CN102988384A

CN102988384A - Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的应用

Info

Publication number: CN102988384A
Application number: CN2012104687875A
Authority: CN
Inventors: 何晓涛
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-11-19
Filing date: 2012-11-19
Publication date: 2013-03-27

Abstract

本发明提供了Houttuynoid C在医学中的新用途，具体地说是Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的应用。经实验研究结果表明Houttuynoid C对尿酸盐致人血管内皮细胞损伤的急性痛风模型具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，因此，Houttuynoid C可用于制备治疗急性痛风炎症药物。本发明涉及的Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。

Description

Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的应用

技术领域

本发明涉及Houttuynoid C在医学中的新用途，具体地说是涉及Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的应用。

背景技术

痛风（gouty），又称痛风性关节炎（gouty arthritis），是体内嘌呤代谢紊乱所致的疾病，表现为血中尿酸过多，易于使尿酸盐（MSU）在关节等组织析出结晶。痛风的急性发作是由于沉积在关节的MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎性反应。

西药在痛风急性发作期选用三种药：秋水仙碱、非甾体抗炎药和肾上腺皮质激素。秋水仙碱的作用机制是与中性粒细胞的微管蛋白结合，从而妨碍粒细胞的活动，抑制粒细胞浸润。非甾体抗炎药如吲哚美辛，抑制环氧酶（COX）活性而发挥抗炎作用，以及选择性COX2抑制药。它们虽然消炎止痛作用快，但毒副作用也相当明显，如秋水仙碱的有效剂量与产生腹泻等胃肠道症状的剂量相近，非甾体抗炎药在有活动性消化性溃疡、胃肠道出血情况下绝对禁用，而保泰松用药短至3周也可致严重的粒细胞减少症或再生障碍性贫血。

本发明涉及的化合物Houttuynoid C是一个2012年发表（Cai, J. Y. et al., 2012. Houttuynoid C, a Potent Defensive Limonoid, with a New Carbon Skeleton from Aphanamixis polystachya. Organic Letters 14 (10), 2524–2527.）的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及DEF（Cai, J. Y. et al., 2012. Houttuynoid C, a Potent Defensive Limonoid, with a New Carbon Skeleton from Aphanamixis polystachya. Organic Letters 14 (10), 2524–2527.），对于本发明涉及的Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。

发明内容

本发明用MSU致人血管内皮细胞（HUVEC）损伤的急性痛风模型评价显示，对MSU致HUVEC损伤具有保护作用，并抑制ICAM-1表达，可用于制备治疗急性痛风炎症药物。本发明的目的在于提供Houttuynoid C在医学中的新用途，具体地说是涉及Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的应用。

本发明的目的是通过以下的技术方案来实现的：

现代医学病理研究说明，痛风性关节炎是MSU引起中性粒细胞局部浸润和炎性反应，急性痛风产生的本质是中性粒细胞（PMN）-血管内皮细胞（HUVEC）黏连增强（Terkeltaub R，et al. The murine homolog of the interleukin-8 receptorcxcr-2 is essential for the occurrence of neutrophilic inflammation in air pouch model of acute urate crystal-induced gouty synovitis.Arthritis Rheum,1998,41(5): 900-909.），HUVEC损伤，其分子生物学基础在于PMN与HUVEC表面黏附分子的相互作用（FujiwaraY,et al.Interleukin-8 stimulates leukocyte migration across amonolayer of cultured rabbit NF-α,IL-1β,IL-8,and IL-1 rain Monosodium Urate Crystal induced rabbit arthritis. Labinvest,19998,78(5): 559-569.），其中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）与粘附功能关系最密切，是急性痛风炎症的重要指标之一（张春，唐怡，刘军，等. 痛风灵方对尿酸钠致大鼠模型关节软组织ICAM-1表达的影响，重庆医学，2002,31（12）：1211-1213.）。

因此，针对急性痛风MSU致HUVEC损伤，ICAM-1表达增多的病理特征，本发明用MSU致HUVEC损伤的体外急性痛风模型（杨妍华，尹莲，王明艳，等.尿酸钠诱导HUVEC损伤的急性痛风模型研究，中华中医药学刊，2010,28（3）：592-594.），评价Houttuynoid C抗急性痛风炎症活性。MSU致人血管内皮细胞（HUVEC）损伤的急性痛风模型评价显示，对MSU致HUVEC损伤具有保护作用，并抑制ICAM-1表达。

所述化合物Houttuynoid C结构如式（Ⅰ）所示：

有益效果

研究结果表明，用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，Houttuynoid C可保护MSU致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风炎症的活性，Houttuynoid C可用于制备治疗急性痛风炎症药物。

本发明涉及的Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于急性痛风的防治活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于急性痛风的防治显然具有显著的进步。

具体实施方式

本发明所涉及化合物Houttuynoid C的制备方法参见文献（Cai, J. Y. et al., 2012. Houttuynoid C, a Potent Defensive Limonoid, with a New Carbon Skeleton from Aphanamixis polystachya. Organic Letters 14 (10), 2524–2527.）。

以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

实施例1：本发明所涉及化合物Houttuynoid C片剂的制备：

取20克化合物Houttuynoid C，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。

实施例2：本发明所涉及化合物Houttuynoid C胶囊剂的制备：

取20克化合物Houttuynoid C，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。

下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。

Houttuynoid C抗急性痛风炎症实验：

1 溶液配制

5g尿酸加1000ml蒸馏水煮沸，加5%NaOH溶液调PH 7.4，搅拌，冷却析晶制成尿酸钠结晶（MSU）。将制好的MSU 10mg高压灭菌，加不含血清的DMEM培养液10ml，研磨配成1mg/ml的DMEM溶液。实验时，此溶液再加DMEM培养液配成不同浓度DMEM的MSU 溶液。

Houttuynoid C 2.5mg，用二甲基亚砜（DMSO）溶解，DMSO终浓度<0.02%，再加无血清的DMEM培养液，配制成浓度2.5ug/ml、25ug/ml、250ug/ml。

阳性药吲哚美辛2.0mg，方法同Houttuynoid C，配制浓度20ug/ml。

2 血管内皮细胞的体外培养

人脐静脉血管内皮细胞HUVEC株由南京中医药大学基础医学院提供，细胞经支原体检测，无支原体污染，细胞经0.25%胰蛋白酶消化，含10%小牛血清的DMEM培养液中和，离心（1000r/min×6min），去上清液，加含10%小牛血清的DMEM培养液，移入细胞培养瓶中，放37℃、5%CO₂培养箱中传代培养。

3 对MSU刺激HUVEC活力的影响

HUVEC在培养瓶中培养，待生长至70%~80%融合时，以0.25%胰蛋白酶消化、离心，10%小牛血清DMEM培养液洗涤3次，用10%小牛血清DMEM培养液调成4×10⁴/ml细胞悬液，植入96孔板（每孔200ul），培养24小时后轻吸出原培养液，进行以下实验，每组各8孔，具体分组及加液如下：对照组（200ulDMEM培养液）、模型组（100ug/ml MSU溶液）、干预A组（100ug/ml MSU溶液+2.5ug/ml Houttuynoid C）、干预B组（100ug/ml MSU溶液+25ug/ml Houttuynoid C）、干预C组（100ug/ml MSU溶液+250ug/ml Houttuynoid C），加液后继续放37℃、5%CO₂培养箱中培养24小时，收集上清液，剩余的HUVEC用于测定细胞活性，每孔再加5mg/ml MTT液20ul，继续放37℃、5%CO₂培养箱中培养4小时后，弃MTT液，加入二甲基亚砜200ul溶解，震荡，于酶标仪读取吸光度值，波长490nm。

阳性药组加液（100ug/ml MSU溶液+20ug/ml吲哚美辛），其他方法同上。

数据统计学处理，细胞活力（%）=实验组吸光度值/对照组吸光度值×100%，结果见表1。

与对照组相比，模型组细胞活力显著减小（P<0.01，P<0.05），阳性药吲哚美辛及Houttuynoid C干预后细胞活力显著提高（P<0.01，P<0.05），并强于对照组，其中，Houttuynoid C各浓度组的细胞活力强于阳性药吲哚美辛。

表1 Houttuynoid C对MSU刺激的血管内皮细胞活力的影响（）

注：与模型组相比，**P<0.01；与对照组相比，^△△P<0.01，^△P<0.05

4 对ICAM-1表达影响

将处于对数生长期的HUVEC用0.25%的胰蛋白酶消化，轻轻吹打，制成细胞悬液，调整细胞密度为5×10⁹/L，接种于细胞培养瓶中。待细胞长满后（约24h），弃去上清液，分为下列组：对照组、模型组（100ug/ml MSU溶液）、Houttuynoid C组（100ug/ml MSU溶液+25ug/ml Houttuynoid C），继续培养24小时，PBS收集细胞，离心去上清，加入CD54单克隆抗体，30min后，PBS洗涤，重悬细胞，应用流式细胞仪检测其阳性细胞百分率（n=10000），重复3次，结果见表2。

表2 Houttuynoid C对MSU刺激的血管内皮细胞ICAM-1表达的影响（

）

结果显示，空白组HUVEC几乎无ICAM-1表达，模型组ICAM-1的表达最高，与模型组相比，Houttuynoid C对ICAM-1的表达有较强的抑制作用。

结论：用MSU致HUVEC损伤的急性痛风模型评价显示，Houttuynoid C可保护MSU 致HUVEC损伤，减少细胞凋亡，提高细胞活性，抑制ICAM-1表达，具有抗急性痛风炎症的活性，Houttuynoid C可用于制备治疗急性痛风炎症药物。

Claims

1.Houttuynoid C在制备治疗急性痛风药物中的应用，所述化合物Houttuynoid C结构如式（Ⅰ）所示：

式（Ⅰ）。