CN103364373B - 一种校准免疫比浊仪的方法与所用纳米尺和免疫比浊仪 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种校准免疫比浊仪的方法，使用至少一种已知直径的纳米尺来校正免疫比浊仪，将至少一种已知直径的非生物活性的纳米颗粒分别制成悬浊液，再分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；将所述比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在一定波长下进行检测，得到一组不同的光信号值；将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。本发明还提供一种校准免疫比浊仪的纳米尺及使用所述纳米尺和所述校准方法进行校准的免疫比浊仪。本发明的纳米尺能够长时间稳定储存，不易受其他干扰因素影响，且可直接反复使用，保证了免疫比浊仪校准的稳定性和精确性。
Description
技术领域
本发明涉及医疗仪器领域，具体涉及一种校准免疫比浊仪的方法与所用纳米尺和免疫比浊仪。
背景技术
现有免疫比浊仪的比浊原理为：一定比例的抗原、抗体在特殊缓冲液中反应时，会发生特异性结合，形成小分子可溶性免疫复合物，这种可溶性免疫复合物在增浊剂的作用下，形成免疫复合物微粒。当光线通过介质时，遇到这些微粒后形成折射、散射或吸收，通过对折射光或散射光的测定，从而对抗原或抗体进行分析。
而现有技术中，一般用于免疫比浊仪校准的方法，是使用具有生物活性的校准品/质控品来对仪器进行校准。生物活性校准品/质控品溶解后不易长时间稳定储存，且校准反应过程易受其他干扰因素影响，因此现有免疫比浊仪存在校准困难，生物活性校准品/质控品因稳定性差、抗干扰能力差等问题，造成校准结果的精确性变差和不稳定。
发明内容
本发明的目的是针对上述问题，提供一种抗干扰能力强及稳定时间长、精确校准的校准免疫比浊仪的方法及该方法中所用的纳米尺和采用该方法的免疫比浊仪。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案是，一种校准免疫比浊仪的方法，使用至少一种已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将至少一种已知直径的非生物活性的纳米颗粒分别制成悬浊液，再分别放入比色杯或其它透明容器中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述比色杯逐一放入免疫比浊仪中，用光信号进行检测，得到一组不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度范围为0.01%-1%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度范围为0.02%-0.1%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度为0.05%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为一种或一种以上，每一种悬浊液中的纳米颗粒直径不同。
优选的，所述纳米颗粒是聚苯乙烯纳米颗粒、聚甲基丙烯酸甲酯纳米颗粒或聚氯乙烯纳米颗粒。
优选的，所述纳米颗粒大小范围为30nm-12500nm。
优选的，所述纳米颗粒大小范围为50nm-5000nm。
优选的，所述纳米颗粒为以下五种中的一种或数种：80nm、200nm、500nm、1000nm和2560nm。
优选的，所述检测波长是320nm-1000nm。
优选的，所述检测波长是570、600、620、650或800nm。
优选的，所述检测波长是620nm。
优选的，所述碳酸盐缓冲液是浓度为10-100mM的碳酸钠或碳酸氢钠溶液。
本发明还提供一种校准免疫比浊仪的纳米尺，以至少一种已知直径的非生物活性的纳米颗粒分别制成悬浊液，分别放入比色杯中制得确定颗粒尺寸的所述纳米尺。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度范围为0.01%-1%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度范围为0.02%-0.1%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度为0.05%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为一种或一种以上，每一种悬浊液中的纳米颗粒直径不同。
优选的，所述纳米颗粒是聚苯乙烯纳米颗粒、聚甲基丙烯酸甲酯纳米颗粒或聚氯乙烯纳米颗粒。
优选的，所述纳米颗粒是聚苯乙烯纳米颗粒。
优选的，所述纳米颗粒直径范围为30nm-12500nm。
优选的，所述纳米颗粒直径范围为50nm-5000nm。
优选的，所述纳米颗粒直径为以下五种大小：80nm、200nm、500nm、1000nm和2560nm。
优选的，所述碳酸盐缓冲液是浓度为10-100mM的碳酸钠或碳酸氢钠溶液。
本发明还提供一种免疫比浊仪，包括采用所述任一的纳米尺。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度范围为0.01%-1%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度范围为0.02%-0.1%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度为0.05%的纳米颗粒悬浮液。
优选的，所述悬浊液为一种或一种以上，每一种悬浊液中的纳米颗粒直径不同。
优选的，所述纳米颗粒是聚苯乙烯纳米颗粒、聚甲基丙烯酸甲酯纳米颗粒或聚氯乙烯纳米颗粒。
优选的，所述纳米颗粒大小范围为30nm-12500nm。
优选的，所述纳米颗粒大小范围为50nm-5000nm。
优选的，所述纳米颗粒为以下五种：80nm、200nm、500nm、1000nm和2560nm。
优选的，所述检测波长是320nm-1000nm。
优选的，所述检测波长是570、600、620、650或800nm。
优选的，所述检测波长是620nm。
优选的，所述碳酸盐缓冲液是浓度为10-100mM的碳酸钠或碳酸氢钠溶液。
本发明适用于仪器出厂前或出厂后安装或使用过程中的校正。
本发明的有益效果是，纳米尺不具有生物活性，方便长时间稳定储存，不易受其他干扰因素影响，且可直接反复使用，保证了免疫比浊仪校准的稳定性和精确性。
附图说明
图1是五种直径的纳米颗粒与所对应的光信号值曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附后权利要求书限定的范围。
实施例1,
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径分别为80nm、200nm、500nm、1000nm和2560nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用50mM的碳酸钠溶液分别制成浓度为0.05%的悬浊液，分别放入比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在620nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。经反复测试，直径分别为80nm、200nm、500nm、1000nm和2560nm的聚苯乙烯纳米颗粒稀释到0.05%的悬浊液是最佳值，检测波长则以620nm为最佳。
实施例2，
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为60nm、180nm、450nm、900nm和2500nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用10mM的碳酸钠溶液分别制成浓度为0.01%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在600nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例3，
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为50nm、240nm、550nm、1050nm和2000nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用20mM的碳酸氢钠溶液分别制成浓度为0.02%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在650nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例4,
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为80nm、300nm、600nm、1200nm和3000nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用30mM的碳酸钠溶液分别制成浓度为0.1%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在570nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例5,
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为40nm、400nm、600nm、1300nm和3200nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用40mM的碳酸氢钠溶液分别制成浓度为1%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在800nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例6，
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为40nm、150nm、700nm、1380nm和4000nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用60mM的碳酸钠溶液分别制成浓度为0.5%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在800nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例7，
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为50nm、500nm、1000nm、4000nm和5000nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用70mM的碳酸氢钠溶液分别制成浓度为0.08%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在570nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例8,
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为40nm、200nm、800nm、3500nm和4800nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用100mM的碳酸氢钠溶液分别制成浓度为0.15%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在600nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例9,
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为30nm、500nm、100nm、5000nm和12000nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用100mM的碳酸氢钠溶液分别制成浓度为0.2%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在800nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例10,
一种校准免疫比浊仪的方法，制备并使用一组已知数值的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将直径为分别为80nm、210nm、480nm、1000nm和2500nm的非生物活性的聚苯乙烯纳米颗粒用100mM的碳酸氢钠溶液分别制成浓度为0.3%的悬浊液，分别放入不同的比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述装有不同大小纳米颗粒悬浊液的比色杯逐一放入免疫比浊仪中，在620nm波长下进行检测，得到一组对应于不同大小纳米颗粒的不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪。
实施例11,
将直径为80nm、200nm、500nm、1000nm和2560nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用的50mM碳酸钠缓冲液制成浓度为0.05%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。经反复测试，该实施例中的纳米颗粒直径是和悬浊液是最佳值。
实施例12,
将直径为70nm、240nm和480nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用100mM碳酸氢钠缓冲液制成0.01%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例13,
将直径为90nm、300nm、600nm和900nm的聚甲基丙烯酸甲酯纳米颗粒分别用10mM碳酸钠缓冲液制成0.02%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例14,
将直径为50nm、500nm、2000nm和5000nm的聚氯乙烯纳米颗粒分别用20mM碳酸氢钠缓冲液制成0.1%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例15,
将直径为40nm、400nm、4000nm和12000nm的聚氯乙烯纳米颗粒分别用30mM碳酸钠缓冲液制成1%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例16,
将直径为30nm、150nm、750nm、3750nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用60mM碳酸钠缓冲液制成0.5%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例17,
将直径为80nm、320nm、1280nm、5120nm和10240nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用70mM碳酸氢钠缓冲液制成0.5%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例18,
将直径为60nm、240nm、960nm、3840nm和11520nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用80mM碳酸钠缓冲液制成0.08%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例19,
将直径为50nm、150nm、450nm、1350nm和4050nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用90mM碳酸钠盐缓冲液制成0.03%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例20,
将直径为100nm、500nm、2500nm、5000nm和10000nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用100mM碳酸钠缓冲液制成0.01%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例21,
将直径为100nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用10mM碳酸钠缓冲液制成0.02%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例22,
将直径为200nm、500nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用20mM碳酸钠缓冲液制成0.02%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例23,
将直径为200nm、500nm、1000nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用30mM碳酸钠缓冲液制成0.05%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例24,
将直径为80nm、200nm、500nm、1000nm的聚苯乙烯纳米颗粒分别用40mM碳酸钠缓冲液制成0.05%的悬浊液，分别装入比色皿中制得确定颗粒尺寸的纳米尺。
实施例中，制备纳米尺时，可以只制备一种尺寸的，也可以是两种、三种、四种、五种或五种以上，根据需要来确定，制备纳米尺使用的纳米颗粒的尺寸范围在30nm-12500nm之间任意选取；所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度范围为0.01%-1%的纳米颗粒悬浮液；所述纳米颗粒是聚苯乙烯纳米颗粒、聚甲基丙烯酸甲酯纳米颗粒或聚氯乙烯纳米颗粒。所述检测波长是320nm-1000nm范围内任意选取。所述检测波长优选值是570、600、620、650或800nm,其中620nm波长为最佳值。所述碳酸盐缓冲液是浓度为10-100mM的碳酸钠或碳酸氢钠溶液。
实施例中，测试五种纳米尺得到光信号值，见表1。
表1
| 微球直径 | 80nm | 200nm | 500nm | 1000nm | 2560nm |
| 光信号值 | T80 | T200 | T500 | T1000 | T2560 |
注：表1中，T80、T200、T500、T1000、T2560为校准值
免疫比浊仪在出厂前或出厂后安装或使用过程中，使用实施例中五种纳米尺进行测试，得到光信号值，见表2。
表2
| 微球直径 | 80nm | 200nm | 500nm | 1000nm | 2560nm |
| 光信号值 | X80 | X200 | X500 | X1000 | X2560 |
注：表2中，X80、X200、X500、X1000、X2560为实际测试值
校正系数
=[X80*X200*X500*X1000*X2560/（T80*T200*T500*T1000*T2560）]1/5
本实施例中，纳米尺可以选择80nm、200nm、500nm、1000nm和2560nm五种直径颗粒中的一种、两种、三种或四种，甚至再增加其他直径的纳米颗粒，满足实际需要即可。
本发明的有益效果是，纳米尺不具有生物活性，方便长时间稳定储存，不易受其他干扰因素影响，且可直接反复使用，保证了免疫比浊仪校准的稳定性和精确性。
以上为对本发明实施例的描述，通过对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (5)
1.一种校准免疫比浊仪的方法，其特征在于，使用至少一种已知直径的纳米尺来校正免疫比浊仪，具体步骤是：第一步，将至少一种已知直径的非生物活性的纳米颗粒分别制成悬浊液，再分别放入比色杯中制得确定颗粒尺寸的纳米尺；第二步，将所述比色杯逐一放入免疫比浊仪中，用光信号进行检测，得到一组不同的光信号值；第三步，将所述光信号值对应不同的标准直径的纳米颗粒的尺寸计算免疫比浊仪的校正系数，从而得以校正该免疫比浊仪；
所述校正系数是每次需校正时，所测得的一组光信号值与所对应的标准直径的纳米颗粒的校准值的计算值，
即[实际测得一组纳米尺的光信号值的乘积/对应直径的纳米尺的光信号校准值的乘积]1/X，X是纳米尺的数量。
2.如权利要求1所述的校准免疫比浊仪的方法，其特征在于，所述悬浊液为碳酸盐缓冲液稀释所述纳米颗粒获得的浓度为0.01％-1％的纳米颗粒悬浮液。
3.如权利要求1或2所述的校准免疫比浊仪的方法，其特征在于，所述悬浊液为一种或一种以上，每一种悬浊液中的纳米颗粒直径不同。
4.如权利要求1或2所述的校准免疫比浊仪的方法，其特征在于，所述悬浊液纳米颗粒直径范围为30-12500nm。
5.如权利要求1或2所述的校准免疫比浊仪的方法，其特征在于，所述检测波长是320nm-1000nm。
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