CN103392905B - 一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，通过将榨取油后的植物油脂饼粕脱脂干燥后用粉碎机粉碎后进行双频超声波辅助碱溶提取蛋白，双频超声复合频率为20～35kHz/35～60kHz，声强为0.1～0.9W/cm²，作用时间5～30s，间歇时间5～30s，按以上条件搅拌提取60～120min，上清液进行酸沉后收集沉淀，通过将植物油脂饼粕蛋白粉溶液进行真空冷冻干燥制成干粉后，用超微粉碎机将干燥后的植物油脂饼粕蛋白粉进行超微粉碎，进而获得蛋白粉。本发明采用的从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法可以解决现有技术的发展瓶颈，促进蛋白溶解，提高提取效率，同时提升其功能性质，具有广泛的实用性。

Description

一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法

发明领域

本发明属于制备蛋白粉技术领域，具体的，本发明涉及一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的技术领域，进一步讲，本发明涉及一种采用双频超声结合超微粉碎从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的技术领域。

背景技术

我国油料植物榨油后剩余副产品植物油脂饼粕中含有大量蛋白质，其粗蛋白质含量多在10％以上，有的甚至达到了60％以上。每年有大量榨油后的植物油脂饼粕被作为廉价饲料甚至废弃处理，造成了蛋白资源的严重浪费。榨油过程的受热处理会导致蛋白严重变性，影响蛋白质利用率。因此，如何高效提取热榨植物油脂饼粕中热变性蛋白并提升其功能特性，开发高品质的植物油脂饼粕蛋白粉产品，是目前热榨植物油脂饼粕加工业亟需解决的问题。

葵花籽粕、胡麻籽粕、红花籽粕、南瓜籽粕、打瓜籽粕、甜瓜籽粕、杏仁粕、核桃粕等热榨植物油脂饼粕中富合蛋白质等各种营养成分，但由于饼粕蛋白在油脂加工过程因受热、压榨或有机溶剂处理等作用而发生严重变性，其溶解性、乳化性、持油性等性能显著下降。因此，如何高效提取并获得良好功能性质的饼粕蛋白是困扰各类饼粕蛋白深加工的主要障碍。

目前，食品行业对功能性质较差的蛋白一般采用改性的手段，主要有物理改性、化学改性以及酶水解法改性等方法。化学法和酶法改性都改变了蛋白的分子结构，蛋白的一些特性因而会受到比较大的影响。物理改性方法一般不改变蛋白分子结构、不损害功能特性，因此具有较好的应用前景。在物理改性方法中，超声波改性因超声产生的空化效应、剪切作用以及超声引发的自由基作用等，可以显著地影响生物大分子的结构和功能，在变性蛋白开发利用方面的优势非常明显。Tang等报道利用15kHz超声波处理不溶的商用大豆分离蛋白，使其形成了可溶的微小蛋白聚集体，同时发现疏水作用、氢键等在可溶蛋白微粒形成中发生作用。国内相关研究表明，超声复性可使菜籽浓缩蛋白的氮溶解指数(NSI)明显提高，乳化能力和起泡能力也有一定提高。但是，当前采用超声辅助提取技术大多采用单一频率的超声模式，对于复杂的植物蛋白结构及其存在形式，单一频率的超声很难取得理想的溶解促进效果和传质强化效果。

超微粉碎技术是利用机械或流体动力的途径将原材料加工成微米粉甚至是纳米粉。由于超微粉体的比表面积较大，具有良好的溶解性、分散性、吸附性、化学反应活性等。超微粉碎技术是近年来随着现代化工、电子、生物、材料及矿产开发等高新技术的不断发展而兴起的，是国内外食品加工的高科技尖端技术。该技术目前在国内食品领域的应用范围较小，尤其在蛋白粉生产过程中采用此项技术进行改性的研究尚处于起步阶段。因此，从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉中采用超微粉碎技术具有重要的现实意义。

发明内容

针对现有技术中未见报道采用双频超声辅助提取结合超微粉碎技术从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的技术现状。本发明为了提供了一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，以榨油后的饼粕为原料，通过双频超声波辐射处理技术辅助提取植物油脂饼粕蛋白质，同时对热变性植物油脂饼粕蛋白进行复性，利用超微粉碎技术进一步提升植物油脂饼粕蛋白溶解性、分散性、持水性和持油性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性等功能特性，提高蛋白粉产品品质。双频超声辅助提取结合超微粉碎显著提高了蛋白的提取率和改善了蛋白的功能特性。

本发明的技术方案：

本发明通过将榨取油后的植物油脂饼粕脱脂干燥后，用粉碎机粉碎后进行双频超声波辅助碱溶提取蛋白，收集上清液进行酸沉后收集沉淀，通过将植物油脂饼粕蛋白粉溶液进行真空冷冻干燥制成干粉后，采用超微粉碎技术处理，用超微粉碎机将干燥后的进行超微粉碎，进而获得蛋白粉。本发明采用的从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法可以解决现有技术的发展瓶颈，促进蛋白溶解，提高提取效率，同时改善蛋白的功能特性。

具体的，本发明提供一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，其具体制备方法步骤如下：

(1)预处理：将榨取油后的植物油脂饼粕脱脂干燥后用粉碎机粉碎，过40～80目筛后获得植物油脂饼粕粉，备用。

(2)双频超声波辅助碱溶提取蛋白：利用上述制备获得预处理原料，按照植物油脂饼粕粉：去离子水为1∶(15-35)的质量比向植物油脂饼粕粉中加入去离子水，用NaOH调至pH值为8.0～11.0，温度40～55℃，并在蛋白提取过程中同时采用双频超声波处理，双频超声复合频率为20～35kHz/35～60kHz，声强为0.1～0.9W/cm²，作用时间5～30s，间歇时间5～30s，按以上条件搅拌提取60～120min；在搅拌提取结束后将提取液于3000～5000r/min离心10～30min，取上清液。

(3)酸沉：用HCL将步骤(2)获得的上清液调至pH4.5，于3000～5000r/min离心10～30min，取沉淀层水洗2～4遍后收集沉淀。

(4)真空冷冻干燥：将上述步骤(3)收集的蛋白质沉淀预冻4～8h后经10～40Pa的压力及在-35～-15℃的温度条件下真空冷冻干燥8～12h，然后在30～40℃的温度条件下解析4～8h，制成蛋白质干粉；

(5)超微粉碎技术处理：用超微粉碎机将上述步骤(4)干燥后的植物油脂饼粕蛋白粉进行超微粉碎，超微粉碎的条件为：转速200～500r/min、氧化锆磨球与蛋白质干粉的质量比(3-15)∶1、粉碎时间20～120min，将其粉碎为粒径为5～25μm的蛋白粉。

本发明通过上述具体提供的一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，采用的双频超声波辅助碱溶提取蛋白、酸沉、真空冷冻干燥及相应的超微粉碎技术处理等技术环节具有上下一体，密不可分割的特点，根据植物油脂饼粕特点，采用从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的技术路线，本发明针对从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉，充分采用现有国内外各种技术手段，从反复多次试验得出，采用双频超声波辅助碱溶提取蛋白、酸沉、真空冷冻干燥及相应的超微粉碎技术处理相辅相依，各技术环节之间有机衔接，整体不可分割，才会获得本发明的方法生产得到的蛋白粉与国内外常见的碱法和单频超声提取生产得到的产品相比，具有色泽浅、组织均匀、口感细腻、无异味等优点，且蛋白质提取率大于65％，蛋白质含量大于90％，蛋白质的各项功能特性均有不同程度的改善，其中溶解性较未使用本发明中技术的相比提高了10％以上、分散时间则较之缩短了30％以上、持水性和持油性也分别提高了10％以上和15％以上、乳化性和乳化稳定性则较之分别提高了2％以上和1％以上、起泡性和起泡稳定性则较之分别提高了5％以上和2％以上，这在本领域普通技术人员所知悉，对于从植物油脂饼粕中制备蛋白粉获得显著而突出的技术效果。

通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下有益效果：

(1)本发明以榨油后的饼粕为原料，通过双频超声波辐射处理技术辅助提取植物油脂饼粕蛋白质，同时对热变性植物油脂饼粕蛋白进行复性，利用超微粉碎技术进一步提升植物油脂饼粕蛋白溶解性、分散性、持水性和持油性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性等功能特性，提高了蛋白粉产品品质。

(2)本发明协同使用超声辅助提取结合超微粉碎技术生产植物油脂饼粕蛋白粉，并对其生产工艺进行整合研究，开发提取率高、纯度高、功能特性佳的植物油脂饼粕蛋白粉产品。本发明的方法生产得到的产品与碱法和单频超声提取生产得到的产品相比，具有色泽浅、组织均匀、口感细腻、无异味等优点，且蛋白质提取率大于65％，蛋白质含量大于90％，蛋白质的各项功能特性均有不同程度的改善，其中溶解性较未使用本发明中技术的相比提高了10％以上、分散时间则较之缩短了30％以上、持水性和持油性也分别提高了10％以上和15％以上、乳化性和乳化稳定性则较之分别提高了2％以上和1％以上、起泡性和起泡稳定性则较之分别提高了5％以上和2％以上，微生物及其它卫生指标均符合相关蛋白粉标准。

附图说明

图1显示为从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的工艺流程图。

具体实施方式

下面，举实施例说明本发明，但是，本发明并不限于下述的实施例。

本发明中采用设备和材料有：QM-3SP型超微粉碎机(磨球材质为氧化锆，南京南大仪器厂)；探头式超声波处理机(功率可调，昆山市超声仪器有限公司)；BYK型真空冷冻干燥机(北京博爱康实验仪器有限公司)；85-2A型恒温磁力搅拌器(常州市国立试验设备研究所)；HH-54型恒温水浴锅(金坛市医疗仪器厂)；TD5A-WS型离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；DELTA320型pH计(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)等。

本发明中选用的所有原辅材料、试剂：葵花籽饼粕、胡麻籽饼粕、红花籽饼粕、南瓜籽饼粕等；NaOH(分析纯)、HCl(分析纯)等。

本发明中选用的所有原辅材料、试剂和仪器、设备都为本领域熟知选用的，但不限制本发明的实施，其他本领域熟知的一些试剂和设备都可适用于本发明以下实施方式的实施。

实施例一：从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法

采用以榨油后的饼粕为原料，通过双频超声波辐射处理技术辅助提取植物油脂饼粕蛋白质，同时对热变性植物油脂饼粕蛋白进行复性，利用超微粉碎技术进一步提升植物油脂饼粕蛋白溶解性、分散性、持水性和持油性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性等功能特性，提高了蛋白粉产品品质。

具体的，本发明采用双频超声结合超微粉碎从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉，其具体制备方法步骤如下：

(1)预处理：将榨取油后的植物油脂饼粕脱脂干燥后用粉碎机粉碎，过40～80目筛后获得植物油脂饼粕粉，备用；

(2)双频超声波辅助碱溶提取蛋白：利用上述制备获得预处理原料，按照植物油脂饼粕粉：去离子水为1∶(15-35)的质量比向植物油脂饼粕粉中加入去离子水，用NaOH调至pH值为8.0～11.0，温度40～55℃，并在蛋白提取过程中同时采用双频超声波处理，双频超声复合频率为20～35kHz/35～60kHz，声强为0.1～0.9W/cm²，作用时间5～30s，间歇时间5～30s，按以上条件搅拌提取60～120min。在搅拌提取结束后将提取液于3000～5000r/min离心10～30min，取上清液；

(3)酸沉：用HCL将步聚(2)获得的上清液调至pH4.5，于3000～5000r/min离心10～30min，取沉淀层水洗2～4遍后收集沉淀。

(4)真空冷冻干燥：将上述步骤(3)收集的蛋白质沉淀预冻4～8h后于10～40Pa的压力及-35～-15℃的温度条件下真空冷冻干燥8～12h，然后在30～40℃的温度条件下解析4～8h，制成蛋白质干粉；

(5)超微粉碎技术处理：用超微粉碎机将上述步骤(4)干燥后的植物油脂饼粕蛋白粉进行超微粉碎，超微粉碎的条件为：转速200～500r/min、氧化锆磨球与蛋白质干粉的质量比(3-15)∶1、粉碎时间20～120min，将其粉碎为粒径为5～25μm的蛋白粉。

通过上述具体提供的一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，采用的双频超声波辅助碱溶提取蛋白、酸沉、真空冷冻干燥及相应的超微粉碎技术处理等技术环节具有上下一体，紧密不可分割的特点，根据植物油脂饼粕特点，采用从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的技术路线，本发明在针对从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉，充分采用现有国内外各种技术手段，从反复多次试验得出，采用双频超声波辅助碱溶提取蛋白、酸沉、真空冷冻干燥及相应的超微粉碎技术处理相辅相依，各技术环节之间有机衔接，整体不可分割，才会获得本发明的方法生产得到的蛋白粉与国内外常见的碱法和单频超声提取生产得到的产品相比，具有色泽浅、组织均匀、口感细腻、无异味等优点，且蛋白质提取率大于65％，蛋白质含量大于90％，蛋白质的各项功能特性均有不同程度的改善，其中溶解性较未使用本发明中技术的相比提高了10％以上、分散时间则较之缩短了30％以上、持水性和持油性也分别提高了10％以上和15％以上、乳化性和乳化稳定性则较之分别提高了2％以上和1％以上、起泡性和起泡稳定性则较之分别提高了5％以上和2％以上，这在本领域普通技术人员所知悉，对于从植物油脂饼粕中制备蛋白粉获得显著而突出的技术效果。

由此可见，通过上述提供的双频超声波辐射处理技术辅助提取植物油脂饼粕蛋白质，同时对热变性植物油脂饼粕蛋白进行复性，利用超微粉碎技术进一步提升植物油脂饼粕蛋白溶解性、分散性、持水性和持油性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性等功能特性都有显著的技术效果，同时微生物及其它卫生指标均符合相关蛋白粉标准。

实施例二：从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法

(1)预处理：将榨取油后的葵花籽饼粕脱脂干燥后用粉碎机粉碎，过40目筛，得1000g葵花籽粕粉。

(2)双频超声波辅助碱溶提取蛋白：利用上述制备获得预处理原料，按照葵花籽粕粉：去离子水为1∶15的质量比向葵花籽粕粉中加入去离子水，用NaOH调至pH值为8.0，温度40℃，并在蛋白提取过程中同时采用双频超声波处理，双频超声复合频率为20kHz/35kHz，声强为0.1W/cm²，作用时间5s，间歇时间5s，按以上条件搅拌提取60min。在搅拌提取结束后将提取液于3000r/min离心15min，取上清液。

(3)酸沉：用HCL将步骤(2)获得的上清液调至pH4.5，于3000r/min离心15min，取沉淀层水洗2遍后收集沉淀。

(4)真空冷冻干燥：将上述步骤(3)收集的蛋白质沉淀预冻4h后于10Pa的压力及-15℃的温度条件下进行真空冷冻干燥12h，然后在30℃的温度条件下解析8h，制成蛋白质干粉；

(5)超微粉碎技术处理：用超微粉碎机将上述步骤(4)干燥后的葵花籽饼粕蛋白粉进行超微粉碎，超微粉碎的条件为：转速200r/min、氧化锆磨球与蛋白质干粉的质量比3∶1、粉碎时间20min，将其粉碎为粒径为25μm左右的蛋白粉。

通过上述提供的从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，可以解决现有技术的发展瓶颈，促进蛋白溶解，提高提取效率，同时改善蛋白的功能特性，蛋白质提取率为66.2％，蛋白质含量为91.6％。采用双频超声结合超微粉碎技术从葵花籽饼粕中制备的蛋白粉与采用传统的碱法和单频超声提取生产得到的产品相比，其特性具有色泽浅、组织均匀、口感细腻、无异味等优点，且蛋白质提取率大于65％，蛋白质含量大于90％，蛋白质的各项功能特性均有不同程度的改善，微生物及其它卫生指标均符合相关蛋白粉标准。

实施例三：从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法

(1)预处理：将榨取油后的胡麻籽饼粕脱脂干燥后用粉碎机粉碎，过60目筛，得1000g胡麻籽粕粉。

(2)双频超声波辅助碱溶提取蛋白：利用上述制备获得预处理原料，按照胡麻籽粕粉：去离子水为1∶25的质量比向胡麻籽粕粉中加入去离子水，用NaOH调至pH值为9.0，温度45℃，并在蛋白提取过程中同时采用双频超声波处理，双频超声复合频率为35kHz/35kHz，声强为0.5W/cm²，作用时间10s，间歇时间10s，按以上条件搅拌提取80min。在搅拌提取结束后将提取液于4000r/min离心20min，取上清液。

(3)酸沉：用HCL将步骤(2)获得的上清液调至pH4.5，于4000r/min离心20min，取沉淀层水洗3遍后收集沉淀。

(4)真空冷冻干燥：将上述步骤(3)收集的蛋白质沉淀预冻5h后于20Pa的压力及-20℃的温度条件下进行真空冷冻干燥10h，然后在35℃的温度条件下解析6h，制成蛋白质干粉；

(5)超微粉碎技术处理：用超微粉碎机将上述步骤(4)干燥后的胡麻籽饼粕蛋白粉进行超微粉碎，超微粉碎的条件为：转速300r/min、氧化锆磨球与蛋白质干粉的质量比7∶1、粉碎时间50min，将其粉碎为粒径为18μm左右的蛋白粉。

通过上述提供的从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，可以解决现有技术的发展瓶颈，促进蛋白溶解，提高提取效率，同时改善蛋白的功能特性，蛋白质提取率为69.3％，蛋白质含量为93.6％。采用双频超声结合超微粉碎技术从胡麻籽饼粕中制备的蛋白粉与采用传统的碱法和单频超声提取生产得到的产品相比，其特性具有色泽浅、组织均匀、口感细腻、无异味等优点，且蛋白质提取率大于65％，蛋白质含量大于90％，蛋白质的各项功能特性均有不同程度的改善，微生物及其它卫生指标均符合相关蛋白粉标准。

实施例四：从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法

(1)预处理：将榨取油后的红花籽饼粕脱脂干燥后用粉碎机粉碎，过70目筛，得1000g红花籽粕粉。

(2)双频超声波辅助碱溶提取蛋白：利用上述制备获得预处理原料，按照红花籽粕粉：去离子水为1∶30的质量比向红花籽粕粉中加入去离子水，用NaOH调至pH值为10.0，温度50℃，并在蛋白提取过程中同时采用双频超声波处理，双频超声复合频率为35kHz/60kHz，声强为0.7W/cm²，作用时间20s，间歇时间20s，按以上条件搅拌提取100min。在搅拌提取结束后将提取液于3000r/min离心30min，取上清液。

(3)酸沉：用HCL将上清液调至pH4.5，于3000r/min离心30min，取沉淀层水洗3遍后收集沉淀。

(4)真空冷冻干燥：将上述步骤(3)收集的蛋白质沉淀预冻6h后于30Pa的压力及-25℃的温度条件下进行真空冷冻干燥9h，然后在35℃的温度条件下解析6h，制成蛋白质干粉；

(5)超微粉碎技术处理：用超微粉碎机将上述步骤(4)干燥后的红花籽饼粕蛋白粉进行超微粉碎，超微粉碎的条件为：转速400r/min、氧化锆磨球与蛋白质干粉的质量比11∶1、粉碎时间80min，将其粉碎为粒径为12μm左右的蛋白粉。

通过上述提供的从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，制备蛋白粉的蛋白质提取率为67.8％，蛋白质含量为90.7％。采用双频超声结合超微粉碎技术从红花籽饼粕中制备的蛋白粉与采用传统的碱法和单频超声提取生产得到的产品相比，其特性具有色泽浅、组织均匀、口感细腻、无异味等优点，且蛋白质提取率大于65％，蛋白质合量大于90％，蛋白质的各项功能特性均有不同程度的改善，微生物及其它卫生指标均符合相关蛋白粉标准。

实施例五：从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法

(1)预处理：将榨取油后的南瓜籽饼粕脱脂干燥后用粉碎机粉碎，过80目筛，得1000g南瓜籽粕粉。

(2)双频超声波辅助碱溶提取蛋白：利用上述制备获得预处理原料，按照南瓜籽粕粉：去离子水为1∶35的质量比向南瓜籽粕粉中加入去离子水，用NaOH调至pH值为11.0，温度55℃，并在蛋白提取过程中同时采用双频超声波处理，双频超声复合频率为20kHz/60kHz，声强为0.9W/cm²，作用时间30s，间歇时间30s，按以上条件搅拌提取120min。在搅拌提取结束后将提取液于5000r/min离心10min，取上清液。

(3)酸沉：用HCL将上清液调至pH4.5，于5000r/min离心10min，取沉淀层水洗4遍后收集沉淀。

(4)真空冷冻干燥：将上述步骤(3)收集的蛋白质沉淀预冻8h后于40Pa的压力及-35℃的温度条件下进行真空冷冻干燥8h，然后在40℃的温度条件下解析4h，制成蛋白质干粉；

(5)超微粉碎技术处理：用超微粉碎机将上述步骤(4)干燥后的南瓜籽饼粕蛋白粉进行超微粉碎，超微粉碎的条件为：转速500r/min、氧化锆磨球与蛋白质干粉的质量比15∶1、粉碎时间120min，将其粉碎为粒径为5μm左右的蛋白粉。

通过上述提供的从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，制备蛋白粉的蛋白质提取率为68.6％，蛋白质含量为93.1％。采用双频超声结合超微粉碎技术从南瓜籽饼粕中制备的蛋白粉与采用传统的碱法和单频超声提取生产得到的产品相比，其特性具有色泽浅、组织均匀、口感细腻、无异味等优点，且蛋白质提取率大于65％，蛋白质含量大于90％，蛋白质的各项功能特性均有不同程度的改善，微生物及其它卫生指标均符合相关蛋白粉标准。

通过上述各实施例提供的从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，本发明通过双频超声波辐射处理技术辅助提取植物油脂饼粕蛋白质，同时对热变性植物油脂饼粕蛋白进行复性，利用超微粉碎技术进一步提升植物油脂饼粕蛋白溶解性、分散性、持水性和持油性、乳化性和乳化稳定性、起泡性和起泡稳定性等功能特性。

Claims (1)

1.一种从热榨植物油脂饼粕中制备蛋白粉的方法，其特征在于，具体制备方法步骤如下：

(1)预处理：将榨取油后的植物油脂饼粕脱脂干燥后用粉碎机粉碎，过40～80目筛后获得植物油脂饼粕粉，备用；

(2)双频超声波辅助碱溶提取蛋白：利用上述制备获得预处理原料，按照植物油脂饼粕粉：去离子水为1∶(15-35)的质量比向植物油脂饼粕粉中加入去离子水，用NaOH调至pH值为8.0～11.0，温度40～55℃，并在蛋白提取过程中同时采用双频超声波处理，双频超声复合频率为20～35kHz/35～60kHz，声强为0.1～0.9W/cm²，作用时间5～30s，间歇时间5～30s，按以上条件搅拌提取60～120min；在搅拌提取结束后将提取液于3000～5000r/min离心10～30min，取上清液；

(3)酸沉：用HCL将步骤(2)获得的上清液调至pH4.5，于3000～5000r/min离心10～30min，取沉淀层水洗2～4遍后收集沉淀；

(4)真空冷冻干燥：将上述步骤(3)收集的蛋白质沉淀预冻4～8h后经10～40Pa的压力及在-35～-15℃的温度条件下真空冷冻干燥8～12h，然后在30～40℃的温度条件下解析4～8h，制成蛋白质干粉；

(5)超微粉碎技术处理：用超微粉碎机将上述步骤(4)干燥后的植物油脂饼粕蛋白粉进行超微粉碎，超微粉碎的条件为：转速200～500r/min、氧化锆磨球与蛋白质干粉的质量比(3-15)∶1、粉碎时间20～120min，将其粉碎为粒径为5～25μm的蛋白粉。