CN103349210A - 稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，包括：将糙米或/和米糠经脱脂处理得到脱脂米粉；将脱脂米粉与氯化钠水溶液混合，混匀后经振荡提取、分离收集上清液，即为总盐溶性蛋白溶液；向总盐溶性蛋白溶液加入乙醇，混合均匀，经静置、第二分离后保留沉淀部分，即为蛋白沉淀；将蛋白沉淀经后处理除杂除盐分以及干燥后即得。本发明方法制备成本低，制备过程无污染，具有良好的经济效益和环境效益，易于工业化大规模生产。本发明制备的分子量为20～22kD的ɑ-淀粉酶抑制剂和分子量为26kD～28kD的ɑ-球蛋白，可用作制备保健食品或普通市售食品的添加剂。

Description

稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法

技术领域

本发明涉及稻米蛋白的制备领域，具体涉及一种稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法。

背景技术

稻米蛋白主要可分为清蛋白（Albumin）、球蛋白（Globulin）、醇溶蛋白（Prolamin）和谷蛋白（Glutelin），其中，球蛋白能溶于稀盐溶液又称盐溶蛋白，是稻米蛋白中的主要生理活性蛋白。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)图谱显示，稻米盐溶蛋白可分为分子量大小不同的两个主要区带，其中，26kDa～28kDa蛋白区带，包括了主要的球蛋白即ɑ-球蛋白；而另一个10kDa～18kDa蛋白区带，是可溶性最大的球蛋白组分，主要包括了部分醇溶蛋白和过敏蛋白。Tong等研究发现，稻米盐溶蛋白中的ɑ-球蛋白组分经口服喂养，能显著降低小鼠血清中的胆固醇、磷脂和甘油的水平，改善高胆固醇饮食和ApoE^-/-（载脂蛋白E基因敲除）小鼠的动脉粥样硬化病变(Tong L T，Fujimoto Y，Shimizu N，et al．Riceɑ-globulin decreasesserum cholesterol concentrations in rats fed a hypercholesterolemic diet andameliorates atherosclerotic lesions in apolipoprotein E-deficient mice[J]．FoodChemistry，2012，132(1)：194–200)。而稻米中的20kD盐溶性蛋白组分被发现是具有枯草杆菌蛋白酶/ɑ-淀粉酶抑制剂活性的双功能蛋白（Othsubo K I&Richardson M，The amino acid sequence of a20kDa bifunctionalsubtilisin/ɑ-amylase inhibitor from brain of rice(Oryza sativa L.)seeds.FEBS1992,309(1):68-72)。由于几乎所有具有枯草杆菌蛋白酶/ɑ-淀粉酶抑制剂活性的双功能蛋白能强烈抑制细菌枯草杆菌蛋白酶家族的丝氨酸蛋白酶，而对哺乳动物胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活性没有抑制作用，这些蛋白在植物中可能用于防御微生物病害(YAMASAKI T,DEGUCHI M,FUJIMOTO T,et al.Rice bifunctionalɑ-amylase/subtilisin inhibitor:cloning and characterization ofthe recombinant inhibitor expressed in Escherichia coli.Biosci.Biotechnol.Biochem,2006:70(5):1200-1209）。已有研究证实植物的ɑ-淀粉酶抑制剂可作为淀粉阻滞剂而延缓人体对食物淀粉的消化，降低血糖指数，能使正常人和糖尿病患者餐后血浆血糖峰值和胰岛素水平显著延缓并降低，具有显著的降血糖治疗效果和减肥效果（LAYER P,Rizza R,Zinsmeister A R,et al.Effect ofa Purified Amylase Inhibitor on Carbohydrate Tolerance in Normal Subjects andPatients With Diabetes Mellitus.Mayo Clinic Proceedings,1986,61(6):442-447;Barrett M L and Udani J K.A proprietary alpha-amylase inhibitor from whitebean(Phaseous vulgaris):A review of clinical studies on weight loss and glycemiccontrol.NUTRITIONAL JOURNAL,2011,10:24)。稻米20kD盐溶性蛋白能抑制动物（红色面粉甲虫）的ɑ-淀粉酶活性（Othsubo K I&Richardson M，Theamino acid sequence of a20kDa bifunctional subtilisin/ɑ-amylase inhibitor frombrain of rice(Oryza sativa L.)seeds.FEBS1992,309(1):68-72)，可能通过抑制体内α-淀粉酶的活性从而降低或延缓食物中淀粉的消化速率，从而具有降血糖和降低淀粉食物血糖指数的保健功效。

营养学家认为种子的胚内含有丰富的营养和生理活性物质。目前稻米蛋白的制备工艺大多数使用碱法和酶处理工艺，成本高，酸碱处理容易产生环境污染，而且经过酶处理的蛋白有并非稻米的天然组分，破坏了其原有的生理功效。

发明内容

本发明提供了一种稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，采用氯化钠、乙醇和碳酸氢铵3种食品级原料，能够从糙米或米糠中提取稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物，低成本，无污染。

一种稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，包括以下步骤：

1）将糙米或/和米糠经脱脂处理得到脱脂米粉；

2）将步骤1）中的脱脂米粉与氯化钠水溶液混合，混匀后经振荡提取、第一分离收集上清液，即为总盐溶性蛋白溶液；

3）向步骤2）中的总盐溶性蛋白溶液加入乙醇，混合均匀，经静置、第二分离后保留沉淀部分，即为蛋白沉淀；

4）将步骤3）中的蛋白沉淀经后处理除杂除盐分以及干燥后得到稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物。

本发明中，采用氯化钠水溶液对米总盐溶性蛋白提取，得到总盐溶性蛋白溶液，采用乙醇对总盐溶性蛋白溶液中稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物进行沉淀，从而经过后处理后得到稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物，为两者的混合物。

步骤1）中，脱脂米粉可采用市售产品也可自行制备，作为优选，所述的脱脂处理包括：将糙米或/和米糠粉碎后过30～80目（进一步优选40～50目）筛得到米粉原料，向米粉原料中加入丙酮脱脂，经振荡、分离、干燥后得到脱脂米粉。经过上述粒径大小的筛选并经丙酮脱脂得到的脱脂米粉，有利于从脱脂米粉提取稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物。进一步优选，所述的米粉原料的质量与丙酮的体积比为1：2～4g/mL，即米粉原料与丙酮的固液比1：2～4g/mL，进一步优选，为1：3g/mL，采用上述质量的丙酮，有利于后续稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的提取。

步骤2）中，采用氯化钠水溶液对脱脂米粉总盐溶性蛋白提取，作为优选，所述的氯化钠水溶液的浓度为0.5mol/L～1.5mol/L，蛋白质在水中溶解度取决于蛋白质分子上离子基团周围的水分子数目，即取决于蛋白质的水合程度。采用不同浓度的中性盐溶液可以控制稻米蛋白的水合程度，也就是控制稻米蛋白质的溶解度。当水中加入少量盐时，盐离子与水分子对蛋白质分子的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大，此即盐溶现象；但盐浓度增加一定程度时，水的活度降低，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质相互聚集而沉淀析出，这就是盐析。本发明选用的中性盐为氯化钠，水溶液中合适的氯化钠浓度是影响稻米总盐溶性蛋白提取率的关键，0.5mol/L～1.5mol/L浓度的氯化钠水溶液有利于盐溶性蛋白提取，稻米总盐溶性蛋白得率较高。

所述的脱脂米粉的质量(g)与氯化钠水溶液的体积(mL)比为1：5～12g/mL，即脱脂米粉与氯化钠水溶液的固液比1：5～12g/mL，固液比是指脱脂米粉的质量(g)和氯化钠水溶液的体积(mL)的比值。当液固比较小的情况下，少量的NaCl溶液不利于蛋白的充分溶解；过高的液固比（高于1:12）不利于后续的浓缩、干燥，并使能耗增加。固液比1：5～12g/mL下，稻米总盐溶性蛋白得率较高。

作为优选，所述的振荡提取的条件为：在20～40℃振荡提取2～4小时，该振荡温度可提高蛋白溶解速率，并且提取2～4小时，使得稻米总盐溶性蛋白得率较高。

作为优选，所述的第一分离的条件为：在5000～8000rpm离心10～30min，第一分离的目的是将溶解于氯化钠水溶液的总盐溶性蛋白提取液与不溶性糙米粉残渣分开，离心力与离心时间会影响残渣沉淀的效果，离心转速过低或时间过短，残渣沉淀不完全，导致提取液浑浊不利于后期分离，离心转速过高时间过长，使能耗增加并导致离心产热引起蛋白变性甚至淀粉糊化，在5000～8000rpm离心10～30min能保证最佳分离效果。

步骤3）中，采用乙醇对稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物进行沉淀，作为优选，所述的总盐溶性蛋白溶液与乙醇的体积比为1：1～3。乙醇引起蛋白质沉淀的原因：一方面是由于乙醇加入水中使溶剂介电常数降低，增加了相反电荷的吸引力；另一方面是因为乙醇是强亲水试剂，争夺蛋白质分子表面的水化水，破坏蛋白质胶体分子表面的水化层而使分子聚集沉淀，选用乙醇进行蛋白的沉淀能保证分离蛋白的食用和应用安全性。一般来说乙醇的浓度多少，与能沉淀的蛋白的分子量有关。当总盐溶性蛋白溶液与乙醇的体积比为1：1～3时，稻米总盐溶性蛋白提取液中20kDa以上的蛋白沉淀越来越完全，而具有生物活性的13～16kD低分子量盐溶蛋白亚组分保留在溶液上清中。总盐溶性蛋白溶液与乙醇的体积比1：1～3的范围，能保证不同糙米或米糠原料中稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物沉淀完全，保证提取效果。

作为优选，所述的静置的条件为：1～10℃静置0.5～1.5h，使得ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物形成沉淀，有利于后续的过程中除去。温度降低使稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的溶解性降低更容易沉淀，同时利于保持目标蛋白的生物活性，在1～10℃静置0.5～1.5h，能保证稻米中20kDa以上的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物有效沉淀。

作为优选，所述的第二分离的条件为：在7000～9000rpm离心10～30min，第二分离的目的是将上述乙醇沉淀的20kDa以上的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物与溶解在上清中的稻米低分子量生物活性蛋白分开，离心力与离心时间会影响沉淀的效果，离心转速过低或时间过短，沉淀与上清不能完全分开，降低目标蛋白纯度。离心转速过高时间过长，使能耗增加，工艺延长，在5000～8000rpm离心10～30min能使蛋白沉淀与上清液更好的分离，保证稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的提取纯度。

步骤4）中，所述的后处理除杂除盐分以及干燥包括：水洗除杂、碳酸氢铵水溶液洗涤去杂、透析除去盐分以及冷冻干燥。所述的水洗除杂包括：向蛋白沉淀加入蒸馏水溶解振荡10～30min，然后在7000～9000rpm离心10～30min，去上清，得到水洗除杂后的蛋白沉淀。所述的碳酸氢铵水溶液洗涤去杂包括：向水洗除杂后的蛋白沉淀加入0.01～0.1mol/L的碳酸氢铵水溶液，溶解振荡10～30min，然后在7000～9000rpm离心10～30min，得到碳酸氢铵水溶液洗涤去杂后的蛋白沉淀。碳酸氢铵水溶液洗涤去杂后的蛋白沉淀经透析除去盐分以及冷冻干燥，即得到稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物。

稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物为干粉状，颜色呈白色或黄白色，无味，经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)分析检测蛋白分子量范围主要表现为20kD～22kD的稻米ɑ-淀粉酶抑制剂和26kD～28kD的稻米ɑ-球蛋白，可以用作制备保健食品或作为普通市售食品添加剂。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，采用氯化钠和乙醇两种食品级原料，采用氯化钠水溶液对米总盐溶性蛋白提取，得到总盐溶性蛋白溶液，采用乙醇对总盐溶性蛋白溶液中稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物进行沉淀，从而经过后处理后得到稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物。本发明方法制备成本低，制备过程无污染，具有良好的经济效益和环境效益，易于工业化大规模生产。

本发明制备的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物，稻米ɑ-淀粉酶抑制剂的分子量为20kD～22kD，稻米ɑ-球蛋白的分子量为26kD～28kD，可以用作制备保健食品或作为普通市售食品添加剂，稻米高分子量ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白产品保持生物活性，具有降胆固醇和降血糖的功效。

具体实施方式

通过以下具体实施例对本发明做进一步的具体说明，但应该理解本发明并不受这些内容所限制。

实施例中未特别说明的百分数均为质量百分数。

实施例1

1）采用市售的北大荒绿色食品配送有限公司的北大荒绿野有机糙米为原料，粉碎后过50目筛，得到米粉原料，选用丙酮对米粉原料进行脱脂，米粉原料（g)与丙酮(mL)固液比1:3g/mL，振荡2h后6000rpm离心20min收集沉淀，置于通风橱自然风干即可得到脱脂米粉；

2）米总盐溶性蛋白提取：称取脱脂米粉15g加入1.0mol/L NaCl水溶液120mL，充分混匀后，40℃振荡提取2h，6000rpm离心20min收集上清液，重复步骤2）一次，合并上清液，得到总盐溶性蛋白溶液；

3）乙醇沉淀：向步骤2）中的总盐溶性蛋白溶液加入无水乙醇，总盐溶性蛋白溶液与无水乙醇的体积比为1：2，同时用磁力搅拌器搅拌混匀，放置4℃条件下静置沉淀1h，8000rpm离心20min，保留沉淀部分，即为蛋白沉淀；

4）向步骤3）中的蛋白沉淀加入30mL蒸馏水溶解振荡15min，然后在8000rpm离心20min，去上清，向水洗除杂后的蛋白沉淀加入0.05mol/L的碳酸氢铵水溶液30mL，溶解振荡15min，然后在8000rpm离心20min，碳酸氢铵水溶液洗涤去杂后的蛋白沉淀装入透析袋对蒸馏水透析1小时，除去盐分，经冷冻干燥获得稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物，为干粉状，颜色呈黄白色，稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的得率为1mg/g脱脂米粉。

实施例2

1）采用市售的江西省天玉油脂有限公司生产的精细脱脂米糠粉为原料，作为脱脂米粉；

2）米总盐溶性蛋白提取：称取脱脂米粉15g加入1.0mol/L NaCl水溶液150mL，充分混匀后，30℃振荡提取2h，6000rpm离心20min收集上清液，重复步骤2）一次，合并上清液，得到总盐溶性蛋白溶液；

3）乙醇沉淀：向步骤2）中的总盐溶性蛋白溶液加入无水乙醇，总盐溶性蛋白溶液与无水乙醇的体积比为1：2，同时用磁力搅拌器搅拌混匀，放置4℃条件下静置沉淀1h，8000rpm离心20min，保留沉淀部分，即为蛋白沉淀；

4）向步骤3）中的蛋白沉淀加入30mL蒸馏水溶解振荡15min，然后在8000rpm离心20min，去上清，向水洗除杂后的蛋白沉淀加入0.05mol/L的碳酸氢铵水溶液30mL，溶解振荡15min，然后在8000rpm离心20min，碳酸氢铵水溶液洗涤去杂后的蛋白沉淀装入透析袋对蒸馏水透析1小时，除去盐分，经冷冻干燥获得稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物，为干粉状，颜色呈黄白色，稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的得率为1.6mg/g脱脂米粉。

实施例3

1）采用市售的北大荒绿色食品配送有限公司的北大荒绿野有机糙米为原料，选用丙酮对米粉原料进行脱脂，米粉原料（g)与丙酮(mL)固液比1:2g/mL，振荡2h后6000rpm离心20min收集沉淀，置于通风橱自然风干即可得到脱脂米粉；

2）米总盐溶性蛋白提取：称取脱脂米粉15g加入1.5mol/L NaCl水溶液75mL，充分混匀后，20℃振荡提取4h，5000rpm离心30min收集上清液，重复步骤2）一次，合并上清液，得到总盐溶性蛋白溶液；

3）乙醇沉淀：向步骤2）中的总盐溶性蛋白溶液加入无水乙醇，总盐溶性蛋白溶液与无水乙醇的体积比为1：1，同时用磁力搅拌器搅拌混匀，放置1℃条件下静置沉淀1.5h，7000rpm离心30min，保留沉淀部分，即为蛋白沉淀；

4）向步骤3）中的蛋白沉淀加入30mL蒸馏水溶解振荡30min，然后在7000rpm离心30min，去上清，向水洗除杂后的蛋白沉淀加入0.01mol/L的碳酸氢铵水溶液30mL，溶解振荡30min，然后在7000rpm离心30min，碳酸氢铵水溶液洗涤去杂后的蛋白沉淀装入透析袋对蒸馏水透析1小时，除去盐分，经冷冻干燥获得稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物，为干粉状，颜色呈黄白色，稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的得率为0.7mg/g脱脂米粉。

实施例4

1）采用市售的北大荒绿色食品配送有限公司的北大荒绿野有机糙米为原料，粉碎后过40目筛，得到米粉原料，选用丙酮对米粉原料进行脱脂，米粉原料（g)与丙酮(mL)固液比1:4g/mL，振荡2h后6000rpm离心20min收集沉淀，置于通风橱自然风干即可得到脱脂米粉；

2）米总盐溶性蛋白提取：称取脱脂米粉15g加入0.5mol/L NaCl水溶液180mL，充分混匀后，40℃振荡提取2h，7000rpm离心10min收集上清液，重复步骤2）一次，合并上清液，得到总盐溶性蛋白溶液；

3）乙醇沉淀：向步骤2）中的总盐溶性蛋白溶液加入无水乙醇，总盐溶性蛋白溶液与无水乙醇的体积比为1：3，同时用磁力搅拌器搅拌混匀，放置10℃条件下静置沉淀0.5h，9000rpm离心10min，保留沉淀部分，即为蛋白沉淀；

4）向步骤3）中的蛋白沉淀加入30mL蒸馏水溶解振荡10min，然后在9000rpm离心10min，去上清，向水洗除杂后的蛋白沉淀加入0.1mol/L的碳酸氢铵水溶液30mL，溶解振荡10min，然后在9000rpm离心10min，碳酸氢铵水溶液洗涤去杂后的蛋白沉淀装入透析袋对蒸馏水透析1小时，除去盐分，经冷冻干燥获得稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物，为干粉状，颜色呈黄白色，稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的得率为0.6mg/g脱脂米粉。

稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的分子量确定

采用蛋白质分子量测定的常规方法即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)法，操作参照江绍玫等的文献（江绍玫，朱速松，刘世家，等．水稻谷蛋白突变体的筛选及遗传分析．遗传学报，2003，30(7)：641-645）所列的方法。

SDS-PAGE凝胶浓度：分离胶15%，浓缩胶5%；

样品制备：取按照本发明实施例制备的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物溶入蒸馏水制成蛋白含量为0.5μg/μl的溶液，取100μL蛋白溶液（蛋白含量为50μg）与25μL蛋白上样混合液[由5μL质量浓度为5%的β-巯基乙醇水溶液、5μL质量浓度为0.5%的溴酚蓝水溶液、5μL质量浓度为10%的SDS水溶液、5μL质量浓度为50%的甘油水溶液以及5μL浓度为250mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH6.8）混合得到]混匀，煮沸5min后15000rpm离心15min，取20μL上清加样于凝胶上进行电泳，同时将蛋白质标准分子量溶液、实施例中步骤2）中的总盐溶性蛋白溶液以及步骤3）蛋白沉淀分别加样电泳，每个样品孔中加入的蛋白量为50μg。

电泳条件：恒压150V，电泳1.5～2小时；

凝胶染色和脱色：电泳后的凝胶用考马斯亮蓝R-250染色液（称取0.6g考马斯亮蓝R-250溶解于含25%无水乙醇、8%乙酸的脱色液中配成染色液，经滤纸过滤后使用）染色4小时，再用脱色液（25%无水乙醇、8%乙酸）脱色过夜，并观察凝胶电泳图。

根据其凝胶电泳图可知，通过与蛋白质标准分子量对比，可到本发明实施例1～4得到的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白的分子量，其中，ɑ-淀粉酶抑制剂的分子量为21kD，ɑ-球蛋白的分子量为28kD，其中，在步骤2）中的总盐溶性蛋白溶液中，其除稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物外，还有低于16kDa分子量和高于30kDa的其他成分，步骤3）生物活性蛋白溶液，主要就是分子量为21kDɑ-淀粉酶抑制剂和分子量为28kD的ɑ-球蛋白。

Claims (10)

1.一种稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将糙米或/和米糠经脱脂处理得到脱脂米粉；

2）将步骤1）中的脱脂米粉与氯化钠水溶液混合，混匀后经振荡提取、第一分离收集上清液，即为总盐溶性蛋白溶液；

3）向步骤2）中的总盐溶性蛋白溶液加入乙醇，混合均匀，经静置、第二分离后保留沉淀部分，即为蛋白沉淀；

4）将步骤3）中的蛋白沉淀经后处理除杂除盐分以及干燥后得到稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物。

2.根据权利要求1所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中，所述的氯化钠水溶液的浓度为0.5mol/L～1.5mol/L。

3.根据权利要求1所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中，所述的脱脂米粉的质量与氯化钠水溶液的体积比为1：5～12g/mL。

4.根据权利要求1所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中，所述的振荡提取的条件为：在20～40℃振荡提取2～4小时。

5.根据权利要求1所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，步骤2）中，所述的第一分离的条件为：在5000～8000rpm离心10～30min。

6.根据权利要求1所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，步骤3）中，所述的总盐溶性蛋白溶液与乙醇的体积比为1：1～3。

7.根据权利要求1所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，步骤3）中，所述的静置的条件为：1～10℃静置0.5～1.5h。

8.根据权利要求1所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，步骤3）中，所述的第二分离的条件为：在7000～9000rpm离心10～30min。

9.根据权利要求1所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，步骤4）中，所述的后处理除杂除盐分以及干燥包括：水洗除杂、碳酸氢铵水溶液洗涤去杂、透析除去盐分以及冷冻干燥。

10.根据权利要求9所述的稻米的ɑ-淀粉酶抑制剂和ɑ-球蛋白混合物的制备方法，其特征在于，所述的水洗除杂包括：向蛋白沉淀加入蒸馏水溶解振荡10～30min，然后在7000～9000rpm离心10～30min，去上清，得到水洗除杂后的蛋白沉淀；

所述的碳酸氢铵水溶液洗涤去杂包括：向水洗除杂后的蛋白沉淀加入0.01～0.1mol/L的碳酸氢铵水溶液，溶解振荡10～30min，然后在7000～9000rpm离心10～30min，得到碳酸氢铵水溶液洗涤去杂后的蛋白沉淀。