CN103385869A - 加巴喷丁的医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明请求保护加巴喷丁用于制备治疗或预防缺血性脑血管疾病的药物中的用途，属于医药领域。加巴喷丁是一种常规的抗癫痫药物，发明人经过大量实验证实加巴喷丁用于缺血性脑血管疾病特别是脑缺血或脑梗塞治疗时可以降低脑缺血患者的NO和NOS水平，并且可以降低血清中MDA含量，对大脑海马神经元具有明显的保护作用。本发明可以为缺血性脑血管疾病患者提供一种新的用药选择，有广阔的医学应用前景。

Description

加巴喷丁的医药用途

技术领域

本发明涉及抗癫痫药加巴喷丁的一种医药用途，具体涉及加巴喷丁用于治疗脑缺血或脑梗塞的药物中的用途，属于医药领域。 

背景技术

缺血性脑血管病（ICVD）约占全部脑血管病的80%，具有发病率、致残率、治病率高的特点，已经成为严重危害人类健康的疾病之一。缺血性脑血管病是局部血液循环所提供的氧及其他营养物质与神经元代谢需求之间的骤然供需不平衡，导致缺血中央区的神经元受损的一类疾病。短暂性脑缺血发作简称TIA，也称一过性脑缺血发作或小中风，它是由于负责供应脑部血液的动脉血管短时间内供血不足，引起相应动脉负责供血的脑组织发生暂时性功能障碍。此病的主要临床症状常常表现为突然发作的头晕、眼花、眩晕、耳鸣、走路不稳，严重时意识模糊、双目失明或复视、单侧或双侧肢体无力与感觉异常、莫名其妙地摔倒、说话不流利等。能够引发短暂性脑缺血发作的原因颇多，诸如高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、糖尿病是最主要和最常见的原因，而过度用脑、情绪激动、寒冷、劳累则可促其发生。 

短暂性脑缺血每次发作的持续时间较短，通常是数秒钟、数分钟或数小时不等，最长不超过24小时，因此容易被人忽视。实际上，短暂性脑缺血是脑血管病的先兆或危险信号，如不及时治疗极易恶化发展成为严重脑血管病从而威胁病人生命。据统计，约有25%～40%短暂性脑缺血患者在5年内将产生严重的脑梗塞。因此，对短暂性脑缺血发作应当进行积极治疗，降低血液粘稠度，调整血液的高凝状态，控制和维持血压在正常范围内，终止和减少短暂性脑缺血发作，预防或推迟脑梗塞的发生。 

脑梗塞是由于脑动脉粥样硬化，血管内膜损伤使脑动脉管腔狭窄，进而因多种因素使局部血栓形成，使动脉狭窄加重或完全闭塞，导致脑组织缺血、缺氧、坏死，引起神经功能障碍的一种脑血管病。脑缺血和脑梗塞具有十分密切的联系，能够实现对脑缺血的治疗就会进一步延缓或者预防脑梗塞的发生和发展。 

脑保护药物是目前神经学界研究的热点，各种药物处于不同研究阶段，但目前还没有一种药物可以对大脑保护取得公认的确切疗效。目前医学上对于脑缺血或脑梗塞的治疗尚没有 特效药物，一般临床上建议控制血压，清淡饮食，并可以服用扩血管药和活血化淤的药或者营养脑细胞的药物改善。但临床实践表明，上述药物的治疗效果并不能令人满意，而这些药物高昂的花费通常让患者苦不堪言。 

加巴喷丁（英文名Gabapentin）是美国Warner-Lanbert公司首先开发的抗癫痫药，其最早于1993年在英国首次上市。加巴喷丁是一种新颖的抗癫痫药，它是γ－氨基丁酸（GABA）的衍生物，加巴喷丁对脑组织的新颖结合点有高的亲和性，它能通过氨基酸转移体通过体内一些屏障，同其它抗惊厥药相比，加巴喷丁具有较小的行为和心血管副作用。加巴喷丁临床上主要适应症为难治的不全性癫痫，加巴喷丁在各种动物模型中均显示预防癫痫的作用，最近研究表明加巴喷丁是通过改变GABA代谢产生抗癫痫作用。另外，加巴喷丁在动物痉挛、镇痛和肌萎缩性侧索硬化模型中也显示出显著的治疗作用。近年来一些研究表明加巴喷丁可以联合其他药物用于神经病理性疼痛的治疗。 

ZL 200410029801.7公开了加巴喷丁和普瑞巴林的互连体前药及其可药用盐在制备用于治疗癫痫、神经病理性疼痛和焦虑药物中的用途。专利申请200780049819.5公开了一种使用加巴喷丁或普加巴林的前药及其药物组合物治疗耳鸣的方法。专利申请03820213.1公开了一种给与α2δ配体如加巴喷丁或普瑞巴林用于治疗注意力缺陷的过度反应症的用途。现有技术或临床实践中尚无加巴喷丁用于治疗脑缺血或脑梗塞的报道。 

发明内容

针对目前医学实践中缺少脑缺血或脑梗塞显效治疗药物、且药物价格高昂的现状，本发明提供一种能够对脑缺血或脑梗塞具有预防或治疗作用的药物。该药物以加巴喷丁为主要活性成分，其用于脑缺血或脑梗塞的治疗时，疗效显著，成本低廉，具有良好的医学应用前景。加巴喷丁为γ－氨基丁酸（GABA）的衍生物，其临床上主要用于癫痫的治疗或预防，因此本发明涉及加巴喷丁的一种新的医药用途，即加巴喷丁用于制备预防或治疗脑缺血或脑梗塞药物中的用途。 

本发明实施例10加巴喷丁对脑缺血模型大鼠海马一氧化氮和一氧化氮合酶的影响实验中，加巴喷丁各治疗组的NO和NOS水平均极显著低于模型组的NO和NOS水平，且明显低于阳性对照药尼莫地平治疗组的NO和NOS水平，提示加巴喷丁可以显著降低大鼠海马中的过氧化物，对大脑海马神经元具有明显的保护作用。本发明实施例11中加巴喷丁对脑缺血及其引发的脑梗塞的治疗结果显示，加巴喷丁不仅可以显著降低大鼠脑缺血模型的血清MDA含量，减少自由基对大鼠脑的损伤，而且可以减小脑缺血大鼠的脑梗塞面积，可见加巴喷丁 对缺血性脑损伤疾病特别是脑缺血以及脑缺血引发的脑梗塞具有显著的治疗效果，且这种治疗效果具有剂量依赖性。各给药组大鼠的海马锥体细胞的显微镜下照片显示模型组大鼠海马锥体细胞细胞核皱缩，染色深，细胞碎片多，应用加巴喷丁治疗后加巴喷丁对脑缺血后损伤的神经元具有保护作用，其中加巴喷丁高剂量组的神经元细胞的细胞形态和数量与模型组相比有显著性差异。 

因此，本发明请求保护加巴喷丁用于治疗或预防缺血性脑血管病的用途，其中缺血性脑血管病优选为脑缺血或脑梗塞，所述脑梗塞优选为由脑缺血引发的脑梗塞。由于现代动物福利的提高和饮食的复杂性，动物患脑血管疾病机率也明显增加。本发明所述的用途治疗对象可以为人或者动物，所述动物优选为哺乳动物。 

以上所述的药物用途中，发明人通过试验将其制备成了比较稳定的口服制剂，如片剂、胶囊剂、缓释胶囊剂、缓释片剂、混悬剂。其中片剂含有两种以上如下辅料：淀粉、糊精、低取代羟丙基纤维素、硬脂酸镁、微晶纤维素、羟丙基纤维素、淀粉浆、乳糖、甘露醇、微粉硅胶、交联羧甲基纤维素钠和交联聚乙烯吡咯烷酮；所述胶囊剂含有两种以上如下辅料：可压性淀粉、乳糖、低取代羟丙基纤维素、微晶纤维素和微粉硅胶；所述混悬剂含有两种以上如下辅料：硫酸锌、樟脑醑、羧甲基纤维素钠、甘油、卡波姆；所述缓释片或缓释胶囊中含有两种以上如下辅料：微晶纤维素、乳糖、甲基纤维素（MC）、乙基纤维素（EC）、羟乙基纤维素（HEC）、羟丙基甲基纤维素（HPMC）、羟丙基纤维素（HPC）、羧甲基纤维素（CMC）、预凝胶淀粉。上述含有加巴喷丁的药物制剂中，每一制剂单位含有加巴喷丁的有效量为0.1mg-1000mg。 

本发明所述的药物用途中，加巴喷丁用于预防或治疗脑缺血或脑梗塞时可以根据病情和药物性质选择合适的给药途径，优选为口服给药，人用给药量为5mg/kg·d~60mg/kg·d，优选为10mg/kg·d~25mg/kg·d，其他动物的给药剂量可以按照人与动物体表面积换算而得到，这对于本领域技术人员是已知的。用于治疗或预防脑缺血或脑梗塞的给药剂型可以为本发明上述所述的药物制剂，如片剂、胶囊剂、缓释胶囊剂、缓释片剂、混悬剂。 

本发明所述的药物组合物用于脑缺血或脑梗塞的预防或治疗时具有以下优势： 

1）加巴喷丁对脑缺血或脑梗塞治疗和预防效果确切，不仅可以为脑缺血或脑梗塞的治疗提供一种新的用药选择，而且其治疗效果优于阳性药物尼莫地平，适宜推广使用。 

2）加巴喷丁对脑缺血和脑梗塞均具有显著的治疗和预防效果，可以延缓脑缺血患者向脑梗塞疾病的转化，降低脑缺血患者的猝死率，提高患者的生存质量和生存时间。 

3）加巴喷丁起效剂量低，并可以制备成不同的给药剂型和给药剂量，可以根据患者疾病 的严重程度选用合适的给药方案，从而可以大大提高患者的用药依从性，提高药物使用的长期效果。 

附图说明

附图1假手术组大鼠海马锥体细胞的组织学照片。 

附图2模型组大鼠海马锥体细胞的组织学照片。 

附图3加巴喷丁高剂量组大鼠海马锥体细胞的组织学照片。 

附图4加巴喷丁低剂量组大鼠海马锥体细胞的组织学照片。 

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步说明本发明，但本领域技术人员应当知晓本发明的具体实施例并不以任何方式限制本发明，且在本发明基础上所作出的任何等同替换均落入本发明的保护范围。 

实施例1加巴喷丁片剂制备 

制备工艺：称取处方量的加巴喷丁、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取60%乙醇适量，加入混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混合均匀，压片，即得。 

实施例2加巴喷丁片剂制备 

制备工艺：称取处方量的加巴喷丁、微晶纤维素和羟丙基纤维素混合均匀。另取8%淀粉浆适量，加入混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混合均匀，压片，即得。 

实施例3加巴喷丁片剂制备 

制备工艺：称取处方量的加巴喷丁、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取60%乙醇适量，加入混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混合均匀，压片，即得。 

实施例4加巴喷丁片剂制备 

制备工艺：称取处方量的加巴喷丁、淀粉、糊精和低取代羟丙基纤维素混合均匀。另取60%乙醇适量，加入混合粉末中，混合均匀后制软材，通过16目筛制粒，60℃以下干燥。干燥完成后用18目筛进行整粒，筛出干粒中的细粉，与过筛的硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混合均匀，压片，即得。 

实施例5加巴喷丁片剂制备 

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取加巴喷丁、乳糖、甘露醇混合均匀后，再分别加入处方量的微粉硅胶、微晶纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠，混合均匀，加入60%乙醇制软材，18目筛制颗粒，湿颗粒于60℃干燥，16目筛整粒，加入硬脂酸镁混合均匀，压片，即得。 

实施例6加巴喷丁胶囊剂制备 

制备工艺：将处方中的各辅料过100目筛，称取加巴喷丁、可压性淀粉、乳糖和低取代羟丙基纤维素混合均匀后，加入60%乙醇制软材，18目筛制颗粒，于60℃干燥，16目筛整粒，装填胶囊，即得。 

实施例7加巴喷丁混悬剂的制备 

制备方法：称取处方量的加巴喷丁置乳钵中，加甘油研磨成细糊状，硫酸锌溶于200ml蒸馏水中，另将羧甲基纤维素钠用200ml蒸馏水制成胶浆，在搅拌下缓缓加入乳钵中，移入量器中，搅拌下加入硫酸锌溶液，搅匀，在搅拌下以细流加入樟脑醑，加蒸馏水至全量，搅匀，即得。 

实施例8加巴喷丁缓释片的制备 

制备工艺：分别称取处方量的加巴喷丁、乳糖和羧丙基甲基纤维素粉碎后过80目筛后置于乳钵中混合均匀，加入适量80%乙醇制备软材，过筛制备湿粒，60-70℃干燥制备干颗粒后整粒，加入硬脂酸镁压片即可得到加巴喷丁缓释片剂。 

实施例9加巴喷丁缓释胶囊剂的制备 

制备工艺：称取处方量加巴喷丁与辅料分别粉碎过80目筛后混合均匀，加50%乙醇适量制成软材，经挤出筛板(孔径0.8mm)挤成直径相当的细条状，然后使条状物料进滚圆机使之完全滚圆，取出微丸，于60℃烘干3h左右，使水分含量控制在1%～4%，取18～24目的微丸。测定微丸的含量，确定胶囊的装量，用充填机进行胶囊充填。 

实施例10加巴喷丁对脑缺血模型大鼠海马一氧化氮和一氧化氮合酶的影响 

本试验中发明人采用尼莫地平作为阳性对照药物，它是一种Ca²⁺通道阻滞剂，通过有效地阻止Ca²⁺进入细胞内、抑制平滑肌收缩，达到解除血管痉挛之目的。动物实验证明，尼莫地平对脑动脉的作用远较全身其他部位动脉的作用强许多，并且由于它具有很高的脂溶性特点，易透过血脑屏障。此外，可选择性地作用于脑血管平滑肌，扩张脑血管，增加脑血流量，明显减少血管痉挛引起的缺血性脑损伤。 

1、材料与方法 

1.1动物分组 

SPF级健康雄性SD大鼠60只，体重250～300g，由山东新时代药业有限公司实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(鲁)20060019。造模6周后，大鼠随机分为6组，正常对照组、模型组、尼莫地平组、加巴喷丁高剂量组(高剂量组)、加巴喷丁中剂量组（中剂量组）和加巴喷丁低剂量组(低剂量组)，每组10只。造模后第7周正常对照组和模型组大鼠分别给予等体积的溶媒灌胃，尼莫地平组大鼠给予30mg/(kg·d)，加巴喷丁高剂量组大鼠给药剂量360mg/(kg·d)，加巴喷丁中剂量组给药剂量180mg/(kg·d)，加巴喷丁低剂量组大鼠给药剂量为90mg/(kg·d)，连续给药3周。 

1.2试剂和仪器 

加巴喷丁：购自珠海昌恒医药有限公司，批号：20101025； 

尼莫地平：购自山西亚宝药业集团股份有限公司，批号90602； 

NO、NOS试剂盒：南京建成生物工程研究所，批号20091210； 

一抗nNOS、iNOS、eNOS和t3肌动蛋白抗体：北京博奥森生物技术有限公司，批号 

s-0156R；羊抗兔Ig-G：北京鼎国生物技术有限公司，批号0090915。 

DYCZ-24D型垂直板电泳槽，北京六一仪器厂； 

JS-250电泳仪，上海培清科技有限公司； 

TS-2000A脱色摇床，江苏其林贝尔仪器制造有限公司； 

MDF-U333低温冰箱，SANY0；Precisa XS125电子天平； 

UV2550分光光度计，日本岛津。 

1.3脑缺血大鼠模型的制备 

大鼠术前禁食12h、禁水4h，用10％水合氯醛(0.30ml/100g)腹腔注射麻醉，仰卧固定于木制手术台上。颈前部备皮，酒精、碘酒消毒后，沿腹侧颈正中切开，依次钝性分离皮下脂肪、胸骨舌骨肌和胸锁乳头肌，再分别分离暴露左、右侧颈总动脉及气管，于近心端和远心端双重结扎后从中间剪断，然后逐层缝合肌肉、皮肤。正常对照组大鼠同法行颈前皮肤切 开，分离皮下脂肪。 

1.4NO含量和NOS活性的测定 

造模后第10周，各组大鼠断头取脑，去除嗅球、小脑，取出大脑海马称重，加入9倍冷生理盐水，电动匀浆机研磨，制成10％匀浆液，3000r/min，离心10min，取上清液，按试剂盒说明书测定NO含量和NOS活性。 

各组大鼠新鲜脑组织海马抽提蛋白后取等量的蛋白进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，电转移至硝酸纤维素膜，室温封闭30min，nNOS、iNOS、eNOS和t3肌动蛋白一抗500倍稀释于封闭液中，4℃反应过夜后室温孵育2h。充分漂洗后辣根过氧化物酶标记的二抗羊抗兔IgG 1500倍稀释于封闭液中，室温孵育1h。将膜置于DAB显色液中，显影、定影、曝光。利用Quantity one软件分析条带的灰度值。 

1.5统计学方法 

采用SPSS 12.0统计软件，数据以x±s表示，组间比较采用方差分析，方差齐者采用LSD检验，方差不齐者采用Tamhane’S检验，P<0.05为差异有统计学意义。 

2结果 

2.1各组大鼠海马NO含量和NOS活性的比较 

如表1所示，与正常对照组比较，模型组大鼠海马NO含量和NOS活性明显升高（P<0.01）；与模型组比较，尼莫地平组和加巴喷丁各剂量组大鼠海马NO含量和NOS活性明显降低(P<0.05)；与阳性对照药尼莫地平相比，加巴喷丁各剂量组大鼠海马NO含量和NOS活性均显著降低(P<0.05)，其中加巴喷丁高剂量组与尼莫地平治疗组相比具有极显著差异（P<0.01）。 

表1各给药组大鼠海马NO含量和NOS活性比较 

组别	样本量(n)	NO（μmol/g）	NOS（U/mg）
				正常对照组	10	2.42±0.98	1.25±0.34
模型组	10	5.68±0.89**	3.54±0.42**
				尼莫地平组	10	4.78±1.02￥	2.58±0.51￥
加巴喷丁高剂量组	10	2.65±0.85￥￥##	1.56±0.40￥￥##
				加巴喷丁中剂量组	10	3.05±0.74￥￥#	1.86±0.46￥￥#
加巴喷丁低剂量组	10	3.24±0.94￥￥#	2.14±0.43￥￥#

与正常对照组相比，^**P＜0.01；与模型组相比，^￥P＜0.05，^￥￥P＜0.01； 

与尼莫地平组相比，^#P＜0.05，^##P＜0.01。 

2.2各组大鼠海马3种NOS亚型表达的比较 

如表2所示，与正常对照组比较，模型组大鼠海马nNOS和iNOS表达明显升高，eNOS表达明显降低（P<0.01）；与模型组比较，尼莫地平组和高剂最组大鼠海马nNOS和iNOS表达明显降低，eNOS表达明显升高(P<0.05)；与阳性对照药尼莫地平相比，加巴喷丁各剂量组大鼠海马nNOS和iNOS表达明显降低，eNOS表达明显升高(P<0.05)，其中加巴喷丁高剂量组与尼莫地平治疗组相比具有极显著差异（P<0.01）。 

表2各给药组大鼠海马NOS 3种亚型表达的比较 

组别	样本量(n)	nNOS（mol/g）	iNOS（U/mg）	eNOS
					正常对照组	10	0.42±0.14	1.05±0.34	1.85±0.27
模型组	10	1.35±0.34**	3.24±0.41**	0.95±0.36**
					尼莫地平组	10	0.89±0.22￥	2.38±0.51￥	1.16±0.31￥
加巴喷丁高剂量组	10	0.55±0.15￥￥##	1.56±0.40￥￥##	1.65±0.18￥￥##
					加巴喷丁中剂量组	10	0.62±0.27￥￥#	1.86±0.46￥￥#	1.48±0.15￥￥#
加巴喷丁低剂量组	10	0.75±0.24￥#	2.14±0.43￥#	1.34±0.24￥#

与正常对照组相比，_**P＜0.01；与模型组相比，_￥P＜0.05，_￥￥P＜0.01； 

与尼莫地平组相比，_#P＜0.05，_##P＜0.01。 

实施例11加巴喷丁对脑缺血及其引发的脑梗塞的治疗作用 

1.实验材料 

本实验中所采用的实验动物为雄性SD大鼠，体重为250-300g，室温下12h昼夜节律下饲养,自由饮食。上述实验动物由山东新时代药业有限公司实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(鲁)20060019。本实验中的供试品加巴喷丁购自珠海昌恒医药有限公司，批号为20101025；对照品为纯水。 

本实验使用的相关材料及试剂如下：MDA试剂盒（购自上海史瑞可生物科技有限公司），20%水合氯醛、碘伏、焦油紫、双氧水、酒精、二甲苯、4%多聚甲醛、生理盐水均为实验室常用试剂。本实验主要仪器与设备：大鼠头部固定器、电凝器、721型可见分光光度计、病理组织漂烘处理仪、石蜡切片机、显微镜数码相机均为药理实验室常用仪器。 

2．实验方法 

2.1动物分组：将实验动物随机分为4组：模型组，假手术组，加巴喷丁高剂量组（360mg/kg），加巴喷丁低剂量组（90mg/kg），每组10只。 

2.2大鼠脑缺血模型的建立：实验动物以20%水合氯醛（300-350mg/kg）腹腔注射麻醉 后，分离双侧颈总动脉并电凝椎动脉。手术第二天动物于清醒状态下结扎双侧颈总动脉，缺血15分钟后放开动脉夹再灌。缺血时保持其直肠温度在36.5-37.5℃之间。以缺血动物体征表现判断缺血模型的可靠性。大鼠脑缺血模型鉴定标准如下：缺血前大鼠处于完全清醒状态，其生命体征正常。缺血后30-60秒内大鼠即失去知觉和活动能力，翻正反射消失，呈现角弓反张，同时痛觉消失，双侧瞳孔散大，对强光刺激闭睑反射消失,眼球颜色灰白（正常为鲜红色）。假手术组处理同实验组，但不结扎双侧颈总动脉。本实验中采用该方法制备的大鼠脑缺血模型造模成功率达94.5%。 

2.3给药途径与时间：加巴喷丁高剂量组（360mg/kg）和低剂量组（90mg/kg）均在缺血/再灌后第8小时按指定的剂量给药一次，首次给药16小时后以相同剂量再次给药。假手术组和模型组给予相同体积的蒸馏水，给药方案同加巴喷丁给药组。 

3、实验观察及指标测定 

3.1血清MDA含量测定：加巴喷丁组和模型组最后1次给药8h后处死大鼠，快速心腔内取血，离心取血清，-20℃冻存；采用硫代巴比妥酸（TBA）比色法测定；操作方法严格按说明书进行。 

3.2脑梗死体积测量：经TTC染色的脑片，用数码相机拍照，应用高清晰度彩色病理图文报告分析系统测出各区脑梗死面积。根据公式：梗死体积=［左侧半球体积-（右侧半球体积-苍白区体积）］/全脑体积，算出梗死体积百分比。 

3.3组织学方法：大鼠经腹腔注射水合氯醛麻醉后，开左胸暴露心脏，将针头自心尖穿过左心室插入主动脉，先用38℃左右生理盐水约100ml快速灌洗，然后复灌入冰冷的4%多聚甲醛250-300ml，30分钟内灌完，灌注后将大鼠断头，取其脑直接用4%多聚甲醛后固定12小时左右。流水冲洗，冲洗时间同固定时间。然后70%（4h）、80%(4h)、90%(4-12h)、95%(2h×2次)、100%(2h×2次)梯度酒精脱水，二甲苯透明（1.5h）、60℃浸蜡（1h×3次）。取出包埋，4℃保存。石蜡切片机切片，厚5μm。45℃温水中贴片于明胶处理过的载玻片上，40℃烘烤过夜。切片经三次二甲苯脱蜡，100%、90%、70%梯度酒精浸水，0.1%焦油紫（Cresyl violet）染色10-20分钟,按常规方法70%、80%、95%、100%梯度酒精分色，光镜下观察神经元紫色而背景基本无色为止。梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片后，光镜观察。在高倍镜下观察神经元细胞的存活与凋亡。有清楚的细胞核，胞体着色良好的计为成活神经元细胞；核皱缩，不成形的为凋亡的神经元细胞。 

4.数据处理： 

实验结果应用SPSS12.0软件进行分析，各组计量资料以均数±标准差（mean±SD）表 示。各组间数据的显著性比较采用t检验；检验结果判定，以p<0.05为差异有显著性。 

5.实验结果 

5.1血清MDA含量测定结果：如表3所示，模型组MDA含量显著高于假手术组，表明脑缺血造模前后MDA含量具有显著差异。不论是加巴喷丁高剂量组还是加巴喷丁低剂量组，其血清MDA含量均与模型组MDA含量存在显著性差异（P<0.05），其中加巴喷丁高剂量组与模型组存在极显著性差异（P<0.01）。 

5.2脑梗死体积测量结果：如表3所示，假手术组无脑梗死。加巴喷丁治疗组的脑梗死体积与模型组脑梗死体积相比具有显著性差异（P<0.05），其中加巴喷丁高剂量组与模型组相比具有极显著性差异（P<0.01）。 

表3大鼠各给药组间血清MDA含量和脑梗死体积比较 

组别	血清MDA含量	脑梗死体积
			假手术组	2.54±0.28	——
模型组	8.10±0.62	17.96±2.30
			加巴喷丁高剂量组	4.86±0.60**	14.57±1.91**
加巴喷丁低剂量组	5.45±0.43*	15.69±2.27*

与模型组比较，^*P<0.05；与模型组比较，^**P<0.01。 

5.3组织学方法结果：发明人通过焦油紫染色来检测海马锥体细胞的存活情况，其结果如附图1-4所示。其中，在显微镜下细胞形态显示为圆形、核淡染的细胞为正常细胞，细胞形态皱缩、核固缩的细胞为死亡细胞。附图1为假手术组大鼠海马锥体细胞的组织学照片，其镜下细胞形态饱满均一，细胞核清晰可见。附图2为模型组大鼠海马锥体细胞的组织学照片，细胞核皱缩，染色深，细胞碎片多，可见脑缺血对大鼠的海马细胞神经元损伤严重。附图3和附图4分别为加巴喷丁高剂量组和低剂量组大鼠海马锥体细胞的组织学照片，图片显示加巴喷丁组对脑缺血后损伤的神经元具有保护作用。其中加巴喷丁高剂量组保护作用显著优于加巴喷丁低剂量组，表明加巴喷丁对脑缺血后损伤的神经元的保护作用呈现剂量依赖性。 

6.讨论 

近年来大量的实验及临床研究都集中在兴奋性氨基酸类神经介质、细胞内钙超载和自由基在缺血性脑损伤中的作用机制，其中自由基在缺血性脑损伤中起着重要作用。自由基是人体正常生物化学过程的中间产物，在机体正常时及病理过程中都存在。超氧化物歧化酶是清除氧自由基的酶，能反应机体抗自由基的能力。丙二醛是自由基损伤机体的最终产物，可严重破坏细胞膜的结构，导致细胞肿胀、坏死，其含量间接反映机体细胞受自由基攻击的严重 程度。临床实践和神经生物学理论显示，血清中丙二醛（MDA）含量与缺血性脑损伤疾病存在着十分密切的关系。 

近代药理学研究表明，加巴喷丁具有扩张血管，增强血管弹性，抗癫痫，减少疼痛的作用，但其确切的作用方式仍不清楚。既往的基础和临床实验多围绕加巴喷丁的抗癫痫作用，而本实验以加巴喷丁能够作用于NMDA受体而抑制钙离子内流为出发点，来研究加巴喷丁对脑缺血的治疗作用。本实验的实验结果显示，加巴喷丁不仅可以显著降低大鼠脑缺血模型的血清MDA含量，减少自由基对大鼠脑的损伤，而且可以减小脑缺血大鼠的脑梗塞面积，可见加巴喷丁对缺血性脑损伤疾病特别是脑缺血以及脑缺血引发的脑梗塞具有显著的治疗效果，且这种治疗效果具有剂量依赖性。 

Claims (10)

1.加巴喷丁用于制备预防或治疗缺血性脑血管疾病的药物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述的缺血性脑血管疾病为脑缺血或脑梗塞。

3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的加巴喷丁为口服制剂。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述的口服制剂为片剂、胶囊剂或混悬剂。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于所述的片剂为缓释片剂，所述胶囊剂为缓释胶囊剂。

6.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述的口服制剂中每一制剂单位中含有加巴喷丁的含量为0.1mg-1000mg。

7.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的加巴喷丁的人用给药量为5mg/kg·d~60mg/kg·d。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于所述的加巴喷丁的人用给药量为10mg/kg·d~25mg/kg·d。

9.如权利要求2所述的用途，其特征在于所述的脑梗塞为脑缺血引发的脑梗塞。

10.如权利要求1或2任一所述的用途，其特征在于所述的预防或治疗的对象为人或动物。

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