CN103349705A

CN103349705A - 轮叶马先蒿活性部位在制备抗氧化药物、化妆品和保健品中的应用

Info

Publication number: CN103349705A
Application number: CN2013103101508A
Authority: CN
Inventors: 王琪; 周春燕; 黎梅
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2013-07-23
Filing date: 2013-07-23
Publication date: 2013-10-16

Abstract

本发明涉及植物提取物在具有抗氧化作用的药物、化妆品和保健品领域中的应用，公开了一种轮叶马先蒿活性部位在具有抗氧化作用药物、化妆品和保健品中的应用。这种活性部位的制备方法为取轮叶马先蒿根干燥粉末，以乙醇提取，滤液合并，减压回收溶剂，得到粗提物；粗提物经石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，萃取物蒸干，得到活性部位。这种活性部位，是一种天然的植物抗氧化剂，对人体无副作用，在抗氧化领域有应用潜能。

Description

轮叶马先蒿活性部位在制备抗氧化药物、化妆品和保健品中的应用

技术领域

本发明涉及植物提取物、药品、保健品和化妆品领域，具体为轮叶马先蒿活性部位在具有抗氧化药物、化妆品和保健品领域中的应用。

背景技术

抗氧化剂(Antioxidants)是阻止氧气不良影响的物质。它是一类能帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害的一类物质。人体的抗氧化剂有自身合成的，也有由食物供给的。所有水果和蔬果中都含有极高的天然抗氧化剂，如维生素A、C、E、P、多酚等。竹叶中提取的竹叶黄酮就是一种优质的天然抗氧化剂，茶叶中也含有天然抗氧化剂，如多酚等。研究表明水果和蔬菜中的天然抗氧化剂具有保护效果。例如维生素E和β-胡萝卜素可以保护细胞膜；维生素C可以排出细胞内的自由基，等等。天然抗氧化剂可以帮助人类预防心脏病和癌症等多种疾病，并能增进脑力，延缓衰老。我国台湾学者对195种中草药的抗氧化性能进行系统筛选和评价，发现几乎一半的中草药表现出抗氧化作用，其中22种中草药乙醇提取物抗氧化能力强于等重量生育酚。

以天然抗氧化剂取代合成抗氧化剂是药品、化妆品和保健品行业的发展趋势，天然植物是一种极有潜力的天然抗氧化剂资源，从天然植物中寻找新的清除体内自由基的抗氧化剂也将是现代医药、保健行业的发展方向，因为生物体内或食物中的脂类的氧化产物可能是许多疾病的诱因，而从天然药物中分离出来的许多抗氧化成分都有治疗作用。从天然植物中筛选和开发抗氧化作用确切、安全无毒的新品种或分离提取其有效抗氧化成分，已是当务之急。天然植物抗氧化作用有很大可挖掘的潜能，加之运用现代科学技术，结合现代中医药学理论，尽早创立中西医结合的抗氧化理论体系，定将有益于天然植物抗氧化剂的开发和应用。另外，天然抗氧化剂尚需在有效成分的抗氧化机理、协同作用、构效关系和分子设计等方面开展深入研究，为中草药开发抗氧化剂的应用奠定理论基础，同时要加强天然植物原料提取、分离纯化有效成分工艺研究，以尽快实现天然抗氧化剂的产业化。

轮叶马先蒿(Pedicularis verticilata L.)俗名土人参，为玄参科马先蒿属植物，马先蒿属(Pedicularis L.)植物药用种类繁多，历史悠久。早在《神农本草经》和《本草纲目》等中药典籍中，就有关于该属植物的药用价值的记载。轮叶马先蒿以根人药，性温味甘，微苦，大补元气，生津安神，强心。多用于治疗气血虚损、疲劳多汗、虚脱衰竭、血压降低等症。

近年来对马先蒿属植物的化学成分和生物活性研究中发现，该属植物含有环烯醚萜苷、苯丙素苷、木脂素苷、生物碱、黄酮等多类化合物，其中环烯醚萜苷、苯丙素苷类化合物是该属的特征性化合物，表现出抗肿瘤、抗氧化、DNA修复、提高机体免疫力、保肝、降压利尿等各种生理活性。苏保宁(1995，兰州大学，中国学位论文全文数据库)，在其硕士论文中报道了从轮叶马先蒿中分离鉴定了16个单体化合物，这些化合物大多属于新木脂素苷、苯丙素苷和单萜环烯醚苷。

综合现有文献资料，未发现轮叶马先蒿及其所含成分具有抗氧化作用的文献和专利报道。

发明内容

本发明旨在提供一种轮叶马先蒿活性部位的用途，将该轮叶马先蒿活性部位应用于制备具有抗氧化效果的药物、化妆品和保健品。

本发明所要解决的技术问题是在于寻找开发高效且对人体无副作用或副作用小的天然植物抗氧化剂。本发明提供了一种在抗氧化领域有应用潜能的轮叶马先蒿活性部位。

一种轮叶马先蒿活性部位在制备具有抗氧化作用的药物、化妆品和保健品领域中的应用。

所述的轮叶马先蒿活性部位的提取方法，步骤包括：

(1)取干燥的轮叶马先蒿根粉末，加入乙醇溶液冷浸后提取2～5次，取滤液；

提取方法为常温(10～30℃)下用体积浓度为30％～95％乙醇溶液(优选为60％～95％)冷浸、超声提取10～60分钟；每次提取时，乙醇溶液与轮叶马先蒿粉末的用量比为5～15ml/g；

(2)合并滤液，依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各萃取物蒸干，即得。

本发明的技术方案为，取轮叶马先蒿根，干燥、粉碎成粗粉，取干燥粉末，以乙醇提取，滤液合并，减压回收溶剂，得到轮叶马先蒿根粗提物；轮叶马先蒿根粗提物依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，其中乙酸乙酯和正丁醇部位具有良好的抗氧化作用。

通过上述方法得到的轮叶马先蒿活性部位，是一种天然的植物抗氧化剂，对人体无副作用，在抗氧化领域有应用潜能。这种轮叶马先蒿活性部位可用于制备具有抗氧化效果的药物、化妆品和保健品。

具体实施方式

实施例1

轮叶马先蒿根干燥粉末20g，室温下(10～30℃)以体积浓度为30％乙醇200ml冷浸、超声提取2次，每次10min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至干，取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由基能力和弹性蛋白酶抑制作用，以便与后续制得的轮叶马先蒿活性部位的活性作比较。

结果：轮叶马先蒿根粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为10％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为1％。

实施例2

轮叶马先蒿根干燥粉末20g，室温下以体积浓度为60％乙醇200ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至干，取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由基能力，以便与后续制得的轮叶马先蒿根活性部位的活性作比较。

结果：轮叶马先蒿根粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为13％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为5％。

实施例3

轮叶马先蒿根干燥粉末20g，室温下以体积浓度为70％乙醇200ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至干，取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由基能力，以便与后续制得的轮叶马先蒿根活性部位的活性作比较。

结果：轮叶马先蒿根粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为24％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为11％。

实施例4

轮叶马先蒿根干燥粉末20g，室温下以体积浓度为75％乙醇200ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至干，取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由基能力，以便与后续制得的轮叶马先蒿根活性部位的活性作比较。

结果：轮叶马先蒿根粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为27％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为12％。

实施例5

轮叶马先蒿根干燥粉末20g，室温下(10～30℃)以体积浓度为95％乙醇200ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至干，取提取物适量，配制成0.5mg/ml溶液备用，测定其清除DPPH自由基能力，以便与后续制得的轮叶马先蒿根活性部位的活性作比较。

结果：轮叶马先蒿根粗提物在50μg/ml浓度时DPPH自由基清除率为40％，在1mg/ml浓度时对弹性蛋白酶抑制率为27％。

实施例6活性部位富集

取轮叶马先蒿根干燥粉末500g，室温下(10～30℃)以体积浓度为95％乙醇5000ml冷浸、超声提取2次，每次30min(500W)，取滤液合并，减压回收溶剂至无醇味；依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别收集各萃取液、蒸干，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位，并配制成不同浓度的溶液备用。

实施例7清除DPPH自由基能力测试

在药物、化妆品和保健品领域，通常抗氧化性能的优劣是用清除DPPH自由基能力测试来表征的，清除DPPH自由基能力测试原理如下：

1，1-二苯基-2-三硝基苯肼[1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical2，2-Diphenyl-1-(2，4，6-trinitrophenyl)hydrazyl，DPPH]是一种稳定的氮中心有机自由基。DPPH法于1958年被提出，广泛用于地量测定生物试样、分类物质和食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析，来检测自由基清除情况，从而评价样品的抗氧化能力。其能力用清除率来表示，清除率越大，则表明其抗氧化能力越强。

试验方法：

1)将不同稀释度的待测样品溶液2ml加入试管中；

2)加入2ml76μmol/L DPPH乙醇溶液，混匀；

3)室温下避光在黑暗处反应30min；

4)在525nm处测定吸光度Abs；每个浓度重复三次测试以保证实验结果的准确性，最后取平均值作为拟合数据。

清除率I(％)＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％

式中：

T0：2ml水或DMSO加2ml DPPH溶液的吸光度；

T：2ml样品液加2ml DPPH溶液的吸光度；

C：2ml样品液加2ml95％乙醇的吸光度；

C0：2ml水或DMSO加2ml95％乙醇的吸光度；

按照上面公式计算清除率，清除率越大抗氧化能力越强。结果如表1。

表1轮叶马先蒿各部位清除DPPH自由基活性测试结果

实施例6所得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中，在0.05mg/ml时，对DPPH自由基清除率分别为10％，89％和88％，由此可见，乙酸乙酯和正丁醇部位均具有很强的自由基清除作用。

实施例8弹性蛋白酶抑制作用

测定方法按照文献(Am.J.Pharmacol.Toxicol.，2009，4，127-129)方法进行，测定步骤为：在96孔板中加入10uL样品溶液和130uL含有1.015mM反应底物Succ-Ala-Ala-Ala-p-硝基酰替苯胺的0.1M Tris-Cl缓冲溶液(PH8.0)，在25℃下温育5分钟，加入15uL弹性蛋白酶溶液(0.5U/ml)，继续在25℃下温育30min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度A410。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液同样测定吸光度。结果见表2。

表2轮叶马先蒿各部位弹性蛋白酶抑制作用

实施例6所得石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位中，在1.0mg/ml时，对弹性蛋白酶抑制率分别为2％，52％和47％，由此可见，乙酸乙酯和正丁醇部位均具有较强的弹性蛋白酶抑制作用，其中，以乙酸乙酯抑制作用最强。

Claims

1.轮叶马先蒿活性部位在制备具有抗氧化作用药物、化妆品和保健品中的应用。

2.根据权利要求1所述轮叶马先蒿活性部位的应用，其特征在于，所述的轮叶马先蒿活性部位的制备方法包括以下步骤：

(2)合并滤液，去除乙醇后用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，萃取物蒸干，即得。

3.根据权利要求2所述轮叶马先蒿活性部位的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇溶液的体积浓度为30％～95％、超声提取10～60分钟。

4.根据权利要求2或3所述轮叶马先蒿活性部位的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇溶液的体积浓度为60％～95％。

5.根据权利要求2任一项所述轮叶马先蒿活性部位的应用，其特征在于，步骤(1)中，每次提取时，乙醇溶液与轮叶马先蒿根粉末的用量比为5～15ml/g。

6.根据权利要求2所述轮叶马先蒿根活性部位，其特征在于，步骤(2)中，所述部位为乙酸乙酯部位和正丁醇部位。