钠和由步骤一得到的单-6-叠氮基环糊精，单-6-叠氮基环糊精与氢化钠的摩尔比为1：1～1：20，于室温条件下反应1～5小时，过滤，然后加入硅烷偶联剂于50～120℃条件下反应2～10小时，硅烷偶联剂与叠氮基环糊精的摩尔比为0.5：6，最后加入活化的微球型硅胶，每克微球型硅胶所需硅烷偶联剂的量为1～5mmol，在60～130℃下继续反应12～36小时，用砂芯漏斗过滤，依次用N,N-二甲基甲酰胺、水、乙醇和丙酮洗涤，所得的固体于真空干燥箱中40～80℃条件下干燥，即得叠氮基天然环糊精硅胶衍生物；

该步反应可表示为：

其中m+n为12～16。

上述所用硅烷偶联剂有如下结构：

其中，X为-OCH₂CH₃或-OCH₃或-Cl或-Br。

上述所用的微球型硅胶是全多孔或核壳结构硅胶小球，微球型硅胶的粒径2～40μm，可选取2.0μm,3.0μm,5.0μm,7.0μm,10μm等，其孔径为

孔径可选取

上述有机溶剂可以选取吡啶、甲苯、二甲基亚砜、N,N-二甲基乙酰胺等。

2-2）羟基改性叠氮环糊精硅胶衍生物的制备：在有机溶剂中加入苯基异氰酸酯和由步骤2-1）得到的叠氮基天然环糊精硅胶衍生物，每克叠氮基天然环糊精硅胶衍生物所需苯基异氰酸酯的量为10～20mmol，在50～120℃下反应8～24小时，用砂芯漏斗过滤，然后分别用吡啶和丙酮各洗涤两次，所得固体于真空干燥箱中40～80℃条件下干燥，即得改性叠氮环糊精硅胶衍生物；其中的有机溶剂可以选取吡啶、四氢呋喃、二甲基亚砜、N,N-二甲基乙酰胺等。

步骤三、click chemistry（点击化学）反应制备三唑桥联复式环糊精固定相，包括：

3-2）点击反应：将催化剂、由步骤一得到的炔基环糊精、由步骤二得到的天然叠氮基环糊精硅胶衍生物和改性叠氮基环糊精硅胶衍生物中的一种加入N,N-二甲基甲酰胺中，所用天然叠氮基环糊精硅胶衍生物或改性叠氮基环糊精硅胶衍生物与炔基环糊精的质量比为1：0.1～1：3，炔基环糊精与催化剂摩尔比为1：0.1%～1：0.3%；在40～120℃条件下反应12～48小时，用砂芯漏斗过滤，依次用DMF，丙酮洗涤，所得的固体于真空干燥箱中40～80℃条件下干燥，即得新型三唑桥联复式环糊精手性固定相。

步骤3-2）所描述的点击反应可表示为:

其中m+n为12～16，R为-H或

本发明所述的固定相可有效地用于反相色谱模式下对手性化合物的分离。下面结合实例和附图，对本发明作进一步说明，而非对本发明的限定。

实施例1

在50mL三口瓶在氮气保护下，加入16mL炔丙胺，然后加入6g单-6-对甲基苯磺酰基-β-环糊精，90℃下加热回流24小时。氮气保护下冷却至室温，将反应体系倒入90mL乙腈中析出固体。固体再用乙腈洗涤两次，即得产品单-6-去氧-N-炔丙基氨基-β-环糊精。

在100mL三口瓶中加入50mL蒸馏水，然后加入5g单-6-对甲基苯磺酰基-β-环糊精，接着加入1.26g叠氮化钠，加热至85℃反应20小时。将反应体系倒入250mL丙酮中析出固体。固体再用丙酮洗涤两次，即得单-6-去氧-叠氮基-β-环糊精。

在100mL三口瓶中加入50mL无水DMF，然后加入1.74g单-6-去氧-叠氮基-β-环糊精，接着加入0.27g氢化钠（95%），搅拌反应至不再产生气泡，将反应体系过滤，滤液倒入100mL三口瓶中，加入0.9mL硅烷偶联剂，在90℃氮气保护条件下反应4小时，然后在反应体系中加入4g活化的硅胶，在110℃氮气保护条件下反应12小时,将反应体系抽滤，所的固体依次用DMF，水，乙醇，丙酮洗涤各洗涤一次，60℃下真空干燥12小时，即得叠氮基天然环糊精硅胶衍生物，其结构为：

在250mL三口瓶中加入1.38g三苯基膦，10mL乙腈,然后向反应体系中缓慢加入100mL的含碘化铜1.0g的乙腈溶液。在20～50℃反应1小时，过滤经乙腈洗涤，真空干燥得三苯基膦与碘化铜的配合物。

取2.3g叠氮基天然环糊精硅胶衍生物于50mL三口瓶中加入30mL无水DMF，0.6g单-6-去氧-N-炔丙基氨基-β-环糊精，然后加入9mgCuI(PPh₃)作为催化剂，90℃条件下反应24小时，依次用DMF，丙酮各洗涤两次，60℃下真空干燥12小时，即得产品，结构为:

实施例2

在5mL三口瓶在氮气保护下，加入16mL炔丙胺，然后加入6g单-6-对甲基苯磺酰基-β-环糊精，90℃下加热回流24小时。氮气保护下冷却至室温，将反应体系倒入90mL乙腈中析出固体。固体再用乙腈洗涤两次，即得产品单-6-去氧-N-炔丙基氨基-β-环糊精。

在10mL三口瓶中加入50mL蒸馏水，然后加入5g单-6-对甲基苯磺酰基-β-环糊精，接着加入1.26g叠氮化钠，加热至85℃反应20小时。将反应体系倒入25mL丙酮中析出固体。固体再用丙酮洗涤两次，即得单-6-去氧-叠氮基-β-环糊精。

在100mL三口瓶中加入5mL无水DMF，然后加入1.74g单-6-去氧-叠氮基-β-环糊精，接着加入0.27g氢化钠（95%），搅拌反应至不再产生气泡，将反应体系过滤，滤液倒入100mL三口瓶中，加入0.9mL硅烷偶联剂，在90℃氮气保护条件下反应4小时，然后在反应体系中加入4g活化的硅胶，在110℃氮气保护条件下反应12小时，将反应体系抽滤，所的固体依次用DMF，水，乙醇，丙酮洗涤各洗涤一次，60℃下真空干燥12小时，即得叠氮基天然环糊精硅胶衍生物，其结构为：

在250mL三口瓶中加入1.38g三苯基膦，10mL乙腈，然后向反应体系中缓慢加入100mL的含碘化铜1.0g的乙腈溶液。在20～50℃反应1小时，过滤经乙腈洗涤，真空干燥得三苯基膦与碘化铜的配合物。

取2.8g叠氮基天然环糊精硅胶衍生物于100mL三口瓶中加入65mL无水吡啶，6.95g苯基异氰酸酯，在85℃氮气保护条件下反应24小时，所的固体依次用吡啶和丙酮各洗涤两次，60℃下真空干燥12小时，即得叠氮基改性环糊精硅胶衍生物，其结构为：

其中R为

取2.3g叠氮基改性环糊精硅胶衍生物于50mL三口瓶中加入30mL无水DMF，0.6g单-6-去氧-N-炔丙基氨基-β-环糊精，然后加入9mg CuI(PPh₃)作为催化剂，90℃条件下反应24小时，依次用DMF，丙酮各洗涤两次，60℃下真空干燥12小时，即得产品，结构为:

其中R为

实施例3

与实施例1不同之处在于，在合成叠氮基环糊精时采用单-6-对甲基苯磺酰基-α-环糊精代替单-6-对甲基苯磺酰基-β-环糊精，按实施例1的合成步骤可得另外一种复式环糊精固定相，其结构为：

实施例4

与实施例1不同之处在于，在合成炔基环糊精时采用单-6-对甲基苯磺酰基-α-环糊精代替单-6-对甲基苯磺酰基-β-环糊精，按实施例1的合成步骤可得另外一种复式环糊精固定相，其结构为：

实施例5：

将实施例1～4中获得的三唑桥联复式环糊精-硅胶手性固定相进行色谱柱填充实验：

1.将空不锈钢色谱柱（

×150mm）一端密封，另一端与前置柱连接之后再将前置柱一端通过一个储罐于HPLC泵连接;

2.三唑桥联复式环糊精-硅胶手性固定相（其中硅胶粒径为3μm或5μm，孔径为

分散于甲醇中制备固定相浆料，将搅拌均匀的浆料加入上述储液罐中，开启高压填柱泵、将色谱柱施以5500psi的压力30min。

3.关闭HPLC泵，等系统压力降为零，取下填充好的色谱柱，两端封存。

色谱柱用于高效液相色谱进行药物手性拆分实验：

1.1%的三乙基醋酸铵（TEAA）缓冲液由1%三乙基胺水溶液配制而成，其pH值通过添加冰醋酸来调节，TEAA/ACN缓冲液通过添加不同体积比的1%TEAA和ACN来配置制，其它流动相按甲醇和水按一定体积比进行混合配制，所有缓冲溶液和流动相均现用现配，经过滤，并超声排除其中的空气。

2.将选定的消旋体化合物溶解于甲醇/水（50/50v/v）配制1mg·ml^-1标准溶液，采用同样的方法配制其他所有的消旋体溶液。

3.图3所用色谱条件为：流动相A为色谱纯乙腈，流动相B为1%醋酸三乙胺缓冲液（pH=5.5），流速为1.0mL·min^-1，温度为30℃。样品为丹酰戊氨酸，固定相为实施例1中制备。图4所用色谱条件为：流动相A为色谱纯甲醇，流动相B为1%醋酸三乙胺缓冲液（pH=6.5），流速为1.0mL·min^-1，温度为30℃。样品为丹酰苯丙氨酸，固定相为实施例1中制备。图5所用色谱条件为：流动相A为色谱纯乙腈，流动相B为1%醋酸三乙胺缓冲液（pH=6.5），流速为1.0mL·min^-1，温度为30℃。样品为托品酸，固定相为实施例2中制备。图6所用色谱条件为：流动相A为色谱纯乙腈，流动相B为超纯水，流速为1.0mL·min^-1，温度为30oC。样品为7-甲氧基黄烷酮，固定相为实施例4中制备。

综上，本发明是一种自下而上通过点击化学作为桥联反应的方法制备得到的复式环糊精键合固定相。首先将环糊精通过醚键接枝到硅胶表面，利用亲核取代、叠氮化反应将环糊精6位羟基转变为叠氮基团，而后通过Cu（I）催化的1，3-偶极环加成反应（点击化学）将合成的炔基环糊精固载到叠氮环糊精硅胶，经洗涤、干燥等处理阶段获得所需的复式环糊精固定相。所获得的固定相材料经红外光谱、固体核磁共振及元素分析等进行结构表征和表面固载量测定，通过匀浆法填充4.6×150mm不锈钢柱，以高效液相色谱反相分离模式考察了固定相对不同手性对映体的拆分能力。本发明所提供的工艺能够制备出结构稳定、适用性广、表面键合度高的液相色谱分离材料。

尽管上面结合图对本发明进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨的情况下，还可以作出很多变形，这些均属于本发明的保护之内。

Claims

1.一种新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，其特征在于，按如下步骤制备：

步骤二、叠氮基环糊精硅胶衍生物的制备，包括：

2-2）羟基改性叠氮环糊精硅胶衍生物的制备：在有机溶剂中加入苯基异氰酸酯和由步骤2-1）得到的叠氮基天然环糊精硅胶衍生物，每克叠氮基天然环糊精硅胶衍生物所需苯基异氰酸酯的量为10～20mmol，在50～120℃下反应8～24小时，用砂芯漏斗过滤，然后分别用吡啶和丙酮各洗涤两次，所得固体于真空干燥箱中40～80℃条件下干燥，即得改性叠氮环糊精硅胶衍生物；

3-2）将催化剂、由步骤一得到的炔基环糊精、由步骤二得到的天然叠氮基环糊精硅胶衍生物和改性叠氮基环糊精硅胶衍生物中的一种加入N,N-二甲基甲酰胺中，所用天然叠氮基环糊精硅胶衍生物或改性叠氮基环糊精硅胶衍生物与炔基环糊精的质量比为1：0.1～1：3，炔基环糊精与催化剂摩尔比为1：0.1%～1：0.3%；在40～120℃条件下反应12～48小时，用砂芯漏斗过滤，依次用N,N-二甲基甲酰胺，丙酮洗涤，所得的固体于真空干燥箱中40～80℃条件下干燥，即得新型三唑桥联复式环糊精手性固定相。

2.按照权利要求1所述新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，其中，步骤一所用的单-6-对甲基苯磺酰基环糊精为单-6-对甲基苯磺酰基-α-环糊精、单-6-对甲基苯磺酰基-β-环糊精和单-6-对甲基苯磺酰基-γ-环糊精中的一种。

3.按照权利要求1所述新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，其中，步骤二中所用的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、甲苯和吡啶中的一种；每克微球型硅胶所用的有机溶剂的量为5～25mL。

4.按照权利要求1所述新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，其中，步骤2-1）中，所用的硅烷偶联剂有如下结构：

其中，X为-OCH₃或-OCH₂CH₃或-Cl或-Br。

5.按照权利要求1所述新型三唑桥联复式环糊精手性固定相的制备方法，其中，步骤2-1）中，所用的微球型硅胶是全多孔或核壳结构硅胶小球，其粒径为2～40μm，其孔径为

6.一种根据权利要求1所述新型三唑桥联复式环糊精手性固定相在反相色谱模式下对手性化合物的分离中的应用。