CN103463108A - Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的应用。经实验研究结果表明Phyllanthoid A对尿酸盐致人血管内皮细胞损伤的急性痛风模型具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，本发明涉及的Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，而且其对于急性痛风的防治活性强，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。

Description

Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的应用

技术领域

本发明涉及化合物Phyllanthoid A的新用途，尤其涉及Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的应用。 

背景技术

痛风（gouty），又称痛风性关节炎（gouty arthritis），是体内嘌呤代谢紊乱所致的疾病，表现为血中尿酸过多，易于使尿酸盐（MSU）在关节等组织析出结晶。痛风的急性发作是由于沉积在关节的MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎性反应。 

本发明涉及的化合物Phyllanthoid A是一个2013年发表（Jian-Qiang Zhao,et al.,Two New Highly Oxygenated and Rearranged Limonoids from Phyllanthus cochinchinensis.Organic Letters，2013,15（10）2414–2417.）的新化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅抑制乳腺癌细胞增值（Jian-Qiang Zhao,et al.,Two New Highly Oxygenated and Rearranged Limonoids from Phyllanthus cochinchinensis.Organic Letters，2013,15（10）2414–2417.），本发明涉及的Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开。 

发明内容

本发明用MSU致人血管内皮细胞（HUVEC）损伤的急性痛风模型评价显示，对MSU致HUVEC损伤具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，可用于制备治疗急性痛风炎症药物。本发明的目的在于提供Phyllanthoid A在医学中的新用途，具体地说是涉及Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的应用。 

本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的： 

本发明提出Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的应用。从药理实验看出，Phyllanthoid A有较好的治疗急性痛风的作用。由于本发明首次公开Phyllanthoid A在治疗急性痛风方面的药理作用。 

所述化合物Phyllanthoid A结构如式（Ⅰ）所示： 

研究结果表明，用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，Phyllanthoid A可保护MSU致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风炎症的活性，Phyllanthoid A可用于制备治疗急性痛风炎症药物。 

本发明涉及的Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。 

具体实施方式

本发明所涉及化合物Phyllanthoid A的制备方法参见文献（Jian-Qiang Zhao,et al.,Two New Highly Oxygenated and Rearranged Limonoids from Phyllanthus cochinchinensis.Organic Letters，2013,15（10）2414–2417.） 

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。 

实施例1：本发明所涉及化合物Phyllanthoid A片剂的制备： 

取5克化合物Phyllanthoid A，加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。 

实施例2：本发明所涉及化合物Phyllanthoid A胶囊剂的制备： 

取5克化合物Phyllanthoid A，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。 

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。 

实验例1：Phyllanthoid A抗急性痛风炎症实验： 

1:方法 

①溶液配制 

5g尿酸加1000ml蒸馏水煮沸，加5%NaOH溶液调PH7.4，搅拌，冷却析晶制成尿酸钠结晶（MSU）。将制好的MSU 10mg高压灭菌，加不含血清的DMEM培养液10ml，研磨配成1mg/ml 的DMEM溶液。实验时，此溶液再加DMEM培养液配成不同浓度DMEM的MSU溶液。 

Phyllanthoid A2.5mg，用二甲基亚砜（DMSO）溶解，DMSO终浓度<0.02%，再加无血清的DMEM培养液，配制成浓度2.5ug/ml、25ug/ml、250ug/ml。 

阳性药吲哚美辛2.0mg，方法同Phyllanthoid A，配制浓度20ug/ml。 

②血管内皮细胞的体外培养 

人脐静脉血管内皮细胞HUVEC株，由南京中医药大学基础医学院提供，细胞经支原体检测，无支原体污染，细胞经0.25%胰蛋白酶消化，含10%小牛血清的DMEM培养液中和，离心（1000r/min×6min），去上清液，加含10%小牛血清的DMEM培养液，移入细胞培养瓶中，放37℃、5%CO₂培养箱中传代培养。 

③对MSU刺激HUVEC活力的影响 

HUVEC在培养瓶中培养，待生长至70%～80%融合时，以0.25%胰蛋白酶消化、离心，10%小牛血清DMEM培养液洗涤3次，用10%小牛血清DMEM培养液调成4×10₄/ml细胞悬液，植入96孔板（每孔200ul），培养24小时后轻吸出原培养液，进行以下实验，每组各8孔，具体分组及加液如下：对照组（200ulDMEM培养液）、模型组（100ug/ml MSU溶液）、干预A组（100ug/ml MSU溶液+2.5ug/ml Phyllanthoid A）、干预B组（100ug/ml MSU溶液+25ug/mlPhyllanthoid A）、干预C组（100ug/ml MSU溶液+250ug/ml Phyllanthoid A），加液后继续放37℃、5%CO₂培养箱中培养24小时，收集上清液，剩余的HUVEC用于测定细胞活性，每孔再加5mg/ml MTT液20ul，继续放37℃、5%CO₂培养箱中培养4小时后，弃MTT液，加入二甲基亚砜200ul溶解，震荡，于酶标仪读取吸光度值，波长490nm。 

阳性药组加液（100ug/ml MSU溶液+20ug/ml吲哚美辛），其他方法同上。 

数据统计学处理，细胞活力（%）=实验组吸光度值/对照组吸光度值×100%，结果见表1。 

与对照组相比，模型组细胞活力显著减小（P<0.01，P<0.05），阳性药吲哚美辛及Phyllanthoid A干预后细胞活力显著提高（P<0.01，P<0.05），并强于对照组，其中，Phyllanthoid A各浓度组的细胞活力强于阳性药吲哚美辛。 

表1 Phyllanthoid A对MSU刺激的血管内皮细胞活力的影响（X±s） 

与模型组比较，^**P<0.01^*P<0.05，与对照组比较，^##P<0.01^#P<0.05 

④对ICAM-1表达影响 

将处于对数生长期的HUVEC用0.25%的胰蛋白酶消化，轻轻吹打，制成细胞悬液，调整细胞密度为5×10⁹/L，接种于细胞培养瓶中。待细胞长满后（约24h），弃去上清液，分为下列组：对照组、模型组（100ug/ml MSU溶液）、Phyllanthoid A组（100ug/ml MSU溶液+25ug/ml Phyllanthoid A），继续培养24小时，PBS收集细胞，离心去上清，加入CD54单克隆抗体，30min后，PBS洗涤，重悬细胞，应用流式细胞仪检测其阳性细胞百分率（n=10000），重复3次，结果见表2。 

表2 Phyllanthoid A对MSU刺激的血管内皮细胞ICAM-1表达的影响（X±s） 

与模型组比较，^**P<0.01^*P<0.05，与对照组比较，^##P<0.01^#P<0.05 

2、结果结果显示，空白组HUVEC几乎无ICAM-1表达，模型组ICAM-1的表达最高，与模型组相比，Phyllanthoid A对ICAM-1的表达有较强的抑制作用。 

结论：用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，Phyllanthoid A可保护MSU致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风炎症的活性，Phyllanthoid A可用于制备治疗急性痛风炎症药物。 

Claims (1)

1.Phyllanthoid A在制备治疗急性痛风药物中的应用，所述化合物PhyllanthoidA结构如式（Ⅰ）所示：