CN103450301A - 法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物、其制备方法及其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一类法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物及其药学上可接受的盐，具有下述通式Ⅰ的结构：
通式Ⅰ中：X=H，F，Cl或Br；R1代表H、OH、OAc、SH、-OP(O)(OH)2、-OPO3HNa、-OP(O)(ONa)2、-OPO3HK或-OP(O)(OK)2；R2代表H、OH、OAc或OCH3；R3代表H、OH、F、CN、OAc或OCH3；R4代表H、OH、F、CN、OAc或OCH3。本发明还提供了上述法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物及其药学上可接受的盐的制备方法以及含有这些衍生物的药用组合物以及它们的医药用途，特别是在制备抗肿瘤药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一类法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物及其药学上可接受的盐，它们的制备方法，含有这些衍生物的药用组合物以及它们的医药用途，特别是在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
全反式法尼基硫代水杨酸（简称：FTA，商品名：Salirasib）是第一个基于法尼基的Ras蛋白抑制剂，能够竞争性取代F-Ras和F-Ras突变蛋白与半乳凝素结合，抑制由Ras引发下游信号通路(包括Raf和P13K信号通路)和mTOR(肿瘤发生的刺激器，它能够依靠或者独立地打开P13K信号通路)，从而促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞的生长。然而，FTA虽已处于Ⅱ期临床研究，但由于其无法强有力地阻止及逆转恶性肿瘤发展进程，且临床治疗效果不高，使用剂量大，临床上通常需要和其他具有细胞毒作用的抗肿瘤药联合治疗。
法尼基硫代水杨酸(FTA，Salirasib)。
核苷和脱氧核苷是由核苷碱基分别和核糖或脱氧核糖以苷键形式而构成的，它们是组成核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)的基本元件，是遗传基因的基础。核苷和脱氧核苷系列衍生物具有多种生物活性物质，可以直接或间接地作为药物使用，在治疗多种重大的疾病方面起到极其重要的作用。然而已知核苷类药物多为亲水性药物，通常需要借助一些细胞膜上的核苷转运体(nucleoside transporter，NT)作用，才能穿透细胞膜，到达作用靶标。尤其在耐药的肿瘤细胞膜上，NT数量减少，且发生突变，愈加阻碍了药物进入细胞膜（Hubeek I，Stam RW，Peters GJ，et al.British Journal of Cancer，2005，93，1388-1394）。
临床研究表明，FTA与干扰肿瘤DNA合成的核苷类药物吉西他滨联合用药，可明显促进肿瘤细胞凋亡，抑制恶性肿瘤的生长，延长癌症患者的生存期，并可提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性（Laheru D，Shah P，Rajeshkumar NV，et al.Invest New Drugs.2012，30(6):2391-2399）。然而联合用药使患者承受的副作用加大，并且增加了多个药物多次服药的负担。
发明内容
本发明将法尼基硫代水杨酸的法尼基长链烷烃通过羧基与嘧啶核苷上N4位氨基进行酰胺化，拟设计、合成法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物，旨在提高法尼基硫代水杨酸的Ras及下游通路的抑制活性，促进肿瘤细胞凋亡，同时，由于提高了核苷类片段的亲脂性，使其被动扩散进入细胞(不依赖核苷转运体)，抑制肿瘤DNA合成的相关酶，可进一步实现多重作用的抗肿瘤效果，并可能防止脱氨酶的降解，提高生物利用度，降低肿瘤细胞对核苷类药物的耐药性。
本发明首次公开了一类法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物及其药学上可接受的盐、其制备方法及其医药用途。本发明公开的化合物是通式I所示的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物及其药学上可接受的盐：
通式Ⅰ中：X=H，F，Cl或Br；
R1代表H、OH、OAc、SH、-OP(O)(OH)2、-OPO3HNa、-OP(O)(ONa)2、-OPO3HK或-OP(O)(OK)2；
R2代表H、OH、OAc或OCH3；
R3代表H、OH、F、CN、OAc或OCH3；
R4代表H、OH、F、CN、OAc或OCH3；
上述通式Ⅰ的结构优选X、R1、R2、R3、R4如下组合，如表1所示，
X=H，R1=OH，R2=OH，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OH，R2=OH，R3=H，R4=OH；
或者X=H，R1=OH，R2=OH，R3=H，R4=CN；
或者X=F，R1=H，R2=OH，R3=OH，R4=H；
或者X=H，R1=OH，R2=H，R3=H，R4=OH；
或者X=H，R1=OH，R2=OCH3，R3=F，R4=F；
或者X=Cl，R1=H，R2=OCH3，R3=OCH3，R4=H；
或者X=H，R1=OPO3HNa，R2=OH，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OP(O)(OH)2，R2=OH，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OPO3HK，R2=OH，R3=H，R4=OH；
或者X=H，R1=OP(O)(ONa)2，R2=OH，R3=H，R4=CN；
或者X=H，R1=OAc，R2=OH，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OAc，R2=OAc，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OAc，R2=OH，R3=H，R4=OH；
或者X=H，R1=OAc，R2=OAc，R3=H，R4=OAc；
或者X=H，R1=OAc，R2=OH，R3=H，R4=CN。
表1通式I优选化合物
本发明的另一目的在于提供本发明通式Ⅰ所述化合物的制备方法。
通式Ⅰ所示法尼基硫代水杨酸衍生物的合成路线如下所示：
其中，X=H，F，Cl或Br；
R1代表H或SH；
R2代表H或OCH3；
R3代表H、F、CN或OCH3；
R4代表H、F、CN或OCH3；
将法尼基硫代水杨酸在酰氯化试剂的作用下，制备法尼基硫代水杨酸酰氯，优选酰氯试剂为氯化亚砜或草酰氯，反应条件为酰氯化反应常规使用的条件，优选25-55℃反应时间1-5小时，再将法尼基硫代水杨酸酰氯与化合物1在含有缚酸剂的二氯甲烷溶液中反应得到化合物4，反应条件优选-5-0℃或室温反应1-2小时，优选缚酸剂为三乙胺、碳酸钾、碳酸钠或4-二甲氨基吡啶；
或者，将法尼基硫代水杨酸和化合物1在缩合剂和有机碱性试剂作用下，缩合制得化合物4，优选缩合剂为苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐、1，3-二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N-二异丙基碳二亚胺或者氯甲酸乙酯或甲酯，优选有机碱性试剂为咪唑、4-二甲氨基吡啶、1-羟基苯并三唑或者N-甲基吗啉，优选反应条件为-5-0℃或室温反应2-12小时。
本发明还提供了一种法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐的制备方法，当核苷片段中R1、R2、R3或R4中的一个或多个基团为羟基时，需要对羟基进行保护以及脱保护，具体合成路线如下所示：
其中，X=H，F，Cl或Br；
R1代表H、OH或SH；
R2代表H、OH、OCH3；
R3代表H、OH、F、CN、OCH3；
R4代表H、OH、F、CN、OCH3；
且R1，R2，R3，R4中至少有一个基团为OH，
当R1基团不是OH时，R1’=R1；当R1基团是OH时，R1’为羟基保护基团；
当R2基团不是OH时，R2’=R2；当R2基团是OH时，R2’为羟基保护基团；
当R3基团不是OH时，R3’=R3；当R3基团是OH时，R3’为羟基保护基团；
当R4基团不是OH时，R4’=R4；当R4基团是OH时，R4’为羟基保护基团；
所述羟基保护基团为-OTBDMS、-OTMS或者-OBoc；
步骤包括：
a.将化合物1结构中含有羟基的基团通过羟基保护剂和碱性试剂作用下得到化合物2，优选羟基保护剂为叔丁基二甲基氯硅烷、三甲基氯硅烷或者二碳酸二叔丁酯，反应条件为常规条件，优选室温，反应10小时；
b.将法尼基硫代水杨酸在酰氯化试剂的作用下，制备法尼基硫代水杨酸酰氯，优选酰氯试剂为氯化亚砜或草酰氯，反应条件为酰氯化反应常规使用的条件，优选25-55℃反应时间1-5小时，再将法尼基硫代水杨酸酰氯与化合物2在含有缚酸剂的二氯甲烷溶液中反应得到化合物3，反应条件优选室温反应1-12小时，优选缚酸剂为三乙胺、碳酸钾、碳酸钠或4-二甲氨基吡啶；
或者，将法尼基硫代水杨酸和化合物2在缩合剂和有机碱性试剂作用下，缩合制得化合物3，优选缩合剂为苯并三氮唑-N，N，N'，N'-四甲基脲六氟磷酸盐、1，3-二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N，N-二异丙基碳二亚胺或者氯甲酸乙酯或甲酯，优选有机碱性试剂为咪唑、4-二甲氨基吡啶、1-羟基苯并三唑或者N-甲基吗啉，优选反应条件为-5-0℃或室温反应2-12h；
c.将化合物3在脱保护基试剂作用下，制得化合物4，优选脱保护剂为四丁基氟化铵、三氟乙酸或者含氯化氢的乙酸乙酯或二氧六环溶液，优选室温反应3-5h。
上述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐的制备方法，还可以在步骤c之后增加步骤d：对于化合物4中R1为羟基的情况下，可以再与膦酰化试剂，优选三氯化磷，或者乙酰化试剂反应，优选乙酰氯或乙酸酐，使得化合物4中R1羟基选择性地膦酰化或乙酰化，得到化合物5，合成路线如下所示：
其中，X=H，F，Cl或Br；
R1代表OH；
R2代表H、OH或OCH3；
R3代表H、OH、F、CN或OCH3；
R4代表H、OH、F、CN或OCH3；
且R1，R2，R3，R4中至少有一个基团为OH；
R1”代表OAc、-OP(O)(OH)2、-OPO3HNa、-OP(O)(ONa)2、-OPO3HK或-OP(O)(OK)2。上述膦酰化或乙酰化反应为本领域常规采用的反应条件，优选在冰浴中滴加膦酰化或乙酰化试剂，滴完后在室温下反应2小时，更优选在三乙胺的二氯甲烷中，冰浴下缓慢滴加三氯氧磷或乙酰氯，滴完后回到室温，并加热回流2小时。乙酰化反应更优选在反应结束后进行硅胶硅胶柱层析纯化（流动相AE:PE=1:2-3:1）。
上述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐的制备方法，还可以在步骤c之后增加步骤e：对于化合物4中的羟基进行乙酰化反应，得到化合物6，合成路线如下所示：
其中，X=H，F，Cl或Br；
R1代表H、OH或SH；
R2代表H、OH或OCH3；
R3代表H、OH、F、CN或OCH3；
R4代表H、OH、F、CN或OCH3；
且R2，R3，R4中至少有一个基团为OH；
当R1基团不是OH时，R1”=R1；当R1基团是OH时，R1”=OAc；
当R2基团不是OH时，R2”=R2；当R2基团是OH时，R2”=OAc；
当R3基团不是OH时，R3”=R3；当R3基团是OH时，R3”=OAc；
当R4基团不是OH时，R4”=R4；当R4基团是OH时，R4”=OAc；
上述乙酰化反应为本领域常规采用的反应条件，优选在冰浴中滴加乙酰化试剂，滴完后在室温下反应2小时，更优选在三乙胺的二氯甲烷中，冰浴下缓慢滴加或乙酰氯，滴完后回到室温，并加热回流2小时，更优选在反应结束后进行硅胶柱层析纯化（流动相AE:PE=1:2-3:1）。
本发明的再一目的是提供本发明通式I化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
本发明的进一步目的在于提供一种含有效剂量的本发明通式I化合物或其医学上可接受的盐及药学上可接受的载体或辅料的药物组合物。
本发明的再一目的是提供本发明通式I化合物在制备抗肿瘤药物和神经保护药物中的应用，尤其是治疗肝癌，胰腺癌，肺癌，乳腺癌，脑癌，结肠癌及胃癌等肿瘤药物中的应用。
本发明化合物可以单独或与一种或一种以上的药学上可接受的载体组合制成制剂以供给药。例如，溶剂、稀释剂等，可以用口服剂型给药，如片剂、胶囊、可分散粉末、颗粒剂等。本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。这些药用制剂中可以含有与载体组合的例如0.05%～90%重量的活性成分，更常见约15%～60%之间重量的活性成分。本发明化合物剂量可以是0.005～5000mg/kg/天，也可根据疾病严重程度或剂型的不同使用剂量超出此剂量范围。
本发明化合物可以与其他抗肿瘤药物例如烷化剂（如环磷酰胺或顺铂）、抗代谢药（如5-氟尿嘧啶或羟基脲）、拓扑异构酶抑制剂（如喜树碱）、有丝分裂抑制剂（如紫杉醇或长春碱）、DNA插入剂（如阿霉素）联合应用，另外还可以与放射治疗联合应用。这些其他抗肿瘤药物或放射治疗可以与本发明化合物同时或在不同时间给予。这些联合治疗可以产生协同作用从而有助于改善治疗效果。
本发明化合物的部分药理试验结果如下：
1、采用MTT法对本发明化合物的肿瘤细胞增殖抑制率测定研究
经过一系列肿瘤细胞测试，发现这些本发明通式I化合物对大部分肿瘤细胞增殖抑制作用较强，且显著比先导化合物FTA强3-10倍左右，尤其表2中所有I化合物在25μmol/L浓度下抑制率均大于80%，均远远超过先导物FTA；
药理实验结果表明，本发明化合物对人肿瘤细胞的增殖具有较强程度的抑制作用，大部分化合物抗肿瘤活性均显著强于FTA。
表2本发明化合物对部分肿瘤细胞增殖的抑制率%(25和5μM)
ND:未检测.
2、采用流式细胞仪进行检测细胞凋亡率，选择本发明通式I化合物进行测试，结果发现通式I化合物在25μmol/L浓度下对人胰腺癌PANC-1、人乳腺癌MDA-MB-231和人急性成淋巴细胞性白血病细胞CCRF-CEM中具有较强地促进肿瘤细胞凋亡作用，凋亡率可达到66-85%，且显著比先导化合物FTA在相同浓度下凋亡作用强4-8倍左右。这一结果说明通式I化合物能够显著诱导肿瘤细胞的凋亡，从而实现特异性杀伤肿瘤细胞的效果。
表3本发明化合物对部分肿瘤细胞的凋亡率%(25μM)
| Compounds | PANC-1 | MDA-MB-231 | CCRF-CEM |
| FTA | 18.35 | 13.72 | 10.14 |
| I1 | 78.33 | 78.85 | 83.17 |
| I2 | 81.02 | 79.93 | 85.70 |
| I3 | 79.55 | 76.42 | 82.03 |
| I4 | 71.68 | 76.55 | 78.84 |
| I5 | 66.87 | 67.02 | 73.20 |
| I6 | 73.56 | 69.11 | 75.14 |
| I7 | 66.46 | 65.81 | 70.15 |
| I8 | 77.05 | 76.05 | 80.92 |
| I9 | 82.13 | 79.59 | 83.69 |
| I10 | 77.24 | 76.08 | 76.87 |
| I11 | 80.25 | 76.72 | 82.15 |
| I12 | 79.75 | 77.18 | 82.02 |
| I13 | 70.80 | 73.52 | 76.13 |
| I14 | 77.83 | 78.22 | 78.44 |
| I15 | 68.40 | 65.96 | 69.54 |
| I16 | 72.56 | 73.06 | 77.56 |
具体实施方式
为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。本发明所用FTA为实验室自制（参照文献Marciano D，Ben-Baruch G，Marom M，et al.J Med Chem199538，1267公开的方法制备），含量>98％。
实施例1N-(1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I1)的制备
4-氨基-1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-(叔丁基二甲基硅氧基)-5-(叔丁基二甲基硅氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(2a)的制备
将吉西他滨(1a)（108mg，0.41mmol）溶于20mL干燥的DMF溶液中，加入TBDMS-Cl（247mg，1.64mmol）和112mg咪唑，室温搅拌10h后减压蒸出溶剂，粗品通过硅胶柱层析纯化（流动相AE:PE=1:2-2:1）得到181mg，收率90%。
法尼基硫代水杨酸酰氯的制备
将0.54g（1.50mmol）FTA溶解于10mL无水CH2Cl2中，向其中加入0.60mL（8.27mmol）氯化亚砜，55℃下搅拌1h，浓缩得黄色油状物法尼基硫代水杨酸酰氯。
N-(1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-(叔丁基二甲基硅氧基)-5-(叔丁基二甲基硅氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(3a)的制备
将法尼基硫代水杨酸酰氯（136mg，0.369mmol）、4-二甲氨基吡啶（4.5mg，0.037mmol）和化合物(2a)（181mg，0.369mmol）溶于20ml CH2Cl2中，室温搅拌1-2h，反应结束后减压蒸出溶剂，粗品通过硅胶柱层析纯化（流动相AE:PE=1:4-1:1）得到淡黄色油状物249mg，收率81%，ESI-MS(m/z):833[M+H]+。
N-(1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1v2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I1)的制备
将上一步化合物3a（249mg，0.299mmol）溶于1M的TBAF四氢呋喃20ml溶液中，室温反应3-5h，点板观察原料点反应完全，减压蒸出反应液溶剂，粗品通过硅胶柱层析纯化（流动相CH2Cl2:MeOH=10:1-8:1）得到(I1)无色透明油状物185mg，收率86%，ESI-MS(m/z):604[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.53(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.77(d,1H,J=7.5Hz，Ar-H)，7.47(m，1H，Ar-H)，7.33(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.32(s，1H，NCH)，5.28(m，1H，SCH2CH)，5.07(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.97-4.19(m，4H，OCH，OCH2，HOCH)，3.58(m，2H，SCH2)，1.83-2.02(m，10H，2×OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.51-1.68(m，12H，4×CH3)。
实施例2N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3，4-二羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I2)的制备
4-氨基-1-((2R，3R，4R，5R)-3，4-二(叔丁基二甲基硅氧基)-5-(叔丁基二甲基硅氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(2b)的制备
参照实施例1中化合物(2a)的制备方法，由阿糖胞苷(1b)替代方法中的吉西他滨，与TBDMS-Cl反应制得淡黄色油状物(2b)，收率72%。
N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3，4-二(叔丁基二甲基硅氧基)-5-(叔丁基二甲基硅氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(3b)的制备
参照实施例1中化合物(3a)的制备方法，由化合物(2b)替代方法中的化合物(2a)，与法尼基硫代水杨酸酰氯反应制得淡黄色油状物(3b)，收率78%，ESI-MS(m/z):813[M+H]+。
N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3，4-二羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I2)的制备
参照实施例1中化合物(I1)的制备方法，由化合物(3b)替代方法中的化合物(3a)，与1M的TBAF四氢呋喃反应制得淡黄色油状物(I2)，收率77%，ESI-MS(m/z):584[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.44(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.68(m，1H，Ar-H)，7.41(m，1H，Ar-H)，7.28-7.31(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.20(d，J=4.2Hz，1H，NCH)，5.23(m，1H，SCH2CH)，5.02(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.66-4.13(m，5H，OCH，OCH2，2×HOCH)，3.52(d，2H，J=4.5Hz，SCH2)，1.87-2.03(m，10H，2×OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.52-1.69(m，12H，4×CH3)。
实施例3N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3-氰基-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I3)的制备
4-氨基-1-((2R，3R，4R，5R)-3-氰基-4-(叔丁基氧羰基氧基)-5-(叔丁基氧羰基氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(2c)的制备
将4-氨基-1-((2R，3R，4R，5R)-3-氰基-4-羟基--5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(1c)（103mg，0.41mmol）溶于10mL1，4-二氧六环和15ml的1N氢氧化钾水溶液中，低温缓慢滴加Boc酸酐（1.48g，6.8mmol）的10mL的1，4-二氧六环溶液，滴完后恢复室温搅拌10h，点板反应完后减压蒸出溶剂，加入25ml水，用3次20ml乙酸乙酯萃取水层，合并有机层用饱和食盐水洗涤后，干燥减压浓缩得到粗品，通过硅胶柱层析纯化（流动相AE:PE=1:2-2:1）得到(2c)128mg，收率69%，ESI-MS(m/z):453[M+H]+。
N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3-氰基-4-(叔丁基氧羰基氧基)-5-(叔丁基氧羰基氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(3c)的制备
将法尼基硫代水杨酸（101mg，0.283mmol）、化合物(2c)（128mg，0.283mmol）、1，3-二环己基碳二亚胺（54mg，0.283mmol）和4-二甲氨基吡啶（7.0mg，0.057mmol）溶于25mlCH2Cl2中，室温搅拌4-8h，反应结束后减压蒸出溶剂，粗品通过硅胶柱层析纯化（流动相AE:PE=1:4-1:1）得到(3c)淡黄色油状物117mg，收率52%，ESI-MS(m/z):793[M+H]+。
N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3-氰基-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I3)的制备
将上一步化合物3c（117mg，0.148mmol）溶于5ml三氟乙酸溶液中，室温反应3-5h，点板观察原料点反应完全，减压蒸出反应液溶剂，粗品通过硅胶柱层析纯化（流动相CH2Cl2:MeOH=10:1-8:1）得到无色透明油状物79mg，收率90%，ESI-MS(m/z):593[M+H]+;1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.62(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.81(m，1H，Ar-H)，7.53(m，1H，Ar-H)，7.26-7.37(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.21(d，J=4.2Hz，1H，NCH)，5.20(m，1H，SCH2CH)，5.01(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.89-4.23(m，3H，OCH2，HOCH)，3.49(m，2H，J=4.5Hz，SCH2)，2.91(m，1H，CHCN)，1.87-2.05(m，10H，2×OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.49-1.69(m，12H，4×CH3)。
实施例4N-(1-((2R，3S，4R，5R)-3，4-二羟基-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氟-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I4)的制备
4-氨基-1-((2R，3S，4R，5R)-3，4-二(叔丁基氧羰基氧基)-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氟-1H-嘧啶-2-酮(2d)的制备
参照实施例3中化合物(2c)的制备方法，由4-氨基-1-((2R，3S，4R，5R)-3，4-二羟基-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氟-1H-嘧啶-2-酮(1d)替代方法中的原料(1c)，与Boc酸酐反应制得淡黄色油状物(2d)，收率68%，ESI-MS(m/z):446[M+H]+。
N-(1-((2R，3S，4R，5R)-3，4-二(叔丁基氧羰基氧基)-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氟-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(3d)
参照实施例3中化合物(3c)的制备方法，由化合物(2d)替代方法中的化合物(2c)，与法尼基硫代水杨酸反应制得淡黄色油状物(3d)，收率59%，ESI-MS(m/z):786[M+H]+。
N-(1-((2R，3S，4R，5R)-3，4-二羟基-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氟-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I4)的制备
参照实施例3中化合物(I3)的制备方法，由化合物(3d)替代方法中的化合物(3c)，与三氟乙酸反应制得无色油状物(I4)，收率87%，ESI-MS(m/z):586[M+H]+;1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.38(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.69(m，1H，Ar-H)，7.46(m，1H，Ar-H)，7.29-7.32(m，2H，Ar-H)，6.07(d，J=4.2Hz，1H，NCH)，5.18(m，1H，SCH2CH)，5.02(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.93-4.16(m，2H，2×HOCH)，3.51(m，2H，J=4.5Hz，SCH2)，1.87-2.05(m，13H，2×OH，2×CHCH 2CH 2CH，CH3)，1.47-1.67(m，12H，4×CCH3)。
实施例5N-(1-((2R，3R，5S)-3-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I5)的制备
4-氨基-1-((2R，3R，5S)-3-(叔丁基氧羰基氧基)-5-(叔丁基氧羰基氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(2e)的制备
参照实施例3中化合物(2c)的制备方法，由4-氨基-1-((2R，3R，5S)-3-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(1e)替代方法中的原料(1c)，与Boc酸酐反应制得淡黄色油状物(2e)，收率55%，ESI-MS(m/z):428[M+H]+。
N-(1-((2R，3R，5S)-3-(叔丁基氧羰基氧基)-5-(叔丁基氧羰基氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(3e)的制备
参照实施例3中化合物(3c)的制备方法，由化合物(2e)替代方法中的化合物(2c)，与法尼基硫代水杨酸反应制得淡黄色油状物(3e)，收率51%，ESI-MS(m/z):768[M+H]+。
N-(1-((2R，3R，5S)-3-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I5)的制备
参照实施例3中化合物(I3)的制备方法，由化合物(3e)替代方法中的化合物(3c)，与三氟乙酸反应制得无色油状物(I5)，收率82%，ESI-MS(m/z):568[M+H]+;1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.48(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.71(m，1H，Ar-H)，7.46(m，1H，Ar-H)，7.22-7.34(m，3H，Ar-H,CH=CHN)，6.17(d，J=4.2Hz，1H，NCH)，5.20(m，1H，SCH2CH)，5.01(m，2H,2×CH2CH=CCH3)，3.72-4.18(m，4H，OCH，OCH2，HOCH)，3.50(d，2H，J=4.5Hz，SCH2)，1.85-2.01(m，10H，2×OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.52-1.71(m，12H，4×CH3)。
实施例6N-(1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-甲氧基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I6)的制备
4-氨基-1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-甲氧基-5-(叔丁基二甲基硅氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(2f)的制备
参照实施例1中化合物(2a)的制备方法，由4-氨基-1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-甲氧基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(1f)替代方法中的吉西他滨，与TBDMS-Cl反应制得淡黄色油状物(2f)，收率76%。
N-(1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-甲氧基-5-(叔丁基二甲基硅氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(3f)的制备
参照实施例1中化合物(3a)的制备方法，由化合物(2f)替代方法中的化合物(2a)，与法尼基硫代水杨酸酰氯反应制得淡黄色油状物(3f)，收率76%，ESI-MS(m/z):733[M+H]+。
N-(1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-甲氧基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I6)的制备
参照实施例1中化合物(I1)的制备方法，由化合物(3f)替代方法中的化合物(3a)，与1M的TBAF四氢呋喃反应制得淡黄色油状物(I6)，收率83%，ESI-MS(m/z):618[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.55(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.76(m，1H，Ar-H)，7.52(m，1H，Ar-H)，7.22-7.35(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.26(d，J=4.2Hz，1H，NCH)，5.26(m，1H，SCH2CH)，5.05(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.84-4.19(m，7H，2×OCH，OCH2，OCH3)，3.54(d，2H，J=4.5Hz，SCH2)，1.87-2.03(m，9H，OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.50-1.71(m，12H，4×CCH3)。
实施例7N-(1-((2R，3S，4R，5R)-3，4-二甲氧基-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氯-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I7)的制备
参照实施例1中化合物(3a)的制备方法，由4-氨基-1-((2R，3S，4R，5R)-3，4-二甲氧基-5-甲基四氢呋喃-2-基)-5-氯-1H-嘧啶-2-酮(1g)替代方法中的化合物(2a)，与法尼基硫代水杨酸酰氯反应制得淡黄色油状物(I7)，收率73%，ESI-MS(m/z):631[M+H]+;1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.43(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.71(m，1H，Ar-H)，7.49(m，1H，Ar-H)，7.27-7.35(m，2H，Ar-H)，6.10(m，1H，NCH)，5.22(m，1H，SCH2CH)，5.03(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.81-4.20(m，8H，2×OCH，OCH3)，3.53(m，2H，J=4.5Hz，SCH2)，1.82-2.02(m，11H，2×CHCH 2CH 2CH，CH3)，1.52-1.70(m，12H，4×CCH3)。
实施例8((2R，3S，5R)-4，4-二氟-3-羟基-5-(2-酮-4-(法尼基硫代水杨酸酰胺基)嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲基磷酸氢钠盐(I8)的制备
将实施例1中化合物(I1)（100mg，0.166mmol），三乙胺（50mg，0.498mmol）溶于10ml二氯甲烷中，冰浴下缓慢滴加三氯氧磷（28mg，0.182mmol），滴完后回到室温，并加热回流2h，点板观察原料反应完后，冷却反应液并离心滤掉固体，滤液中加入7.3ml1N的碳酸氢钠，并室温下继续搅拌6h后加入6ml丙酮后析出目标化合物(I8)62mg，收率53%，ESI-MS(m/z):682[M-H]-.1H NMR(CD3OD，300MHz):8.49(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.73(d，1H，J=7.5Hz，Ar-H)，7.45(m，1H，Ar-H)，7.27-7.31(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.28(m，1H，NCH)，5.25(m，1H，SCH2CH)，5.04(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.91-4.16(m，4H，OCH，OCH2，HOCH)，3.55(d，2H，J=4.5Hz，SCH2)，1.83-2.08(m，10H，2×OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.49-1.67(m，12H，4×CH3)。
实施例9((2R，3S，5R)-4，4-二氟-3-羟基-5-(2-酮-4-(法尼基硫代水杨酸酰胺基)嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲基二氢磷酸酯(I9)的制备
将上一步实施例8中产物(I8)，加入含有10ml氯仿，5ml甲醇和10ml0.1N稀盐酸的混合溶液，室温搅拌1h后，再加入16ml混合溶液（氯仿：甲醇为3：1）和10ml水，收集有机层干燥浓缩得到游离目标产物(I9)，收率96%，ESI-MS(m/z):682[M-H]-。
实施例10((2R，3R，4R，5R)-3，4-二羟基-5-(2-酮-4-(法尼基硫代水杨酸酰胺基)嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲基磷酸氢钾盐(I10)的制备
参照实施例8中化合物(I8)的制备方法，由化合物(I2)替代方法中的化合物(I1)，与三氯氧磷反应，并通过1N的碳酸氢钾成盐制得白色固体目标化合物(I10)，收率50%，ESI-MS(m/z):662[M-H]-;1H NMR(CD3OD，300MHz):8.47(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.71(m，1H，Ar-H)，7.43(m，1H，Ar-H)，7.25-7.32(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.22(d，J=4.2Hz，1H，NCH)，5.26(m，1H，SCH2CH)，5.05(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.72-4.18(m，5H，OCH，OCH2，2×HOCH)，3.56(m，2H，J=4.5Hz，SCH2)，1.85-2.02(m，10H，2×OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.56-1.73(m，12H，4×CH3)。
实施例11((2R，3R，4R，5R)-3-羟基-4-氰基-5-(2-酮-4-(法尼基硫代水杨酸酰胺基)嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲基磷酸二钠盐(I11)的制备
参照实施例8中化合物(I8)的制备方法，由化合物(I3)替代方法中的化合物(I1)，与三氯氧磷反应，并通过1N的碳酸氢钾成盐制得白色固体目标化合物(I11)，收率50%，ESI-MS(m/z):671[M-H]-.1H NMR(CD3OD，300MHz):8.56(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.73(m，1H，Ar-H)，7.48(m，1H，Ar-H)，7.22-7.35(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.26(d，J=4.2Hz，1H，NCH)，5.23(m，1H，SCH2CH)，5.04(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.84-4.20(m，3H，OCH2，HOCH)，3.52(m，2H，J=4.5Hz，SCH2)，2.93(m，1H，CHCN)，1.83-2.04(m，9H，OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.51-1.69(m，12H，4×CH3)。
实施例12N-(1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-羟基-5-(乙酰氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I12)的制备
将实施例1中化合物(I1)（100mg，0.166mmol），三乙胺（50mg，0.498mmol）溶于10ml二氯甲烷中，冰浴下缓慢滴加乙酰氯（14mg，0.182mmol），滴完后回到室温继续搅拌2h，点板观察原料反应完后，减压蒸出反应液溶剂，粗品通过硅胶柱层析纯化（流动相CH2Cl2:MeOH=15:1-10:1）得到(I12)无色透明油状物66mg，收率62%，ESI-MS(m/z):646[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.57(m，1H，CH=CHN)，7.82(d，1H，J=7.5Hz，Ar-H)，7.50(m，1H，Ar-H)，7.28-7.36(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.24(m，1H，NCH)，5.26(m，1H，SCH2CH)，5.04(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.84-4.21(m，4H，OCH，OCH2，HOCH)，3.56(m，2H，SCH2)，2.91(s，3H，COCH3)，1.85-2.06(m，9H，OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.52-1.71(m，12H，4×CH3)。
实施例13N-(1-((2R，4S，5R)-3，3-二氟-4-乙酰氧基-5-(乙酰氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I13)的制备
将实施例1中化合物(I1)（100mg，0.166mmol），4-二甲氨基吡啶（53mg，0.437mmol）溶于20ml二氯甲烷中，冰浴下缓慢滴加乙酰氯（28mg，0.364mmol），滴完后回到室温继续搅拌5h，点板观察原料反应完后，减压蒸出反应液溶剂，粗品通过硅胶柱层析纯化（流动相AE:PE=1:2-3:1）得到(I13)无色透明油状物78mg，收率68%，ESI-MS(m/z):688[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.63(m，1H，CH=CHN)，7.85(d，1H，J=7.5Hz，Ar-H)，7.53(m，1H，Ar-H)，7.26-7.40(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.27(d，1H，J=7.5Hz，NCH)，5.29(m，1H，SCH2CH)，5.07(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.88-4.26(m，4H，2×OCH，OCH2)，3.56(m，2H，SCH2)，2.89-2.93(m，6H，COCH3)，1.81-2.08(m，8H，2×CHCH 2CH 2CH)，1.50-1.76(m，12H，4×CH3)。
实施例14N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3，4-二羟基-5-(乙酰氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I11)的制备
参照实施例12中化合物(I12)的制备方法，由化合物(I2)替代方法中的化合物(I1)，与乙酰氯反应制得无色油状物(I14)，收率57%，ESI-MS(m/z):626[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.47(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.70(m，1H，Ar-H)，7.56(m，1H，Ar-H)，7.25-7.36(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.27(m，1H，NCH)，5.27(m，1H，SCH2CH)，5.06(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.73-4.18(m，5H，OCH，OCH2，2×HOCH)，3.55(m，2H，SCH2)，2.88(s，3H，COCH3)，1.86-2.10(m，9H，OH，2×CHCH 2CH 2CH)，1.51-1.74(m，12H，4×CH3)。
实施例15N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-(乙酰氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I15)的制备
参照实施例13中化合物(I13)的制备方法，由化合物(I2)替代方法中的化合物(I1)，与乙酰氯反应制得无色油状物(I15)，收率62%，ESI-MS(m/z):710[M+H]+.1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.58(d，J=7.5Hz，1H，CH=CHN)，7.76(m，1H，Ar-H)，7.62(m，1H，Ar-H)，7.27-7.34(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.23(m，1H，NCH)，5.25(m，1H，SCH2CH)，5.04(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.79-4.13(m，5H，OCH2，3×OCH)，3.53(d，2H，J=4.5Hz，SCH2)，2.84-2.92(m，9H，3×COCH3)，1.82-2.05(m，8H，2×CHCH 2CH 2CH)，1.47-1.68(m，12H，4×CH3)。
实施例16N-(1-((2R，3R，4R，5R)-3-氰基-4-羟基-5-(乙酰氧基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-酮-1，2-二氢嘧啶-4-基)-法尼基硫代水杨酸酰胺(I16)的制备
参照实施例12中化合物(I12)的制备方法，由化合物(I3)替代方法中的化合物(I1)，与乙酰氯反应制得无色油状物(I16)，收率55%，ESI-MS(m/z):635[M+H]+;1H NMR(DMSO-d6，300MHz):8.65(m，1H，CH=CHN)，7.86(d，1H，J=7.5Hz，Ar-H)，7.53(m，1H，Ar-H)，7.26-7.33(m，3H，Ar-H，CH=CHN)，6.27(m，1H，NCH)，5.28(m，1H，SCH2CH)，5.09(m，2H，2×CH2CH=CCH3)，3.87-4.26(m，3H，OCH2，HOCH)，3.57(d，2H，J=4.5Hz，SCH2)，2.89-2.97(m，4H，CHCN，COCH3)，1.81-2.07(m，10H，2×OH，2×CHCH 2CH 2CH),1.50-1.76(m，12H，4×CH3)。
实施例17四甲基氮唑蓝比色法（MTT）体外抗肿瘤试验
按常规采用MTT评价了本发明化合物对6种人癌细胞株的抗增殖活性。MTT法已广泛用于大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感测定等。选择FTA作为阳性对照药。
人癌细胞株：肝癌细胞Hep3B、胰腺癌细胞PANC-1、结肠癌细胞HCT116、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MDA-MB-231、人急性成淋巴细胞性白血病细胞CCRF-CEM。
实验方法如下：取处于指数生长期状态良好的细胞一瓶，加入0.25%胰蛋白酶消化，使贴壁细胞脱落，制成每毫升含2×104～4×104个细胞的悬液。取细胞悬液接种于96孔板上，每孔180μL，置恒温CO2培养箱中培养24小时。换液，加入受试化合物I1-I12(化合物用DMSO溶解后用PBS稀释，受试化合物浓度分别为5×10-6，2.5×10-5mol/L)，每孔20μL，培养48小时。将MTT加入96孔板中，每孔20μL，培养箱中反应4小时。吸去上清液，加入DMSO，每孔150μL，平板摇床上振摇5分钟。用酶联免疫检测仪在波长为570nm处测定每孔的吸收度，计算细胞抑制率。实验结果如表2所示。
细胞抑制率=(阴性对照组OD值–受试物组OD值)/阴性对照组OD值×100%。
实施例18流式细胞仪检测细胞凋亡率
选择胰腺癌细胞株PANC-1、乳腺癌细胞MDA-MB-231、人急性成淋巴细胞性白血病细胞CCRF-CEM，并且处于对数生长期状态，加入消化液（0.125%胰蛋白酶+0.01%EDTA）消化，计数2～2.5×105个/ml，制成细胞悬液，接种于培养板，置恒温CO2培养箱中培养24小时。换用2%血清的DMEM培养基培养，加入不同浓度受试药物化合物I1-I12，继续培养48小时。收集细胞，贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集，1000r/min离心5min，用冷的PBS洗涤细胞二次(1000rpm离心5min)，计数后，加约1×105个细胞于试管中离心，去上清。悬浮细胞于500μL的Binding Buffer。加入5μL Annexin V-FITC混匀后，加入5μL Propidium Iodide，混匀，避光反应5～15min。在1小时内，进行流式细胞仪的观察和检测。激发波长Ex=488nm;发射波长Em=530nm。每组3管。未经药物处理的细胞为阴性对照。凋亡细胞为AnnexinV+和AnnexinV+PI+，而PI+的细胞为坏死细胞，非染细胞为未损伤细胞。计算200细胞中的凋亡细胞为测试指标。实验结果如表3所示。实际凋亡率=药物凋亡率/阴性对照组的凋亡率。
Claims (9)
1.一种法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物及其药学上可接受的盐，具有下述通式Ⅰ的结构：
通式Ⅰ中：X=H，F，Cl或Br；
R1代表H、OH、OAc、SH、-OP(O)(OH)2、-OPO3HNa、-OP(O)(ONa)2、-OPO3HK或-OP(O)(OK)2；
R2代表H、OH、OAc或OCH3；
R3代表H、OH、F、CN、OAc或OCH3；
R4代表H、OH、F、CN、OAc或OCH3。
2.如权利要求1所述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述通式Ⅰ的结构中的X、R1、R2、R3、R4选自如下组合：
X=H，R1=OH，R2=OH，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OH，R2=OH，R3=H，R4=OH；
或者X=H，R1=OH，R2=OH，R3=H，R4=CN；
或者X=F，R1=H，R2=OH，R3=OH，R4=H；
或者X=H，R1=OH，R2=H，R3=H，R4=OH；
或者X=H，R1=OH，R2=OCH3，R3=F，R4=F；
或者X=Cl，R1=H，R2=OCH3，R3=OCH3，R4=H；
或者X=H，R1=OPO3HNa，R2=OH，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OP(O)(OH)2，R2=OH，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OPO3HK，R2=OH，R3=H，R4=OH；
或者X=H，R1=OP(O)(ONa)2，R2=OH，R3=H，R4=CN；
或者X=H，R1=OAc，R2=OH，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OAc，R2=OAc，R3=F，R4=F；
或者X=H，R1=OAc，R2=OH，R3=H，R4=OH；
或者X=H，R1=OAc，R2=OAc，R3=H，R4=OAc；
或者X=H，R1=OAc，R2=OH，R3=H，R4=CN。
3.权利要求1或2所述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐的制备方法，合成路线如下所示：
其中，X=H，F，Cl或Br；
R1代表H或SH；
R2代表H或OCH3；
R3代表H、F、CN或OCH3；
R4代表H、F、CN或OCH3；
其特征在于将法尼基硫代水杨酸在酰氯化试剂的作用下，制备法尼基硫代水杨酸酰氯，将法尼基硫代水杨酸酰氯与化合物1在含有缚酸剂的二氯甲烷溶液中反应得到化合物4；
或者，将法尼基硫代水杨酸和化合物1在缩合剂和有机碱性试剂作用下，缩合制得化合物4。
4.权利要求1或2所述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐的制备方法，合成路线如下所示：
其中，X=H，F，Cl或Br；
R1代表H、OH或SH；
R2代表H、OH、OCH3；
R3代表H、OH、F、CN、OCH3；
R4代表H、OH、F、CN、OCH3；
且R1，R2，R3，R4中至少有一个基团为OH，
当R1基团不是OH时，R1’=R1；当R1基团是OH时，R1’为羟基保护基团；
当R2基团不是OH时，R2’=R2；当R2基团是OH时，R2’为羟基保护基团；
当R3基团不是OH时，R3’=R3；当R3基团是OH时，R3’为羟基保护基团；
当R4基团不是OH时，R4’=R4；当R4基团是OH时，R4’为羟基保护基团；
所述羟基保护基团为-OTBDMS、-OTMS或者-OBoc；
步骤包括：
a.将化合物1结构中含有羟基的基团通过羟基保护剂和碱性试剂作用下得到化合物2；
b.法尼基硫代水杨酸在酰氯化试剂的作用下，制备法尼基硫代水杨酸酰氯，将法尼基硫代水杨酸酰氯与化合物2在含有缚酸剂的二氯甲烷溶液中反应得到化合物3；
或者，将法尼基硫代水杨酸和化合物2在缩合剂和有机碱性试剂作用下，缩合制得化合物3；
c.将化合物3在脱保护基试剂作用下，制得化合物4。
5.如权利要求4所述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，在步骤c之后还包括步骤d：将化合物4与膦酰化试剂或者乙酰化试剂反应，得到化合物5；
合成路线如下所示：
其中，X=H，F，Cl或Br；
R1代表OH；
R2代表H、OH或OCH3；
R3代表H、OH、F、CN或OCH3；
R4代表H、OH、F、CN或OCH3；
且R1，R2，R3，R4中至少有一个基团为OH；
R1”代表OAc、-OP(O)(OH)2、-OPO3HNa、-OP(O)(ONa)2、-OPO3HK或-OP(O)(OK)2。
6.如权利要求4所述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，在步骤c之后还包括步骤e：将化合物4与乙酰化试剂反应，得到化合物6；合成路线如下所示：
其中，X=H，F，Cl或Br；
R1代表H、OH或SH；
R2代表H、OH或OCH3；
R3代表H、OH、F、CN或OCH3；
R4代表H、OH、F、CN或OCH3；
且R2，R3，R4中至少有一个基团为OH；
当R1基团不是OH时，R1”=R1；当R1基团是OH时，R1”=OAc；
当R2基团不是OH时，R2”=R2；当R2基团是OH时，R2”=OAc；
当R3基团不是OH时，R3”=R3；当R3基团是OH时，R3”=OAc；
当R4基团不是OH时，R4”=R4；当R4基团是OH时，R4”=OAc。
7.一种药物组合物，含有权利要求1或2所述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的辅料。
8.如权利要求1或2所述的法尼基硫代水杨酸-核苷缀合物或其药学上可接受的盐在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用。
9.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述治疗和/或预防肿瘤药物为治疗和/或预防肝癌，胰腺癌，肺癌，乳腺癌，脑癌，结肠癌及胃癌肿瘤药物。
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