CN103399147B - 多聚半乳糖醛酸的新应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药领域，公开了多聚半乳糖醛酸(PGA)的新应用，即PGA在制备检测类风湿性关节炎的物质中的应用以及检测类风湿性关节炎的方法及试剂盒。本发明所述检测方法利用抗原抗体反应，通过测定与PGA特异性结合的抗体的水平检测风湿性关节炎简单、快捷，敏感性高、特异性好易于推广。本发明所述检测类风湿性关节炎的试剂盒敏感性高、特异性好、稳定可靠、适用范围广，适用于类风湿性关节炎及早期类风湿性关节炎的检测。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及多聚半乳糖醛酸的新应用，尤其是涉及多聚半乳糖醛酸在制备检测类风湿性关节炎的物质中的应用以及检测类风湿性关节炎的方法及试剂盒。
背景技术
类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一种以慢性侵蚀性关节炎为特征的全身性自身免疫病。类风湿关节炎的病变特点为滑膜炎，以及由此造成的关节软骨和骨质破坏，最终导致关节畸形。类风湿关节炎分布于世界各地，在不同人群中的患病率为0.18%～1.07%，其发病具有一定的种族差异，印地安人高于白种人，白种人高于亚洲黄种人。在我国的总患病人数逾500万。类风湿关节炎在各年龄中皆可发病，高峰年龄在30～50岁左右，一般女性发病多于男性。类风湿关节炎如果不经过正规治疗，约75%的患者在3年内出现残废。
类风湿关节炎无有效的预防方法，重在早期诊断早期治疗，以免延误病情。其中通过检测抗自身抗体具有较高的敏感性和准确性。类风湿关节炎患者体内存在多种抗自身抗体及免疫复合物，如类风湿因子(RF)及多种抗瓜氨酸化蛋白抗体（CCP-Abs）等，在疾病的发生发展过程中起较重要的作用。同时又可以作为诊断类风湿关节炎并评价其活动性的重要指标。类风湿因子（RF）是类风湿关节炎患者体内重要的抗自身抗体，75%～85%的患者血清类风湿因子阳性，并与病情和关节外表现相关。而抗瓜氨酸化蛋白抗体是一类针对含有瓜氨酸化表位的自身抗体的总称，对类风湿关节炎的诊断具有很高的敏感性和特异性，并与类风湿关节炎的病情和预后密切相关。各种抗瓜氨酸化蛋白抗体对类风湿关节炎的敏感性和特异性不同，详见表1。
表1抗瓜氨酸化蛋白抗体的种类及诊断价值
| 抗体 | 敏感性（%） | 特异性（%） |
| 抗核周因子（APF） | 49～91 | 73～99 |
| 抗角蛋白抗体（AKA） | 36～59 | 88～99 |
| 抗聚丝蛋白抗体（ACA） | 41 | 99 |
| 抗环瓜氨酸肽抗体（CCP） | 68 | 98 |
| 抗突变型波形蛋白抗体（MCV） | 70 | 91 |
| 抗瓜氨酸化纤维蛋白原抗体（ACF） | 61～75 | 85～98 |
| 抗病毒瓜氨酸化多肽抗体（VCP） | 45 | 95 |
多聚半乳糖醛酸（polygalacturonic acid，PGA）为半乳糖醛酸的脱水缩合而成的聚合体，亦称多聚半乳糖醛酸聚糖，表达于许多动植物中，如苹果等。但是至今尚未见到有关多聚半乳糖醛酸可用于检测或辅助诊断风湿关节炎的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供多聚半乳糖醛酸的新应用，即多聚半乳糖醛酸在制备检测类风湿性关节炎的物质中的应用以及检测类风湿性关节炎的方法及试剂盒。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明提供了多聚半乳糖醛酸在制备检测类风湿性关节炎的物质中的应用。
进一步的，本发明提供了一种检测类风湿性关节炎的试剂盒，包括多聚半乳糖醛酸。
优选的，本发明所述试剂盒还包括带标记的二抗。
优选的，所述带标记的二抗为酶标记二抗。
优选的，所述酶标记二抗的标记酶为辣根过氧化物酶。
优选的，所述带标记的二抗的抗体为抗人IgA和IgG。
优选的，所述抗人IgA和IgG为山羊抗人IgA和IgG、兔抗人IgA和IgG或鼠抗人IgA和IgG。
优选的，本发明所述试剂盒还包括如下物质中的一种或多种：牛血清白蛋白、正常小鼠血清，PBS缓冲液、PBST溶液、PBST-BSA溶液、PBST-BSA-小鼠血清、OPD-磷酸柠檬酸缓冲液、硫酸和96孔酶标板。
本发明还提供了一种检测类风湿关节炎的方法，包括：
步骤1、将50μg/mL多聚半乳糖醛酸溶于pH9.6的碳酸盐缓冲液中，包被于96孔酶标板，每孔100μL，4℃过夜，PBST溶液洗5次；
步骤2、2%BSA-PBST溶液封闭，每孔200μL，37℃封闭2小时，PBST溶液洗5次；
步骤3、加入待测样本，1:200稀释于0.1%BSA-10%小鼠血清-PBST中，每孔100μL，37℃孵育2小时，PBST溶液洗5次；
步骤4、再加入1:4000稀释的HRP标记的羊抗人IgA和IgG，37℃孵育1小时，PBST溶液洗5次；
步骤5、pH9.6的OPD-磷酸柠檬酸缓冲液显色，12.5%硫酸溶液终止反应，ELISA reader读取OD492nm吸光度值。
与现有技术相比，本发明所述检测方法利用抗原抗体反应，通过测定与PGA特异性结合的抗体的水平检测风湿性关节炎简单、快捷，敏感性高、特异性好易于推广。本发明所述检测类风湿性关节炎的试剂盒敏感性高、特异性好、稳定可靠、适用范围广，适用于类风湿性关节炎及早期类风湿性关节炎的检测。
附图说明
图1示实施例1不同血清样品中PGA-IgA含量的检测图，其中***为p<0.001，具有统计学显著差异；ns为p>0.05，不具有统计学差异；
图2示实施例1不同血清样品中PGA-IgG含量的检测图，*为p<0.05，***为p<0.001，具有统计学显著差异，ns为p>0.05，不具有统计学差异；
图3示实施例2早期RA患者组的PGA-IgA的ROC曲线，其中ROC曲线下面积AUC=0.9547；
图4示实施例2RA活动期患者组的PGA-IgA的ROC曲线，其中ROC曲线下面积AUC=0.9547；
图5示实施例2早期RA患者组的PGA-IgG的ROC曲线，其中ROC曲线下面积AUC=0.7613；
图6示实施例2RA活动期患者组的PGA-IgG的ROC曲线，其中ROC曲线下面积AUC=0.9544；
图7示实施例4同一患者PGA-IgA与RF、CCP-Abs产生时间比较的结果图，其中为PGA-IgA，为CCP-Abs，为RF。
具体实施方式
本发明实施例公开了多聚半乳糖醛酸的新应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品、方法和应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
申请人选取150例健康人、80例RA活动期患者、20例早期RA患者、49例骨关节炎、32例强制性脊髓炎和13例银屑病关节炎患者血清样品，对血清中PGA特异性抗体的含量进行检测。结果显示无论是IgA型还是IgG型的PGA特异性抗体在健康人及骨关节炎、强制性脊髓炎、银屑病关节炎患者血清中均无表达，而在大部分类风湿关节炎患者血清中明显升高。IgA和IgG两型的PGA特异性抗体在健康人和类风湿关节炎两组之间差异均十分显著(p<0.001)，且在早期类风湿关节炎（早期RA）患者血清中PGA特异性抗体的含量亦有明显升高(p<0.001)。表明PGA是对人体的一种自身抗原，健康人体内不产生针对该表位的抗体，在发生自身免疫病时，免疫耐受被打破，血清中该抗体的滴度升高。
ROC曲线又称受试者工作特征曲线(receive operating characteristic curve)，是反映检测指标敏感性和特异性连续变量的综合指标。ROC曲线下的面积值AUC在1.0和0.5之间。在AUC>0.5的情况下，AUC越接近于1，说明诊断效果越好。AUC在0.5～0.7时有较低准确性，AUC在0.7～0.9时有一定准确性，AUC在0.9以上时有较高准确性。AUC=0.5时，说明诊断方法完全不起作用，无诊断价值。
为评价PGA特异性抗体在诊断RA中的应用价值，申请人根据RA活动期患者组和早期RA患者组PGA-IgA和PGA-IgG水平分别绘制了ROC曲线。计算ROC曲线下面积AUC来评价诊断效率。结果显示RA活动期患者组和早期RA患者组的PGA-IgA和PGA-IgG的ROC曲线下面积AUC均大于0.7，具有良好的特异性和敏感性。
RF和CCP-Abs是在临床上常用的两种RA的辅助诊断指标。申请人选取不同诊断的特异性及敏感性，比较PGA抗体与RF及CCP-Abs特异性和敏感性。结果显示如果诊断的特异性设定为95.3%，PGA-IgA和PGA-IgG的敏感性分别为58.8%和67.5%，略低于CCP-Abs的76.9%和RF的76.7%。但是PGA-IgA在早期RA的敏感性在65%，与CCP-Abs的66.7%非常相近，而远好于RF的33.3%。如将诊断的敏感性设定为80%，PGA-IgA的特异性为90%，好于RF的25.4%和CCP-Abs的84.7%。表明PGA特异性抗体在RA患者血清中呈高表达，其敏感性和特异性跟常用的RA诊断指标RF及CCP-Abs差不多，而在早期RA的诊断中，PGA-IgA较RF及CCP-Abs好。
进一步的，申请人通过分别检测同一RA患者2005、2006、2007年的血清中PGA-IgA、RF及CCP-Abs的含量比较PGA-IgA与RF、CCP-Abs产生时间。结果显示，PGA-IgA于2005年便可检测到，而RF、CCP-Abs在一年后才能够检测到。进一步表明PGA-IgA可用于早期RA的检测。
综上所述，PGA特异性抗体在健康人体不表达，在RA患者血清中呈高表达，其敏感性和特异性跟常用的RA诊断指标RF及CCP-Abs差不多，而在早期RA的诊断中，PGA-IgA较RF及CCP-Abs好。且PGA特异性抗体产生时间比RF、CCP-Abs早。因此PGA特异性抗体可用于类风湿关节炎的辅助诊断，尤其对于早期类风湿关节炎的诊断。利用抗原抗体反应，通过测定与PGA特异性结合的抗体的水平可以检测风湿性关节炎。因此本发明提供了多聚半乳糖醛酸在制备检测类风湿性关节炎的物质中的应用。
本发明还提供了一种检测类风湿性关节炎的试剂盒，包括多聚半乳糖醛酸。多聚半乳糖醛酸可以与产生的PGA特异性抗体结合，通过测定样品血清中PGA特异性抗体水平检测是否患有类风湿性关节炎。
在一些实施例中，本发明所述试剂盒还包括带标记的二抗。
二抗是在其它宿主体内制备的能与一抗或一抗片段结合的抗体，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗上面通常连有标记，包括酶(辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP)，荧光基团(FITC、Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等)、生物素、金颗粒。本领域技术人员可以根据不同的实验选用不同的标记。对于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗，而细胞或组织标记实验(细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术)中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用Biotin/Avidin检测系统。在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记，而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。
作为优选，本发明所述试剂盒中二抗为酶标记二抗。
进一步的，本发明所述试剂盒中酶标记二抗的标记酶优选为辣根过氧化物酶。
抗体按理化性质和生物学功能可分为IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五类。本发明所述试剂盒中所述带标记的二抗的抗体为抗人IgA和IgG。
二抗是在其它宿主体内制备的与一抗或一抗片段结合的抗体，因此不同的宿主可以得到不同的二抗。本发明所述二抗优选为山羊抗体、兔抗体或鼠抗体，即所述抗人IgA和IgG为山羊抗人IgA和IgG、兔抗人IgA和IgG或鼠抗人IgA和IgG。
进一步的，在一些实施例中本发明所述试剂盒还包括如下物质中的一种或多种：牛血清白蛋白、正常鼠血清，PBS缓冲液、PBST溶液、PBST-BSA溶液、PBST-BSA-鼠血清、OPD-磷酸柠檬酸缓冲液、硫酸和96孔酶标板。
其中，所述PBS缓冲液的浓度为0.15mol/L，pH为7.2。所述PBST溶液为在所述PBS缓冲液中加入Tween20得到的溶液，所述PBST溶液中所述Tween20的体积浓度为0.05%。所述PBST-BSA溶液为在所述PBST缓冲液中加入牛血清白蛋白得到的溶液，所述牛血清白蛋白的终浓度为1克/L。PBST-BSA-鼠血清为在所述PBST-BSA溶液缓冲液中加入10v/v%正常鼠血清。所述OPD-磷酸柠檬酸缓冲液为在10mL磷酸柠檬酸缓冲液加入4mg邻苯二胺和15μL3%H2O2得到的溶液。所述磷酸柠檬酸缓冲液的pH为5.0，为0.2mol/L磷酸氢二钠溶液25.7mL与0.1mol/L柠檬酸溶液24.3mL混匀后加水定容至100mL得到的溶液。
进一步的，本发明还提供了一种检测类风湿关节炎的方法，包括：
步骤1、将50μg/mL多聚半乳糖醛酸溶于pH9.6的碳酸盐缓冲液中，包被于96孔酶标板，每孔100μL，4℃过夜，PBST溶液洗5次；
步骤2、2%BSA-PBST溶液封闭，每孔200μL，37℃封闭2小时，PBST溶液洗5次；
步骤3、加入待测样本，1:200稀释于0.1%BSA-10%小鼠血清-PBST中，每孔100μL，37℃孵育2小时，PBST溶液洗5次；
步骤4、再加入1:4000稀释的HRP标记的羊抗人IgA和IgG，37℃孵育1小时，PBST溶液洗5次；
步骤5、pH9.6的OPD-磷酸柠檬酸缓冲液显色，12.5%硫酸溶液终止反应，ELISA reader读取OD492nm吸光度值。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。其中，一些主要的实验材料和方法如下所述，其他未注明具体条件的实验方法为所属研究领域众所周知的常规操作，或按照产品说明书所建议的条件。
实施例1：健康人与类风湿关节炎患者血清中PGA特异性抗体含量的检测
1、实验材料
多聚半乳糖醛酸（PGA，81325）购自美国Sigma公司；Epoxy-activatedSepharose6B及CN-Br-activated Sepharose4B购自Pharmacia Biotech公司；辣根过氧化物酶（Horseradish peroxidase,HRP）标记的山羊抗人IgG、IgA抗体购自SBA公司。
血清样品：150例健康人血清样品由北京市红十字血液中心提供；80例RA活动期患者、20例早期RA患者、49例骨关节炎、32例强制性脊髓炎、13例银屑病关节炎患者血清样品由北京大学第二医院提供。
仪器设备与耗材：Eppendorf公司微量加样器；北京六一仪器厂恒流泵；4℃冰箱；-80℃低温冰箱；Axygen公司微量吸头；芬兰雷勃公司ELISA reader；96孔酶标板。
2、实验方法
2.1、制备PGA包被的Sepharose6B：0.3g环磷酰胺活化的Sepharose6B用水溶胀，至少200mL ddH2O冲洗干净后与200mg PGA在0.05M pH11.0的NaHCO3-NaOH包被缓冲液中于37℃颠倒混匀反应16小时以上。反应结束后用包被缓冲液洗掉未结合的多糖，凝胶与1M的乙醇胺/Na2-NaH2PO4缓冲液（pH8.0）37℃颠倒混匀反应6-7小时以封闭未结合的活性基团。然后用0.1MNaAc-HAc（NaCl0.5M）pH4.0，0.1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0缓冲液中，作为制备好的PGA包被的Sepharose6B（PGA-Sepharose6B），4℃保存备用。
2.2、PGA特异性抗体的制备：将10mL RA患者血清与0.1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0缓冲液平衡后的PGA-SepHarose6B孵育4℃过夜，然后重新装柱，30mL0.1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0洗柱，流速2mL/min，用考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度为零后，用5mL0.1M甘氨酸pH3.0缓冲液洗脱目的蛋白，流速1mL/min。洗脱蛋白加入1/10体积的1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0中和pH值。纯化后的抗体用12%SDS-PAGE鉴定纯度，分装冻存于-80℃备用。
2.3、制备鼠抗人IgG或鼠抗人IgA包被的溴化氢活化Sepharose4B：0.3g溴化氢活化的Sepharose4B用水溶胀，至少200mL ddH2O冲洗干净后与5-10mg鼠抗人IgG或鼠抗人IgA在0.05M pH11.0的NaHCO3-NaOH包被缓冲液中于37℃颠倒混匀反应16小时以上。反应结束后用包被缓冲液洗掉未结合的抗体，凝胶与1M的乙醇胺/Na2-NaH2PO4缓冲液（pH8.0）37℃颠倒混匀反应6-7小时以封闭未结合的活性基团。然后用0.1M NaAc-HAc（NaCl0.5M）pH4.0，0.1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0交替冲洗。制备好的抗体包被的Sepharose4B（IgG-Sepharose4B或IgA-Sepharose4B）放在0.1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0缓冲液中，4℃保存备用。
2.4、PGA特异性IgG/IgA标准品的制备：将从RA患者血清中纯化的PGA特异性抗体（IgG/IgA）与0.1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0缓冲液平衡后的IgG-Sepharose4B或IgA-Sepharose4B孵育4℃过夜，然后重新装柱，30mL0.1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0洗柱，流速2mL/min，用考马斯亮蓝蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度为零后，用5mL0.1M甘氨酸pH3.0缓冲液洗脱目的蛋白，流速1mL/min。洗脱蛋白加入1/10体积的1M Tris-Cl（NaCl0.5M）pH8.0中和pH值。纯化后的抗体用12%SDS-PAGE鉴定纯度，分装冻存于-80℃备用。
2.5、健康人与类风湿关节炎患者血清中PGA特异性抗体含量的检测：将PGA（50μg/mL）溶于pH9.6的碳酸盐缓冲液中，包被于96孔酶标板，每孔100μL，4℃过夜。PBST溶液（PBS缓冲液中加入0.05%Tween20）洗5次。2%BSA-PBST溶液封闭，每孔200μL，37℃封闭2小时。PBST溶液洗5次。加入健康人血清或RA患者血清样本，1:200稀释于0.1%BSA-10%小鼠血清-PBST中，每孔100μL，37℃孵育2小时。PBS-T溶液洗5次。再加入1:4000稀释的HRP标记的羊抗人IgA和IgG，37℃孵育1小时。PBST溶液洗5次。OPD-磷酸柠檬酸缓冲液显色（pH9.6），12.5%硫酸溶液终止反应。ELISA reader读取OD492nm吸光度值，结果见图1和图2。
由图1和图2可见，无论是IgA型还是IgG型的PGA特异性抗体在健康人及骨关节炎、强制性脊髓炎、银屑病关节炎患者血清中均无表达，而在大部分类风湿关节炎患者血清中明显升高。IgA和IgG两型的PGA特异性抗体在健康人和类风湿关节炎两组之间差异均十分显著(p<0.001)，且在早期类风湿关节炎（早期RA）患者血清中PGA特异性抗体的含量亦有明显升高(p<0.001)。表明PGA特异性抗体可用于类风湿关节炎的辅助诊断，尤其对于早期类风湿关节炎的诊断具有重要意义。
实施例2：健康人与类风湿关节炎患者血清中PGA特异性抗体含量比较的ROC曲线
根据实施例1中健康人、RA活动期患者组和早期RA患者组PGA-IgA和PGA-IgG水平分别绘制ROC曲线。以实施例1中健康人血清中PGA特异性抗体的含量为对照，对RA活动期患者组和早期RA患者组对血清中PGA特异性抗体的含量进行分析，确定测定值的上下限、组距以及截断点（Cutoffpoint），按选择的组距间隔列出累积频数分布表，分别计算出所有截断点的敏感性、特异性和假阳性率（1-特异性）。以敏感性为纵坐标代表真阳性率，（1-特异性）为横坐标代表假阳性率，作图绘成ROC曲线。计算ROC曲线下面积AUC，结果见图3～6。
结果显示，早期RA患者组的PGA-IgA的ROC曲线下面积AUC=0.9547，RA活动期患者组的PGA-IgA的ROC曲线下面积AUC=0.9119，早期RA患者组的PGA-IgG的ROC曲线下面积AUC=0.7613，RA活动期患者组的PGA-IgG的ROC曲线下面积AUC=0.9544。RA活动期患者组和早期RA患者组的PGA-IgA和PGA-IgG的ROC曲线下面积AUC均大于0.7，表明以PGA特异性抗体为指标的检测具有良好的特异性和敏感性。
实施例3：PGA抗体与RF及CCP-Abs特异性和敏感性的比较
通过QUANTA Lite CCP3IgG ELISA试剂盒检测（购自美国INOVA诊断公司）测定健康人、RA活动期患者组和早期RA患者组的CCP-Abs含量：CCP-Abs的含量，应用IMMAGE（Immunochemistry system machine试剂盒（购自美国Beckman公司）检测健康人、RA活动期患者组和早期RA患者组的RFs的含量。按照实施例2的方法分别绘制ROC曲线，计算ROC曲线下面积AUC。并根据以下公式计算不同检测指标的特异性和敏感性。敏感性=真阳性人数/（真阳性人数+假阴性人数）*100%，代表正确判断病人的比率。特异性=真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数）*100%，代表正确判断非病人的比率。选取不同诊断的特异性及敏感性，比较PGA抗体与RF及CCP-Abs特异性和敏感性，其中a）为将诊断的特异性分别设定为95.3%或99.3%时，比较PGA-IgA、PGA-IgG、CCP-Abs和RFs用于诊断RA的敏感性；b）为将诊断的敏感性设定为80%时，比较PGA-IgA、PGA-IgG、CCP-Abs和RFs用于诊断RA的特异性。结果见表2。
表2PGA抗体与RF及CCP-Abs特异性和敏感性的比较
由表2可见，如果诊断的特异性设定为95.3%，PGA-IgA和PGA-IgG的敏感性分别为58.8%和67.5%，略低于CCP-Abs的76.9%和RF的76.7%。但是PGA-IgA在早期RA的敏感性在65%，与CCP-Abs的66.7%非常相近，而远好于RF的33.3%。如将诊断的敏感性设定为80%，PGA-IgA的特异性为90%，好于RF的25.4%和CCP-Abs的84.7%。
实施例4：同一患者PGA-IgA与RF、CCP-Abs产生时间比较
患者李某，2005年第一次就诊时，已出现类风湿关节炎的症状，但症状较轻微，血清中RF、CCP-Abs的含量尚在正常值范围内，一年以后再次就诊，症状加重，RF、CCP-Abs含量明显升高，进入类风湿关节炎活动期。分别于2005、2006、2007年收集该患者的血清，分别按照实施例1和实施例3的方法检测PGA-IgA、RF及CCP-Abs，结果见图7。
由图7结果显示，PGA-IgA于2005年便可检测到，而RF、CCP-Abs在一年后才能够检测到。表明PGA-IgA可用于早期RA的检测。
实施例5：检测类风湿性关节炎的试剂盒
一种检测类风湿性关节炎的试剂盒，包括多聚半乳糖醛酸。
实施例6：检测类风湿性关节炎的试剂盒
一种检测类风湿性关节炎的试剂盒，包括多聚半乳糖醛酸和辣根过氧化物酶标记山羊抗人IgA和IgG。
实施例7：检测类风湿性关节炎的试剂盒
一种检测类风湿性关节炎的试剂盒，包括多聚半乳糖醛酸、辣根过氧化物酶标记兔抗人IgA和IgG、正常小鼠血清，OPD-磷酸柠檬酸缓冲液。
实施例8：检测类风湿性关节炎的试剂盒
一种检测类风湿性关节炎的试剂盒，包括多聚半乳糖醛酸、辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgA和IgG、牛血清白蛋白、正常鼠血清，PBS缓冲液、PBST溶液、PBST-BSA溶液、PBST-BSA-鼠血清、OPD-磷酸柠檬酸缓冲液、硫酸和96孔酶标板。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
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1.多聚半乳糖醛酸在制备检测类风湿性关节炎的物质中的应用。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU6603698A (en) * | 1997-03-19 | 1998-10-12 | Montech Medical Developments Pty Ltd | Method for the diagnosis of rheumatoid arthritis |
| CN102597268A (zh) * | 2009-09-03 | 2012-07-18 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 用于治疗、诊断和监控类风湿性关节炎的方法 |
| CN102971631A (zh) * | 2010-12-15 | 2013-03-13 | 株式会社凯蒂生物 | 类风湿性关节炎的检查方法及类风湿性关节炎检查用试剂盒 |
-
2013
- 2013-08-07 CN CN201310342055.6A patent/CN103399147B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU6603698A (en) * | 1997-03-19 | 1998-10-12 | Montech Medical Developments Pty Ltd | Method for the diagnosis of rheumatoid arthritis |
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| CN102971631A (zh) * | 2010-12-15 | 2013-03-13 | 株式会社凯蒂生物 | 类风湿性关节炎的检查方法及类风湿性关节炎检查用试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Influence of the Degree of Polymerization of Oligogalacturonates and of Esterification Pattern of Pectin on Their Recognition by Monoclonal Antibodies;Francoise Liners et al.;《 Plant Physiol.》;19920731;第99卷;1099-1104 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103399147A (zh) | 2013-11-20 |
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