CN103356630A - 含有己酮可可碱和普卡必利的药物组合物及其医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种便秘治疗用药物组合物，该药物组合物以己酮可可碱和普卡必利或其可药用盐为主要活性成分，该药物组合物可以显著改善肠道传输功能，降低肛门括约肌的压力，并且两种药物联合具有显著的协同作用。该药物组合物成分明确，疗效确切，能够对慢性便秘特别是功能性便秘起到标本兼治的治疗效果，因此具有广阔的医疗应用前景。

Description

含有己酮可可碱和普卡必利的药物组合物及其医药用途

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其药物用途，具体涉及一种以己酮可可碱和普卡必利为药物活性成分的药物组合物及其用于便秘治疗的医药用途，本发明属于医药领域。

背景技术

便秘是临床上最常见的胃肠道症状之一，常表现为排便费力、排便次数减少、排便硬结或干球便、排便不尽感、肛门直肠堵塞感，甚至用手法辅助排便。慢性便秘在过去相当长的时期内被人们所轻视，近年来，便秘的患病率逐渐升高，且有研究显示其与急性心脑血管疾病、痴呆、结直肠癌发病有着密切关系，已引起越来越多的关注。

慢性便秘按其发病原因可以分为功能性便秘和器质性便秘。器质性便秘可以由胃肠道疾病、累及消化道的系统性疾病引起，如糖尿病、硬皮病、神经系统疾病等均可引起不同程度的便秘症状，肠管器质性病变如肿瘤、炎症或其他原因也可引起肠腔狭窄或梗阻。功能性便秘(IBS型便秘)是一类和腹痛或腹胀有关的便秘的类型，按发病病因可细分为慢传输型、出口梗阻型和混合型。其中慢传输型便秘(slow transit constipation，STC)主要表现为：(1)、常有排便次数减少，少便意，粪质坚硬等症状，因而排便困难。(2)、肛直肠指检时无粪便或触及坚硬的粪便，而肛门外括约肌的缩肛和力排功能正常。(3)、全胃肠或结肠通过时间延长。(4)、缺乏出口梗阻型便秘的证据，如气球排出试验正常，肛门直肠测压显示正常。出口梗阻型便秘(outlet obstructive constipation，OOC)主要表现为：(1)、排便费力、不尽感或下坠感、排便量少，有便意或缺乏便意。(2)、肛直肠指检时直肠内存有不少泥样粪便，力排时肛门外括约肌呈矛盾性收缩。(3)、全胃肠或结肠通过时间显示正常，多数标志物可潴留在直肠内。(4)、肛门直肠测压时显示力排时肛门外括约肌呈矛盾性收缩等或直肠壁的感觉阈值异常。混合型便秘则兼具备慢传输型和出口梗阻型的特点。STC主要是由于结肠动力低下、结肠传输时间延长所致；OOC患者临床上表现为排便费力、需要手法帮助排便、排便不尽感等。罗马Ⅲ标准将OOC归入功能性肛门直肠病中，称为功能性排便障碍。功能性排便障碍的诊断必须符合功能性便秘的诊断标准，同时有排便时盆底肌肉不阱调收缩、肛门括约肌松弛不够或排便时推进力不足的客观证据。

慢性便秘的治疗通常使用较多的是轻泻剂，但是轻泻剂并不能有效改善便秘的症状，2008年的一项研究显示，虽然16％-40％的便秘患者使用轻泻剂，但症状仍然存在，与未使用轻泻剂的患者相比没有明显差别。2007年一项基于网络的调查显示，有47％的患者对轻泻剂不完全满意，其中82％由于疗效不佳，16％由于安全性。因此现有的治疗还不能满足慢性便秘患者的治疗需要，开发一种疗效确切的慢性便秘治疗药物具有十分重要的临床意义和社会意义。

己酮可可碱具有改善微循环、降低血黏度、增加周围微循环和组织带氧能力，其作用基础是由于己酮可可碱可以提高红细胞内ATP和其它环苷酸类物质，提高红细胞和白细胞变形能力，阻止细胞聚集而直接改善微循环。同时，己酮可可碱还能抑制磷酸二酯酶活性和血栓烷合成，使血管内皮细胞生成PGI₂增加、抑制血栓素A₂合成而产生扩张血管及降低通透性的作用、抑制中性粒细胞黏附激活能力，从而改善血液循环。

己酮可可碱临床上主要用于缺血性中风后脑循环的改善，同时可用于周围血管病，如伴有间歇性的跛行的慢性闭塞性脉管炎等的治疗。己酮可可碱作为磷酸二酯酶抑制药，近年来逐步发现了一些新的医药用途。

普卡必利(prucalopride)为苯丙咪唑类药物，是特异性5-HT4受体完全激动剂，具有较高选择性和特异性5-HT4受体激动作用。普卡必利可以增加胆碱能神经递质的释放，刺激肠蠕动反射，增强结肠收缩和近端结肠传输，能够有效地缓解便秘病人的症状，临床主要用于治疗各种便秘及手术的胃肠道蠕动无力和假性梗阻。普卡必利可明显加强结肠运转，尤其是近端结肠(升、横结肠)的排空，但对胃及小肠的运转、内脏敏感性不产生影响。曾用名：4-Amino-5-chloro-2，3-dihydro-N-[1-(3-methoxypropyl)-4-piperidinyl]-7-benzofurancarboxamide，4-氨基-5-氯-2，3-二氢-N-[1-(3-甲氧基丙基)-4-哌啶基]-7-苯并呋喃甲酰胺，其结构如下所示：

美国罗切斯特梅奥医院报道，采用普卢卡必利治疗重度慢性便秘短期可显著改善肠道功能，减轻便秘症状。Camilleri等进行了一项多中心、随机对照研究，对620名重度慢性便秘(大便次数≤2次/周)分别每天服用安慰剂、普卢卡必利2mg或4mg，疗程12周。结果三组排便次数增加的比例分别为25.8％、47.3％和46.6％。普卡必利治疗的两组患者对治疗的满意度和症状严重程度认知都有显著改善，并未发现严重的心血管影响。

CN101744821A公开了己酮可可碱在制备治疗肛肠疾病药物中的用途，其在治疗肛肠疾病特别是痔疮时取得了十分显著的治疗效果。CN10214500A公开了己酮可可碱预防或治疗功能性便秘的医药用途，并具体公开了含有己酮可可碱的药物制剂，但该医药用途和药物制剂中并没有涉及本发明所述药物组合物。

发明内容

针对现有便秘临床治疗中缺乏有效治疗药物的现状，本发明提供一种可以显著改善便秘症状并可对便秘症状标本兼治的药物组合物，该药物组合物用于治疗便秘的优点是作用全面、毒副作用低和价格低廉，因而具有十分广阔的医药应用前景。

本发明的目的之一是通过一系列科学的处方设计，提供一种治疗便秘特别是功能性便秘的药物组合物。该药物组合物包括以下两种药物活性成分：

1)己酮可可碱；

2)普卡必利或其可药用盐。

本发明的药物组合物含有己酮可可碱和普卡必利或其可药用盐两种药物活性成分，由于两种药物活性成分的作用机制不同，组成组合物后对便秘治疗效果将更加全面，并且两药合用有协同作用，其在增加患者日均排便量、增强患者肠道推进力方面以及降低肛门括约肌的反应灵敏度均明显优于相同剂量的单方；此外，该药物组合物中两种活性成分在有效降低肛门括约肌的压力，改善肛门括约肌的电位振幅及平均时限方面也存在明显的协同作用，提示该药物组合物对出口梗阻型便秘有着明显的治疗优势。发明人通过合理选择组合物中己酮可可碱和普卡必利的用量，选择合适的药物剂型，使药物组合物在有效治疗便秘的同时又可最大程度地降低各自的毒副作用。动物实验研究发现将本发明所提供的组合物制备成外用制剂具有疗效确切和使用方便的优势。己酮可可碱和普卡必利或其可药用盐联合应用组成复方后，药物成分明确、性质稳定、相互影响较小，便于药物制剂质量控制的建立，有利于生产制备时质量的控制，非常适合工业化大生产。

优选地，本发明上述药物组合物中，普卡必利的可药用盐选自其盐酸盐、氢溴酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、甲硫酸盐、硫酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐、枸橼酸盐，更优选为其琥珀酸盐。

优选地，本发明上述的药物组合物中，普卡必利或其可药用盐以普卡必利计，己酮可可碱和普卡必利重量比为1∶0.0001～10时，本发明药物组合物对慢性便秘特别是功能性便秘的治疗具有更好的疗效。进一步优选地，己酮可可碱和普卡必利的重量比为1∶0.001～1；更优选地，己酮可可碱和普卡必利的重量比为1∶0.01～0.1

本发明的目的之二是提供用于便秘治疗特别是慢性便秘治疗的含有上述药物组合物的药物制剂。本发明提供的药物组合物是口服制剂或者是外用制剂，其中口服制剂是片剂、胶囊剂、颗粒剂等，所述的片剂可以为普通片剂、双层片或者缓释片。所述含药物组合物的外用制剂优选为栓剂、凝胶剂、乳膏剂和软膏剂等。

本发明上述药物组合物还含有制剂工艺上可接受的辅料赋形剂，经大量实验筛选，栓剂适用赋形剂包括但不限于半合成脂肪酸甘油脂、甘油、明胶、聚乙二醇。

凝胶剂适用赋形剂包括但不限于卡波姆、纤维素类衍生物。

乳膏剂适用赋形剂包括但不限于单硬脂酸甘油酯、甘油、丙二醇、硬脂酸、白凡士林、三乙醇胺、十二烷基硫酸钠、尼泊金乙脂。

软膏剂适用赋形剂包括但不限于单硬脂酸甘油酯、石蜡、白凡士林、液状石蜡、丙二醇、对羟基苯甲酸乙酯、司盘80。

片剂适用赋形剂包括但不限于微晶纤维、羧甲基淀粉钠、硬脂酸盐、淀粉。

胶囊剂适用赋形剂包括但不限于微粉硅胶、甘露醇、糖粉、羧甲基淀粉钠。

缓释片剂适用赋形剂包括但不限于羟丙基甲基纤维素、乳糖、80％乙醇溶液、硬脂酸镁。

渗透泵控释片剂适用赋形剂包括但不限于乳糖、蔗糖、PVPk30、硬脂酸镁、乙基纤维素、HPMC6cp、聚乙二醇4000、欧巴代Ⅱ。

本发明的目的之三是公开上述药物组合物在制备治疗或预防慢性便秘药物中的用途，本发明所述的药物组合物用于治疗慢性便秘特别是治疗功能性便秘时，取得了预料不到的治疗效果，两种药物在慢性便秘的治疗中体现出了显著的协同作用。本发明的实施例15表明各复方组在增加小鼠日均排便量、增强小鼠肠道推进力及增加肠道ICC数量方面与两种药物单独使用存在显著的差异，提示两种药物在上述方面存在显著的协同作用。本发明实施例16显示各复方组在降低肛门括约肌电位振幅和延长时限方面均显著优于两种药物单独使用，两种药物存在明显的协同作用；另外，两种药物在降低肛门括约肌压力方面也显著优于单药组。本发明实施例17显示本发明药物组合物在洛哌丁胺诱导的大鼠便秘模型中可明显增加大鼠肠黏膜上皮的黏液并改善结肠功能，其改善效果要明显优于己酮可可碱单独使用，复方外用组要略好于复方灌胃组。

本发明药物组合物用于慢性便秘特别是功能性便秘的预防或治疗时，可以选用合适的给药方式给药，优选为口服给药或外用给药，给药时可选用本发明公开的药物剂型及其他合适剂型，如本发明上文所公开的片剂、胶囊剂、颗粒剂、栓剂、乳膏剂等药物制剂。用于慢性便秘预防或治疗时，药物组合物中己酮可可碱的给药量为0.15mg/kg·d～15mg/kg·d，优选为5mg/kg·d～10mg/kg·d；普卡必利的给药量为0.0015mg/kg·d～0.15mg/kg·d，优选为0.01mg/kg·d～0.1mg/kg·d。

本发明所提供的组合物用于治疗慢性便秘特别是功能性便秘时，取得了如下突出的预料不到的技术效果：

1)两种药物活性成分的作用机制不同，组成组合物后对便秘治疗效果将更加全面，且己酮可可碱和普卡必利或其可药用盐联合应用组成复方后，药物成分明确、性质稳定、相互影响较小，合用后可以减轻两种药物对人体的毒副作用

2)药物组合物中的两种药物在改善功能性便秘的多种指标方面存在显著的协同作用，因此本发明药物组合物对多种便秘类型均存在显著的预防和治疗作用。本发明实施例15显示各复方组在增加小鼠日均排便量、增强小鼠肠道推进力及增加肠道ICC数量方面与两种药物单独使用存在显著的差异，提示两种药物在上述方面存在显著的协同作用。本发明实施例16显示各复方组在降低肛门括约肌电位振幅和延长时限方面均显著优于两种药物单独使用，两种药物存在明显的协同作用；另外，两种药物在降低肛门括约肌压力方面也显著优于单药组。

3)本发明药物组合物使用方便，给药方式可采用外用或者口服，且外用组在治疗药物引起的便秘时存在治疗优势。本发明实施例17显示本发明药物组合物在洛哌丁胺诱导的大鼠便秘模型中可明显增加大鼠肠黏膜上皮的黏液并改善结肠功能，其改善效果要明显优于己酮可可碱单独使用，复方外用组要略好于复方灌胃组。

4)药物临床实验证实，施用本发明药物组合物的患者用药依从性高，用药后可以显著增加慢性便秘患者的排便次数，减轻排便的的困难程度，用药后不仅排便的持续时间显著缩短，而且粪便的性状也显著改善。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面通过对本发明较佳具体实施例的描述，详细解释说明本发明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1 复方片剂的制备

制备工艺：将己酮可可碱和普卡必利与辅料微晶纤维素、淀粉混合均匀，加入适量的15％淀粉浆制软材，然后过16目筛制粒。湿颗粒在60℃干燥，干颗粒过16目筛整粒，筛出干粒中的细粉，与硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混匀，压片，即得。

实施例2 复方片剂的制备

制备工艺：除组分不同外，制备工艺同实施例1所述工艺。

实施例3 复方双层片的制备

制备工艺：己酮可可碱过100目筛，羟丙基甲基纤维素-4M、微晶纤维素过80目筛，称取处方量的己酮可可碱和羟丙基甲基纤维素-4M、微晶纤维素混合均匀，加入8％PVP无水乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

制备工艺：普卡必利过100目筛，羧甲基纤维素钠、乳糖过80目筛，称取处方量的普卡必利和羧甲基纤维素钠、乳糖混合均匀，加入6％PVP的95％乙醇溶液适量制粒，60℃干燥，16目筛整干颗粒，干颗粒中加入处方量的硬脂酸镁。

c、将上述a，b两种组分采用双层压片机冲压即得双层片。

实施例4 复方分散片的制备

制备工艺：按处方量称取己酮可可碱、普卡必利，以微晶纤维素为填充剂，交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮为崩解剂，5％PVP 60％乙醇溶液为黏合剂，微粉硅胶为助流剂，用流化床一步制粒，然后压片，即得。

实施例5 复方片剂的制备

制备工艺：按实施例1所述工艺制备即得。

实施例6 复方片剂的制备

制备工艺：按实施例1所述工艺制备即得。

实施例7 复方颗粒剂的制备

制备工艺：称取处方量的己酮可可碱、普卡必利、淀粉、糊精、蔗糖粉混合均匀。另将适量的80％乙醇加入于混合粉末中，混合均匀，制软材，通过18目尼龙筛制成湿粒，60℃左右干燥，20目筛整粒，分装，即得。

实施例8 复方分散片的制备

制备工艺：按处方量称取己酮可可碱、普卡必利，以微晶纤维素为填充剂，交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮为崩解剂，5％PVP 60％乙醇溶液为黏合剂，微粉硅胶为助流剂，用流化床一步制粒，然后压片，即得。

实施例9 复方栓剂的制备

制备工艺：取半合成脂肪酸甘油脂置器皿中，水浴加热融化，待温度降至50℃左右，加入甘油、聚山梨酯80，搅拌均匀，加入处方量的己酮可可碱和普卡必利，搅拌均匀，搅匀后注入涂有润滑剂的栓模中至稍溢出模口为度，冷却，凝固后削去溢出部分，脱模，质检，包装，共制100粒。

实施例10 复方栓剂的制备

制备工艺：取聚乙二醇4000和聚乙二醇1000置器皿中，水浴加热融化，待温度降至50℃左右，加入甘油，搅拌均匀，加入己酮可可碱和普卡必利，搅拌均匀，搅匀后注入涂有润滑剂的栓模中至稍溢出模口为度，冷却，凝固后削去溢出部分，脱模，质检，包装，共制100粒。

实施例11 栓剂的制备

制备工艺：同实施例9，共制1000粒。

实施例12 凝胶剂的制备

制备工艺：将卡波姆缓慢加入到处方量50％左右的水中，边加边搅拌直至形成透明的凝胶基质，将己酮可可碱和普卡必利溶于适量水中，再加入基质中，搅拌均匀，加入丙二醇、甘油、纯化水至全量，三乙醇胺调节PH值至中性，即得。

实施例13 复方乳膏剂的制备

制备工艺：按处方量取单硬脂酸甘油酯、硬脂酸、白凡士林、三乙醇胺水浴加热至熔化，混匀，作为油相。另外取适量的纯化水，将己酮可可碱和普卡必利溶解到水中。

取甘油、十二烷基硫酸钠、纯化水、尼泊金乙脂混合加热至80℃左右，作为水相。待油相温度为80℃左右时，搅拌下将己酮可可碱和普卡必利溶液加入其中，并使温度保持在80℃左右。将搅拌均匀后的油相，在慢速搅拌下，缓缓加入水相中，后加速搅拌30min，停止搅拌，即得乳膏。

实施例14 复方软膏剂的制备

制备工艺：取石蜡、单硬脂酸甘油酯、白凡士林、液状石蜡、丙二醇、司盘80和对羟基苯甲酸乙酯于水浴上加热熔化并保持80℃，搅拌下缓慢加入80℃的水，边加边搅拌至冷凝，即得软膏基质。取己酮可可碱和普卡必利溶于适量的纯化水中，加入到基质中，最后加水至1000g，搅拌均匀，即得。

药效学实施例

实施例15 药物组合物对慢传输型便秘小鼠模型的影响

1.试验目的

实验组小鼠皮下注射吗啡诱导建立慢传输型便秘小鼠模型，记录小鼠粪便重量，利用活性炭灌胃法试验比较实验组与对照组小鼠结肠传输功能；利用免疫组化技术比较两组小鼠结肠组织中Cajal细胞数量。

2.材料

无特殊病原体SPF级ICR鼠100只，山东新时代药业新药安评中心，雌雄各半，体重20～25克；小鼠代谢笼(苏州冯氏实验动物公司)；注射用盐酸吗啡(沈阳第一制药厂，规格10mg/支)；生理盐水；一抗(sc-168，Santa Cruz Biotechnology，Inc，200mg/L)；二抗(羊抗兔抗体，中山生物科技公司)；

3 试验方法和步骤

3.1 慢传输型便秘小鼠模型的建立

ICR鼠100只，随机分为10个实验组，1个正常对照组和1个模型对照组，每组10只。所有小鼠置入100个小鼠代谢笼中，SPF级环境饲养。适应性喂养3天后，实验组和模型对照组小鼠皮下注射盐酸吗啡2.5mg/(kg·d)，正常对照组注射等量生理盐水。每3天记录一次小鼠粪便粒数、大便干重及小鼠体重，计算小鼠日均排便重量(g)。以小鼠日均排便量减少，且日均排便量与正常对照组相比具有显著性差异作为慢传输型便秘小鼠模型的建立成功的标志，造模成功后停止注射给药。

3.2 小鼠日均排便重量的测定

将造模成功后(饲养第46天起)的90只小鼠随机分成模型对照组和以下实验组，各实验组小鼠按照如下给药方案给药：

己酮可可碱高组：灌胃给予己酮可可碱溶液，己酮可可碱给药剂量为150mg/(kg·d)

己酮可可碱低组：灌胃给予己酮可可碱溶液，己酮可可碱给药剂量为0.15mg/(kg·d)

普卡必利高组：灌胃给予普卡必利溶液，普卡必利给药剂量为1.5mg/(kg·d)

普卡必利低组：灌胃给予普卡必利溶液，普卡必利给药剂量为0.015mg/(kg·d)

复方一组：灌胃复方溶液，给药剂量为己酮可可碱150mg/(kg·d)，普卡必利1.5mg/(kg·d)

复方二组：灌胃复方溶液，给药剂量为己酮可可碱150mg/(kg·d)，普卡必利0.015mg/(kg·d)复方三组：灌胃复方溶液，给药剂量为己酮可可碱0.15mg/(kg·d)，普卡必利1.5mg/(kg·d)

复方四组：灌胃复方溶液，给药剂量为己酮可可碱0.15mg/(kg·d)，普卡必利0.015mg/(kg·d)

上述药物给药前均用同等体积的蒸馏水溶解，正常对照组和模型对照组给予同等体积的蒸馏水。上述给药组小鼠每天给药一次，给药期间每隔1天记录一次小鼠粪便粒数、大便干重及小鼠体重，计算小鼠日均排便重量(g)。小鼠日均排便量与正常组相比减少，表明慢传输型便秘程度增大。连续给药30天后处死小鼠，实验结束。

3.3 肠道传输功能测定

用活性炭灌胃法测定首粒黑便排出时间。停药1周的所有小鼠禁食24小时，经口灌入100mg/ml活性炭悬液2ml。从活性炭灌胃完毕开始时计时，记录从灌胃到首粒黑便排出的时间。首粒黑便排出时间越长表明慢传输型便秘程度越大。

3.4 免疫组化标记小鼠结肠组织ICC及小鼠结肠组织ICC数量的比较

实验结束后颈椎脱臼法处死，剖腹取出幽门到直肠末端全部肠道，分别取每只小鼠远端结肠组织2～3处，4％甲醛溶液固定，石蜡包埋连续切片(厚度：4～5μm)；脱蜡和水化后，切片放入pH8.0的EDTA缓冲液，煮沸15min，保温10min，室温冷却；PBS液(pH7.6)冲洗3次，每次5min；每张切片滴加50μl3％双氧水以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育10min；PBS液(pH7.6)冲洗3次，每次5min；去除血清，分别加入一抗(1∶500)50μl，37℃孵育60min，PBS液冲洗3次，每次5min；去除PBS液，分别加入生物素标记的二抗(1∶50)50μl，室温孵育10min；PBS液冲洗3次，每次3min；去除PBS液，加50μl链霉菌抗生物素—过氧化物酶溶液，室温孵育10min；PBS液冲洗3次，每次3min；去除PBS液，加2滴新鲜配制的DAB，显微镜下观察3～10min；自来水冲洗；苏木精复染，0.1％HCl乙醇分化，流水冲洗返蓝；梯度乙醇脱水干燥(二甲苯透明)，中性树胶封固，细胞质呈棕色为阳性反应。每张切片选择五个高倍镜视野(×200)，应用Lecia RX250型图像分析系统及Qwin软件标记并计算c-kit阳性细胞面积。c-kit阳性细胞面积与正常组小鼠相比越小，表明慢传输型便秘程度越大。

3.5 试验数据的统计学处理

实验数据录入SPSS211.0统计软件包，统计方法选用t检验，p＜0.05为差异有显著性意义。

4 结果

表1 药物组合物对慢传输型便秘小鼠的影响

^*与模型对照组相比，p＜0.05；^**与模型对照组相比，p＜0.01；

^#与己酮可可碱高组相比，p＜0.05；^##与己酮可可碱高组相比，p＜0.01；

^$与己酮可可碱低组相比，p＜0.05；^$$与己酮可可碱低组组相比，p＜0.01；

^&与普卡必利高组相比，p＜0.05；^&&与普卡必利高组相比，p＜0.01；

^△与普卡必利低组相比，p＜0.05；^△△与普卡必利低组相比，p＜0.01；

^■■与正常对照组比较，p＜0.01；

5 讨论

慢传输型便秘患者肠道Cajal间质细胞(ICC)数量减少、体积缩小，故可认为ICC减少是慢传输型便秘肠道组织细胞学的主要特点。c-kit为一种原癌基因，位于5号染色体w位点上，它编码kit受体，后者属酪氨酸激酶膜受体。ICC有无c-kit表达与肠道动力密切相关，因此可以利用c-kit抗体标记识别ICC。本研究利用c-kit抗体标记ICC后对比两组小鼠阳性细胞数量，模型对照组小鼠粪便减少，肠道推进力减弱，肠道ICC数量减少，与正常组差异显著，故本研究所造模型与慢传输型便秘生理、病理组织细胞学特点一致。各复方给药组在改善慢传输型便秘的症状即增加小鼠日均排便量，增强小鼠肠道推进力并增加肠道ICC数量方面，不仅与模型对照组具有极显著差异，而且与己酮可可碱单独用药组以及普卡必利单独用药组相比也具有显著的差异，提示两种药物在慢传输型便秘治疗中具有显著的协同作用，取得了预料不到的药物治疗效果。

实施例16 药物组合物对大鼠肛门括约肌的影响

1 材料与方法

1.1 材料：

雄性Wistar大鼠90只，体重240±10g，均由山东新时代药业新药安评中心提供，将上述实验动物放入不锈钢钢筋笼内饲养，温度24±0.5℃，相对湿度为55±10％，每天07:00-19:00光照12小时，大鼠自由进食和饮水，统一标准餐进食。

1.2 方法：

所有大鼠随机分为9组，每组10只。具体分组与给药如下：

生理盐水组：灌胃给予等体积生理盐水；

己酮可可碱高组：灌胃给予己酮可可碱溶液，己酮可可碱给药剂量为150mg/(kg·d)；

己酮可可碱低组：灌胃给予己酮可可碱溶液，己酮可可碱给药剂量为0.15mg/(kg·d)；

普卡必利高组：灌胃给予普卡必利溶液，普卡必利给药剂量为1.5mg/(kg·d)；

普卡必利低组：灌胃给予普卡必利溶液，普卡必利给药剂量为0.015mg/(kg·d)；

复方一组：灌胃复方溶液，给药剂量为己酮可可碱150mg/(kg·d)，普卡必利1.5mg/(kg·d)；

复方二组：灌胃复方溶液，给药剂量为己酮可可碱150mg/(kg·d)，普卡必利0.015mg/(kg·d)复方三组：灌胃复方溶液，给药剂量为己酮可可碱0.15mg/(kg·d)，普卡必利1.5mg/(kg·d)

复方四组：灌胃复方溶液，给药剂量为己酮可可碱0.15mg/(kg·d)，普卡必利0.015mg/(kg·d)

在给药前1h、给药后72h，分别检测各组动物的肛周括约肌肌电图，同时进行肛直肠测压。用DANTEC公司生产的Counterpoint MKⅡ型神经肌电图仪进行肛门括约肌表面肌电图检测。滤波频带500-1000Hz，灵敏度0.2-1mV/cm，扫描速度0.5-1ms，采用表面电极置于肛门周围皮肤，记录4组实验动物的肛门括约肌肌电图情况，利用自带软件计算出电位平均振幅及平均时限。

采用RT-2070型多通道直肠肛管测压仪，加以自制的微型气囊(最大0.5ml)测压导管，进行试验动物的肛直肠测压。微型多极探头深入肛直肠内0.5cm，测量肛直肠静息压、肛直肠最大自主收缩压和直肠肛门抑制反射值。由于大鼠肛管短、细，与直肠无明显交界，故仅用单气囊进行肛直肠测压。同时，通过多导生理记录仪记录测量值。

检测完毕后处死试验动物，切取4组实验动物的肛门括约肌组织，行病理切片，苏木素-伊红(HE)染色，在400倍光学显微镜下观察试验动物的肛门括约肌肌维组织形态学特点。

1.3 统计学处理：

所有统计学数据均采用平均值±方差。采用SPSS11.0统计分析软件进行方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肛门括约肌肌电图的变化情况

实验结果显示9组实验动物在治疗前后的肛周括约肌肌电图均为有规律的持续性电活动，9组动物治疗前肛周括约肌肌电图表现差异无统计学意义(P＜0.05)，电位振幅(96.8±35.7)μV，时限(3.8±0.9)ms。

与生理盐水组相比，治疗后72h，所有治疗组的肌电图运动电位振幅都有所降低，平均时限有所提高，但己酮可可碱高组、己酮可可碱低组、普卡必利高组、普卡必利低组与生理盐水组相比无显著性差异，各复方组与生理盐水组相比均具有显著性差异；

与己酮可可碱各剂量组和普卡必利各剂量组单独用药相比，其对应的各复方组在降低电位振幅和延长时限方面具有显著性差异，证明了己酮可可碱和普卡必利在降低肛门括约肌电位振幅和延长时限方面存在明显的协同作用。具体实验结果参见表2。

表2 各给药组肛门括约肌肌电图电位振幅及平均时限

注：^*与生理盐水组相比，p＜0.05；^#与己酮可可碱高组相比，p＜0.05；

^$与己酮可可碱低组相比，p＜0.05；^&与普卡必利高组相比，p＜0.05；

^△与普卡必利低组相比，p＜0.05。

2.2 肛直肠测压情况：

与生理盐水组相比，治疗后72h后所有治疗组的肛直肠静息压、肛直肠最大自主收缩压、直肠肛门抑制反射值的气囊容量均低于生理盐水组。但己酮可可碱高组、己酮可可碱低组、普卡必利高组、普卡必利低组与生理盐水组相比无显著性差异，各复方组与生理盐水组相比具有显著性差异；与己酮可可碱单药组以及普卡必利单药组相比，各复方组在降低肛直肠静息压、肛直肠最大自主收缩压、直肠肛门抑制反射值的气囊容量方面具有显著性差异，也优于各单药组在上述指标改善的加和，提示己酮可可碱和普卡必利在降低肛直肠静息压、肛直肠最大自主收缩压、直肠肛门抑制反射值的气囊容量方面具有显著的协同作用。各给药组对肛直肠压力的影响具体见表3。

对于占功能性便秘50％以上的出口梗阻型便秘，肛门内外括约肌的持续痉挛和压力升高是其主要的病理生理改变之一。复方给药组的肛直肠静息压、最大自主收缩压和直肠肛门抑制反射值明显下降，说明其有效地降低了肛门括约肌的肌张力，达到了松弛肛门括约肌的效果。病理组织学切片观察发现，复方给药组的肛门括约肌纤维有一定程度的萎缩。研究表明，复方给药组能有效降低肛门括约肌的压力，为临床治疗慢性出口梗阻型便秘提供了新的方法和思路，值得进一步研究。

表3 各给药组对肛直肠压力的影响

注：

^*与生理盐水组相比，p＜0.05；^#与己酮可可碱高组相比，p＜0.05；

^$与己酮可可碱低组相比，p＜0.05；^&与普卡必利高组相比，p＜0.05；

^△与普卡必利低组相比，p＜0.05。

实施例17 药物组合物对洛哌丁胺诱导的便秘大鼠直肠黏膜黏液的影响

1.实验材料

8周龄的SD大鼠，体重240±10g，由山东新时代药业新药安评中心提供，随即放进不锈钢钢筋笼内饲养，温度24±0.5℃，相对湿度为55±10％，每天07:00-19:00光照12小时，大鼠自由进食和饮水，统一标准餐进食。洛哌丁胺(Loperamide)购自上海新亚药业闵行有限公司；0.9％NaCl溶液购自重庆大新药业股份有限公司。

2.实验方法与步骤

随机将大鼠分为己酮可可碱灌胃组、己酮可可碱外用组、复方外用组，复方灌胃组，模型对照组、正常对照组，每组10只。将大鼠适应性饲养3天后，除正常对照组外、各组均皮下注射洛哌丁胺1.5mg/kg，注射前洛哌丁胺溶解于0.9％NaCl溶液中，每天于09:00和18:00分别注射一次。正常组大鼠则注射等体积的0.9％NaCl溶液，连续注射5天后按下述实验方案给予药物：

模型对照组：灌胃给予同体积的生理盐水

正常对照组：灌胃给予同体积的生理盐水

己酮可可碱灌胃组：灌胃给予己酮可可碱溶液，给药剂量为1.5mg/kg

己酮可可碱外用组：给予己酮可可碱栓剂，给药剂量为1.5mg/kg

复方灌胃组：灌胃给予复方溶液，给药剂量为己酮可可碱1.5mg/kg，普卡必利0.015mg/kg

复方外用组：给予复方栓剂，给药剂量为己酮可可碱1.5mg/kg，普卡必利0.015mg/kg

以上各组大鼠均笼养，自由饮食，每天给药一次。连续用药14天后，将各组大鼠用氯氨酮麻醉，剖腹，割取远端结肠8cm，纵向剖开，冲净内容物，10％中性福尔马林固定，备用。全部固定后的标本用石蜡包埋，常规切片，AB-PAS染色。含黏液的细胞灰度值较低，不含黏液的细胞灰度值较高。采用IMS全真彩色图像分析系统(上海申腾信息技术公司产品)分析黏液阳性面积。技术指标为图像分辨率512×512，灰度等级为256。显微镜为Olympus-BH2。每个标本随机检测6个10×10低倍视野。实验结果以均值±标准差表示，采用SPSS10.0软件包进行方差分析。

3.结果

实验结果表明：

(1)正常对照组大鼠肠黏膜上皮黏液丰富；模型对照组大鼠肠黏膜上皮黏液明显减少，与正常组相比具有极其显著性差异(p＜0.01)。

(2)与模型对照组相比，己酮可可碱灌胃组及外用组，复方灌胃组及外用组大鼠肠黏膜上皮黏液明显增多，其中复方灌胃组及外用组与模型对照组相比具有显著性差异。

(3)与己酮可可碱灌胃组以及己酮可可碱外用组相比，复方灌胃组和复方外用组的上皮黏液面积均显著增多，具有显著性差异。

(4)与复方灌胃组相比，复方外用组的大鼠肠黏膜上皮黏液明显增多，且具有显著性差异(p＜0.05)，这表明直肠黏膜直接给药对于增强肠黏膜功能效果更加明显。

表4 药物组合物对洛哌丁胺诱导的便秘大鼠直肠黏膜黏液的影响

^*与模型对照组相比，p＜0.05；^**与模型对照组相比，p＜0.01；

^★与己酮可可碱灌胃组相比，p＜0.05；^★★与己酮可可碱灌胃组相比，p＜0.01；

^#与己酮可可碱外用组相比，p＜0.05；^##与己酮可可碱外用组相比，p＜0.01；

^■■与正常对照组比较，p＜0.01；与复方灌胃组相比，p＜0.05。

4.讨论

正常结肠黏膜杯状细胞的分泌液富含黏蛋白，黏蛋白与水结合形成黏液，构成黏液保障，对黏膜起到机械性保护作用。黏液分泌的减少是结肠功能衰弱的表现，或固水能力减少，或细胞黏蛋白分泌减少。本发明通过给药己酮可可碱和普卡必利的药物组合物，惊奇地发现己酮可可碱和普卡必利在改善结肠功能，增加肠黏膜黏液正常分泌方面具有显著的协同作用，取得了意想不到的效果。可见，含有己酮可可碱和普卡必利的药物组合物用于治疗功能性便秘时，不仅可以显著改善功能性便秘症状，并且能显著改善肠黏膜的功能，从而有可能实现功能性便秘标本兼治。

实施例18 本发明药物组合物对慢性便秘患者的治疗作用

以实施例5制成的片剂进行临床研究，报告如下：

1.受试者选择

1.1 纳入受试者标准：

a)排便次数减少和粪便硬度增加者；

b)大便一周少于三次者；

c)无器质性便秘者；

d)习惯性便秘者；

1.2 受试者排除标准

a)不能经口进食者或不能按规定服用受试样品者；

b)主诉不清者；

c)体质虚弱无法进行实验者；

d)30天内进行外科手术引起的便秘症状发生者；

e)严重器质性病变引起的近期排便困难者(结肠癌、严重的肠炎、肠梗阻和炎症性肠病等)

f)便秘困难并伴有疼痛者

g)30天内发生过急性胃肠道疾病者；

h)孕期或经期妇女；

i)合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重全身疾患者；

j)有其他伴随疾病正在治疗者；

k)短期内服用与受试功能有关的物品，影响结果判断者。

按照上述纳入和排除标准选择患者50例，其中男性17例，女性33例；年龄最小者25岁，最大者85岁，排便时间最短者2.5天，最长者9天；病程最短者30天，最长者40年。

2.试验设计、分组和数据处理

采用试验前后自设对照试验设计，对比研究服用药物前后的状况。资料以X±S表示，自身对照试验采用配对t检验。

观察指标：治疗前做一次血、尿、粪常规及肝肾功能检查。观察给药前后排便次数、持续时间、排便情况及粪便性状的变化。

排便状况根据排便困难程度(腹痛或肛门灼烧感、不适感、下坠感，有无便频但排便困难而量少等症状)分为Ⅰ-Ⅳ级，统计积分值。

Ⅰ级(0分)：排便正常；

Ⅱ级(1分)：仅有下坠感、不适感；

Ⅲ级(2分)：下坠不适感明显，或便频但排便困难而量少，较少出现腹痛或肛门灼烧感；

Ⅳ级(3分)：经常出现腹痛或肛门灼烧感；

粪便性状根据布里斯托(Bristol)粪便性状分类法将粪便性状分为Ⅰ-Ⅲ级。

Ⅰ级(0分)：像香肠或蛇，平滑且软；表面有裂痕但有明显边缘(容易排出)；

Ⅱ级(1分)：香肠形状，但有团块；松散块状，边缘粗燥，像泥浆状的粪便；

Ⅲ级(2分)：分离的硬团，像果核(不易排出)。

3.治疗方法：

全部患者均服用本发明实施例5制备成的复方片剂，每次2-4片，每天两次，并停用其他通便药物，待大便通畅后可服用维持量2片，每日两次，药量可以根据患者体质情况及便秘症状改善状况酌情增减。疗效判定标准如下：

临床治愈：大便干软，每日排便1次，其他症状全部消失；

显效：便秘明显好转，便质基本正常，时间间歇1～2天，其他症状2/3消失；

有效：便质干结有所改善，大便间歇时间较原来缩短1～2天，其他症状有一定好转；

无效：便秘及其他症状均无改善。

4.结果：

患者腹胀纳差、腹痛、头晕头痛、口苦眠差等主观症状得到明显改善。与治疗前相比，服用药物后患者的排便次数明显增多，排便持续时间缩短，排便困难程度和粪便性状面明显好转(表5)。50例患者痊愈23例，显效16例，有效9例，无效2例，总有效率96％。

表5 服用本发明药物前和连续服用14日后患者排便情况和粪便性状变化(X±S，n＝50)

与给药前相比，^*P＜0.001

上述临床结果表明，用药前后慢性便秘患者的便秘症状显著改善(P＜0.001)，本发明药物组合物可以显著增加慢性便秘患者的排便次数，减轻排便的的困难程度，用药后不仅排便的持续时间显著缩短，而且粪便的性状也显著改善。

Claims (11)

1.一种治疗便秘的药物组合物，其包括如下药物活性成分：

1)己酮可可碱；

2)普卡必利或其可药用盐。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于普卡必利的可药用盐选自其盐酸盐、氢溴酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、甲硫酸盐、硫酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐或枸橼酸盐。

3.如权利要求2所述的药物组合物，其特征在于普卡必利的可药用盐为琥珀酸盐。

4.如权利要求1所述的药物组合物，所述普卡必利的可药用盐以普卡必利计，其特征在于所述药物组合物中己酮可可碱与普卡必利的重量比为1∶0.0001～10。

5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物中己酮可可碱与普卡必利的重量比为1∶0.001～1。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物为口服制剂或外用制剂。

7.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所述口服制剂为片剂、胶囊剂或颗粒剂。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于所述片剂为普通片剂、分散片或双层片。

9.如权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所述外用制剂为栓剂、凝胶剂、乳膏剂或软膏剂。

10.权利要求1所述的药物组合物在制备治疗慢性便秘药物中的用途。

11.如权利要求10所述的用途，其特征在于所述慢性便秘为功能性便秘。