CN107198705A - 一种人面果提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种人面果提取物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种人面果提取物及其制备方法和应用。通过不同的溶剂处理人面果提取液，再分别通过大孔吸附树脂以及聚酰胺技术对不同组份的提取液进行纯化处理，从而得到含量高的人面果总黄酮成分、人面果总萜类以及人面果总口山酮类成分。本发明还提供了所述制备方法制备得到的人面果提取物及其在制备药物中的应用。本发明所述的制备方法，工艺简单，效果显著，适合于工艺化生产要求；所用溶剂毒性小，均为正常生产中所涉及溶剂，对人体安全性好，而且易于回收再利用，经济效益高；而且可以同时制备得到三种含量高的人面果提取物成分，效率极高，对于人面果的开发和应用打下了坚实的基础。

Description

一种人面果提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于中药领域，尤其涉及一种人面果提取物及其制备方法和应用。
背景技术
人面子(学名：Dracontomelon duperreanum Pierre)，别名：人面树，银莲果，为漆树科。人面子属常绿大乔木植物，高达20余米。喜阳光充足及高温多湿环境，适深厚肥沃的酸性土生长。该种树冠宽广浓绿，甚为美观，是“四旁”和庭园绿化的优良树种，也适合作行道树。成熟的鲜果呈黄色，可以生食，酸甜可口，有健胃、生津止渴和促进食欲之功能，制作高级饮料、高级晶品和保健食品的上乘原料。人面果还是药用植物，其果实、根皮、叶均可入药，有清热解毒，消肿止痛，活血散淤之效，常用于跌打损历，风湿关节痛等症。
现有研究表明人面果富含黄酮类、三萜类和口山酮类(xanthone)等多种抗氧化及抗糖尿病活性成分。然而相关的研究资料还很少，分离纯化的技术也大都依赖于反相硅胶柱层析以及半制备或制备液相等特别昂贵的设备来完成，不仅造成无法负担的成本，而且所处理的样品量极小，仅适合于研究水平，无法进行实际的生产开发应用。
发明内容
发明目的：为克服现有技术中的问题，本发明提供了一种人面果提取物及其制备方法和应用，通过不同的溶剂处理人面果提取液，再分别通过大孔吸附树脂以及聚酰胺技术对不同组份的提取液进行纯化处理，从而得到含量高的人面果总黄酮成分、人面果总萜类以及人面果总口山酮类成分。
技术方案：一种人面果提取物的制备方法，包括：
(1)将人面果置于醇中进行提取，提取结束后，过滤提取液，滤液浓缩后得人面果醇提物；
(2)用水溶解所述的人面果醇提物，然后用乙酸乙酯进行萃取，将乙酸乙酯层浓缩至浸膏，将水层用水饱和正丁醇进行萃取，正丁醇层浓缩至浸膏；
(3)取乙酸乙酯层的浸膏，溶解后用型号为AB-8、HP-20、HPD-826或LX-2000的大孔吸附树脂进行吸附，然后依次用水、15～30％乙醇以及40～60％乙醇进行洗脱，收集40～60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得到人面果总萜类粉；
取正丁醇层的浸膏，溶解后用型号为AB-8、HP-20、HPD-826或LX-2000的大孔吸附树脂进行吸附，然后依次用10～30％乙醇、40～60％乙醇及70～80％乙醇进行洗脱，收集40～60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得人面果总黄酮类粉；收集70～80％乙醇部分洗脱液，浓缩至稀醇味，加入到装有聚酰胺的层析柱内，依次用10-30％及40-60％乙醇进行洗脱，得到40-60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得到人面果总口山酮类粉。
步骤(1)中，所述的醇为乙醇，浓度为90～100％，优选为90～95％。
所述提取的温度为60～80℃，提取的次数为2～4次，每次提取的时间为1～2h。优选的，所述提取的温度为70～80℃，提取的次数为2～3次。
所述提取的液料比为5～10:1，优选为8～10：1。
步骤(2)中，用水溶解所述的人面果醇提物时，人面果醇提物与水的质量体积比为1:30～50。
所述乙酸乙酯萃取的次数为2～4次，每次用量为0.1～1倍量体积比。优选的，所述乙酸乙酯萃取的次数为2～3次，每次用量为0.2～0.3倍量体积比。
所述水饱和正丁醇萃取的次数为2～4次，每次用量为0.1～1倍量体积比。优选的，所述水饱和正丁醇萃取的次数为2～3次，每次用量为0.2～0.3倍量体积比。
步骤(3)中，乙酸乙酯层的浸膏溶解时，可加入20～50倍量水溶解，再补加少量乙醇以使溶液澄清。
用树脂对所述乙酸乙酯层吸附后，较好的依次用水、20～30％乙醇以及50～60％乙醇进行洗脱，收集50～60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得到人面果总萜类粗粉。
正丁醇层的浸膏溶解时，可入20～50倍体积量5～20％乙醇使其解。
用树脂对正丁醇层吸附后，较好的用20～30％乙醇、50～60％乙醇及70～80％乙醇进行洗脱，收集50～60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得人面果总黄酮类粗粉。
所述聚酰胺的细度为100-200目。
取正丁醇浸膏用大孔吸附树脂吸附后洗脱所得70～80％乙醇部分洗脱液，过层析柱后，较好的用20～30％及50～60％乙醇进行洗脱，得到50～60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得到人面果总口山酮类粗粉。
本发明还提供了所述制备方法制备得到的人面果提取物。所述的人面果提取物共三种，分别为人面果总萜类粉(总萜含量为75～85％)、人面果总黄酮类粉(总黄酮含量为80～90％)、人面果总口山酮类粉(总口山酮类含量为90～95％)。
本发明还提供了所述人面果提取物在制备药物中的应用。
现有技术研究表明，人面果中的萜类、黄酮类、口山酮类物质均具有较好的抗菌抗病毒、抗氧化作用以及降糖作用，可用于心脑血管疾病以及糖尿病等相关疾病的防治，也可用于化妆品用于美白祛斑，因此，可利用本发明所述的人面果提取物制备相关药物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
①本发明所述的制备方法，工艺简单，效果显著，适合于工艺化生产要求。
②本发明所述的制备方法，所用溶剂毒性小，均为正常生产中所涉及溶剂，对人体安全性好，而且易于回收再利用，经济效益高。
③本发明所述的制备方法，提取后，通过各不同萃取溶剂将各主要部分按特定顺序分别萃取出来，再通过不同填料以层析方式进行分别洗脱和纯化，可以同时制备得到三种含量高的人面果提取物成分，效率极高，对于人面果的开发和应用打下了坚实的基础。本发明实施后，药材利用率大大提高，其相关产品上市后会因其确切的疗效、可控的质量、低位的价格为消费者带来福音。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例中总萜、总黄酮、总口山酮含量的测定方法：
测定方法：紫外分光光度法；
标准曲线：分别以齐墩果酸和芦丁为标准品，在波长550nm和512nm处检测吸收度值，以浓度为纵坐标、以吸收度为横坐标做标准曲线，依次来测定供试品中相应的总萜、总黄酮、总口山酮含量。
总萜、总黄酮、总口山酮的鉴定确认采用常规方法，具体的，各部分所制备的样品主要经紫外吸收光谱及薄层色谱显色以及参考相关文献资料进行综合鉴定：其中人面果总帖类部分在215-230nm波长范围内有最大吸收带，总黄酮类、总口山酮部分在245-365nm波长范围内有两个主要吸收带，加入诊断试剂后导致光谱发生改变；薄层色谱法在特定展开剂及显色剂体系下，总萜、总黄酮、总口山酮样品TLC得到的Rf值与标准品相对应。
实施例1：
称取人面果10kg，以95％乙醇80L为提取溶剂，70℃回流提取3次，每次1h，合并提取液，过滤，减压浓缩，得到人面果醇提物。取上述人面果醇提物，按1:50的质量体积比，加入饮用水使溶解，用乙酸乙酯充分萃取3次，每次乙酸乙酯用量为0.2倍量体积比，合并乙酸乙酯层并浓缩至浸膏；水层加入水饱和正丁醇萃取3次，每次水饱和正丁醇用量为0.2倍量体积比，合并正丁醇层并浓缩至浸膏。取上述乙酸乙酯部分浸膏，加入20倍质量饮用水低温(室温)使溶解，补加少量乙醇以使溶液澄清，放冷(室温)后逐渐加入到处理好的装有型号为AB-8大孔吸附树脂的树脂柱内，待吸附完全后开始洗脱，依次用水、20％乙醇以及50％乙醇开始洗脱，收集50％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总萜类粗粉，以齐墩果酸为标准品，测得总萜含量(质量分数)为83.6％。
取所得正丁醇部分浸膏，加入20倍体积量5％乙醇使溶解，逐渐加入到处理好的装有型号为HPD-826大孔吸附树脂的树脂柱内，待吸附完全后开始洗脱，依次用20％乙醇、50％乙醇及70％乙醇开始洗脱，收集50％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总黄酮类粗粉，以芦丁为标准品，测得总黄酮含量(质量分数)为86.2％。
取正丁醇浸膏用大孔吸附树脂吸附后所洗脱得到的70％乙醇部分洗脱液，浓缩至稀醇味，放冷后加入到装有聚酰胺(100-200目)的层析柱内，依次用20％及50％乙醇进行洗脱，得到50％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总口山酮类粗粉，以芦丁为标准品，测得总口山酮类含量(质量分数)为90.2％。
实施例2
称取人面果10kg，以90％乙醇100L为提取溶剂，70℃回流提取3次，每次1h，合并提取液，过滤，减压浓缩，得到人面果醇提物。取上述人面果醇提物，按1:50的质量体积比，加入饮用水使溶解，用乙酸乙酯充分萃取3次，每次乙酸乙酯用量为0.2倍量体积比，合并乙酸乙酯层并浓缩至浸膏；水层加入水饱和正丁醇萃取3次，每次水饱和正丁醇用量为0.2倍量体积比，合并正丁醇层并浓缩至浸膏。取上述乙酸乙酯部分浸膏，加入20倍质量饮用水室温下使溶解，补加少量乙醇以使溶液澄清，放冷至室温后逐渐加入到处理好的装有型号为HP-20大孔吸附树脂的树脂柱内，待吸附完全后开始洗脱，依次用水、15％乙醇以及60％乙醇开始洗脱，收集60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总萜类粗粉，以齐墩果酸为标准品，测得总萜含量为78.2％。
取所得正丁醇部分浸膏，加入20倍体积量5％乙醇使溶解，逐渐加入到处理好的装有型号为HPD-20大孔吸附树脂的树脂柱内，待吸附完全后开始洗脱，依次用20％乙醇、60％乙醇及80％乙醇开始洗脱，收集60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总黄酮类粗粉，以芦丁为标准品，测得总黄酮含量为84.1％。
取正丁醇浸膏用大孔吸附树脂吸附后所洗脱得到的80％乙醇部分洗脱液，浓缩至稀醇味，放冷后加入到装有聚酰胺(100-200目)的层析柱内，依次用20％及50％乙醇进行洗脱，得到50％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总口山酮类粗粉，以芦丁为标准品，测得总口山酮类含量为92.4％。
实施例3
称取人面果10kg，以90％乙醇100L为提取溶剂，80℃回流提取3次，每次1h，合并提取液，过滤，减压浓缩，得到人面果醇提物。取上述人面果醇提物，按1:50的质量体积比，加入饮用水使溶解，用乙酸乙酯充分萃取3次，每次乙酸乙酯用量为0.3倍量体积比，合并乙酸乙酯层并浓缩至浸膏；水层加入水饱和正丁醇萃取3次，每次水饱和正丁醇用量为0.3倍量体积比，合并正丁醇层并浓缩至浸膏。取上述乙酸乙酯部分浸膏，加入20倍质量饮用水室温下使溶解，补加少量乙醇以使溶液澄清，放冷至室温后逐渐加入到处理好的装有型号为HP-826大孔吸附树脂的树脂柱内，待吸附完全后开始洗脱，依次用水、30％乙醇以及50％乙醇开始洗脱，收集50％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总萜类粗粉，以齐墩果酸为标准品，测得总萜含量为83.3％。
取所得正丁醇部分浸膏，加入20倍体积量5％乙醇使溶解，逐渐加入到处理好的装有型号为HPD-20大孔吸附树脂的树脂柱内，待吸附完全后开始洗脱，依次用10％乙醇、60％乙醇及70％乙醇开始洗脱，收集60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总黄酮类粗粉，以芦丁为标准品，测得总黄酮含量为82.7％。
取正丁醇浸膏用大孔吸附树脂吸附后所洗脱得到的70％乙醇部分洗脱液，浓缩至稀醇味，放冷后加入到装有聚酰胺(100-200目)的层析柱内，依次用20％及60％乙醇进行洗脱，得到60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，即得到淡黄色人面果总口山酮类粗粉，以芦丁为标准品，测得总口山酮类含量为91.1％。

Claims (9)

1.一种人面果提取物的制备方法，其特征在于，包括：
(1)将人面果置于醇中进行提取，提取结束后，过滤提取液，滤液浓缩后得人面果醇提物；
(2)用水溶解所述的人面果醇提物，然后用乙酸乙酯进行萃取，将乙酸乙酯层浓缩至浸膏，将水层用水饱和正丁醇进行萃取，正丁醇层浓缩至浸膏；
(3)取乙酸乙酯层的浸膏，溶解后用型号为AB-8、HP-20、HPD-826或LX-2000的大孔吸附树脂进行吸附，然后依次用水、15～30％乙醇以及40～60％乙醇进行洗脱，收集40～60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得到人面果总萜类粉；
取正丁醇层的浸膏，溶解后用型号为AB-8、HP-20、HPD-826或LX-2000的大孔吸附树脂进行吸附，然后依次用10～30％乙醇、40～60％乙醇及70～80％乙醇进行洗脱，收集40～60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得人面果总黄酮类粉；收集70～80％乙醇部分洗脱液，浓缩至稀醇味，加入到装有聚酰胺的层析柱内，依次用10-30％及40-60％乙醇进行洗脱，得到40-60％乙醇部分洗脱液，浓缩至干，粉碎，得到人面果总口山酮类粉。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的醇为乙醇，浓度为90～100％。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取的温度为60～80℃，提取的次数为2～4次，每次提取的时间为1～2h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述提取的液料比为5～10:1。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述乙酸乙酯萃取的次数为2～4次，每次用量为0.1～1倍量体积比。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述水饱和正丁醇萃取的次数为2～4次，每次用量为0.1～1倍量体积比。
7.一种根据权利要求1-6任一项所述制备方法制备得到的人面果提取物。
8.根据权利要求7所述的人面果提取物，其特征在于，人面果总萜类粉中总萜含量为75～85％、人面果总黄酮类粉中总黄酮含量为80～90％、人面果总口山酮类粉中总口山酮类含量为90～95％。
9.根据权利要求7所述的人面果提取物在制备药物中的应用。
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