CN103305492A - 一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种菠萝蛋白酶的制造方法，特别是一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法。它包括以下步骤：菠萝预处理、粗粉碎、酶解、榨汁、过滤、添加辅料、精过滤、添加稳定剂、吸附剂吸附、洗脱、超滤、冷冻干燥获得成品。本发明的优点在于：利用纤维素吸附法替换传统菠萝蛋白酶提取中高岭土吸附法、单宁沉淀法、有机溶剂萃取法，产率高、工艺简单、能耗低，所生产的菠萝蛋白酶酶活力、细菌含量、重金属含量、外观等指标达到或超过医药级标准。此外，吸附纤维素经洗脱再生后可以重复使用，能够极大的降低生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及一种菠萝蛋白酶的提取方法，尤其涉及一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法。
背景技术
菠萝蛋白酶是一种蛋白质水解酶，从菠萝茎中提取的菠萝蛋白酶是一种纯天然植物蛋白酶，具有很强的分解纤维蛋白和血凝块的能力，同时，菠萝蛋白酶具有消炎、增进药物吸收、防治心血管疾病、抑制肿瘤细胞生长等作用，在医药行业运用广泛。
目前，菠萝蛋白酶的提取方法，主要有化学提取法和物理提取方法，如专利CN1908165A提供了一种菠萝蛋白酶物理提取新方法，其提取菠萝蛋白酶的工艺步骤为：原料-清洗-粉碎-预处理-榨汁-离心-冷冻-过滤-超滤-干燥-成品，整个工艺能耗巨大，生产工艺复杂繁琐，成本高，不利于规模化生产，其菠萝蛋白酶产品得率较低。专利CN100368537C提供了一种菠萝蛋白酶冷冻干燥粉的制备方法，菠萝原料经清洗榨汁后，滤液用氧化锌吸附，超滤浓缩液，冷冻干燥等步骤制得菠萝蛋白酶冷冻干燥粉，可作为医药原料使用，该工艺较为简单，易于操作，但其产物酶活性太低，工艺中使用的材料昂贵，不经济。专利CN101307309A提供了一种利用金属螯合亲和膜提纯菠萝蛋白酶的方法，活化的尼龙膜经改性后，螯合金属锌离子，吸附菠萝蛋白酶，而后洗脱即可。该法需对尼龙膜处理，整个工艺复杂且耗时长，成本高，终产品纯化倍数低。
发明内容
本发明针对现有技术中提取工艺复杂，成本高昂，且所生产的酶细菌含量、重金属含量不能达到医药级标准的不足，提供了一种提取菠萝蛋白酶的酶活力、细菌含量、重金属含量、外观等指标均能达到或超过医药级标准的可工业化的提取方法。
为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决。
一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，它包括如下步骤：
步骤一菠萝预处理，菠萝洗净后预冷处理；
步骤二粗粉碎，将预冷处理后的菠萝粉碎；
步骤三酶解，向粗粉碎后的菠萝块中加入木质素酶，酶解菠萝果肉细胞壁；
步骤四榨汁，酶解后的菠萝果肉，经压榨处理，获得菠萝果浆；
步骤五过滤，菠萝果浆经过粗过滤和循环过滤，获得带细渣的菠萝汁；
步骤六添加辅料，向带细渣的菠萝汁中添加辅料；
步骤七精过滤，精细过滤添加辅料的带细渣的菠萝汁，获得菠萝清液；
步骤八添加稳定剂，向菠萝清液中添加稳定剂乙二胺四乙酸二钠和抗坏血酸；
步骤九吸附剂吸附,向前一步添加稳定剂的菠萝清液中添加纤维素吸附剂，搅拌后静置，离心获得菠萝蛋白酶沉淀；
步骤十洗脱,加入去离子水和抗坏血酸至菠萝蛋白酶沉淀中，混合均匀后过滤得到菠萝蛋白酶清液；
步骤十一超滤,低温超滤菠萝蛋白酶清液，获得菠萝蛋白酶浓缩液；
步骤十二冷冻干燥获得成品,菠萝蛋白酶浓缩液经冷冻干燥后获得菠萝蛋白酶干固体。
作为优选，步骤一中菠萝预冷处理的温度为0～5℃，预冷处理时间为20～30小时。经过预冷处理，能减少菠萝蛋白酶酶活损失，又有利于后续粉碎处理。
作为优选，步骤三中木质素酶的添加量为菠萝总质量的0.001%～0.01%。木质素酶的处理，能够有效水解菠萝细胞壁，有利于细胞破碎，充分释放菠萝蛋白酶。
作为优选，步骤五中菠萝果浆先通过袋式过滤机粗过滤，而后通过卧式过滤机循环过滤获得菠萝汁。由于采用多步过滤的处理方式，首先通过袋式过滤机处理，除去体积较大的菠萝茎渣，而后通过卧式过滤机循环过滤，获得滤液，能有效提高产率和生产效率，降低劳动强度，有利于工业化精细化生产。
作为优选，步骤六中滤液中加入质量百分比为0.05%～0.5%的苯甲酸钠。苯甲酸钠作为一种常用的食品防腐剂，它的加入能有效防止滤液中微生物的滋生，降低终产品细菌含量。
作为优选，步骤七中带细渣的菠萝汁采用压滤机过滤，去除滤液中的细渣，获得菠萝清液。
作为优选，步骤八中菠萝清液中加入质量百分比为0.01%～0.1%的乙二胺四乙酸二钠和质量百分比为0.01%～0.1%的抗坏血酸。螯合剂乙二胺四乙酸二钠的加入能有效防止酶失活，抗氧化剂抗坏血酸的加入，能有效防止菠萝蛋白酶被氧化，防止提取过程中酶活损失。
作为优选，步骤九中向前一步处理后的菠萝清液中添加质量百分比0.2%～0.8%的纤维素吸附剂并充分搅拌，低温静置后，离心取沉淀，静置处理的温度为-2～5℃。纤维素吸附剂的使用，替换了传统菠萝蛋白酶提取中高岭土吸附法、单宁沉淀法、有机溶剂萃取法，酶活回收率高，纯度好，且对环境友好。此外，吸附纤维素经洗脱再生后可以重复使用，能够极大的降低生产成本。
作为优选，步骤十中去离子水的添加量为菠萝蛋白沉淀质量的5%～15%，抗坏血酸的添加量为菠萝蛋白沉淀质量的0.04%～0.1%。去离子水的加入，保证菠萝蛋白酶的充分洗脱，再次加入抗氧化剂抗坏血酸，有效提高酶活回收率。
作为优选，步骤十一中选用截留分子量为10000或20000的超滤膜进行超滤浓缩，超滤温度为0～12℃，通过超滤，浓缩滤液，有利于后续冷冻干燥步骤中降低能耗。
本发明的有益效果是：
（1）菠萝经冷冻预处理，减少了酶活力损失；
（2）菠萝经粉碎之后经多次过滤，提高了菠萝的榨汁率；
（3）整个提取过程步骤少，工艺简单；
（4）利用纤维素吸附法替换传统菠萝蛋白酶提取中高岭土吸附法、单宁沉淀法、有机溶剂萃取法，酶活回收率高，纯度好，且对环境友好。此外，吸附纤维素经洗脱再生后可以重复使用，能够极大的降低生产成本。
（5）在超滤后再进行干燥，降低了菠萝蛋白酶中的水分含量，缩短了干燥时间，降低能耗；
（6）采用冷冻干燥，过程中酶活力几乎没有损耗；
（7）本方法提取的菠萝蛋白酶的酶活力、细菌含量、重金属含量、外观等指标达到或超过医药级标准。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
本实施例的高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，包括以下步骤：菠萝原料预处理、粗粉碎、酶解、榨汁、过滤、添加辅料、精过滤、添加稳定剂、吸附剂吸附、洗脱、超滤、冷冻干燥，获得成品。
具体是：原料清洗后置于4℃环境中预冷24h后，用锤式粉碎机粉碎；粉碎后的菠萝块中添加质量百分比为0.001%的木质素酶并混合均匀，经输送带传输到压榨机进行榨汁处理，压榨机下有接料槽，收集菠萝果浆；菠萝果浆经袋式过滤机粗过滤，再经卧式过滤机循环过滤获得带细渣的菠萝汁；向带细渣的菠萝汁中添加入总质量0.2%苯甲酸钠搅拌15min后，采用板框压滤机除去滤液中的细渣，获得菠萝清液；向菠萝清液中加入菠萝清液质量0.08%乙二胺四乙酸二钠和0.1%抗坏血酸搅拌；混合均匀后添加质量百分比为0.5%纤维素吸附剂，搅拌均匀后4℃静置1h，离心收集菠萝蛋白酶沉淀；向沉淀物中加入质量百分比为0.08%的抗坏血酸和10%的去离子水，搅拌50min，过滤后收集菠萝蛋白酶清液；采用截留分子量为10000超滤膜组件进行超滤浓缩，超滤温度设定为8℃，将菠萝蛋白酶清液浓缩至原体积的20%；最后将浓缩液冷冻干燥获得到粉末状成品。成品酶活为280万CDU/g。
实施例2
本实施例的高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，包括以下步骤：菠萝原料预处理、粗粉碎、酶解、榨汁、过滤、添加辅料、精过滤、添加稳定剂、吸附剂吸附、洗脱、超滤、冷冻干燥，获得成品。
具体是：原料清洗后置于2℃环境中预冷20h后，用锤式粉碎机粉碎；粉碎后的菠萝块中添加质量百分比为0.003%的木质素酶并混合均匀，经输送带传输到压榨机进行榨汁处理，压榨机下有接料槽，收集菠萝果浆；菠萝果浆经袋式过滤机粗过滤，再经卧式过滤机循环过滤获得带细渣的菠萝汁；向带细渣的菠萝汁中添加入总质量0.5%苯甲酸钠搅拌10min后，采用板框压滤机除去滤液中的细渣，获得菠萝清液；向菠萝清液中加入菠萝清液质量0.03%乙二胺四乙酸二钠和0.07%抗坏血酸搅拌；混合均匀后添加质量百分比为0.8%纤维素吸附剂，搅拌均匀后2℃静置40min，离心收集菠萝蛋白酶沉淀；向沉淀物中加入质量百分比为0.06%的抗坏血酸和15%的去离子水，搅拌40min，过滤后收集菠萝蛋白酶清液；采用截留分子量为10000超滤膜组件进行超滤浓缩，超滤温度设定为4℃，将菠萝蛋白酶清液浓缩至原体积的20%；最后将浓缩液冷冻干燥获得到粉末状成品。成品酶活为294万CDU/g。
实施例3
本实施例的高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，包括以下步骤：菠萝原料预处理、粗粉碎、酶解、榨汁、过滤、添加辅料、精过滤、添加稳定剂、吸附剂吸附、洗脱、超滤、冷冻干燥，获得成品。
具体是：原料清洗后置于5℃环境中预冷30h后，用锤式粉碎机粉碎；粉碎后的菠萝块中添加质量百分比为0.01%的木质素酶并混合均匀，经输送带传输到压榨机进行榨汁处理，压榨机下有接料槽，收集菠萝果浆；菠萝果浆经袋式过滤机粗过滤，再经卧式过滤机循环过滤获得带细渣的菠萝汁；向带细渣的菠萝汁中添加入总质量0.1%苯甲酸钠搅拌12min后，采用板框压滤机除去滤液中的细渣，获得菠萝清液；向菠萝清液中加入菠萝清液质量0.05%乙二胺四乙酸二钠和0.01%抗坏血酸搅拌；混合均匀后添加质量百分比为0.2%纤维素吸附剂，搅拌均匀后5℃静置90min，离心收集菠萝蛋白酶沉淀；向沉淀物中加入质量百分比为0.04%的抗坏血酸和5%的去离子水，搅拌60min，过滤后收集菠萝蛋白酶清液；采用截留分子量为20000超滤膜组件进行超滤浓缩，超滤温度设定为4℃，将菠萝蛋白酶清液浓缩至原体积的20%；最后将浓缩液冷冻干燥获得到粉末状成品。成品酶活为285万CDU/g。
实施例4
本实施例的高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，包括以下步骤：菠萝原料预处理、粗粉碎、酶解、榨汁、过滤、添加辅料、精过滤、添加稳定剂、吸附剂吸附、洗脱、超滤、冷冻干燥，获得成品。
具体是：原料清洗后置于0℃环境中预冷26h后，用锤式粉碎机粉碎；粉碎后的菠萝块中添加质量百分比为0.007%的木质素酶并混合均匀，经输送带传输到压榨机进行榨汁处理，压榨机下有接料槽，收集菠萝果浆；菠萝果浆经袋式过滤机粗过滤，再经卧式过滤机循环过滤获得带细渣的菠萝汁；向带细渣的菠萝汁中添加入总质量0.05%苯甲酸钠搅拌15min后，采用板框压滤机除去滤液中的细渣，获得菠萝清液；向菠萝清液中加入菠萝清液质量0.01%乙二胺四乙酸二钠和0.03%抗坏血酸搅拌；混合均匀后添加质量百分比为0.6%纤维素吸附剂，搅拌均匀后2℃静置1h，离心收集菠萝蛋白酶沉淀；向沉淀物中加入质量百分比为0.1%的抗坏血酸和15%的去离子水，搅拌30min，过滤后收集菠萝蛋白酶清液；采用截留分子量为20000超滤膜组件进行超滤浓缩，超滤温度设定为12℃，将菠萝蛋白酶清液浓缩至原体积的20%；最后将浓缩液冷冻干燥获得到粉末状成品。成品酶活为281万CDU/g。
实施例5
本实施例的高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，包括以下步骤：菠萝原料预处理、粗粉碎、酶解、榨汁、过滤、添加辅料、精过滤、添加稳定剂、吸附剂吸附、洗脱、超滤、冷冻干燥，获得成品。
具体是：原料清洗后置于4℃环境中预冷30h后，用锤式粉碎机粉碎；粉碎后的菠萝块中添加质量百分比为0.005%的木质素酶并混合均匀，经输送带传输到压榨机进行榨汁处理，压榨机下有接料槽，收集菠萝果浆；菠萝果浆经袋式过滤机粗过滤，再经卧式过滤机循环过滤获得带细渣的菠萝汁；向带细渣的菠萝汁中添加入总质量0.05%苯甲酸钠搅拌10min后，采用板框压滤机除去滤液中的细渣，获得菠萝清液；向菠萝清液中加入菠萝清液质量0.1%乙二胺四乙酸二钠和0.06%抗坏血酸搅拌；混合均匀后添加质量百分比为0.4%纤维素吸附剂，搅拌均匀后-2℃静置30min，离心收集菠萝蛋白酶沉淀；向沉淀物中加入质量百分比为0.06%的抗坏血酸和12%的去离子水，搅拌40min，过滤后收集菠萝蛋白酶清液；采用截留分子量为20000超滤膜组件进行超滤浓缩，超滤温度设定为0℃，将菠萝蛋白酶清液浓缩至原体积的20%；最后将浓缩液冷冻干燥获得到粉末状成品。成品酶活为302万CDU/g。
总之，以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所作的均等变化与修饰，皆应属本发明专利的涵盖范围。
Claims (10)
1.一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：它包括如下步骤：
步骤一菠萝预处理，菠萝洗净后预冷处理；
步骤二粗粉碎，将预冷处理后的菠萝粉碎；
步骤三酶解，向粗粉碎后的菠萝块中加入木质素酶，酶解菠萝果肉细胞壁；
步骤四榨汁，酶解后的菠萝果肉，经压榨处理，获得菠萝果浆；
步骤五过滤，菠萝果浆经过粗过滤和循环过滤，获得带细渣的菠萝汁；
步骤六添加辅料，向带细渣的菠萝汁中添加辅料；
步骤七精过滤，精细过滤添加辅料的带细渣的菠萝汁，获得菠萝清液；
步骤八添加稳定剂，向菠萝清液中添加稳定剂乙二胺四乙酸二钠和抗坏血酸；
步骤九吸附剂吸附,向前一步添加稳定剂的菠萝清液中添加纤维素吸附剂，搅拌后静置，离心获得菠萝蛋白酶沉淀；
步骤十洗脱,加入去离子水和抗坏血酸至菠萝蛋白酶沉淀中，混合均匀后过滤得到菠萝蛋白酶清液；
步骤十一超滤,低温超滤菠萝蛋白酶清液，获得菠萝蛋白酶浓缩液；
步骤十二冷冻干燥获得成品,菠萝蛋白酶浓缩液经冷冻干燥后获得菠萝蛋白酶干固体。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤一中，菠萝预冷处理的温度为0～5℃，预冷处理时间为20～30h。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤三中，木质素酶的添加量占菠萝总质量的0.001%～0.01%。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤五中，菠萝果浆的粗过滤采用袋式过滤机，循环过滤采用卧式过滤机。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤六中，添加的辅料为防腐剂苯甲酸钠，添加量为带细渣菠萝汁总质量的0.05%～0.5%。
6.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤七中，采用压滤机过滤带细渣的菠萝汁。
7.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤八中，乙二胺四乙酸二钠的添加量为菠萝清液质量的0.01%～0.1%，抗坏血酸的添加量为菠萝清液质量的0.01%～0.1%。
8.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤九中，纤维素吸附剂添加量为菠萝清液质量的0.2%～0.8%，静置的温度为-2～5℃。
9.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤十中，去离子水的添加量为菠萝蛋白酶沉淀质量的5%～15%，抗坏血酸的添加量为菠萝蛋白酶沉淀质量的0.04%～0.1%。
10.根据权利要求1所述的一种高纯度医药级菠萝蛋白酶的提取方法，其特征在于：步骤十一中，超滤膜孔径的截留分子量为10000或20000，超滤温度为0～12℃。
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103540573A (zh) * | 2013-10-19 | 2014-01-29 | 沅江浣溪沙酶技术有限公司 | 一种木质素酶及生产方法 |
| CN103653003A (zh) * | 2013-11-07 | 2014-03-26 | 南宁市格瑞安特化工新材料科技有限公司 | 维生素c在常温钝化菠萝蛋白酶方面的应用 |
| CN104789545A (zh) * | 2014-01-16 | 2015-07-22 | 南京瑞尔医药有限公司 | 一种菠萝蛋白酶的提纯方法 |
| CN106636039A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-05-10 | 嵊州市派特普科技开发有限公司 | 一种菠萝蛋白酶的提取方法 |
| CN106987575A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-07-28 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种生物酶的制备方法 |
| CN108504646A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-09-07 | 贵州沣稷生物科技有限公司 | 一种菠萝蛋白酶的高效提取方法 |
| CN109880814A (zh) * | 2019-04-28 | 2019-06-14 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法 |
| CN111876401A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-11-03 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种从菠萝茎叶中提取获得菠萝蛋白酶的方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1186118A (zh) * | 1996-12-23 | 1998-07-01 | 茂名市茂辉公司化州分公司 | 菠萝蛋白酶的物理提取新方法 |
| CN1834239A (zh) * | 2006-04-07 | 2006-09-20 | 王美岭 | 菠萝蛋白酶冷冻干燥粉的制备方法 |
| CN1908165A (zh) * | 2006-08-03 | 2007-02-07 | 谢丹青 | 菠萝蛋白酶物理提取新方法 |
| CN101319208A (zh) * | 2008-04-08 | 2008-12-10 | 徐闻县美仑生物制品有限公司 | 一种菠萝蛋白酶的制造方法 |
| CN102071180A (zh) * | 2009-11-23 | 2011-05-25 | 湖州来色生物基因工程有限公司 | 一种菠萝蛋白酶制备新工艺 |
-
2013
- 2013-06-09 CN CN201310235004.3A patent/CN103305492B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1186118A (zh) * | 1996-12-23 | 1998-07-01 | 茂名市茂辉公司化州分公司 | 菠萝蛋白酶的物理提取新方法 |
| CN1834239A (zh) * | 2006-04-07 | 2006-09-20 | 王美岭 | 菠萝蛋白酶冷冻干燥粉的制备方法 |
| CN1908165A (zh) * | 2006-08-03 | 2007-02-07 | 谢丹青 | 菠萝蛋白酶物理提取新方法 |
| CN101319208A (zh) * | 2008-04-08 | 2008-12-10 | 徐闻县美仑生物制品有限公司 | 一种菠萝蛋白酶的制造方法 |
| CN102071180A (zh) * | 2009-11-23 | 2011-05-25 | 湖州来色生物基因工程有限公司 | 一种菠萝蛋白酶制备新工艺 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张夏红等: "高沸醇木质素及其衍生物对菠萝蛋白酶的吸附", 《过程工程学报》, vol. 6, no. 1, 28 February 2006 (2006-02-28) * |
| 马超: "菠萝蛋白酶提取、分离纯化及稳定性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》, no. 3, 15 March 2010 (2010-03-15) * |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103540573A (zh) * | 2013-10-19 | 2014-01-29 | 沅江浣溪沙酶技术有限公司 | 一种木质素酶及生产方法 |
| CN103540573B (zh) * | 2013-10-19 | 2015-10-07 | 沅江浣溪沙酶技术有限公司 | 一种木质素酶及生产方法 |
| CN103653003A (zh) * | 2013-11-07 | 2014-03-26 | 南宁市格瑞安特化工新材料科技有限公司 | 维生素c在常温钝化菠萝蛋白酶方面的应用 |
| CN103653003B (zh) * | 2013-11-07 | 2015-12-30 | 南宁市格瑞安特化工新材料科技有限公司 | 维生素c在常温钝化菠萝蛋白酶方面的应用 |
| CN104789545A (zh) * | 2014-01-16 | 2015-07-22 | 南京瑞尔医药有限公司 | 一种菠萝蛋白酶的提纯方法 |
| CN106636039A (zh) * | 2017-01-22 | 2017-05-10 | 嵊州市派特普科技开发有限公司 | 一种菠萝蛋白酶的提取方法 |
| CN106987575A (zh) * | 2017-04-11 | 2017-07-28 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种生物酶的制备方法 |
| CN106987575B (zh) * | 2017-04-11 | 2020-07-31 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种生物酶的制备方法 |
| CN108504646A (zh) * | 2018-06-07 | 2018-09-07 | 贵州沣稷生物科技有限公司 | 一种菠萝蛋白酶的高效提取方法 |
| CN109880814A (zh) * | 2019-04-28 | 2019-06-14 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种从菠萝皮渣中提取获得菠萝蛋白酶的方法 |
| CN111876401A (zh) * | 2020-08-13 | 2020-11-03 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种从菠萝茎叶中提取获得菠萝蛋白酶的方法 |
| CN111876401B (zh) * | 2020-08-13 | 2022-02-15 | 中国热带农业科学院农产品加工研究所 | 一种从菠萝茎叶中提取获得菠萝蛋白酶的方法 |
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Denomination of invention: A method for extracting pharmaceutical grade bromelain Granted publication date: 20141029 Pledgee: Industrial Bank Limited by Share Ltd. Chengdu branch Pledgor: YANGTIAN BIO PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. SICHUAN Registration number: Y2024980006212 |