CN103347583A

CN103347583A - 固定过滤器组件

Info

Publication number: CN103347583A
Application number: CN2011800503931A
Authority: CN
Inventors: C·D·泰勒; K·D·多尔蒂; S·洪乔
Original assignee: McLane Research Laboratories Inc
Current assignee: McLane Research Laboratories Inc
Priority date: 2010-10-19
Filing date: 2011-10-18
Publication date: 2013-10-09
Anticipated expiration: 2031-10-18
Also published as: US20120091067A1; JP6027010B2; HK1190109A1; JP2014501603A; CN103347583B; US9552545B2; US20130206668A1; US8426218B2; WO2012054513A1

Abstract

一种用来在流体环境中收集样本的过滤器组件，组件利用层流对流流动，以引起防腐剂/固定剂和滤液穿过过滤器的流动。将过滤器周围的大体凹形的静滞空间冲洗成没有防腐剂，并且防腐剂和滤液的密度差使较密流体收集在储器中，并且保存收集样品。

Description

固定过滤器组件

对于相关申请的相互参考

本申请要求在2011年10月19日提交的美国专利申请No.12/907,330的权益，该专利申请的内容以参引方式并入本文。

技术领域

本公开涉及在流体环境中的样本收集和处置，更具体地说，涉及在水域生态系统中对微生物和具体样本进行的收集和固定。更广义地说，本公开涉及在任何水环境中的取样，如在储器和/或任何天然或人造储水构造中、以及关于可能与水质有关的任何行业。

背景技术

在流体环境中的样本收集和处置无疑是各种报告的主题。海洋研究典型地需要关于海洋食物链的连续信息，该海洋食物链一般可以包括（1）水生细菌和原生生物、（2）浮游植物、（3）浮游动物以及（4）鱼以及较高形式、甲壳类动物、爬行类动物、海洋哺乳动物、等等，其中，按上升顺序，每一种可以成为下一种的食物来源。可以在海洋中测量细菌、原生生物、浮游植物及浮游动物，并且研究它们对于渔业和环境健康的相关性以及影响。还会需要关于它们在大陆架水域、深海及内陆水域中的丰度和竖向与水平分布的信息。准确地、连续地并且以宽广的空间覆盖水平获得数据，仍然是现存的问题。

可以注意到，美国海岸警卫队按如下方式可操作地定义相关生物种类（从在船舶压载水中的入侵物种的角度）：浮游动物，最小尺寸≥50μm的有机物；浮游植物/原生动物，最小尺寸＜50μm且≥10μm的有机物；细菌，最小尺寸＜10μm的有机物（这个操作组也将包括多种较小的光合浮游植物和蓝绿细菌）。

相应地，对于使样本采集自动化的方法和设备存在着需要，这些样本用于关键分析，这些关键分析包括计数、种系发育本性，分子和代谢作用以及食物链的各种微生物、浮游植物及浮游动物成分的的活力。更具体地说，方法可以包括自动现场速率研究，这些自动现场速率研究涉及示踪孵育和样本保存。

发明内容

在第一示范实施例中，本公开涉及一种用于滤液流动的过滤器组件，该过滤器组件包括：用于具有密度D₁的第一流体滤液的流动的进口与出口，以及包含具有密度D₂的第二流体的储器；用于过滤介质的内部空间；以及将储器与内部空间隔开的储器板，其中，储器板包括至少两个开口，所述至少两个开口与储器和内部空间连通。由于第一流体和第二流体的密度差，在储器中的第二流体能够通过对流而与在内部空间中的第一流体交换。

在第二示范实施例中，本公开涉及一种用来从具有第一密度D₁的滤液中收集和固定微生物的方法，该方法包括提供过滤器组件的步骤，过滤器组件包括进口与出口以及储器，该储器包含具有密度D₂的第二流体。过滤介质定位在过滤器组件内、在过滤器组件的进口和出口之间，其中，过滤介质定位成离开储器并且在内部空间内，该内部空间由储器板与储器隔开。储器板包括用于滤液的流动的一个开口和与储器和内部空间连通的至少两个开口。然后，可以使滤液通过过滤器组件，并且在过滤介质上收集微生物和/或颗粒材料，且在如下条件下使微生物和/或颗粒材料暴露于第二流体：（1）当滤液具有的密度D₁大于D₂时，滤液流出内部空间进入储器，并且第二流体替换在内部空间中的滤液；或者（2）当滤液具有的密度D₁小于D₂时，第二流体从储器流入内部空间，并且第二流体替换在内部空间中的滤液。在后一种情形下，过滤器组件可以被颠倒，以促进第二流体流动进入内部空间中以替换滤液。

附图说明

由结合附图进行的优选实施例的如下详细描述，可以更好地理解本发明的特征、操作及优点，在附图中：

图1是本公开的过滤器组件的前视图；

图2是图1的过滤器组件的立体图；

图3是图1的过滤器组件的分解图；

图3A是图1的过滤器组件的储器板的一部分的放大图；

图4是图2的过滤器组件沿线4-4取得的横截面图；

图5A-5D是示意图，表明在本公开的过滤器组件的过滤过程中的四个阶段；而

图6是在过滤介质上向下看到的层流对流过程的时间推移说明，其中，染料用来代替防腐剂（见下面），并且具有小于被过滤的介质的密度。

具体实施方式

由如下详细说明，本发明的另外其它目的和优点对于本领域的技术人员而言将更为显明，其中，如下详细说明示出和描述本发明的优选实施例。如将认识到的那样，本发明能够具有其它和不同实施例，并且本发明的若干细节能够在各个方面修改，而不脱离本发明。相应地，说明内容在本质上是例示性的，而不是限制性的。

前沿（cutting edge）微生物生态学正越来越强调样本的收集，这些样本用于随后的宏基因组（DNA、核糖体RNA[rRNA]；常驻微生物生物区的定量种系分型）、宏转基因组（信使RNA[mRNA]；那些代谢基因正在起作用的评估）及宏蛋白质组（产生的蛋白质基因产物的身份和数值）分析，这些分析用来描述微生物在它们的环境中的身份和作用。这里的方法的一个潜在好处是，这种信息现在可以收集，而不需要在实验室中培养生物体，这种培养在目前仅能捕获在环境中存在的活微生物的不到1%。颗粒材料的收集因此将会是紧要的（essential），并且因为目前在现场以一定时间周期收集样本，所以也实现了用于这种材料的化学保存的方法，这种方法现与宏基因组、宏转基因组及宏蛋白质组分析相容。

本公开的过滤器组件因此可以具有过滤样本的收集和保存的广阔潜在用途，这些过滤样本由机器人时序水取样器所收集，用于随后的分子分析。本公开的方法和设备适用于任何水取样条件，例如深海取样，并且也可以与自动时序仪表相容。另外，这里的取样适用于收集生物和/或有机和/或无机颗粒成分，例如悬浮沉积物、碎屑、海雪材料、粪便材料、等等。由于细菌将是这样的收集材料的成分，所以重要的是，按防止细菌分解的方式保存这样的收集物。如果不防止细菌分解，则会改变所研究的无生命材料的组成和物理性质。

本公开的过滤器组件在图1中的前视图中示出。组件10是独立的在线过滤器，该过滤器除了将颗粒物样本收集到过滤介质的表面上之外，还能够借助于无需运动零件的物理过程化学地保存所收集的颗粒样本。“无需运动零件”这种表述可以理解为是指，过滤器组件的各个元件都无需为了提供过滤和保存而运动。代之以，过滤器组件利用层流对流流动，该层流对流流动由在使用者选择的化学防腐剂（固定剂）——该化学防腐剂（固定剂）在取样期间可以保持在过滤器的储器中——与水介质（样本要从该水介质中滤出）之间的密度差所驱动。

这里所使用的“层流对流流动”或“层流对流”指流体的比较平滑的重力流动，该比较平滑的重力流动由各流体密度的相对差引起，因而可以或称为重力对流流动。在公共空间中在不同密度的两种流体上的重力可以使较高密度流体下沉，并且使较低密度流体相对于较高密度流体移动到顶置（over-riding）位置。

这里所使用的“防腐剂”或“固定剂”是指用来将新鲜采集的生物样品的结构保存在一种状态下的材料，该状态最接近地代表原始鲜活状态的结构和组成。这些材料可以与组织大分子发生化学反应，形成分子间和分子内交联，这些分子间和分子内交联增大分子的结构稳定性。它们也可以使自溶酶失去活性，并且可以使组织更耐受来自自溶（autolysis）和微生物活性的酶降解。这些防腐剂通常包括至少两种成分，一种或更多种活性成分（固定剂）和载体，该载体常常是缓冲系统。载体可以包括这样的材料，例如代谢毒物（叠氮化物、氰化物）、二价阳离子（Ca、Mg）、渗透剂（DMSO）、表面活性剂（洗涤剂-例如TWEEN）、电解质或非电解质，加入这些材料以调节渗透性。

依据被研究的主题，防腐剂可以例如是醇基的（甲醇、乙醇、丙醇、丁醇）、醛基的（甲醛、戊二醛）、酸基的（乙酸、稀硫酸）、或汞基的（氯化汞）。另一种优选类型——可以从Ambion，Austin，Texas获得的

溶液，是水性无毒组织储存试剂，该水性无毒组织储存试剂快速地渗透到组织中，以稳定和保护细胞DNA和RNA。

溶液消除了立即处理组织样本或在液氮中冷冻样本以便以后处理的需要。组织块可被收获，并且被浸没在

溶液中以便储存，而不损害在以后RNA／DNA隔离之后所获得的RNA/DNA的质量或数量。

过滤器组件10是没有运动零件的独立模块，该独立模块还可以包括进口34和出口36，进口34和出口36可以流体连接到适当样本分配阀和流动源（泵、吸管，未示出）上。防腐剂对于过滤样本的主动输送发生在过滤器组件10内，使过程的应用非常简单并且可被适配以用于各种过滤用途。

图2是图1的过滤器组件的立体图。

图3是图1和2的过滤器组件的分解图，自下而上，示出了环形储器20、密封储器板22、过滤器支承板26以及顶置的样本进口板30，该环形储器20可以包含使用者选择的化学防腐剂，该过滤器支承板26支承过滤介质28，该样本进口板30用来封闭组件10。“储器板”这种表述可以理解为任何结构——该结构用来将过滤介质与储器隔离，并且也允许流体流过其中的开口（一个或更多个），以在过滤已经发生之后，将防腐剂供给到过滤介质，如下文中将更充分地解释的那样。

已命名的各元件可以借助于螺纹帽盖32而被接合在一起，该螺纹帽盖32可以拧入到位于储器20的外侧上的外螺纹中。第二O形圈42可以安装在储器上，以将它与帽盖32密封。第三O型圈44可以位于中央支柱60的顶部上，并且可以将储器20与储器板22的底部密封，该中央支柱60位于储器的中央。储器板22还可以包括出口29，该出口用于让滤液从静滞空间（dead space）50中流出。第四O型圈46可以安装在样本进口板30的下侧上，以将组件10进一步密封。应该注意，也设有对各元件加以机械接合的其它装置（如夹持装置、螺栓连接装置、等等）。

除了过滤介质28之外的已命名元件可以由比较惰性的塑料（对于正被过滤的介质，例如海水、淡水或盐水溶液）模制，例如由聚（氯乙烯）（PVC）模制。其它热塑性塑料可以包括聚烯烃，例如聚乙烯、聚丙烯、等等。过滤介质可以包括各种过滤材料的任一种，这些过滤材料包括但不限于例如玻璃纤维、醋酸纤维素纤维或聚碳酸酯膜，该聚碳酸酯膜已经被照射和蚀刻，以提供多个比较细的孔。一种形式的聚碳酸酯薄膜以商标名Nuclepore^TM销售，并且可以从Whatman,Ltd获得，该聚碳酸酯薄膜包括限定的孔尺寸。纤维过滤器的厚度可以是约0.007-0.010英寸，而聚碳酸酯膜的厚度可以是约0.002-0.003英寸。玻璃纤维过滤器的标称孔径可以是约0.8μm，对于醋酸纤维素过滤器是0.22-0.45μm，而对于聚碳酸酯膜是约0.1-0.45μm。

过滤器组件10可以优选具有用于取样的标准尺寸，例如22mm直径，47或50mm直径及147mm直径。相应地，过滤器直径可以在15mm至200mm的范围中。

图4是图2的过滤器组件沿线4-4取得的横截面图。特别值得注意的分别是，样本进口板30和储器板22的内表面31、23，该内表面31、23每个可以优选地拥有圆锥锥度，以将流体流动平滑地引导通过过滤器组件10，并且将过滤介质28拘限在小的背靠背锥形内部静滞空间50内。这样的锥度可在1-15°、优选地5-10°的范围中，以使静滞空间的体积最小化。圆锥锥度这种表述可以理解为，按恒定比率从相对较大直径变化到相对较小直径的表面特征。也可以认识到，内表面31和23可以是凹形的，这意味着它们还可以从相对较大的直径变化至相对较小的直径，但不是按恒定比率。圆锥锥度和/或凹形的表面特征的使用可以提供流体（例如这里描述的防腐剂流体）的相对改进的层流流动。

同样，在过滤器组件10的环形储器体积V和锥形内部静滞空间50之间的流体连通可以经在储器板22中的多个较小直径的孔24而发生，这些较小直径的孔24与过滤器支承板流体连通。就是说，在过滤器组件10的储器体积V和锥形内部50之间的流体连通可以经在储器板22中的多个较小直径的孔24（在放大立体图中示出）而发生。

过滤器支承板26本身可以优选地包括多个同心凹槽27，以有助于流体在过滤器单元内的流动的进一步分布。过滤器支承板26优选地包括径向扇贝形凹槽25，这些径向扇贝形凹槽25与多个同心凹槽27相交，以提供在支承板26与相邻靠的过滤介质28之间的流体流动路径，优选地，在储器板中的孔24尺寸可以相对于过滤器单元的体积和被过滤的流体而改变，但直径可以优选地是约0.020±.002英寸。相应地，各孔24本身的直径可以优选地在约0.015英寸至0.025英寸的范围中。过滤器单元包括进口34和出口36，进口34和出口36的孔尺寸可以优选地为约0.625英寸。可以认识到，进口和出口优选地具有任何尺寸，使得它们足够小，从而使进出储器的流体交换不发生在同一孔内；如果直径太大，则这种交换将发生。

为了更好地保证防腐剂和滤液的流动路径在操作期间保持相分离，两个孔24可以优选地径向按彼此约90-180°的角度布置。可以想到的是，可以存在多于2个的孔。例如，可以利用3至10个孔，这些孔可以布置成用以提供两个相分离的流动路径。在孔的数量方面，较大的孔数量可以增大防腐剂的流量，也观察到的是，在过滤期间增大防腐剂的损失。相应地，找到了在流量与防腐剂损失之间的平衡，已观察到，这种平衡借助于使用2个孔（如上文提到的那样）而最佳地实现。

现在来看图5B，为了在过滤器单元10中发生层流对流流动，防腐剂P和滤液F这两种流体的密度必须不同。在P和F之间的密度差可以是正或负0.01g/cc，这就足以维持层流对流流动。在各流体之间的更大密度差可以提供更快的流动。例如，密度差可以是正或负0.05g/cc、或正或负0.01g/cc一直到0.50g/cc。相应地，在防腐剂P与滤液F之间的密度差可以在正或负0.01g/cc一直到0.50g/cc的范围中。然后当各孔之一暴露于带有所指明的密度差的滤液时，对流流动开始。对流流动在这里所公开的这样的过滤用途中是特别优选的，因为穿过过滤介质的防腐剂扩散是比较慢的过程，而对流流动比较快。

图5A-5D示意地表明过滤器组件的功能，使用灰色模（grey die）F代表滤液的流动路径。在其展开构造中的、准备用在例如海水水域中的过滤器组件10，在图5A中示出。过滤器组件10的内部体积V气密地填充有防腐剂P（在图5A-5D中以空白形式示出）。在如图5B所示的过滤或样本获取的开始时，由于较重（较高密度）滤液F（在图5A-5D中表示为灰色的海水）的流动，对在过滤器组件10内的锥形静滞空间50加以冲洗使之不含有防腐剂P，该滤液F流入过滤器组件10中，并且排出在锥形静滞空间50中的较轻（较小密度）防腐剂。将防腐剂P从过滤介质28上方扫除，从而在过滤期间，待被收集的样本不暴露于防腐剂（图5B）。

因为储器在任何时候都保持被充满，所以穿过各孔24中的一个或更多个孔而对流的任何防腐剂“I”，必定与进入其它孔24（这些孔24可以沿径向相互置换）中的被过滤的介质“O”的相等体积相平衡。在防腐剂P与样本滤液F（例如海水）之间的密度差使层流对流流动被启动，并且使较低密度防腐剂流体P流到在较高密度流体F上方的相对位置。流量可以由两个孔24的尺寸而控制。在过滤期间，过滤介质28不暴露于防腐剂P，因为滤液正在穿过介质28到出口36连续地通过。也值得注意的是，在过滤期间，图5B，从锥形静滞空间50离开储器的防腐剂，与已经被过滤的滤液一道被立即从组件中冲出。

当停止过滤时，防腐剂P在锥形静滞空间50中的过滤器支承板26下方（见图4）经历层流对流流动进程，并且也穿过过滤介质28。这然后用来化学地保存积累在过滤器的表面上的颗粒物质（图5C）。这种保存，依据在防腐剂与滤液之间的密度差，可以优选地发生在小于或等于30分钟的时间段上。防腐剂输送速率可以线性地取决于在防腐剂与滤液之间的密度差。例如，当密度差是约0.03g/cc时，保存周期可以发生在15-20分钟的时间段上，而无需任何机械操作。最后，过滤器组件10关于不同密度流体再次达到平衡，维持对于样本的保存（图5D）。可以认识到，密度相对较低的防腐剂最终覆盖过滤介质，由此取代密度相对较高的海水，这些海水可以流到储器20的底部。

当防腐剂/固定剂P具有的密度低于被过滤的介质F的密度时，在图5A-5D中所示的例子是适用的。当防腐剂P具有的密度高于被过滤的介质F的密度时，过滤器组件10可被颠倒，以如描述的那样起作用。在这个实例中，防腐剂P可以在层流对流流动期间沿着向下方向（与当防腐剂具有低密度时的向上方向相反）流动。过滤器然后可以再被隔离，并且样本可被收集和分析。样本可以包含例如生物和无生命颗粒样品。

图6是在过滤介质上向下看到的层流对流流动过程的随时间推移的示意图，其中，染料用来代替防腐剂，并且具有的密度小于被过滤的介质的密度。如可看到的那样，在层流对流过程的开始（时间零或OT）处的过滤器是清洁的，因为没有染料流入或流过过滤器。随着时间持续推移（5、10、15、20分钟），过滤器表现为改变颜色（越来越多的灰色），因为染料流过过滤器，并且将过滤器染色。相应地，随时间推移的影像，证实了染料以层流对流方式透过过滤介质。依据在流体之间的密度差的数值，持续时间可以小于或大于20分钟。

更具体地说，在图6中的例子中，在滤液（D～1.03g/cc）和防腐剂密度（～1.00g/cc）之间的密度差是约3.00%。如果在滤液与防腐剂之间的密度差较大（例如

具有～1.22g/cc的密度，海水是～1.03g/cc，密度差是19.0%），则防腐剂的输送速率将快几倍，这是有益的，在约7～8分钟内保存样本。另一方面，在过滤期间防腐剂的损失也将会比较大，这是不利的。

本公开的过滤器组件可以具有广阔潜在用途，亦即，过滤样本的收集和保存的用途，这些过滤样本由机器人时序水取样器所收集，用于随后的分子分析。本公开的过滤器组件能够在深水环境中有效地工作，在这样的环境下，人们会期望使运动零件最少化、并且使与自动时序仪表的相容性最大化。因为组件是没有运动零件的独立模块，所以现在除了用于滤液（例如海水）的进口和出口之外，无需任何其它连接。也将会免除与机电装置（该机电装置用于将防腐剂主动输送到过滤样本）连接的需要。这保证如下特征：这里的过滤器组件可被适配以适应各种过滤用途，在这些过滤用途中，机械步骤的最小化是所期望的或是至关重要的。

尽管已经示出和描述了本公开的具体实施例，但本领域的技术人员显然可以做出不脱离本公开的精神和范围的各种其它变化和修改。因此，落入在本公开的范围内的全部变化和修改将被所附的权利要求书所涵盖。

Claims

1.一种用于滤液流动的过滤器组件，包括：

a.用于具有密度D₁的第一流体滤液的流动的进口与出口，以及包含具有密度D₂的第二流体的储器；

b.用于过滤介质的内部空间；

c.将所述储器与所述内部空间隔开的储器板，其中，所述储器板包括至少两个开口，所述至少两个开口与所述储器和所述内部空间连通，其中，由于所述第一流体和第二流体的密度差，在所述储器中的所述第二流体能够与在所述内部空间中的所述第一流体交换。

2.根据权利要求1所述的过滤器组件，其中：

（1）当所述滤液具有的密度D₁大于D₂时，所述滤液流出所述内部空间进入所述储器，并且所述第二流体替换在所述内部空间中的所述滤液；或者

（2）当所述滤液具有的密度D₁小于D₂时，所述第二流体从所述储器流入所述内部空间，并且所述第二流体替换在所述内部空间中的所述滤液。

3.根据权利要求1所述的过滤器组件，还包括进口板，该进口板具有表面，并且其中，所述储器板具有表面，并且其中，所述进口板的所述表面和所述储器板的所述表面形成所述内部空间。

4.根据权利要求3所述的过滤器组件，其中，所述储器板的所述表面和所述进口板的所述表面具有圆锥锥度。

5.根据权利要求3所述的过滤器组件，其中，所述储器板的所述表面和所述进口板的所述表面是凹形的。

6.根据权利要求1所述的过滤器组件，其中，所述过滤介质由过滤器支承板至少部分地支承在所述空间中。

7.根据权利要求2所述的过滤器组件，其中，流出所述内部空间进入所述储器的所述滤液经历层流对流流动。

8.根据权利要求2所述的过滤器组件，其中，从所述储器流入所述内部空间中的所述第二流体经历层流流动。

9.根据权利要求1所述的过滤器组件，其中，所述第二流体是用于生物样品或无生命颗粒样品的防腐剂。

10.根据权利要求1所述的过滤器组件，其中，所述第一流体是海水、淡水或盐水溶液。

11.根据权利要求1所述的过滤器组件，其中，D₁和D₂密度相差±0.01g/cc至0.50g/cc。

12.根据权利要求9所述的过滤器组件，其中，所述防腐剂用以减弱包含在所述滤液中的样品的RNA/DNA/蛋白质降解。

13.根据权利要求1所述的过滤器组件，其中，所述过滤介质是玻璃纤维、醋酸纤维素纤维或聚碳酸酯膜中的一种。

14.一种用来从具有第一密度D₁的滤液中收集和固定微生物的方法，该方法包括如下步骤：

提供过滤器组件，所述过滤器组件包括：进口与出口以及储器，该储器包含具有第二密度D₂的第二流体；过滤介质，在所述过滤器组件内在所述过滤器组件进口和出口之间，并且其中，所述过滤介质定位成离开所述储器并且在内部空间内，该内部空间由储器板与所述储器隔开；所述储器板包括用于所述滤液的流动的一个开口以及与所述储器和所述内部空间连通的至少两个开口；

使所述滤液通过所述过滤器组件，并且在所述过滤介质上收集微生物和/或颗粒材料；

在如下条件下使所述微生物和/或颗粒材料暴露于所述第二流体：

15.根据权利要求14所述的方法，还包括进口板，该进口板具有表面，并且其中，所述储器板具有表面，并且其中，所述进口板的所述表面和所述储器板的所述表面形成所述内部空间。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述储器板的所述表面和所述进口板的所述表面具有圆锥锥度。

17.根据权利要求15所述的方法，其中，所述储器板的所述表面和所述进口板的所述表面是凹形的。

18.根据权利要求14所述的方法，其中，所述过滤介质由过滤器支承板至少部分地支承在所述空间中。

19.根据权利要求14所述的方法，其中，流出所述内部空间进入所述储器的所述滤液经历层流对流流动。

20.根据权利要求14所述的方法，其中，从所述储器流入所述内部空间中的所述第二流体经历层流流动。

21.根据权利要求14所述的方法，其中，所述第二流体是用于生物样品或无生命颗粒样品的防腐剂。

22.根据权利要求14所述的方法，其中，所述第一流体是海水、淡水或盐水溶液。

23.根据权利要求14所述的方法，其中，D₁和D₂密度相差±0.01g/cc至0.50g/cc。

24.根据权利要求21所述的方法，其中，所述防腐剂用以减弱包含在所述滤液中的样品的RNA降解。

25.根据权利要求14所述的方法，其中，所述过滤介质是玻璃纤维、醋酸纤维素纤维或聚碳酸酯膜中的一种。