CN103417675A

CN103417675A - 一种用于治疗肝病的药物组合物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN103417675A
Application number: CN2013103249670A
Authority: CN
Inventors: 娄渊贵; 宋晓华; 张海英
Original assignee: 娄渊贵
Priority date: 2013-07-30
Filing date: 2013-07-30
Publication date: 2013-12-04
Anticipated expiration: 2033-07-30
Also published as: CN103417675B

Abstract

本发明提供了一种用于治疗肝病的药物组合物及其制备方法和用途，所述药物组合物包括丹参提取物、当归提取物、鸡血藤提取物、川芎提取物、汉防己提取物、黄芪、冬虫夏草、桃仁、苦参、蒲公英、鳖甲。该药物组合物表现出抗肝纤维化的显著作用，具有优异的治疗各种慢性肝炎、肝硬化的功用。

Description

一种用于治疗肝病的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，更具体地涉及一种高效的用于治疗肝病的药物组合物及其制备方法，属于中药组合物及治疗领域。

背景技术

肝脏是人体内最大的消化腺，是体内物质能量代谢的中心站。然而，据世界卫生组织统计，全球乙肝病毒携带者超过了20亿人，而目前全球有将近4亿乙肝患者。因而，肝病(如肝炎、肝硬化、肝纤维化等)已经成为危害人体健康的重大困扰。众所周知，慢性肝病或肝炎属于临床常见、多发病，肝纤维化则是在慢性肝损害基础上导致细胞外基质异常增生所致，是各种慢性肝病发展为肝硬化的必经之途，而且肝炎发病率高，需长期服用保肝药物。因此，为保障国民身体健康，预防和治疗肝病的发生或阻断其发展成为现代医学研究的一大重点，而研究高效的抗肝纤维化制剂则成为该项研究的重中之重。

现有技术中已有诸多治疗肝病药物的相关报道，例如：

CN1268362A的专利申请公开了一种治疗慢性肝炎、肝纤维化和早期肝硬化的药物，其由黄芪、丹参、当归、红花、川芎、香附、赤芍、柴胡、陈皮、鸡血藤多种活性成分组成，但该药物的治愈率低、远期反弹性较高。

CN1539483A的专利申请公开了一种治疗慢性肝病及抗肝纤维化的中药，它是由适当比例的藏红花、蛤蚧、丹参、鳖甲、黄芪、红参、当归、川芎、砂仁、僵虫、三七、枸杞、木香组成，经多道工序制备而成，能够有效地治疗慢性肝炎和肝纤维化。

CN102357171A的专利申请公开了一种防治肝纤维化的药物组合物，其包含当归、红花、桃仁、丹皮、赤芍、川芎、乌药、五灵脂、延胡索、香附、枳壳、甘草等多种原药成分，该药物组合物具有预防和治疗肝纤维化病变的作用，可应用于制备相应的药物制剂。

CN101632829B的专利申请公开了一种由熊胆粉、丹参、姜黄、黄芪组配而成的药物组合物，具有明显的保肝、护肝，降低转氨酶和抑制肝细胞纤维化的药理作用。

然而，现有技术中的药物组合物也往往不尽如人意，例如常表现出疗效不够显著、作用单一、用量大等缺点。因此，开发新型高效的可用于治疗肝病的药物组合物成为本发明的研究宗旨所在。

发明内容

为获得新型高效的可用于治疗肝病的药物组合物，本发明人对此经过大量的深入研究，在付出了充分的创造性劳动后，从而完成了本发明。

需要注意的是，除非另有说明或规定，自始至终，本发明中涉及药物组合物的“包括”具有两种含义：开放式的“包括”和封闭式的“由...组成”。

具体而言，本发明主要涉及两个方面。

第一方面，本发明涉及一种新型高效的用于治疗肝病的药物组合物，所述药物组合物包括丹参提取物、当归提取物、鸡血藤提取物、川芎提取物、汉防己提取物、黄芪、冬虫夏草、桃仁、苦参、蒲公英、鳖甲。

作为一种示例性例举，在所述药物组合物中，以重量份计，其具体组分含量如下：

丹参提取物	6-10
		当归提取物	1-6
鸡血藤提取物	1-5
		川芎提取物	11-15
汉防己提取物	6-12
		黄芪	10-14
冬虫夏草	0.5-1.5
		桃仁	4-9
苦参	3-9
		蒲公英	4-10
鳖甲	10-18。

在本发明的所述药物组合物中，黄芪、冬虫夏草、桃仁、苦参、蒲公英、鳖甲的形式并没有严格的限定，例如可为药店出售的本身形式、小块、粉末等形式，优选为微粉的形式。

在本发明的所述药物组合物中，丹参提取物的重量份数为6-10份，如为6份、7份、8份、9份或10份。

在本发明的所述药物组合物中，当归提取物的重量份数为1-6份，如为1份、2份、3份、4份、5份或6份。

在本发明的所述药物组合物中，鸡血藤提取物的重量份数为1-5份，如为1份、2份、3份、4份或5份。

在本发明的所述药物组合物中，川芎提取物的重量份数为11-15份，如为11份、12份、13份、14份或15份。

在本发明的所述药物组合物中，汉防己提取物的重量份数为6-12份，如为6份、7份、8份、9份、10份、11份或12份。在本发明的所述药物组合物中，黄芪的重量份数为10-14份，如为10份、11份、12份、13份或14份。

在本发明的所述药物组合物中，冬虫夏草的重量份数为0.5-1.5份，如为0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1.0份、1.1份、1.2份、1.3份、1.4份或1.5份。

在本发明的所述药物组合物中，桃仁的重量份数为4-9份，如为4份、5份、6份、7份、8份或9份。

在本发明的所述药物组合物中，苦参的重量份数为3-9份，如为3份、4份、5份、6份、7份、8份或9份。

在本发明的所述药物组合物中，蒲公英的重量份数为4-10份，如为4份、5份、6份、7份、8份、9份或10份。

在本发明的所述药物组合物中，鳖甲的重量份数为10-18份，如为10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份或18份。

第二方面，本发明涉及上述药物组合物的制备方法，具体步骤如下：

(A)丹参提取物、当归提取物、鸡血藤提取物的制备

分别将上述药材经晾晒后粉碎，采用质量百分比浓度为65%-75%的乙醇于55-65℃下回流提取2.5-3.5小时，提取液经回收乙醇后制成浸膏，再经干燥、粉碎、研磨成微粉，过70目筛，从而分别得到作为活性成分的丹参提取物、当归提取物和鸡血藤提取物；

(B)黄芪、冬虫夏草、苦参、蒲公英、桃仁、鳖甲的制备

分别称取一定量上述药材，将其晒干、粉碎、研磨成细粉，过70目筛，从而分别得到上述几种成分的微粉，备用；

(C)川芎提取物的制备

采用多步萃取法，具体步骤如下：称取川芎药材晒干、粉碎后研磨，过20目筛，然后将其置于超微振动磨中，加入质量百分比浓度为90%的乙醇，其中川芎与乙醇(以90%的乙醇计)的质量/体积比为1:5g/ml，超微震动提取3-5小时，提取完毕后，离心分离30min，得到上清液a；

将剩余药渣转移至超声装置中，加入质量百分比浓度为30%的盐酸乙醇溶液，其中药渣与盐酸乙醇溶液的质量/体积比为1:6g/ml，超声40-50min，提取完毕后，离心分离30min，得到上清液b；

合并上清液a和b，浓缩得浸膏，将浸膏加适量水溶解后加到预先装好的苯乙烯强酸性阳离子交换树脂柱，采用质量百分比浓度为50%的乙醇溶液洗脱，浓缩后，用氯仿萃取两次，合并氯仿层，经旋蒸、干燥、粉碎、研磨后得川芎提取物。

(E)汉防己提取物的提取

采用膨胀溶剂-树脂吸附法，具体步骤如下：

称取汉防己药材晒干、粉碎后研磨，过30目筛，然后将其溶于乙醇溶剂中，再加入一定质量的二氧化碳，所述乙醇/CO₂按照体积/质量比为1:8-12ml/g，其中汉防己与乙醇的质量体积比为1:10g/ml，加压至3-5Mpa形成膨胀溶剂体系，温度60-70℃，搅拌提取2-3h后，降至常压，将提取液减压浓缩得浸膏；

将浸膏溶于质量百分比浓度为2%-5%的盐酸水溶液中得上柱液，其中浸膏与盐酸水溶液的质量/体积比为1:3g/ml，将D101大孔吸附树脂装入吸附柱中，上柱液缓慢流经树脂柱以使汉防己甲素吸附于树脂上，然后采用质量百分比浓度为75%-85%的乙醇洗脱液洗脱，洗脱液减压回收、真空干燥、得汉防己提取物粗品；粗品上硅胶层析柱，经等体积比的石油醚-丙酮洗脱后，再经旋蒸、干燥、粉碎、研磨得汉防己提取物，留待备用。

(F)按照上述重量份称取各类药材的微粉或提取物混合均匀，即得本发明所述药物组合物。

此外，本发明的所述药物组合物中，还可加入药学上可接受的辅助或赋形剂制备成各种剂型，例如口服液、片剂、丸剂等，优选为丸剂，更优选为水蜜丸；例如，每100g所得混合粉末用炼蜜30g，再加水搅拌均匀后制成水蜜丸，干燥得产品。对于辅料的选择，本领域技术人员可依据药剂类型的要求来进行，本发明没有特定的限制。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。

制备例1

I、丹参提取物、当归提取物、鸡血藤提取物的制备

分别将上述药材经晾晒后粉碎，采用质量百分比浓度为70%的乙醇于60℃下回流提取3小时，提取液经回收乙醇后制备成浸膏，再经干燥、粉碎、研磨成微粉，过70目筛，从而分别得到作为活性成分的丹参提取物、当归提取物和鸡血藤提取物，备用。

II、黄芪、冬虫夏草、苦参、蒲公英、桃仁、鳖甲的制备

分别称取一定量上述药材，将其晒干、粉碎、研磨成细粉，过70目筛，从而分别得到上述几种成分的微粉，留待备用。

制备例2

多步萃取法制备川芎提取物

称取25g川芎药材晒干、粉碎后研磨，过20目筛，然后将其置于超微振动磨中，加入质量百分比浓度为90%的乙醇125ml，超微震动提取4小时，提取完毕后，离心分离30min，得到上清液a。

将剩余药渣转移至超声装置中，加入质量百分比浓度为30%的盐酸乙醇溶液，使药渣与盐酸乙醇溶液的质量体积比为1:6g/ml，然后超声45min，提取完毕后，离心分离30min，得到上清液b；

合并上清液a和b，浓缩得浸膏，将浸膏加适量水溶解后加到预先装好的732型苯乙烯强酸性阳离子交换树脂柱，采用质量百分比浓度为50%的乙醇洗脱，浓缩后，用氯仿萃取两次，合并氯仿层，经旋蒸、干燥、粉碎、研磨后得川芎提取物。

制备例3

采用膨胀溶剂-树脂吸附法制备汉防己提取物

称取25g汉防己药材晒干、粉碎后研磨，过30目筛，然后将其溶于250ml乙醇溶剂中，再加入2.5kg的二氧化碳，加压至4Mpa形成膨胀溶剂体系，温度65℃，搅拌提取2.5h后，降至常压，然后将提取液减压浓缩得浸膏；

将浸膏溶于4%盐酸水溶液30ml中得上柱液，使浸膏与盐酸水溶液的质量/体积比为1:3g/ml，然后将D101大孔吸附树脂装入吸附柱中，上柱液缓慢流经树脂柱以使汉防己甲素吸附于树脂上，采用质量百分比浓度为80%的乙醇洗脱液洗脱，洗脱液减压回收、真空干燥、得汉防己提取物粗品；粗品上硅胶层析柱，经石油醚-丙酮(v/v=2:1)洗脱后，再经旋蒸、干燥、粉碎、研磨得汉防己提取物，留待备用。

实施例1

称取上述制备得到的微粉或提取物：丹参提取物6g、当归提取物5g、鸡血藤提取物4g、川芎提取物12g、汉防己提取物10g、黄芪12g、冬虫夏草1.0g、桃仁6g、，苦参5g、蒲公英8g、鳖甲15g混合均匀，即得本发明所述药物组合物，命名为KG-1。

实施例2

称取上述制备得到的微粉或提取物：丹参提取物8g、当归提取物4g、鸡血藤提取物3g、川芎提取物15g、汉防己提取物12g、黄芪11g、冬虫夏草0.6g、桃仁8g、苦参6g、蒲公英6g、鳖甲12g混合均匀，即得药物组合物，命名为KG-2。

实施例3

称取上述制备得到的微粉或提取物：丹参提取物10g、当归提取物6g、鸡血藤提取物5g、川芎提取物11g、汉防己提取物8g、黄芪14g、冬虫夏草1.2g、桃仁4g、苦参8g、蒲公英10g、鳖甲16g混合均匀，即得药物组合物，命名为KG-3。

性能测试试验

本发明所述药物组合物对四氯化碳致大鼠纤维化的治疗功效

试验材料：本发明实施例2所制备的药物组合物；N-乙酰-L-半胱氨酸。

试验方法：

取清洁雄性Wistar大鼠32只，体重150-180g，取5只作为正常对照组(不造模)，其余27只采用四氯化碳制备大鼠纤维化模型：以10%四氯化碳溶液(以分析纯四氯化碳溶于植物油中，配成100ml/L溶液备用)1ml/100g体重灌胃，2次/周，连续8周。造模8周后随机处死2只大鼠，取肝脏做病理组织检查，证实已造成肝纤维化模型。将造模成功的大鼠随机分为5组，即模型组、阳性药物组、给药高剂量组、给药中剂量组、给药低剂量组，然后停止造模并开始灌胃给药。

对给药高剂量组、给药中剂量组、给药低剂量组的大鼠的给药剂量相对于其体重分别为10g/kg、5g/kg、3g/kg灌胃本发明药物组合物，频率为每日一次；

阳性药物组以N-乙酰-L-半胱氨酸灌胃(相对于大鼠体重为0.25g/kg)；

正常组及模型组均以等体积的生理盐水灌胃，灌胃剂量相对于其体重均为10ml/kg。

对上述六组大鼠以上述剂连续灌胃8周，每天观察动物，并于最后一次给药的次日空腹采血。

A、以全自动生化分析仪检测血清中AST、ALT指标，结果见表1;

B、以放免法检测血清中肝纤维化指标HA、PIIINP，结果见表2；

C、采血后处死动物并取肝脏，进行病理组织学检查：取出肝脏组织，标本用10%福尔马林液处理，石蜡切片，H-E染色，显微镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变情况，并采用Masson染色观察肝组织内纤维化程度。

结果分析：

A

表1.四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝功能及羟脯氨酸含量的影响

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

由表1结果可见：由四氯化碳所诱导的肝纤维化模型对大鼠的肝功能有明显损伤，模型组大鼠血清中AST、ALT水平明显高于正常对照组(P<0.01)。本发明的药物组合物高、中剂量组则表现出显著的治疗效果，治疗后的大鼠肝功能明显恢复、提高。另外，模型组大鼠肝组织中羟脯氨酸含量显著高于正常组(P<0.01)，而本发明药物组合物高、中剂量组对大鼠的肝组织中羟脯氨酸含量与模型组相比较则有明显降低(P<0.01)。因此，本发明的药物组合物能够显著改善四氯化碳所诱导的纤维化模型大鼠的肝功能，能够显著降低肝纤维化大鼠肝组织中异常增高的羟脯氨酸含量。

B

表2.四氯化碳诱导肝纤维化模型大鼠血清中肝纤维化指标的影响

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；

每组试验所测数据的平均值；s：样本标准差。

由表2结果可见，肝硬化模型大鼠血清中HA、PIIINP水平均显著高于正常大鼠，本发明中的药物组合物高、中剂量组能够明显降低血清中的HA和PIINP水平。因此，本发明的药物组合物能够改善四氯化碳所诱导的肝纤维化大鼠血清中的相关肝纤维化指标。

C、

由病理组织检查结果可见，正常对照组大鼠肝组织均未见明显的病理改变，Masson染色见肝组织内除中心静脉及小胆管周围见环形的胶原纤维外，其余处未见胶原纤维。模型组5只大鼠中均表现出显著病变，如肝组织小叶组织结构被破坏，大量肝纤维组织增生、穿插，Masson染色也显示肝组织内存在纤维组织增生。阳性药组病变情况比模型组减轻，但肝组织内纤维化基肝细胞脂肪变性均较模型组好转。本发明的药物组合物高、中剂量组各例与模型组相比，肝组织内纤维化程度明显减轻，肝组织改变与正常组基本相似。

对实施例1、3所制备的药物组合物以相同的测试方式进行性能测试，其同样表现出与实施例2所制备药物组合物相当的治疗活性。

综合上述，本发明的药物组合物对肝纤维化的肝功能有明显的保护作用，能够有效预防、治疗肝纤维化的作用，对与其密切相关的肝炎、肝病也具有预防、治疗功效。

应当理解，这些实施例的用途仅用于说明本发明而非意欲限制本发明的保护范围。此外，也应理解，在阅读了本发明的技术内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动、修改和/或变型，所有的这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的保护范围之内。

Claims

1.一种药物组合物，所述药物组合物包括丹参提取物、当归提取物、鸡血藤提取物、川芎提取物、汉防己提取物、黄芪、冬虫夏草、桃仁、苦参、蒲公英、鳖甲。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于：以重量份计，其具体组分含量如下：

3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物为口服液、片剂、丸剂的形式。

4.如权利要求1-3任一项所述药物组合物的制备方法，其特征在于：按照上述重量份称取各类药材混合均匀，即得所述药物组合物。

5.如在权利要求4所述的制备方法，其特征在于：其中丹参提取物、当归提取物、鸡血藤提取物的制备方法为：分别将上述药材经晾晒后粉碎，采用质量百分比浓度为65%-75%的乙醇于55-65℃下回流提取2.5-3.5小时，提取液经回收乙醇后制成浸膏，再经干燥、粉碎、研磨成微粉，过70目筛，从而分别得到作为活性成分的丹参提取物、当归提取物和鸡血藤提取物。

6.如在权利要求4-5任一项所述的制备方法，其特征在于：黄芪、冬虫夏草、苦参、蒲公英、桃仁、鳖甲的制备方法为：分别称取一定量上述药材，将其晒干、粉碎、研磨成细粉，过70目筛，从而分别得到上述几种成分的微粉。

7.如在权利要求4-6任一项所述的制备方法，其特征在于：川芎提取物的提取采用多步萃取法，具体步骤如下：

称取川芎药材晒干、粉碎后研磨，过20目筛，然后将其置于超微振动磨中，加入质量百分比浓度为90%的乙醇，其中川芎与90%乙醇的质量/体积比为1:5g/ml，超微震动提取3-5小时，提取完毕后，离心分离30min，得到上清液a；

8.如在权利要求4-7任一项所述的制备方法，其特征在于：汉防己提取物的提取采用膨胀溶剂-树脂吸附法，具体步骤如下：

将浸膏溶于质量百分比浓度为2%-5%的盐酸水溶液中得上柱液，其中浸膏与盐酸水溶液的质量/体积比为1:3g/ml，将D101大孔吸附树脂装入吸附柱中，上柱液缓慢流经树脂柱以使汉防己甲素吸附于树脂上，然后采用质量百分比浓度为75%-85%的乙醇洗脱液洗脱，洗脱液减压回收、真空干燥、得汉防己提取物粗品；粗品上硅胶层析柱，经等体积比的石油醚-丙酮洗脱后，再经旋蒸、干燥、粉碎、研磨得汉防己提取物。

9.如在权利要求1-3任一项所述的药物组合物用于制备治疗各种慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化药物中的用途。