CN103355675B - 一种具有清肺功能组合物及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种具有清肺功能组合物，其由包括以下重量份数的原料制成：雪梨30-50份、橘红12-24份、茅根11-19份、花椰菜提取物7-13份、鱼腥草7-13份、动物血提取物7-13份、罗汉果4-6份、甜菊1.4-2.6份、甘草1.4-2.6份。本发明经过大量的实验研究，通过对该配方药理、药效学等各项指标分析，制得有创造性的配方及生产工艺，具有较强的工业实用性。其配方独特，科学合理，针对性强，并有互辅互乘之功效的特色；经动物实验及体外抑菌实验证实，该组合配方是一种适合广泛人群，清除肺泡污垢回复肺功能，预防呼吸系统疾病的保健饮品。

Description

一种具有清肺功能组合物及制备方法
技术领域
本发明涉及医药及保健品领域，具体为一种具有清热解毒、祛火除湿、祛痰清肺等功能的具有清肺功能组合物及制备方法。 
背景技术
随着现代工业和交通的迅速发展，烟尘和汽车尾气等的排放，已经导致空气污染非常严重。世界卫生组织（WHO）在首个全球空气质量报告中发出警告，指出全球很多城市空气污染已达到严重威胁人类健康的程度。而我国的城市空气污染水平已达到中上水平，PM10的浓度已达WHO建议的五倍以上，而且有好大一部分城市的PM10浓度已远高于此浓度。而接触这些污染源最频繁的是人体的呼吸系统，外界环境中的有机或无机粉尘，包括各种病原微生物、粉尘粒子及有害气体等，均可通过呼吸道和肺部吸入，而引起各种疾病，给人们带来极大的痛苦。 
美国研究人员在人类及小鼠身上的试验显示，十字花科植物中普遍富含的萝卜硫素有助肺部自行清除有害细菌和污染。据其研究报告说，萝卜硫素能激活人体内一种名为NRF2的信号通道。这种信号通道一旦不能发挥作用，人体巨噬细胞就将失去吞噬死亡细胞及外来细菌和污染物的功能。实验结果证实，严重吸烟者、长期重度空气污染环境下工作及慢性阻塞性肺病（慢阻肺）患者的巨噬细胞都失去了这种清理功能。研究人员首先将43名慢阻肺患者的巨噬细胞暴露于两种细菌环境中，其中一种环境下，巨噬细胞不能发挥“清道夫”作用；而另一种环境下，巨噬细胞接受萝卜硫素治疗后，NRF2通道得以激活，巨噬细胞分辨、吞噬细菌的能力也得到修复。研究人员随后培育了两组分别暴露于吸烟环境一周以及六个月的小鼠，它们的肺部细菌均开始增多，与人类慢阻肺患者症状类似。利用萝卜硫素治疗小鼠后，它们肺部的细菌开始逐步得到清理。 
动物血提取物是一种宝贵的营养资源，富含200多种不同功能的蛋白质成分和微量元素。提取物中还富含生物利用率非常高的卟啉物质和卟啉衍生物。现代医学研究发现，铁原卟啉(血晶素)，能抑制病毒的蛋白质启动，从而控制逆转录酶与病毒核糖核酸复制的作用，最终中止病毒分子的进一步复制繁殖，保护机体受病毒侵害。卟啉还可作为机体分子器件之一，发挥卟啉分子能络合捕获体内有害重金属离子和其他有害离子的作用，将这些有害重金属离子排除体外，临床实验也证明铅中毒患者使用含有卟啉和卟啉衍生物制剂能有效降低血铅含量。大量实验证实：卟啉及卟啉衍生物可作为机体分子运输器使用，同时卟啉及卟啉衍生物还有重金属络合作用。利用卟啉的这些生物作用，可以将其用于清除机体重金属中毒和清除机体中多余重金属沉积形成的毒垢。 
另外，动物血中的蛋白质经胃酸分解后，可产生一种消毒及润肠的物质，这种物质能与进入人体内的粉尘和有害金属微粒起生化反应，变成不易被人体消化吸收的废物，然后通过排泄将这些有害物带出体外，堪称人体污物的“清道夫”。 
发明内容
本发明的目的是针对以上所述全球空气污染严重导致人们健康受到损害，以及所述现有技术中具有很好保健治疗效果的启示，应用现代提取技术及传统中医理论，提供一种具有清热解毒、祛火除湿、祛痰清肺、能有效清除肺泡细菌和颗粒污染物的具有清肺功能组合物，来填补目前还没有能有效清除肺部污染、细菌附着的预防药物的空白。 
本发明的另一目的是提供一种具有清肺功能组合物的制备方法。 
为达到上述目的，本发明的技术方案是：一种具有清肺功能组合物，其由包括以下重量份数的原料制成： 
雪梨30-50份、橘红12-24份、茅根11-19份、花椰菜提取物7-13份、鱼腥草7-13份、动物血提取物7-13份、罗汉果4-6份、甜菊1.4-2.6份、甘草1.4-2.6份。 
所述花椰菜提取物的制备方法包括如下步骤： 
（1）取花椰菜50份，用清水洗净，沥干水分； 
（2）干燥：置热风循环烘箱65℃烘烤60分钟。 
（3）粉碎：将干燥后的花椰菜加入粉碎机中粉碎，过60目筛。 
（4）浸提与过滤：将花椰菜粉放入夹层锅内，加5-10重量份的体积比浓度为80%甲醇溶液，加热80-90℃保温60分钟，其间不停地搅拌，之后过200目筛；滤渣再加入2-5重量份的体积比浓度为80%甲醇溶液，加热保温30分钟，过200目筛。 
（5）脱色：合并两次滤液，加0.5-1重量份的活性炭，80℃保温30分钟。用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜及0.2μm滤膜依次进行超滤；滤液经真空离心干燥，备用。 
所述动物血提取物的制备方法包括以下步骤： 
（1）在50重量份新鲜动物血中加5-8重量份柠檬酸钠进行抗凝，加5-10重量份的水，煮沸20-30分钟，使蛋白质凝固，过滤收集血块。 
(2)酶解：破碎血块，调pH至8.0，按每100g蛋白质加胰酶0.2-0.6g加入胰酶，50℃水解4小时，在95℃灭酶5分钟，过滤。 
（3）脱色：滤液，加0.5-1重量份的活性炭，80℃保温30分钟，用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜超滤；滤液，真空离心干燥，备用。 
所述新鲜动物血可以是采集的猪血或者牛血。 
一种具有清肺功能组合物的制备方法，其包括下列步骤： 
（1）、按上述重量份数称取雪梨、橘红、茅根、鱼腥草、罗汉果、甜菊、甘草放入中药提取罐中，加入400-600份制药用纯净水，加热保持微沸1-3小时，用150-300目滤布过滤；药渣再加入400-600份制药用纯净水，加热保持微沸0.5-2小时，用150-300目滤布过滤，合并二次滤液，转入真空浓缩罐，减压浓缩至液体比重为1.18（20℃）。 
（2）、按上述重量份数称取动物血提取物、花椰菜提取物分别溶解在10-20份制药用纯净水中，充分溶解后加入（1）中，混合均匀。 
一种具有清肺功能组合物颗粒冲剂的制备方法，其步骤包括将⑷混合物 倒进搅拌机内，边搅拌边加入25-50份75%的乙醇，然后加入22-54份95%的乙醇，搅拌5min，至湿料颜色均匀一致，粘度适中。将软料在制粒机中制粒，过20目筛网。将制好的湿粒放入50℃烘箱内干燥；然后将干颗粒在制粒机中整粒，过20目筛网，即得成品。 
根据需要，本发明配方可以按照制药工艺制成罐装饮料、瓶装饮料、口服液等剂型。 
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明经过大量的实验研究，通过对该配方药理、药效学等各项指标分析，制得有创造性的配方及生产工艺，具有较强的工业实用性。其配方独特，科学合理，针对性强，并有互辅互乘之功效的特色。经动物实验及体外抑菌实验证实，该组合配方是一种适合广泛人群，清除肺泡污垢回复肺功能，预防呼吸系统疾病的保健饮品。 
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行详细的说明。 
实施例1 
一种具有清肺功能组合物，其由包括以下重量份数的原料制成： 
雪梨1份、橘红13份、茅根12份、花椰菜提取物8份、鱼腥草8份、动物血提取物8份、罗汉果4.5份、甜菊1.5份、甘草1.5份。 
实施例2 
一种具有清肺功能组合物，其由包括以下重量份数的原料制成： 
雪梨49份、橘红23份、茅根18份、花椰菜提取物12份、鱼腥草12份、动物血提取物12份、罗汉果5.5份、甜菊2.5份、甘草2.5份。 
实施例3 
一种具有清肺功能组合物，其由包括以下重量份数的原料制成： 
雪梨35-45份、橘红15-21份、茅根13-17份、花椰菜提取物8.5-11.5份、鱼腥草8.5-11.5份、动物血提取物8.5-11.5份、罗汉果4.5-5.5份、甜菊1.7-2.3份、甘草1.7-2.3份。 
实施例4 
一种具有清肺功能组合物，其由包括以下重量份数的原料制成： 
雪梨36份、橘红16份、茅根14份、花椰菜提取物8.6份、鱼腥草8.6份、动物血提取物8.6份、罗汉果4.6份、甜菊1.8份、甘草1.8份。 
实施例5 
一种具有清肺功能组合物，其由包括以下重量份数的原料制成： 
雪梨44份、橘红20份、茅根16份、花椰菜提取物11.4份、鱼腥草11.4份、动物血提取物11.4份、罗汉果5.4份、甜菊2.2份、甘草2.2份。 
实施例6 
一种具有清肺功能组合物，其由包括以下重量份数的原料制成： 
雪梨40份、橘红18份、茅根15份、花椰菜提取物10份、鱼腥草10份、动物血提取物10份、罗汉果5份、甜菊2份、甘草2份。 
所述花椰菜提取物的制备方法包括如下步骤： 
（1）取花椰菜50份，用清水洗净，沥干水分； 
（2）干燥：置热风循环烘箱65℃烘烤60分钟。 
（3）粉碎：将干燥后的花椰菜加入粉碎机中粉碎，过60目筛。 
（4）浸提与过滤：将花椰菜粉放入夹层锅内，加5重量份的体积比浓度为80%甲醇溶液，加热80℃保温60分钟，其间不停地搅拌，之后过200目筛；滤渣再加入2重量份的体积比浓度为80%甲醇溶液，加热保温30分钟，过200目筛。 
（5）脱色：合并两次滤液，加0.5重量份的活性炭，80℃保温30分钟。用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜及0.2μm滤膜依次进行超滤；滤液经真空离心干燥，备用。 
所述花椰菜提取物的制备方法包括如下步骤： 
（1）取花椰菜50份，用清水洗净，沥干水分； 
（2）干燥：置热风循环烘箱65℃烘烤60分钟。 
（3）粉碎：将干燥后的花椰菜加入粉碎机中粉碎，过60目筛。 
（4）浸提与过滤：将花椰菜粉放入夹层锅内，加10重量份的体积比浓度为80%甲醇溶液，加热90℃保温60分钟，其间不停地搅拌，之后过200目筛；滤渣再加入5重量份的体积比浓度为80%甲醇溶液，加热保温30分 钟，过200目筛。 
（5）脱色：合并两次滤液，加1重量份的活性炭，80℃保温30分钟。用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜及0.2μm滤膜依次进行超滤；滤液经真空离心干燥，备用。 
优选的，所述花椰菜提取物的制备方法包括如下步骤： 
（1）取花椰菜50份，用清水洗净，沥干水分； 
（2）干燥：置热风循环烘箱65℃烘烤60分钟。 
（3）粉碎：将干燥后的花椰菜加入粉碎机中粉碎，过60目筛。 
（4）浸提与过滤：将花椰菜粉放入夹层锅内，加8重量份的体积比浓度为80%甲醇溶液，加热85℃保温60分钟，其间不停地搅拌，之后过200目筛；滤渣再加入3重量份的体积比浓度为80%甲醇溶液，加热保温30分钟，过200目筛。 
（5）脱色：合并两次滤液，加0.8重量份的活性炭，80℃保温30分钟。用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜及0.2μm滤膜依次进行超滤；滤液经真空离心干燥，备用。 
所述动物血提取物的制备方法包括以下步骤： 
（1）在50重量份新鲜动物血中加6重量份柠檬酸钠进行抗凝，加5-10重量份的水，煮沸25分钟，使蛋白质凝固，过滤收集血块。 
(2)酶解：破碎血块，调pH至8.0，按每100g蛋白质加胰酶0.4g加入胰酶，50℃水解4小时，在95℃灭酶5分钟，过滤。 
（3）脱色：滤液，加0.8重量份的活性炭，80℃保温30分钟，用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜超滤；滤液，真空离心干燥，备用。 
所述动物血提取物的制备方法包括以下步骤： 
（1）在50重量份新鲜动物血中加5重量份柠檬酸钠进行抗凝，加5重量份的水，煮沸20分钟，使蛋白质凝固，过滤收集血块； 
(2)酶解：破碎血块，调pH至8.0，按每100g蛋白质加胰酶0.2g加入胰酶，50℃水解4小时，在95℃灭酶5分钟，过滤； 
（3）脱色：滤液，加0.5重量份的活性炭，80℃保温30分钟，用Whatman2 滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜超滤；滤液，真空离心干燥，备用。 
所述动物血提取物的制备方法包括以下步骤： 
（1）在50重量份新鲜动物血中加8重量份柠檬酸钠进行抗凝，加10重量份的水，煮沸30分钟，使蛋白质凝固，过滤收集血块； 
(2)酶解：破碎血块，调pH至8.0，按每100g蛋白质加胰酶0.6g加入胰酶，50℃水解4小时，在95℃灭酶5分钟，过滤； 
（3）脱色：滤液，加1重量份的活性炭，80℃保温30分钟，用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜超滤；滤液，真空离心干燥，备用。 
所述新鲜动物血可以是采集的猪血或者牛血。 
上述具有清肺功能组合物的制备方法，其包括下列步骤： 
（1）、按上述重量份数称取雪梨、橘红、茅根、鱼腥草、罗汉果、甜菊、甘草放入中药提取罐中，加入500份制药用纯净水，加热保持微沸2小时，用250目滤布过滤；药渣再加入500份制药用纯净水，加热保持微沸1.5小时，用250目滤布过滤，合并二次滤液，转入真空浓缩罐，减压浓缩至液体比重为1.18（20℃）。 
（2）、按上述重量份数称取动物血提取物、花椰菜提取物分别溶解在15份制药用纯净水中，充分溶解后加入（2）中，混合均匀。 
上述具有清肺功能组合物的制备方法，其包括下列步骤： 
（1）、按上述重量份数称取雪梨、橘红、茅根、鱼腥草、罗汉果、甜菊、甘草放入中药提取罐中，加入400份制药用纯净水，加热保持微沸1小时，用150目滤布过滤；药渣再加入400份制药用纯净水，加热保持微沸0.5小时，用150目滤布过滤，合并二次滤液，转入真空浓缩罐，减压浓缩至液体比重为1.18（20℃）。 
（2）、按上述重量份数称取动物血提取物、花椰菜提取物分别溶解在10份制药用纯净水中，充分溶解后加入（2）中，混合均匀。 
上述具有清肺功能组合物的制备方法，其包括下列步骤： 
（1）、按上述重量份数称取雪梨、橘红、茅根、鱼腥草、罗汉果、甜菊、甘草放入中药提取罐中，加入600份制药用纯净水，加热保持微沸3小时， 用300目滤布过滤；药渣再加入600份制药用纯净水，加热保持微沸2小时，用300目滤布过滤，合并二次滤液，转入真空浓缩罐，减压浓缩至液体比重为1.18（20℃）。 
（2）、按上述重量份数称取动物血提取物、花椰菜提取物分别溶解在20份制药用纯净水中，充分溶解后加入（2）中，混合均匀。 
一种具有清肺功能组合物颗粒冲剂的制备方法，其步骤包括将⑷混合物倒进搅拌机内，边搅拌边加入25份75%的乙醇，然后加入22份95%的乙醇，搅拌5min，至湿料颜色均匀一致，粘度适中。将软料在制粒机中制粒，过20目筛网。将制好的湿粒放入50℃烘箱内干燥。然后将干颗粒在制粒机中整粒，过20目筛网，即得成品。 
一种具有清肺功能组合物颗粒冲剂的制备方法，其步骤包括将⑷混合物倒进搅拌机内，边搅拌边加入50份75%的乙醇，然后加入54份95%的乙醇，搅拌5min，至湿料颜色均匀一致，粘度适中。将软料在制粒机中制粒，过20目筛网。将制好的湿粒放入50℃烘箱内干燥。然后将干颗粒在制粒机中整粒，过20目筛网，即得成品。 
一种具有清肺功能组合物颗粒冲剂的制备方法，其步骤包括将⑷混合物倒进搅拌机内，边搅拌边加入35份75%的乙醇，然后加入35份95%的乙醇，搅拌5min，至湿料颜色均匀一致，粘度适中。将软料在制粒机中制粒，过20目筛网。将制好的湿粒放入50℃烘箱内干燥。然后将干颗粒在制粒机中整粒，过20目筛网，即得成品。 
根据需要，本发明配方可以按照制药工艺制成罐装饮料、瓶装饮料、口服液等剂型。 
毒理学试验 
一、小鼠急性毒性试验（LD50） 
1、材料： 
1.1、实验材料： 
具有清肺功能组合物为细颗粒冲剂，用蒸馏水配制成各实验组所需浓度。 
1.2、动物： 
由南方医科大学实验动物中心提供的NIH种健康小鼠，体重22±3g，雌雄各半。 
2、方法与结果： 
2.1、试验方法： 
NIH种小白鼠40只，体重22±3g，雌、雄各半，采用Horn`s法，随机将小鼠分为4个剂量组，以0.5ml/10g.b.w的灌胃量24小时内空腹灌胃两次，两次间隔6小时，观察一周，结果见表一。 
表一：具有清肺功能组合物急性毒性试验结果 
2.2、结果： 
受试小鼠经口服不同剂量（LD50>30.00g/kg.b.w）具有清肺功能组合物，均未观察到小鼠有中毒反应，表明具有清肺功能组合物为无毒物质。 
二、小鼠骨髓微核试验： 
1、材料： 
1.1、试验材料： 
样品（具有清肺功能组合物）为细颗粒冲剂，以蒸馏水配制成各试验组实验所需浓度。 
1.2、动物： 
由南方医科大学实验动物中心提供的NIH种健康小鼠，体重22±3g，雌雄各半。 
2、方法与结果： 
2.1、试验方法： 
NIH种小白鼠60只，体重22±3g，雌、雄各半，随机将小鼠分为6组， 实验按“食品安全性毒理学评价程序和方法”进行，分两次灌胃，于第二次灌胃6小时后，处死小鼠取胸骨骨髓材料涂片、染色、镜检，求出各组微核率，结果按泊松分布法统计，结果见表二。 
表二：具有清肺功能组合物小鼠骨髓微核试验结果 
**与阴性对照组比较p<0.01。 
2.2、结果： 
各剂量组的微核率与阴性对照组比较，统计学均无显著性差异，试验结果为阴性，表明具有清肺功能组合物对体细胞无诱变作用。 
三、小鼠精子畸形试验： 
1、材料： 
1.1、试验材料： 
样品（具有清肺功能组合物）为细颗粒冲剂，以蒸馏水配制成各试验组实验所需浓度。 
1.2、动物： 
由南方医科大学实验动物中心提供的NIH种健康小鼠，体重21±3g，雌雄各半。 
2、方法与结果： 
2.1、试验方法： 
NIH种雄性小鼠25只，体重22±3g，随机分成5组，连续灌胃5天（环 磷酰胺阳性组作腹腔注射），灌胃量：0.5ml/10g.b.w，第35天后处死动物，取双侧副睾按常规制片、染色，油镜下检查每组完整精子5000条，求出精子畸形率，按Wilcoson秩和检验法进行统计学处理，结果见表三。 
表三：具有清肺功能组合物对小鼠精子形态的影响 
**与阴性对照组比较p<0.01。 
2.2、结果： 
各剂量组的精子畸形率与阴性对照组比较，在统计学上均无显著性差异意义。样品在剂量高达12.00g/kg.b.w时均未发现对生殖细胞有诱变畸形作用，表明具有清肺功能组合物对生殖细胞无诱变作用。 
四、哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验） 
1、材料与方法： 
1.1、试验菌株： 
经过鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102试验菌株。 
1.2、代谢活化系统： 
多氯联苯（PCB）诱导的大鼠肝匀浆S9液（当代谢活化时加入）。 
1.3、受试物及剂量选择： 
实验前以无菌蒸馏水稀释，沸水浴30分钟后供试验用。通过预试验，以受试物得最小毒性剂量作为最高剂量。 
1.4、试验方法（平板掺入法）： 
在顶层培养基中加入0.1ml试验菌株增菌液，0.1ml受试物溶液和0.5ml S9混合液（当代谢活化时加入），混匀后倒入底层培养基平板上，每一剂量组均为三个皿。根据受试物毒性测定结果，设10000、2000、400、80、16ug/皿五个剂量组，同时设自发回变、溶剂对照、阳性诱变剂对照，在37℃下培养48小时，记录各试验组每皿回变菌落数。如受试物回变菌落数的增加超过溶剂对照2倍以上，并有剂量-关系者，判定为致突变阳性。 
2结果： 
表四：具有清肺功能组合物对鼠伤寒沙门氏菌的回变结果（第一次）（±s） 
表五：具有清肺功能组合物对鼠伤寒沙门氏菌的回变结果（第二次）（±s） 
由表四、表五可见，具有清肺功能组合物对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，在加及不加S9时，10000、2000、400、80、16ug/皿五个剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照菌落数2倍，亦无剂量-反 应关系。无论在加及不加S9混合液时，各剂量组均未引起试验菌株的回复突变菌落数显著增加，表明Ames试验结果阴性，亦说明具有清肺功能组合物无直接或间接的致突变作用。 
非特异性免疫调节实验 
1、实验目的： 
通过动物试验观察具有清肺功能组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响以及对小鼠免疫器官重量的影响。 
2、实验材料： 
2.1、样品： 
具有清肺功能组合物（液体饮料、颗粒冲剂），每日1次，每次1ml（相当于原药0.034g），颗粒冲剂用蒸馏水调配成0.034g/ml。 
2.2、实验动物： 
健康昆明种小鼠（雌雄各半，6-8周龄）80只，体重20±2g，由南方医科大学实验动物中心提供。 
3、对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响： 
3.1、实验动物分组： 
取健康昆明种小鼠（雌雄各半，6-8周龄）40只，体重20±2g，随机分为正常对照组、氢化可的松组、氢化可的松加具有清肺功能组合物组，每组10只。 
3.2、实验方法： 
正常对照组、氢化可的松组，每日灌喂生理盐水1ml。氢化可的松加具有清肺功能组合物组，每日灌喂清清饮1ml（相当于原药0.034g）连续10天。于灌喂的第三天，氢化可的松组、氢化可的松加具有清肺功能组合物组，每天腹腔注销氢化可的松20mg/kg.b.w(0.1ml/次)一次，连续7天。正常对照组、具有清肺功能组合物组每天腹腔注销等体积生理盐水一次，连续7天。于灌药第八天，每只小鼠腹腔注销2%淀粉生理盐水溶液0.5ml，72小时后，每只小鼠腹腔注销5%鸡红细胞悬液1ml，间隔1小时后，用颈椎脱臼法处死小鼠，用剪刀剪开小鼠腹壁皮肤，经腹膜注入Hanks液2ml，轻揉小鼠腹部 1-2分钟后，吸取腹腔洗液1ml，分别滴于两片载玻片上，置于垫有湿纱布搪瓷盒内，37℃温箱内孵育30分钟。用生理盐水漂洗，以除去未粘在玻片上的细胞，然后凉干，用1:1丙酮：甲醇液固定5分钟，用姬姆萨-磷酸缓冲液染色25分钟，用蒸馏水冲洗，晾干，在显微镜下计数100个巨噬细胞及巨噬细胞吞噬的鸡红细胞数。 
3.3、结果： 
按公式计算吞噬百分率和吞噬指数，结果见表。 
表一：具有清肺功能组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
与正常对照组比较*p﹥0.05，各组间两两比较p﹤0.05 
从表一结果可见具有清肺功能组合物不仅能提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数（p﹤0.05），且能使氢化可的松所致的吞噬百分率和吞噬指数降低（p﹥0.05）。提示具有清肺功能组合物能增强正常小鼠和免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，具有非特异性免疫增强作用。 
4、对小鼠免疫器官的影响： 
4.1、实验动物分组： 
取健康昆明种小鼠（雌雄各半，6-8周龄）40只，体重20±2g，随机分成正常对照组、环磷酰胺组、具有清肺功能组合物及环磷酰胺具有清肺功能组合物，每组10只。 
4.2、实验方法： 
正常对照组、环磷酰胺组每日给生理盐水灌喂1ml，连续10天。具有清肺功能组合物及环磷酰胺具有清肺功能组合物每日给具有清肺功能组合物灌喂1ml（相当于原药0.034g），连续10天。环磷酰胺组和环磷酰胺具有清肺功能组合物组，于第一次给样前2小时腹腔注射环磷酰胺60mg/kg，正常对照组及具有清肺功能组合物组腹腔注射生理盐水0.5ml，连续5天。最后一次给样24小时后称体重，然后处死小鼠，取胸腺和脾脏，吸去血液，去除脂肪、系膜，用电子天平称取其湿重，计算胸腺、脾脏指数。 
4.3、结果： 
表二：具有清肺功能组合物对小鼠胸腺、脾脏指数的影响
*与正常对照组比较p﹥0.05，各组间两两比较p﹤0.01。 
**与具有清肺功能组合物组比较p﹥0.05。 
从表一结果可见具有清肺功能组合物可增加正常小鼠胸腺重量，并能对抗环磷酰胺引起的胸腺重量减轻（p﹤0.01），具有清肺功能组合物对正常小鼠脾脏重量无明显影响（p﹥0.05），但可使环磷酰胺所引起的脾脏减轻恢复到正常水平（p﹥0.05），说明具有清肺功能组合物对环磷酰胺所引起的脾脏、胸腺重量减轻有保护作用。 
抑菌试验 
1、试验目的： 
通过对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎双球菌、肺炎杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等六种常见细菌进行抗菌试验，从而观察具有清肺功能 组合物对该六种细菌生长的影响。 
2、实验材料： 
2.1、样品配制： 
具有清肺功能组合物颗粒冲剂20g溶解在100ml蒸馏水中，调pH到7.6，高压灭菌，压力升至103kPa时，维持20分钟。 
2.2、培养基配制： 
2.2.1、普通肉汤培养基：牛肉浸膏5g、蛋白胨4g、氯化钠2.5g加约300ml蒸馏水，加热溶解后调pH到7.6，最后定溶到500ml，滤纸过滤，高压灭菌，压力升至103kPa时，维持20分钟。 
2.2.2、10%血清肉汤培养基：取10ml家兔血清在无菌下加到100ml的普通肉汤培养基中。 
2.2.3、固体培养基：上述肉汤培养基每100ml加入2g琼脂粉，高压灭菌后，分管，每管5ml（血清肉汤固体培养基按10%加入家兔血清）。 
2.3、测试菌种： 
由南方医科大学提供标准菌株。 
3、实验方法： 
3.1、测试菌株培养及稀释：将乙型溶血性链球菌及肺炎双球菌接种在血清肉汤固体培养基斜面上，37℃培养20小时，取菌苔接种在10%血清肉汤培养基中，37℃培养20小时后，按1:10稀释备用。金黄色葡萄球菌、肺炎杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌接种在普通肉汤固体培养基斜面上，37℃培养20小时，再接种在普通肉汤培养基中，37℃培养20小时，用普通肉汤培养基按1:1000倍稀释备用。 
3.2、待测样品制备：灭菌后的样品（具有清肺功能组合物颗粒冲剂）用肉汤培养基作等倍稀释1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256、1:512、1:1024。 
3.3、接种及培养：将等倍稀释的样品各取1ml于试管中（编号1-10号），分别加入0.05ml测试菌液。另外取两支试管（11、12号）各取1:1024倍稀释的样品液1ml，其中一支（11号）不加菌液，另一支（12号）加入0.05ml 测试菌液。置37℃孵箱培养24-48小时，观察结果。以11号管不长菌，12号管长菌确定实验有效。测定管以不长菌的样品最高稀释倍数为样品的抗菌效价。结果见表1、表2。 
表1：具有清肺功能组合物体外抑菌试验结果： 
注：（）表示细菌不长，（+）表示细菌生长 
表2：具有清肺功能组合物体外抑菌效价和最低有效浓度： 
菌种 效价 最低有效浓度（含原药mg/ml）
金黄色葡萄球菌 512 0.78
乙型溶血性链球菌 64 6.26
肺炎双球菌 32 12.50
肺炎杆菌 128 3.12
大肠杆菌 256 1.56
绿脓杆菌 16 25
四、结果： 
从表1、表2可见，具有清肺功能组合物对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、肺炎双球菌、肺炎杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等六种常见细菌均有不同程度的抗菌作用，其中对金黄色葡萄球菌的抗菌作用最强，对肺炎杆菌、大肠杆菌也有较好的抑菌作用，说明具有清肺功能组合物在体外具有抗菌、抑菌作用。 
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例，应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明构思在现有技术基础上通过逻辑分析、推理或者根据有限的实验可以得到的技术方案，均应该在由本权利要求书所确定 的保护范围之中。 

Claims (8)

1.一种具有清肺功能组合物，其特征在于，其由以下重量份数的原料制成：
雪梨30-50份、橘红12-24份、茅根11-19份、花椰菜提取物7-13份、鱼腥草7-13份、动物血提取物7-13份、罗汉果4-6份、甜菊1.4-2.6份、甘草1.4-2.6份；
制备方法包括下列步骤：
(1)、按上述重量份数称取雪梨、橘红、茅根、鱼腥草、罗汉果、甜菊、甘草放入中药提取罐中，加入400-600份制药用纯净水，加热保持微沸1-3小时，用150-300目滤布过滤；药渣再加入400-600份制药用纯净水，加热保持微沸0.5-2小时，用150-300目滤布过滤，合并二次滤液，转入真空浓缩罐，减压浓缩至液体在20℃的比重为1.18；
(2)、按上述重量份数称取动物血提取物、花椰菜提取物分别溶解在10-20份制药用纯净水中，充分溶解后加入(1)中，混合均匀。
2.按照权利要求1所述的一种具有清肺功能组合物，其特征在于，其由以下重量份数的原料制成：
雪梨35-45份、橘红15-21份、茅根13-17份、花椰菜提取物8.5-11.5份、鱼腥草8.5-11.5份、动物血提取物8.5-11.5份、罗汉果4.5-5.5份、甜菊1.7-2.3份、甘草1.7-2.3份。
3.按照权利要求2所述的一种具有清肺功能组合物，其特征在于，其由以下重量份数的原料制成：
雪梨40份、橘红18份、茅根15份、花椰菜提取物10份、鱼腥草10份、动物血提取物10份、罗汉果5份、甜菊2份、甘草2份。
4.按照权利要求1、2或3所述的一种具有清肺功能组合物，其特征在于，所述花椰菜提取物的制备方法包括如下步骤：
(1)取花椰菜50份，用清水洗净，沥干水分；
(2)干燥：置热风循环烘箱65℃烘烤60分钟；
(3)粉碎：将干燥后的花椰菜加入粉碎机中粉碎，过60目筛；
(4)浸提与过滤：将花椰菜粉放入夹层锅内，加5-10重量份的体积比浓度为80％甲醇溶液，加热80-90℃保温60分钟，其间不停地搅拌，之后过200目筛；滤渣再加入2-5重量份的体积比浓度为80％甲醇溶液，加热保温30分钟，过200目筛；
(5)脱色：合并两次滤液，加0.5-1重量份的活性炭，80℃保温30分钟。用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜及0.2μm滤膜依次进行超滤；滤液经真空离心干燥。
5.按照权利要求1、2或3所述的一种具有清肺功能组合物，其特征在于，所述动物血提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)在50重量份新鲜动物血中加5-8重量份柠檬酸钠进行抗凝，加5-10重量份的水，煮沸20-30分钟，使蛋白质凝固，过滤收集血块；
(2)酶解：破碎血块，调pH至8.0，按每100g蛋白质加胰酶0.2-0.6g加入胰酶，50℃水解4小时，在95℃灭酶5分钟，过滤；
(3)脱色：滤液，加0.5-1重量份的活性炭，80℃保温30分钟，用Whatman2滤纸过滤，滤液再用0.45μm滤膜超滤；滤液，真空离心干燥。
6.按照权利要求5所述的一种具有清肺功能组合物，其特征在于，所述新鲜动物血是采集的猪血或者牛血。
7.按照权利要求1、2或3所述的具有清肺功能组合物的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：
(1)、按上述重量份数称取雪梨、橘红、茅根、鱼腥草、罗汉果、甜菊、甘草放入中药提取罐中，加入400-600份制药用纯净水，加热保持微沸1-3小时，用150-300目滤布过滤；药渣再加入400-600份制药用纯净水，加热保持微沸0.5-2小时，用150-300目滤布过滤，合并二次滤液，转入真空浓缩罐，减压浓缩至液体在20℃的比重为1.18；
(2)、按上述重量份数称取动物血提取物、花椰菜提取物分别溶解在10-20份制药用纯净水中，充分溶解后加入(1)中，混合均匀。
8.按照权利要求7所述的具有清肺功能组合物的制备方法，其特征在于，步骤包括将⑵混合物倒进搅拌机内，边搅拌边加入25-50份75％的乙醇，然后加入22-54份95％的乙醇，搅拌5min；将软料在制粒机中制粒，过20目筛网；将制好的湿粒放入50℃烘箱内干燥，然后将干颗粒在制粒机中整粒，过20目筛网。
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