CN103319443A - 一种二氢萘酮类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种新的二氢萘酮类化合物，其具有以下结构式：

Description

一种二氢萘酮类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化合物领域，具体涉及一种二氢萘酮类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

随着生态环境保护力度的日益加大，新化合物的研究开发面临着很多有关毒性、生物安全性以及环境友好性等因素的制约，使得新化合物的开发难度越来越高。

微生物的种类众多，代谢产物更是多种多样，从微生物的代谢产物中发现新化合物，进而研究开发成为药物(包括医药、农药、兽药)的技术正在被广泛使用。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种来源于微生物代谢产物的新的二氢萘酮类化合物。

本发明的第二个目的在于提供所述二氢萘酮类化合物的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供所述二氢萘酮类化合物的应用。

本发明的二氢萘酮类化合物具有以下结构式：

本发明的二氢萘酮类化合物通过发酵镰孢菌属(Fusarium sp.)CGMCC No.5823而获得。

根据本发明，所述镰孢菌属(Fusarium sp.)CGMCC No.5823使用大米培养基发酵，发酵温度为27～30℃，时间为28～35天。

根据本发明的优选实施例，所述化合物的制备还包括对发酵产物进行分离纯化的步骤。

根据本发明，所述分离纯化步骤包括：

先用乙酸乙酯提取，提取物用硅胶进行柱分离，采用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂进行洗脱，其中，石油醚与乙酸乙酯的体积比为40∶60，浓缩得浓缩液粗样；

然后，用半制备液相色谱分离，截取保留时间为18.6min的物质，得到粗样；

对得到的粗样进一步用半制备液相色谱分离，截取保留时间为22.3min的物质，最终获得化合物纯品。

本发明的化合物具有明显的HIV病毒抑制活性，可用于制备抗HIV病毒的药物。

附图说明

图1为本发明的二氢萘酮类化合物的正离子电喷雾质谱图。

图2为本发明的二氢萘酮类化合物的氢谱图。

图3为本发明的二氢萘酮类化合物的碳谱图。

图4～6为本发明的化合物的二维相关谱图(图4COSY，图5HSQC，图6HMBC)。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明作进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

本发明所使用的菌种为镰孢菌属(Fusarium sp.)HCCB06252，已于2012年2月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号CGMCC No.5823。

以下实施例中所使用的大米培养基的配方为：大米800g，纯净水1000ml，pH自然；115℃灭菌20min。

实施例1、化合物的制备

1.1、发酵

采用大米培养基固体发酵镰孢菌属(Fusarium sp.)菌株HCCB06252，发酵温度为27～30℃，时间为28～35天。

1.2、分离纯化

将1.1获得的大米发酵物用乙酸乙酯提取后用硅胶进行柱分离，采用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂进行洗脱，其中，石油醚与乙酸乙酯的体积比为40∶60，浓缩得粗样。

然后，用半制备液相色谱(半制备柱为YMC-Pack ODS-A C18，5μm，20mm*250mm)分离(0～15min用52％甲醇等度洗脱，15～45min用52％～100％甲醇梯度洗脱，流速7ml/min)，截取保留时间为18.6min的物质，得到粗样。

对得到的粗样进一步用半制备液相色谱(半制备柱为AgilentZORBAX SB-C18，5μm，9.4mm*250mm)分离(0～30min用22％乙腈等度洗脱，流速2ml/min)，截取保留时间为22.3min的物质，最终获得化合物纯品，用于以下结构鉴定。

实施例2、化合物的结构鉴定

将实施例1获得的化合物经正离子电喷雾质谱检测，图谱如图1所示，显示其准分子离子峰为：m/z 295.1156[M+H]⁺，对应分子式为C₁₅H₁₉O₆。采用Bruker Avance II-400型超导核磁共振仪测定了样品的氢谱(图2)、碳谱(图3)和二维相关谱(图4～6)，核磁数据如表1所示。

表1、化合物的NMR数据表(Actone-d₆，δin ppm，Jin Hz)

^aRecorded at 400MHz，^bRecorded at 100MHz。

通过解析，确定了该化合物所有碳原子和氢原子的归属，得到了该化合物的结构如下：

该化合物分子式为C₁₅H₁₈O₆，分子量为294，化学中文名为10-羟基-2，3二氢萘酮，英文名为10-hydroxy-2，3-dihydronaphthalenone。

经检索，现有技术中未见有报道，是一种新的化合物。

实施例3、化合物的抗HIV病毒活性检测

对实施例1中获得的化合物进行抗HIV病毒活性检测，具体方法如下：

质粒pNL4.3.Env-.Luc(NIH AIDS Research & Reference ReagentProgram，Catalog Number 3418)能够表达具有报告基因荧光素酶但包膜蛋白缺失的HIV-1病毒，质粒pHCMV-G(Yee，J.et al，(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：9564-9568.)能够表达水泡性口膜炎病毒外壳糖蛋白(VSVG)。将pNL4.3.Env-.Luc和pHCMV-G共转染293T细胞(AmericanType Culture Collection，CRL-11268)，产生VSVG假型HIV-1病毒株。

将SupT1细胞(American Type Culture Collection，CRL-1942)接种至96孔培养板，每孔1×10⁴个细胞，以MOI(感染复数)＝1接种上述VSVG假型HIV-1病毒，加入终浓度为10μg/ml的实施例1中获得的化合物，置5％CO₂、37℃培养48h，测定感染细胞中荧光素酶活性，计算样品的抑制率。以终浓度为10μg/ml的依法韦仑(Efavirenz)为阳性对照；每个实验重复3次，计算平均值。化合物对HIV病毒的抑制率结果如表2所示。

表2、化合物对HIV病毒的抑制率(％)

化合物	本发明化合物(10μg/ml)	依法韦仑(10μg/ml)
			抑制率(％)	51.1	100

由表2的结果可见，本发明的二氢萘酮类化合物具有明显的HIV抑制活性，有望进一步开发用于治疗HIV感染，或者用于制备抗HIV病毒的药物。

Claims (6)

1.一种二氢萘酮类化合物，其特征在于具有以下结构式：

2.权利要求1所述的二氢萘酮化合物的制备方法，其特征在于，所述化合物通过发酵镰孢菌属(Fusarium sp.)CGMCC No.5823而获得。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述镰孢菌属(Fusariumsp.)CGMCC No.5823使用大米培养基发酵，发酵温度为27～30℃，时间为28～35天。

4.如权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述化合物的制备还包括对发酵产物进行分离纯化的步骤。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述分离纯化步骤包括：

先用乙酸乙酯提取，提取物用硅胶进行柱分离，采用石油醚/乙酸乙酯混合溶剂进行洗脱，其中，石油醚与乙酸乙酯的体积比为40∶60，浓缩得浓缩液粗样；

然后，用半制备液相色谱分离，截取保留时间为18.6min的物质，得到粗样；

对得到的粗样进一步用半制备液相色谱分离，截取保留时间为22.3min的物质，最终获得化合物纯品。

6.权利要求1所述的二氢萘酮类化合物用于制备抗HIV病毒的药物。

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