CN103408667B

CN103408667B - 胱抑素c纳米抗体及其编码序列

Info

Publication number: CN103408667B
Application number: CN201310385837.8A
Authority: CN
Inventors: 万亚坤; 王平艳; 孙燕燕
Original assignee: Southeast University
Current assignee: Southeast University
Priority date: 2013-08-30
Filing date: 2013-08-30
Publication date: 2014-12-31
Anticipated expiration: 2033-08-30
Also published as: CN103408667A

Abstract

本发明为针对于胱抑素C(CysC)抗原表位的纳米抗体，同时公布了编码该纳米抗体的基因序列以及能够表达该纳米抗体的宿主细胞。通过本发明所公布的纳米抗体基因序列及宿主细胞，并且该纳米抗体能够在大肠杆菌内高效表达，以利于胱抑素C(CysC)检测试剂的研发。

Description

胱抑素C纳米抗体及其编码序列

技术领域

本发明属于生物医学或生物制药技术领域，涉及针对于胱抑素C分子的纳米抗体及其编码序列。

背景技术

胱抑素C(Cystatin C，Cys C)，亦称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，分子量为13KDa，是一种分泌性蛋白质。编码Cys C的基因属于管家基因，无组织特异性，能在所有的有核细胞内以恒定速度持续转录与表达，故Cys C可在体内以恒定速度产生，并存在于各种体液中，尤其在脑脊液和精浆中含量最高，而尿液中最低。生理条件下带正电荷，能自由从肾小球滤过，完全被肾小管上皮细胞重吸收并于细胞内降解，不重新回到血液中；同时肾小管上皮细胞也不分泌Cys C至管腔内。因此，其血清浓度主要由GFR决定，肾脏是清除循环中Cys C的唯一器官，胱抑素C可作为评价肾小球滤过率的内源性检测指标，其血清浓度测定是优于传统的血尿素、尿酸、肌酐和内生肌酐清除率测定的新的肾功能评价指标。

单域抗体（single domain antibody，sdAb），又称纳米抗体（nanobody）或重链抗体（heavy chain antibody，hcAb），是从骆驼科动物和鲨鱼的血清中分离出的一种抗体，其体积约为传统抗体的1/10。自然界中在骆驼体内存在缺失轻链的重链抗体，克隆其可变区得到的单域抗体是最小的功能性抗原结合片段，相对分子质量（Mr）仅为15000，称为纳米抗体,具有分子质量小、稳定性强、可溶性好、易表达、免疫原性低并容易偶联其他分子等特点。纳米抗体技术是生物医学科学家在传统抗体的基础上，运用分子生物学技术结合纳米粒子科学的概念进行的抗体工程革命，从而研发的最新和最小的抗体分子，最初由比利时科学家Hamers.R在骆驼血液中发现。这些“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，但不像单链抗体那样相互黏连聚集成块。这种小型化的基因工程抗体在基础研究、开发新药和疾病的诊断和治疗上具有广阔的应用前景。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种针对Cys C表位的纳米抗体，同时提供该纳米抗体的编码序列及该纳米抗体在制备检测的应用。

技术方案

本发明的技术方案为：

一种针对Cys C纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，其特征在于，所述框架区FR选自下组的FR的氨基酸序列：SEQ ID NO：1所示的FR1，SEQ ID NO：2所示的FR2，SEQ ID NO：3所示的FR3，SEQ ID NO：4所示的FR4；所述互补决定区CDR选自下组的CDR的氨基酸序列：SEQ ID NO：5所示的CDR1，SEQ ID NO：6所示的CDR2，SEQ ID NO：7所示的CDR3；

或

所述框架区FR选自下组的FR的氨基酸序列：SEQ ID NO：10所示的FR1，SEQ ID NO：11所示的FR2，SEQ ID NO：12所示的FR3，SEQ ID NO：13所示的FR4；所述互补决定区CDR选自下组的CDR的氨基酸序列：SEQ ID NO：14所示的CDR1，SEQ ID NO：15所示的CDR2，SEQ ID NO：16所示的CDR3；。

所述的Cys C纳米抗体的VHH链，其特征在于，它具有SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：18所示的氨基酸序列。

一种Cys C纳米抗体，其特征在于，它针对Cys C表位的纳米抗体，包括两条具有SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：18所示氨基酸序列的VHH链。

一种DNA分子，其特征在于，它具有选自DNA序列如SEQ ID NO：8 或SEQ ID NO：17所示。

一种表达载体，其特征在于，它含SEQ ID NO：8 或SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列。

一种宿主细胞，其特征在于，其含有权利要求6所述的表达载体，其可以表达Cys C的纳米抗体。

所述的Cys C纳米抗体用于检测Cys C分子的用途。

有益效果：

本发明将Cys C分子偶联在酶标板上，展示该蛋白的正确空间结构，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫纳米抗体基因库（骆驼重链抗体噬菌体展示基因库），从而获得了针对Cys C特异性的纳米抗体基因，将此基因转至大肠杆菌中，从而建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。

附图说明

图1是纳米抗体的基因电泳图，从左到右的DNA条带分别是：第一条为100bp的分子标记，第二至第四条为PCR产物带约为500 bp,第五条为PCR过程中阴性对照；

图2是表达的一种胱抑素C的纳米抗体，经镍柱树脂凝胶亲和层析纯化后的SDS-PAGE的电泳图，结果显示，纳米抗体经过该纯化过程，其纯度可达到95%以上。

具体实施方式

本发明应用针对Cys C偶联在酶标板上，展示蛋白质的正确空间结构，以此形式的抗原筛选免疫纳米抗体基因库（骆驼重链抗体噬菌体展示基因库），而获得了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。

实施例1 胱抑素C纳米抗体文库的构建

（1）将1 mg 人胱抑素C蛋白(购自武汉华美生物工程有限公司CUSABIO)与弗氏佐剂等体积混合，免疫一只新疆单峰驼（句容圣龙家畜养殖厂），每周一次，共免疫4次，除第一次使用完全的弗氏佐剂，剩余几次全部使用弗氏不全佐剂，刺激B细胞表达抗原特异性的纳米抗体；（2）经4次免疫结束后，提取骆驼外周血淋巴细胞100 mL并提取总RNA(参照QIAGEN公司提供的RNA提取试剂盒）；（3）按照Super-Script Ⅲ FIRST STRANDSUPERMIX试剂盒说明书，将提取的RNA反转录成cDNA,并利用巢式PCR扩增重链抗体的可变区片段VHH。

第一轮PCR：

上游引物：GTCCTGGCTGCTCTTCTACAAGGC，见SEQ ID NO：19；

下游引物：GGTACGTGCTGTTGAACTGTTCC，见SEQ ID NO：20；

扩增重链抗体引导肽和抗体CH2之间的片段，54℃退火，25个循环；

第二轮PCR：

以第一轮PCR产物作模板，

上游引物：GATGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGRGGAGG，见SEQ ID NO：21；

下游引物：GGACTAGTGCGGCCGCTGGAGACGGTGACCTGGGT，见SEQ ID NO：22；

扩增重链抗体FR1区和长、短铰链区之间的片段(长片段和短片段)，60 ℃退火，17个循环，回收目的片段，结果如图1显示，该片段的大小约为500 bp，即从左到右的DNA条带分别是：第一为100 bp的分子Marker，第二纳米抗体基因电泳带约为500 bp；（4）使用限制性的内切酶Pst I及Not I（购自NEB）酶切20 μg pComb3噬菌体展示载体（Biovector供应）及10 μg VHH并用T4 DNA连接酶（购自TaKaRa公司）连接两个片段；（5）将连接产物转化至电转感受态细胞TG1（购自北京神州红叶科技有限公司）中，构建Cys C的纳米抗体文库并测定库容，库容的大小为1.85×10⁸。

实施例2 胱抑素C纳米抗体筛选过程

（1）将溶解在100 mM NaHCO₃、pH 8.2中的20 ug Cys C偶联在NUNC酶标板上，

4℃放置过夜；（2）第二天加入100 μL 0.1%酪蛋白，室温封闭2小时；（3）2小时后，加入100 μL噬菌体（5×10¹¹tfu免疫骆驼纳米抗体噬菌展示基因库），室温下作用1小时；(4）用0.05% Tween-20(T)PBS(PBST)洗5遍，以洗掉不结合的噬菌体；(5）用100 mM TEA（triethylamine）将与Cys C特异性结合的噬菌体解离下，并感染处于对数期生长的大肠杆菌TG1，产生并纯化噬菌体用于下一轮的筛选。相同筛选过程重复3~4轮。

实施例3 用噬菌体的酶联免疫方法（ELISA）筛选特异性单个阳性克隆

（1）从上述3~4轮筛选后含有噬菌体的细胞培养皿中，挑选96个单个菌落并接种于24孔细胞培养板中，生长至对数期后，加1 mM IPTG，28 ℃培养过夜；（2）利用渗透法获得粗提抗体，并将抗体转移到经抗原包被的ELISA板中，室温放置1小时；（3）用PBST洗去未结合的抗体，加入mouse anti-HA tag antibody，室温下放置1小时；（4）用PBST洗去未结合的抗体，加入anti-mouse alkaline phosphatase conjugate，室温下放置1小时；（5）用PBST洗去未结合的抗体，加入显色液，于ELISA仪上，在405nm波长，读取吸收值；（6）当样品孔OD值大于对照孔OD值2倍以上时，判为阳性克隆孔；（7）纯化阳性孔的质粒并进行测序。

依据各个克隆株的基因序列，把CDR1，CDR2，CDR3序列相同的株视为同一克隆株，而其序列不同的株视为不同克隆株。本发明提供两个Cys C纳米抗体，每个Cys C纳米抗体包括框架区和互补决定区；其中所述的框架区为4个分别为FR1-FR4，框架区FR1-FR4及其互补决定区CDR1-CDR3的氨基酸序列分别为：

胱抑素C纳米抗体1：框架区FR1-FR4及其互补决定区CDR1-CDR3氨基酸序列为：

FR1：Q V Q L Q E S G G G S V Q A G G S L R L S C A A S

FR2：M G W F R Q A P G K E R E G V A Q

FR3：N Y P D S V K G R F T I S Q D N A K N T L Y L Q M N S L E P E D T A M Y Y C

FR4：W G Q G T Q V T V S S

CDR1：G D I N S G F F

CDR2：I D T H G T T

CDR3：A A D P R A L V G S C G L G T C Y E S D Y

其整体核苷酸序列为：CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGAGGAGGCTCGGTGCAGGCTG

GAGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGAGACATCAACAGTGGCTTCTTTATGGGCTGGTTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGAGCGCGAGGGGGTCGCACAAATTGATACTCATGGCACCACAAACTACCCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACTCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTTGAACCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGGCAGATCCGCGCGCCCTGGTTGGTAGCTGCGGCCTCGGAACATGCTATGAGTCTGACTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA

氨基酸序列：Q V Q L Q E S G G G S V Q A G G S L R L S C A A SG D I N S G F FM G W F R Q A P G K E R E G V A Q I D T H G T T N Y P D S V K G R F T I S Q D N A K N T L Y L Q M N S L E P E D T A M Y Y C A A D P R A L V G S C G L G T C Y E S D Y W G Q G T Q V T V S S

胱抑素C纳米抗体2：框架区FR1-FR4及其互补决定区CDR1-CDR3氨基酸序列为：

FR1：Q V Q L Q E S G G G S V Q A G G S L R L S C A A S

FR2：L G W F R Q A P G K E R E G V A A

FR3：Y Y T D S V K G R F T V S Q D N A K N T L Y L Q M N G L R P E D T A M

Y Y C

FR4：W G Q G T Q V T V S S

CDR1：D V I L S N Y A Y

CDR2：I Y S R A G S T

CDR3：A S R W A P Y G A P C D I D S T Y I P

其整体核苷酸序列为：

CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGAGGAGGCTCGGTGCAGGCTGG

AGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGACGTCATCTTATCCAACTACGCCTATTTGGGCTGGTTCCGCCAGGCTCCAGGGAAAGAGCGCGAGGGGGTCGCAGCTATTTATAGTCGTGCAGGAAGCACATACTATACCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCCAAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATTTGCAAATGAATGGCCTGAGGCCTGAGGACACTGCCATGTACTACTGTGCGTCAAGGTGGGCCCCGTACGGTGCTCCCTGCGACATAGACAGTACATATATACCCTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA

氨基酸序列：Q V Q L Q E S G G G S V Q A G G S L R L S C A A S D V I L S N Y A Y L G W F R Q A P G K E R E G V A A I Y S R A G S T Y Y T D S V K G R F T V S Q D N A K N T L Y L Q M N G L R P E D T A M Y Y C A S R W A P Y G A P C D I D S T Y I P W G Q G T Q V T V S S

实施例4 纳米抗体在大肠杆菌中表达、纯化

（1）将前面测序分析所获得不同克隆株的质粒电转化到大肠杆菌WK6中，并将其涂布在LA+glucose即含有氨苄青霉素和葡萄糖的培养平板上，37 ℃过夜；（2）挑选单个菌落接种在5 mL含有氨苄青霉素的LB培养液中，37 ℃摇床培养过夜；（3）接种1 mL的过夜菌种至330 mL TB培养液中，37 ℃摇床培养，培养到OD值达到0.6~1时，加入330ul 1M IPTG，28 ℃摇床培养过夜；（4）离心，收菌；（5）利用渗透法，获得抗体粗提液；（6）经镍柱离子亲和层析可制备纯度达90%以上的蛋白。

实施例5 胱抑素C纳米抗体检测特异性分析

将胱抑素C、前白蛋白经碳酸盐透析后包被在酶标板上，同时做空白孔对照，各包被两个孔，将胱抑素C纳米抗体及对照抗体前白蛋白纳米抗体分别转移到经抗原包被的ELISA板中，在室温下放置1小时。（3）用PBST洗去未结合的抗体，加入一抗mouse anti-HA tag antibody（抗鼠抗HA抗体，购自北京康为世纪生物科技有限公司），在室温下放置1小时。（4）用PBST洗去未结合的抗体，加入二抗anti-mouse alkaline phosphatase conjugate（山羊抗小鼠碱性磷酸酶标记抗体，购自艾美捷科技有限公司），在室温下放置1小时。（5）用PBST洗去未结合的抗体，加入碱性磷酸酶显色液，于ELISA仪上，在405nm波长，读取吸收值。结果显示胱抑素C纳米抗体能特异性的识别胱抑素C。结果如下：

抗体 OD405抗原	胱抑素C	前白蛋白	空白对照
				胱抑素C纳米抗体1	2.292	0.316	0.291
胱抑素C纳米抗体2	2.391	0.328	0.322
				前白蛋白纳米抗体	0.285	1.967	0.289

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 东南大学

<120> 胱抑素C纳米抗体及其编码序列

<130>

<160> 22

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ala

1 5 10 15

Gln

<210> 3

<211> 38

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Asn Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn

1 5 10 15

Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Glu Asp

20 25 30

Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

35

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 4

Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 5

Gly Asp Ile Asn Ser Gly Phe Phe

1 5

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 6

Ile Asp Thr His Gly Thr Thr

1 5

<210> 7

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 7

Ala Ala Asp Pro Arg Ala Leu Val Gly Ser Cys Gly Leu Gly Thr Cys

1 5 10 15

Tyr Glu Ser Asp Tyr

20

<210> 8

<211> 381

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

caggtgcagc tgcaggagtc tggaggaggc tcggtgcagg ctggagggtc tctgagactc 60

tcctgtgcag cctctggaga catcaacagt ggcttcttta tgggctggtt ccgtcaggct 120

ccagggaagg agcgcgaggg ggtcgcacaa attgatactc atggcaccac aaactaccca 180

gactccgtga agggccgatt caccatctcc caagacaacg ccaagaacac tctgtatctg 240

caaatgaaca gccttgaacc tgaggacact gccatgtact actgtgcggc agatccgcgc 300

gccctggttg gtagctgcgg cctcggaaca tgctatgagt ctgactactg gggccagggg 360

acccaggtca ccgtctcctc a 381

<210> 9

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 9

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Asp Ile Asn Ser Gly Phe

20 25 30

Phe Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val

35 40 45

Ala Gln Ile Asp Thr His Gly Thr Thr Asn Tyr Pro Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gln Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Ala Asp Pro Arg Ala Leu Val Gly Ser Cys Gly Leu Gly Thr Cys Tyr

100 105 110

Glu Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 10

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 10

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 11

Leu Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ala

1 5 10 15

Ala

<210> 12

<211> 38

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 12

Tyr Tyr Thr Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Gln Asp Asn

1 5 10 15

Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Pro Glu Asp

20 25 30

Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

35

<210> 13

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 13

Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 14

Asp Val Ile Leu Ser Asn Tyr Ala Tyr

1 5

<210> 15

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 15

Ile Tyr Ser Arg Ala Gly Ser Thr

1 5

<210> 16

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 16

Ala Ser Arg Trp Ala Pro Tyr Gly Ala Pro Cys Asp Ile Asp Ser Thr

1 5 10 15

Tyr Ile Pro

<210> 17

<211> 381

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

caggtgcagc tgcaggagtc tggaggaggc tcggtgcagg ctggagggtc tctgagactc 60

tcctgtgcag cctctgacgt catcttatcc aactacgcct atttgggctg gttccgccag 120

gctccaggga aagagcgcga gggggtcgca gctatttata gtcgtgcagg aagcacatac 180

tataccgact ccgtgaaggg ccgattcacc gtctcccaag acaacgccaa gaacacgctg 240

tatttgcaaa tgaatggcct gaggcctgag gacactgcca tgtactactg tgcgtcaagg 300

tgggccccgt acggtgctcc ctgcgacata gacagtacat atataccctg gggccagggg 360

acccaggtca ccgtctcctc a 381

<210> 18

<211> 127

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 18

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Ala Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Asp Val Ile Leu Ser Asn Tyr

20 25 30

Ala Tyr Leu Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly

35 40 45

Val Ala Ala Ile Tyr Ser Arg Ala Gly Ser Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser

50 55 60

Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Gln Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Ser Arg Trp Ala Pro Tyr Gly Ala Pro Cys Asp Ile Asp Ser

100 105 110

Thr Tyr Ile Pro Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 19

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

gtcctggctg ctcttctaca aggc 24

<210> 20

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

ggtacgtgct gttgaactgt tcc 23

<210> 21

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

gatgtgcagc tgcaggagtc tggrggagg 29

<210> 22

<211> 35

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

ggactagtgc ggccgctgga gacggtgacc tgggt 35

Claims

1.一种针对Cys C纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，其特征在于，所述框架区FR为下组的FR的氨基酸序列：SEQ ID NO：1所示的FR1，SEQ ID NO：2所示的FR2，SEQ ID NO：3所示的FR3，SEQ ID NO：4所示的FR4；所述互补决定区CDR为下组的CDR的氨基酸序列：SEQ ID NO：5所示的CDR1，SEQ ID NO：6所示的CDR2，SEQ ID NO：7所示的CDR3。

2.根据权利要求1所述的Cys C纳米抗体的VHH链，其特征在于，其为SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列。

3.一种Cys C纳米抗体，其特征在于，它针对Cys C表位的纳米抗体，其为SEQ ID NO：9所示氨基酸序列的VHH链。

4.一种DNA分子，其特征在于，其DNA序列如SEQ ID NO：8所示。

5.一种表达载体，其特征在于，其含SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。

6.一种宿主细胞，其特征在于，其含有权利要求5所述的表达载体，其可以表达Cys C的纳米抗体。