CN103288752A - 肉桂酸酰胺衍生物、制备方法及其在制备止血化瘀药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了肉桂酸酰胺衍生物、制备方法及其在制备止血化瘀药物中的应用。发明人以羟基肉桂酸与磺胺类药物为原料，将羟基肉桂酸溶于乙酸酐中，然后依次加入吡啶、四氢呋喃并与磺胺类药物反应得到酰胺化合物粗品，经过滤、洗涤、重结晶等工序得到一类新型的肉桂酸酰胺衍生物。研究发现，此类化合物能通过内外源凝血途径激活凝血因子，加强子宫活动，可以较好的与人血清结合，在体内很好的运输，发挥促凝活性和镇痛作用，同时有化瘀的双向调节效果。凝血四项指标、血浆复钙实验以及小鼠离体子宫实验证实，此类化合物分别存在促凝、抗凝以及双向调节的活性，具有止血化瘀药物用途，可应用在制备血液疾病药物方面。
Description
技术领域
本发明属于酰胺化合物技术领域，尤其是肉桂酸酰胺衍生物、制备方法及其在制备止血化瘀药物中的应用。
背景技术
肉桂酸，化学名3-苯基-2-丙烯酸，又名桂皮酸、桂酸，是一种天然提取物，安全无毒，呈白色单斜结晶，微有桂皮气味，微溶于水，易溶于酸、苯、丙酮、冰醋酸，溶于乙醇、甲醇和氯仿中。体内外实验表明，肉桂酸具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、消炎作用和抑制黄嘌呤氧化酶的活性，是一种重要的有机合成中间体，目前广泛用于医药、香料、农药、塑料和感光树脂等精细化工生产。酚酸类化合物，是指在同一苯环上有若干个酚性羟基的有机酸，酚酸具有广泛的生理活性。肉桂酸及其衍生物是一类重要的酚酸，具有多方面的生物活性，如抗氧化、清除自由基、抗紫外线辐射、抑菌效应中枢兴奋、凝血、解毒以及抗病毒作用，在医药、农药、化妆品原料和食品添加剂等方面有着广泛的用途。肉桂酸及其衍生物的抗菌活性很早就引起人们的注意，农业上将咖啡酸作为天然杀菌剂。肉桂酸及其衍生物的抗氧化活性研究表明，天然蜂胶成分咖啡酸苯乙酯具有抗癌功效，是天然抗肿瘤药物研发的明星分子。肉桂酸及其衍生物主要以有机酸酯和多糖苷的形式广泛存在于咖啡豆、木瓜、蓝莓、苹果等天然植物。发明人所在课题组从滇桂艾纳香中提取的肉桂酸、咖啡酸、绿原酸、阿魏酸、原儿茶酸、香草酸等均为肉桂酸的衍生物。研究发现，该类化合物有着较好的血液生理活性，在妇科止血药物中有着潜在的应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供肉桂酸酰胺衍生物、制备方法及其在制备止血化瘀药物中的应用，具体是以羟基肉桂酸与磺胺类药物为原料合成的一系列肉桂酸酰胺衍生物、合成方法和用途。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：肉桂酸酰胺衍生物，该衍生物为以下通式的化合物之一：
其中，
R1为-H、-OH、-OAc或-OCH3，R2为-H、-OH、-OAc或-OCH3，
R3为-H、
该衍生物为以下化合物之一：
化合物1
化合物2
化合物3
化合物4
化合物5
化合物6
化合物7
化合物8
化合物9
化合物10
化合物11
上述肉桂酸酰胺衍生物在制备止血药物中的应用。
化合物1、2、3、8或9在制备止血药物中的应用。
上述肉桂酸酰胺衍生物在制备抗凝药物中的应用。
化合物4、5、7或11在制备抗凝药物中的应用。
上述肉桂酸酰胺衍生物在制备止血抗凝双向调节药物中的应用。
化合物10在制备止血抗凝双向调节药物中的应用。
上述肉桂酸酰胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：
<1>将羟基肉桂酸溶于乙酸酐中，待完全溶解后，加入吡啶，140℃下搅拌回流4小时后停止反应，减压抽滤得到白色粉末乙酰肉桂酸粗品，用乙醇重结晶得到乙酰肉桂酸纯品；加入的羟基肉桂酸、乙酸酐的摩尔比为1∶5；
<2>将步骤<1>得到的乙酰肉桂酸溶于二氯亚砜中，乙酰肉桂酸与二氯亚砜的摩尔比为1∶7，在80℃油浴下搅拌回流6小时后停止反应，减压蒸去溶剂，加入四氢呋喃稀释得到溶液；
<3>在冰浴条件下将磺胺类药物加入到步骤<2>所得的溶液中，加入吡啶，冰浴搅拌1.5h，常温搅拌24小时后停止反应；加入的磺胺类药物、吡啶与步骤<2>的乙酰肉桂酸的摩尔比为1：2：1；
<4>待步骤<3>反应结束后，减压蒸去溶剂，在反应混合物中加入蒸馏水，蒸馏水与反应物肉桂酸衍生物的摩尔比为1∶150，产物沉淀析出，减压过滤，水洗沉淀，再用体积比为1∶1的四氢呋喃和甲醇混合溶液对沉淀重结晶得到乙酰肉桂酸衍生物；
或待步骤<3>反应结束后，减压蒸去溶剂，加入浓盐酸，浓盐酸与步骤<1>的羟基肉桂酸的体积摩尔比为6mL∶0.0305mol，60℃水浴下搅拌回流3小时后停止反应，减压蒸去溶剂，冷却加入蒸馏水，蒸馏水与反应物肉桂酸衍生物的摩尔比为1∶150，沉淀析出，减压抽滤，水洗，取沉淀，再用体积比为1∶1的四氢呋喃和甲醇混合溶液对沉淀重结晶得到羟基肉桂酸衍生物。
步骤<3>中的磺胺类药物是磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪钠、磺胺、磺胺氯哒嗪钠、磺胺二甲氧嘧啶钠或磺胺噻唑。
本发明以重要的天然药物提取物为原料，合成了一类良好药物活性的新型肉桂酸酰胺衍生物，此类衍生物具有血液生理活性。研究表明，它们在止血、抗凝或止血抗凝双向调节方面发挥作用，可以作为止血、抗凝或或止血抗凝双向调节的潜在药物，在血液疾病方面应用前景广阔。发明人设计并合成了11种代表化合物，利用全自动血凝分析仪（ACL-Advance）测定了具有代表性的血凝四项活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(IT)以及纤维蛋白原(FIB)来确定目标化合物及原料对凝血机制的影响，部分揭示此系列化合物的止血作用或抗凝机理，探讨其药理性质。因为血浆复钙时间也是检验内源性凝血途径的常用指标之一，通过对目标化合物进行血浆复钙实验，进一步明确了其止血途径。同时，采用小鼠离体子宫为实验对象，用BL-410生物机能实验系统记录离体子宫收缩情况，观察新型肉桂酸酰胺衍生物化合物对小鼠离体子宫收缩张力及频率的影响。通过小鼠离体子宫实验模型探讨衍生物对子宫收缩活动的影响，了解止血与活血作用的初步机理，为合成药效更好的妇科止血药提供理论依据。通过对各项指标的检测，了解了化合物结构特征与其功效之间的关系，为其二次开发提供理论依据。研究发现：化合物的结构中除了含有相同的基团-CO-NH-外，基团含有能形成强氢键的元素（给体或受体），可以增强化合物的血液生理活性，这可能会使得化合物与血液中蛋白的氨基酸形成氢键，增强了结合作用力。当肉桂酸苯环上的取代为间位取代时，对凝血四项指标的影响较大；取代基团为甲氧基团取代对化合物的活性影响最大，其次是乙酰基，最后是羟基，这可能是因为取代基团的极性不同，使得化合物在与血液中各种因素结合时作用力不同造成的差异。通过实验研究，明确了具有促凝、抗凝或双向调节的化合物的结构特征，为后期研究血液活性化合物的作用机制打下实验基础，给产品的开发，提供了重要的前期参考依据。
附图说明
图1是本发明肉桂酸酰胺衍生物对APTT的影响实验结果图(n=3，药物浓度0.125mg/mL)。
图2是本发明肉桂酸酰胺衍生物对TT的影响实验结果图(n=3，药物浓度0.125mg/mL)。
图3是本发明肉桂酸酰胺衍生物对FIB的影响实验结果图(n=3，药物浓度0.125mg/mL)。
图4是本发明肉桂酸酰胺衍生物对PT的影响实验结果图(n=3，药物浓度0.125mg/mL)。
图1至图4中：K为空白对照，Y为云南白药阳性对照，1至11分别为化合物1-11；与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，显著性采用ANOVA方法Tukey’s测试。
图5是本发明肉桂酸酰胺衍生物对小鼠子宫频率的影响实验结果图（即：药物浓度对数-子宫频率抑制率，n=6）。
图6是本发明肉桂酸酰胺衍生物对小鼠子宫平均张力的影响实验结果图（即：药物浓度对数-子宫张力抑制率，n=6）。
具体实施方式
实施例1 对乙酰肉桂酰磺胺间甲氧嘧啶（化合物1）的制备
称取对羟基肉桂酸5g（0.0305mol）置于250mL圆底烧瓶中，加入乙酸酐15mL，摇匀，140℃反应4小时，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，乙醇重结晶，得到白色粉末状化合物即为对乙酰肉桂酸。将制备的对乙酰肉桂酸置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得乙酰肉桂酰氯初产品，加入15mL THF，稀释，将称量好的磺胺间甲氧嘧啶8.55g（0.0305mol）加入其中，再加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，反应结束后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得浅白色固体粗产品，产物用甲醇：THF=1:1进行重结晶，得到白色粉末纯化合物（1），产率为50%，mp:228–230°C，Rf=0.34GF254(EtOAc/PE=1.5:1)。MS:m/z467.2，calcd468.11，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm):δ:2.277(s，3H，-CO-CH3);3.838(t，3H，-OCH3);6.370(s，1H，Py-H);6.788–6.840(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz);7.198–7.226(d，2H，Ar-H，J=8.4Hz);7.676–7.714(d，2H，Ar-H，J=8.4Hz);7.624–7.626(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz);7.881–7.907(d，2H，Ar-H，J=7.8Hz);7.917–7.943(d，2H，Ar-H，J=7.8Hz);8.424(s，1H，Py-H);10.620(s，1H，-CO-NH);12.059(s，1H，-SO2-NH).13C-NMR(75MHz，DMSO)δ:54.59，67.45，91.35，119.39，122.14，122.97，128.75，129.51，132.61，134.62，140.77，143.73，152.13，157.01，158.97，164.48，169.50，170.38.Anal.calcd.for C22H20N4O6S:C，56.40;H，4.30;N，11.96.Found:C，56.48;H，4.25;N，12.04.IR data(KBr pellets，cm-1):3360(m)，1740(w)，1627(s)，1589(s)，1477(m)，1382(m)，1228(s)，and1091(m).
实施例2 对羟基肉桂酰磺胺对甲氧嘧啶（化合物2）的制备
称取对羟基肉桂酸5g（0.0305mol）置于250mL圆底烧瓶中，加入乙酸酐15mL，摇匀，140℃反应4小时，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，乙醇重结晶，得到白色粉末状化合物即为对乙酰肉桂酸。将制备的对乙酰肉桂酸置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得乙酰肉桂酰氯初产品，加入15mL THF，稀释，将称量好的磺胺对甲氧嘧啶8.55g（0.0305mol）加入其中，再加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，反应结束后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得浅白色固体，加入盐酸(6mL)，60℃水浴下搅拌回流3小时后停止反应，减压蒸去溶剂，冷却后加入蒸馏水（水的加入量可以是水与反应物肉桂酸衍生物的摩尔数之比为1：150），沉淀析出，减压抽滤，取沉淀，四氢呋喃和甲醇（V/V=1:1）重结晶得到此目标化合物。得到纯的化合物为浅黄色粉末，产率为80%，用甲醇和THF（V/V=1:1）对该化合物进行两次重结晶，得到无色块状晶体。Rf=0.32GF254(EtOAc/PE=3:1)。mp:243-245°C，MS:m/z425.03，calcd426.45，1H-NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm):δ3.783(s，3H，-OCH3);6.607–6.659(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz);6.827–6.856(d，2H，Ar-H，J=8.7Hz);7.474–7.502(d，2H，Ar-H，J=8.7Hz);7.531–7.582(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz);7.853-7.882(d，2H，Ar-H，J=8.7Hz);7.966–7.937(d，2H，Ar-H，J=8.7Hz);8.295(s，2H，Py-H);10.008(s，1H，-OH);10.480(s，1H，-CO-NH);11.415(s，1H，-SO2-NH).13C NMR(75MHz，DMSO)δ:56.68，116.36，118.36，118.94，125.97，129.25，130.22，134.53，141.93，143.77，145.08，150.07，151.46，159.91，165.02.Anal.calcd.for C20H18N4O5S:C，56.33;H，4.25;N，13.14.Found:C，56.28;H，4.20;N，13.20.IR data(KBr pellets，cm-1):3676(m)，3361(m)，3177(w)，1670(w)，1600(s)，1512(m)，1422(m)，1442(m)，1278(m)，1171(s)and946(m).
实施例3 间羟基肉桂酰磺胺氯吡嗪（化合物3）的制备
称取间羟基肉桂酸5g（0.0305mol）置于250mL圆底烧瓶中，加入乙酸酐15mL，摇匀，140℃反应4小时，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，乙醇重结晶，得到白色粉末状化合物即为对乙酰肉桂酸。将制备的对乙酰肉桂酸置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得乙酰肉桂酰氯初产品，加入15mL THF，稀释，将称量好的磺胺氯吡嗪钠9.90g（0.0305mol）加入其中，再加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，反应结束后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得浅白色固体，加入盐酸(6mL)，60℃水浴下搅拌回流3小时后停止反应，减压蒸去溶剂，冷却后加入蒸馏水（水的加入量可以是水与反应物肉桂酸衍生物的摩尔数之比为1：150），沉淀析出，减压抽滤，取沉淀，四氢呋喃和甲醇（V/V=1:1）重结晶得到此目标化合物，得到的化合物为黄色粉末，产率68%，Rf=0.42GF254(EtOAc/PE=1.5:1).mp:188–190°C，MS:m/z429.1，calcd，430.05，1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:6.730–6.782(d，1H，-C=C-H，J=15.9Hz)，6.818-6.851(m，Ar-H，1H)，7.010(s，Ar-H，1H)，7.046-7.072(d，1H Ar-H)，7.220-7.272(m，1H Ar-H)，7.515-7.567(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz)，7.884-7.979(m，4H，Ar-H)，8.307-8.338(d，2H，Ar-H)，9.674(s，1H，-OH)，10.630(s，1H，-CO-NH)，11.898(s，1H，-SO2-NH).13C NMR(75MHz，DMSO)δ:114.43，117.82，119.26，119.59，121.76，129.37，130.54，132.73，133.27，136.15，137.52，142.04，144.23，145.94，147.87，158.21，164.62.Anal.calcd.for C19H15ClN4O4S(%):C，52.96;H，3.51;N，13.00;Found:C，52.84;H，3.62;N，13.24.3463(s)，1672(w)，1638(w)，1590(w)，1521(w)，1451(m)，1332(m)，1156(m)，848(s)，595(s).
实施例4 间乙酰肉桂酰磺胺（化合物4）的制备
称取对羟基肉桂酸5g（0.0305mol）置于250mL圆底烧瓶中，加入乙酸酐15mL，摇匀，140℃反应4小时，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，乙醇重结晶，得到白色粉末状化合物即为对乙酰肉桂酸。将制备的对乙酰肉桂酸置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得乙酰肉桂酰氯初产品，加入15mL THF，稀释，将称量好的磺胺5.25g（0.0305mol）加入其中，再加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，反应结束后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得浅黄色固体粗产品，产物用甲醇：THF=1:1进行重结晶，得到浅黄色粉末纯化合物，产率40%，Rf=0.35GF254(EtOAc/PE=1.5:1).mp:171-174oC，MS:m/z359.1，calcd，360.08，1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:δ:2.303(s，3H，-CH3)，6.840-6.892(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz)，7.177–7.215(m，1H，Ar-H)，7.275(s，2H，Ar-H)，7.423(s，1H，Ar-H)，7.472–7.561(m，2H，-NH2)，7.606-7.658(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz)，7.784-7.877(m，4H，Ar-H)，10.570(s，1H，-CO-NH).13C NMR(75MHz，DMSO)δ:21.32，119.29，121.34，123.37，123.79，125.79，127.25，130.63，136.59，138.96，140.41，142.52，151.40.Anal.calcd.for C17H16N2O5S(%):C，56.66;H，4.47;N，7.77;Found:C，56.45;H，4.36;N，7.62.3470(s)，1737(w)，1664(w)，1594(w)，1532(m)，1460(s)，1340(s)，1162(s)，848(s)，594(s).所有的谱学特征与目标化合物相吻合。
实施例5 间羟基肉桂酰磺胺（化合物5）的制备
称取间羟基肉桂酸5g（0.0305mol）置于250mL圆底烧瓶中，加入乙酸酐15mL，摇匀，140℃反应4小时，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，乙醇重结晶，得到白色粉末状化合物即为对乙酰肉桂酸。将制备的对乙酰肉桂酸置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得乙酰肉桂酰氯初产品，加入15mL THF，稀释，将称量好的磺胺5.25g（0.0305mol）加入其中，再加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，反应结束后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得浅黄色固体，待反应结束后，加入盐酸(6mL)，60℃水浴下搅拌回流3小时后停止反应，减压蒸去溶剂，冷却后加入蒸馏水（水的加入量可以是水与反应物肉桂酸衍生物的摩尔数之比为1：150），沉淀析出，减压抽滤，取沉淀，四氢呋喃和甲醇（V/V=1:1）重结晶得到黄色粉末，产率55%，Rf=0.38，GF254(EtOAc/PE=1.5:1).mp:180–182°C，MS:m/z317.2，calcd，318.07，1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:6.755-6.807(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz)，6.824–6.857(m，1H，Ar-H)，7.020(s，1H，Ar-H)，7.054-7.080(d，1H，Ar-H)，7.229–7.256(d，1H，Ar-H)，7.276(s，2H，-NH2)，7.519-7.571(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz)，7.785-7.880(m，4H，Ar-H)，9.679(s，1H，-OH)，10.543(s，1H，-CO-NH).13C NMR(75MHz，DMSO)δ:114.40，117.74，119.26，119.56，121.97，127.24，130.54，136.24，138.83，141.73，142.63，158.22，164.47.Anal.calcd.for C15H14N2O4S(%):C，56.59;H，4.43;N，8.80;Found:C，56.54;H，4.32;N，8.81.3467(s)，1672(w)，1624(w)，1591(w)，1533(m)，1453(m)，1279(w)，1158(w)，848(s)，594(s).所有的谱学特征与目标化合物相吻合。
实施例6 间乙酰肉桂酰磺胺氯哒嗪（化合物6）的制备
称取间羟基肉桂酸5g（0.0305mol）置于250mL圆底烧瓶中，加入乙酸酐15mL，摇匀，140℃反应4小时，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，乙醇重结晶，得到白色粉末状化合物即为对乙酰肉桂酸。将制备的对乙酰肉桂酸置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得乙酰肉桂酰氯初产品，加入15mL THF，稀释，将称量好的磺胺氯哒嗪9.90g（0.0305mol）加入其中，再加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，反应结束后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得浅白色固体粗产品，产物用甲醇：THF=1:1进行重结晶，得到淡黄色粉末化合物，产率60%，Rf=0.39GF254(EtOAc/PE=1.5:1)mp:166–168°C，MS:m/z471.2，calcd，472.06，1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:2.28(d，3H，-CH3)，6.827–6.879(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz);7.159-7.197(m，Ar-H，1H)，7.416(s，1H，Ar-H)，7.447-7.518(m，Ar-H，2H)，7.416(s，Ar-H，1H)，7.541-7.573(d，1H，Py-H，J=9.4Hz)，7.608-7.660(d，1H，-C=C-H，J=15.6Hz)，7.749-7.781(d，1H，Py-H，J=9.4Hz);7.868-7.940(m，，4H，Ar-H)，10.64(s，1H，-CO-NH)，12.47(s，1H，-SO2-NH).13C NMR(75MHz，DMSO)δ:21.29，119.41，121.34，123.21，123.82，125.83，128.72，130.59，136.51，140.65，143.67，151.38，154.72，164.32，169.63.Anal.calcd.forC21H17ClN4O5S(%):C，53.34;H，3.62;N，11.85;Found:C，53.23;H，3.65;N，11.87.3462(s)，1685(m)，1638(s)，1616(s)，1536(m)，1402(m)，1133(w)，848(s)，778(s)，601(s).
实施例7 间乙酰肉桂酰磺胺二甲嘧啶（化合物7）的制备
称取间羟基肉桂酸5g（0.0305mol）置于250mL圆底烧瓶中，加入乙酸酐15mL，摇匀，140℃反应4小时，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，乙醇重结晶，得到白色粉末状化合物即为对乙酰肉桂酸。将制备的对乙酰肉桂酸置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得乙酰肉桂酰氯初产品，加入15mLTHF，稀释，将称量好的磺胺二甲嘧啶8.49g（0.0305mol）加入其中，再加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，反应结束后，在旋转蒸发仪上蒸干溶剂，得浅白色固体粗产品，产物用甲醇：THF=1:1进行重结晶，得到淡黄色粉末化合物，产率60%，Rf=0.40GF254(EtOAc/PE=1.5:1).mp:132–136oC，MS:m/z465.1，calcd，466.13，1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:11.50(s，1H，SO2NH)，10.42(d，J=10.9Hz，1H，CONH)，9.54(s，1H，ArOH)，7.83(d，J=8.9Hz，2H，ArH)，7.70(d，J=8.9Hz，2H，ArH)，7.4(d，J=15.7Hz，1H，=CH)，7.02(d，J=8.6Hz，2H，ArH)，6.90(d，J=8.6Hz，2H，ArH)，6.62(d，J=15.7Hz，1H，=CH)，6.55(s，1H，C=CH)，2.27(s，9H，-CH3).13C NMR(75MHz，DMSO)δ:21.28，23.30，25.55，67.46，113.94，114.40，117.78，118.68，119.59，121.90，129.83，130.53，135.06，136.20，140.52，141.83，143.23，151.38，156.66，158.21，164.26，164.52，167.77.169.64.Anal.calcd.forC23H22N4O5S(%):C，59.22;H，4.75;N，12.01.Found:C，59.29;H，4.66;N，12.10.3471(s)，1637(m)，1458(m)，1340(w)，1140(m)，996(w)，849(s)，599(s).
实施例8 对甲氧基肉桂酰磺胺间甲氧嘧啶（化合物8）的制备
称取对甲氧基肉桂酸5g（0.028mol），置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得对甲氧基肉桂酰氯初产品，加入15mL THF进行溶解。称取磺胺间甲氧磺胺嘧啶（0.0262mol）置于装有对甲氧基肉桂酰氯圆底烧瓶中，加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，旋干溶剂，得粗产品，用甲醇/THF重结晶得到化合物8。产品为白色粉末，产率85%，Rf=0.62，GF254(EtOAc/PE=1.5:1).mp:244–246°C，MS:m/z439.1，calcd，440.47.1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:10.41(s，1H，CONH)，8.27(s，1H，Py-H)，7.76(d，J=9.0Hz，2H，ArH)，7.72(d，J=9.0Hz，2H，ArH)，7.45(d，J=15.7Hz，1H，CH=)，7.41(d，J=8.8Hz，2H，ArH)，6.84(d，J=8.8Hz，2H，ArH)，6.54(d，J=15.7Hz，1H，CH=)，6.20(s，1H，Py-H)，3.66(m，6H，OCH3).13CNMR(75MHz，DMSO)δ:55.76，114.95，119.25，119.37，127.46，128.72，130.07，141.56，143.93，154.70，161.27，164.87.Anal.calcd.forC21H20N4O5S(%):C，57.26;H，4.58;N，12.72;Found:C，57.22;H，4.53;N，12.77.IR data(KBr pellets，cm-1):3374(s)，1684(w)，1596(s)，1516(s)，1389(s)，1331(s)，1258(s)，1161(s)，1091(s)，1041(s)，995(m)，813(m).
实施例9 对甲氧基肉桂酰磺胺噻唑（化合物9）的制备
称取对甲氧基肉桂酸5g（0.028mol），置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得对甲氧基肉桂酰氯初产品，加入15mL THF进行溶解。称取磺胺噻唑钠7.97g（0.0262mol）置于装有对甲氧基肉桂酰氯圆底烧瓶中，加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，旋干溶剂，得粗产品，用甲醇/THF重结晶白色粉末化合物，产率55%，Rf=0.24GF254(EtOAc/PE=1.5:1).mp:251–253°C，MS:m/z414.1，calcd，415.07，1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:12.62(s，1H，SO2NH)，10.39(s，1H，CONH)，7.75(d，J=9.0Hz，2H，ArH)，7.67(d，J=9.0Hz，2H，ArH)，7.51(d，J=15.7Hz，1H，CH=)，7.48(d，J=7.1Hz，2H，ArH)，7.15(d，J=4.6Hz，1H，Py-H)，6.90(d，J=7.1Hz，2H，ArH)，6.72(d，J=4.6Hz，1H，Py-H)，6.59(d，J=15.7Hz，1H，CH=)，3.66(t，J=13.4Hz，3H，OCH3).13C NMR(75MHz，DMSO)δ145.08(s)，134.58(s)，130.06(s)，129.25(s)，127.47(s)，118.97(s)，114.96(s)，56.68(s)，55.76(s).Anal.calcd.for C19H17N3O4S2(%):C，54.92;H，4.12;N，10.11;Found:C，54.80;H，4.15;N，10.24.IR data(KBr pellets，cm-1):3311(w)，3105(w)，1661(w)，1601(m)，1527(s)，1400(w)，1306(w)，1255(w)，1173(m)，1146(s)，1088(s)，908(m)，684(s).
实施例10 间甲氧基肉桂酰磺胺嘧啶（化合物10）的制备
称取间甲氧基肉桂酸5g（0.028mol），置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得对甲氧基肉桂酰氯初产品，加入15mL THF进行溶解。称取磺胺嘧啶6.58（0.0262mol）置于装有间甲氧基肉桂酰氯圆底烧瓶中，加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，旋干溶剂，得粗产品，用甲醇/THF重结晶得到白色粉末化合物，产率60%，MS:m/z409.1，calcd，410.45，1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:11.91(s，1H，SO2NH)，10.62(s，1H，CONH)，8.51(d，J=4.9Hz，2H，Py-H)，7.93(dd，J=30.2，8.9Hz，4H，Ar-H)，7.28(s，1H，Ar-H)，7.22(d，J=8.5Hz，2H，Ar-H)，7.04(t，J=4.9Hz，1H，Py-H)，7.02–6.95(m，1H，Ar-H)，6.84(d，J=15.6Hz，1H，CH=)，6.57(d，J=15.6Hz，1H，=CH)，3.80(s，3H，-CH3).13CNMR(75MHz，DMSO)δ164，162，160，142，141，138，136，130，127，122，120，119，116，113，55.Anal.calcd.for C20H18N4O4S(%):C，58.53;H，4.42;N，13.65;Found:C，58.55;H，4.38;N，13.53.IR data(KBr pellets，cm-1):3466(s)，1691(m)，1637(m)，1590(w)，1460(s)，1337(m)，1158(s)，848(s)，595(s).
实施例11 间甲氧基肉桂酰磺胺氯哒嗪（化合物11）的制备
称取间甲氧基肉桂酸5g（0.028mol），置于100mL的圆底烧瓶中，加入SOCl215mL，在80℃油浴下，搅拌回流反应6h，减压蒸去溶剂，得对甲氧基肉桂酰氯初产品，加入15mL THF进行溶解。称取磺胺氯哒嗪7.46（0.0262mol）置于装有对甲氧基肉桂酰氯圆底烧瓶中，加入吡啶5mL，冰浴搅拌反应1.5h后自然升温反应24h，旋干溶剂，得粗产品，用甲醇/THF重结晶得白色粉末化合物，产率66%，MS:m/z443.2，calcd，444.07，1H NMR(300MHz，DMSO-d6，δppm)δ:12.34(s，1H，SO2NH)，10.51(s，1H，CONH)，7.81(d，J=8.9Hz，2H，ArH)，7.75(d，J=8.9Hz，2H，ArH)，7.65(d，J=9.5Hz，1H，Py-H)，7.50(d，J=9.5Hz，1H，Py-H)，7.46(d，J=15.7Hz，1H，CH=)，7.26–7.18(m，1H，ArH)，7.11–7.05(m，2H，ArH)，6.86(dd，J=8.1，2.0Hz，1H，ArH)，6.71(d，J=15.7Hz，1H，CH=)，3.66(d，J=4.3Hz，3H，OCH3).13C NMR(75MHz，DMSO)δ170，164，159，143，141，136，134，130，128，122，120，119，116，113，91，55，54.Anal.calcd.for C20H17ClN4O4S(%):C，53.99;H，3.85;N，12.59;Found:C，53.75;H，3.77;N，12.69.IR data(KBr pellets，cm-1):3466(s)，1691(m)，1637(m)，1590(w)，1460(s)，1337(m)，1158(s)，848(s)，595(s).
药理实验例1 本发明合成的肉桂酸酰胺衍生物促抗凝活性
1材料、试剂
1.1实验材料
1.1.1受试药物
实施例1至11合成的化合物1至11。
1.1.2阳性药物
云南白药（云南白药集团股份有限公司生产；批准文号：国药准字253020798，生产批号：XBO30020105；规格:4g/瓶）。实验时用生理盐水配制成0.125mg/mL的药液，备用。
1.2实验试剂
活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)含量测定试剂盒（美国Instrumentation Laboratory公司），人血浆（广西医科大学附属医院提供）。
1.3仪器
Allegra64R台式高速离心机（美国Beekman公司产品）；HH-W三用恒温水浴箱（江苏省金坛市医疗仪器厂）；YXQG02型电热式蒸汽消毒器（山东新华医疗器械厂）；SW-CJ-2F双人双面净化操作台（江苏净化设备有限公司）。
1.4凝血四项指标测试的血浆制备
健康人体动脉取血，置于含有1/10体积的枸椽酸钠抗凝液的塑料管中，颠倒混匀，离心15min(3000rmp/min)，收集上清液。
1.5酚酸及类似物衍生物对活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)以及纤维蛋白原(FIB)含量的测定
分别在1mL的样品管中，加入新鲜的混合人血浆900μL，再分别加入100μL1.25mg/mL的化合物溶液(对照组为生理盐水)，配置成1:9的稀释浓度，按APTT、TT、PT、FIB试剂盒说明，在ACL-Advace全自动血凝分析仪上进行测试。
1.6数据处理：
数据采用spss数据处理软件，结果均用
表示，显著性采用单向方差分析（one-way analysis of variance，ANOVA）和Tukey’s计算。P﹤0.05为差异有统计学意义。
2实验结果
2.1化合物对凝血四项指标的影响（见表1-3和图1-4）
表1 化合物对APTT、PT、FIB以及TT指标的影响（n=3，浓度:0.125mg/mL）
表2 化合物对APTT、PT、FIB以及TT指标的影响（n=3，浓度:0.25mg/mL）
注：显著性采用ANOVA方法Tukey’s测试，与空白比较，*p<0.05；**p<0.01
通过凝血四项指标3个浓度的测试，发现化合物4、5、10、11对凝血指标的影响比较大，其中化合物4、5对四个指标都有较大影响，化合物10主要影响APTT和PT。在低浓度时，对位和间位羟基肉桂酸形成的化合物对FIB的影响比较大。其中化合物1、2、3、8、9在测试的三个浓度范围内（0.0625，0.125，0.25mg/mL）具有一定促凝活性；4和5则具有抗凝活性。化合物10则在低浓度表现促凝，在高浓度表现抗凝活性。上述指标中，化合物对TT的影响最为显著。其中，化合物4、10、5、7在0.125mg/mL浓度时显著延长TT凝血时间，分别比空白组延长了120%、123%、50.67%、36.03%，也都比阳性对照化合物（云南白药，延长14.77%）延长的时间要长，说明该类化合物对凝血酶或纤维蛋白的聚合有很强的抑制作用。
药理实验例2 本发明合成的肉桂酸酰胺衍生物血浆复钙实验
1材料、试剂
通过凝血四项的筛选，将血液生理活性较好肉桂酸酰胺衍生物（1、2、3、4、5、8、10、11）进行血浆复钙实验（浓度范围为1.25×10-1～1.25×10-5mg/mL）。其中，在凝血四项中，筛选出的具有一定促凝作用的代表性化合物为1、2、3、8；具有一定抗凝作用的化合物为4、5、11；而化合物10在低浓度促凝，高浓度抗凝。分别对这些化合物做五个浓度的血浆复钙时间影响实验。实验数据如表4所示。
1.1实验原理
复钙时间（RT）：由于抗凝剂与血浆中的钙结合，使凝血过程中断，在血浆中加入适量的促凝剂后，血液的凝固过程即可继续进行。所以，一般情况下抗凝血液在不加外来物质情况下是不会发生凝集的。
一般以药物凝血时间比空白对照组缩短10%以上者认为有效。
1.2仪器
HH-W三用恒温水浴箱（江苏省金坛市医疗仪器厂）；YXQG02型电热式蒸汽消毒器（山东新华医疗器械厂）；SW-CJ-2F双人双面净化操作台（江苏净化设备有限公司）。
1.3实验原料
实施例所得化合物1、2、3、4，5、8、10、11。
1.4血浆分装
将试剂瓶（棕色，50mL）、移液管及试管放入电热式蒸汽消毒器，盒盖拧紧加热，至0.5mPa时放气到0mPa，然后加热至压力升到120mPa时，维持在该压力下加热30min，消毒完毕放气拿出。
将消毒后的实验材料放到净化操作台上，点燃酒精灯，用医用酒精对要接触血浆的所有物品进行消毒，然后将血浆在37℃水浴解冻，解冻后按每10mL血浆装一瓶进行分装，分装后放入冰箱中进行冷冻，温度在-20℃以下。
1.5试剂配制
无糖磷酸盐（PBS）缓冲溶液：准确称量氯化钠7.5972克，氯化钾0.2013克，磷酸氢二钠4.2926，磷酸二氢钠0.2041克，用蒸馏水溶解，然后转移至1000毫升容量瓶，去离子水定容至刻度，常温保存，待用。
0.775%氯化钙溶液：准确称取分析纯氯化钙7.75克，用去离子蒸馏水定容到1000毫升容量瓶中。1.25mg/mL的衍生物溶液的配置：准确称量12.5mg的某衍生物，用10%的NaOH1滴助溶，用PBS缓冲液稀释，加入到10毫升的容量瓶，PBS定容至刻度，常温保存，溶液最终的pH=8.0.
2.6实验方案
分别用配置好的1.25mg/mL的酰胺衍生物溶液稀释10、100、1000、10000、100000倍，即浓度分别为1.25×10-1mg/mL、1.25×10-2mg/mL、1.25×10-3mg/mL、1.25×10-4mg/mL、和1.25×10-5mg/mL，然后进行血浆复钙实验。
取9支内径为10mm的玻璃洁净试管，前三支作为空白对照组，后六支作为样品组，进行血浆复钙实验。每支试管放入0.1mL血浆，37℃水浴恒温2min；在空白对照组中加入0.1mL PBS，在样品组中加入0.1mL某样品某浓度溶液，摇匀，恒温2min。然后每隔10s在一支试管中加入0.1mL0.775%的CaCl2溶液，按一定的顺序加，且在加第一支试管的同时开始计时。加完后，每隔10s倾斜一次试管，直到液面完全不动，即为复钙时间。以云南白药为阳性对照，建立药物浓度与复钙时间的药效关系，结果如表4。
表4 具有较好血液生理活性的肉桂酸酰胺衍生物的血浆复钙时间（n=6）
结果显示，化合物4在测试浓度范围之内主要表现抗凝活性，其余化合物在不同浓度区间则表现出不同活性。化合物1、2主要表现促凝活性，化合物4、8和11主要表现出抗凝活性。研究发现，化合物结构中含有-NH2时，对化合物的活性影响比较大，这可能与-NH2可以与血液中蛋白的氨基酸形成氢键，增强了结合作用力。在肉桂酸苯环上的取代为间位取代时，对凝血四项指标的影响较大；取代基团为甲氧基团取代对化合物的活性影响最大，其次是乙酰基，最后是羟基，可能是因为取代基团本身的极性不同，使得化合物在与血液中的因子结合时相互作用力也不同。
药理实验例3 本发明合成的肉桂酸酰胺衍生物小鼠离体子宫实验
1原料
实施例1-11所得的化合物1-11。
2主要仪器和试剂
电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，AL204），精密pH计（上海雷磁仪器厂，pHS-3C），恒温平滑肌（成都泰盟科技有限公司，HW-400S），移液枪（Finnpipette），生物张力传感器（成都泰盟科技有限公司，FT-100），氯化钠（广东光华化学厂有限公司），三羟甲基氨基甲烷（国药集团化学试剂公司），二甲亚砜（广东广华化学厂有限公司），乙烯雌酚注射液（广州白云山明兴制药有限公司），葡萄糖（广东光华化学厂有限公司）。
3实验动物
小鼠（昆明种）雌性鼠重量在25～30g，在实验之前，动物有一个星期的适应期，随意供应水和食物，动物合格号桂医动字第11004号，由广西中医学院实验动物中心提供。
4具体实验步骤
取25～30g以上处于动情期的雌性小鼠一批，实验前2日以已烯雌酚注射液0.1mL/只，可促使其进入动情期。实验时脱颈椎处死，剖腹，用手术剪剪去子宫系膜，在子宫二角相连处下端剪断，将子宫取出，置于有乐氏营养液的培养皿内，剪除附着在子宫上的脂肪组织和结缔组织。然后将子宫二角相连处剪开，取一角，剪取2cm，一端用标本钩钩上固定在浴槽底部，另一端用线结扎与传感器相连，张力调至0.5g左右。受检浴槽的营养液以浸没子宫为宜。恒温浴槽中不断冲常氧，恒温水浴温度为37±0.5℃。静置15min，待稳定后，描记正常曲线，加入配置好的化合物溶液，进行小鼠离体子宫实验，累积进样，测定其频率、最大张力及平均值，每个子宫使用时间不超过3h。观察并描记曲线变化张力及频率。
5数据处理
数据采用spss数据处理软件，结果果均用表示，显著性采用单向方差分析（one-way analysis of variance，ANOVA）和Tukey’s计算。加样前后样品的差异性，采用paired t-test with a two-tailed p-value或者采用EXCEL软件进行单因素方差分析和t-test检验。p<0.05为差异有统计学意义。
6溶液配制
Tris-HCl溶液（pH=7.4）：准确称量6.0g三羟基氨基甲烷，4.5g NaCl于1000mL的烧杯中，用适量的水溶解，用3mol/L的HCl调PH=7.4，常温保存，待用。
化合物溶液（1×10-3mol/L）：准确称取一定量实施例所得肉桂酸酰胺衍生物产品，溶于10ml DMSO，用Tris-HCl溶液稀释至50mL。
7实验结果
衍生物对小鼠离体子宫收缩频率的影响，实验结果见表5-6和图5-6。
表5 衍生物对小鼠子宫收缩频率的影响（n=6）
表6 衍生物对小鼠子宫平均张力的影响（n=6）
表6显示：化合物5在浓度19.61×10-5mol/L时比加药前有显著性差异（P<0.01），化合物2、4和10在低浓度时增加平均张力，化合物的其余浓度以及其它的化合物的各个浓度，在测试浓度范围之内，张力都是相对加药前减小的。说明化合物在一定浓度内具有抗凝的效果，结合凝血四项指标的结论，也就说明对于具有一定抗凝血作用的化合物4、5、7、11，同时对子宫的张力也起到抑制作用，增加抗凝作用；而对于具有一定促凝作用的化合物1、2、3、6、8、9和11，则说明抑制了子宫的张力，会使得化合物呈现更好的双向调节活性，使得化合物在促凝同时，由于组织的作用，达到不形成血栓的效果。
研究表明，化合物6和7加入后，在浓度为2.49×10-5mol/mL和4.98×10-5mol/mL时较给药前有较大幅度的减小（p<0.05）。不同浓度的化合物1和2的加入，都使得子宫收缩频率增加，说明化合物有兴奋子宫的作用，可以增加子宫的收缩作用能够直接防止产后的大出血。可以推测出化合物1和2具有直接收缩子宫以及毛细血管，达到直接止血目的，并有利于组织修复与再生，具有促凝活性。而在凝血四项中发现具有抗凝活性的化合物8和9，在离体子宫实验中的子宫收缩频率随着浓度增加频率降低，说明化合物的止血途径主要由内源凝血途径决定，组织因素的影响在其中起调节凝血过程的作用；化合物7加入以后，子宫的收缩频率都降低，与凝血四项指标抗凝血活性一致，说明化合物抗凝同时与外源凝血途径以及组织因素有关；其余化合物随着浓度增加频率先增大后减小，说明具有双向调节功能。
药理实验例4 部分血液生理活性好的化合物与人血清蛋白相互作用的实验
1材料、试剂
人血清白蛋白（HSA）（合肥博美（sigma分装)，98%)，氯化钠(广东光华化学厂有限公司)，三羟甲基氨基甲烷(国药集团化学试剂公司)，盐酸(广东汕头市西陇化工厂），二甲亚砜（广东广华化学厂有限公司），超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司），电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），精密pH计（上海雷磁仪器厂），荧光分光光度计（日本岛津（Shimadzu）），移液枪（Finnpipette），紫外-可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。
2实验方法
2.1实验样品：化合物1、4、5和10。
（1）溶液配制
1.0×10-4mol L-1人血清白蛋白(HSA)溶液：准确称取0.3300g HSA，用双蒸水溶解后转移至50mL容量瓶，然后再用双蒸水定容至刻度，置于4℃冰箱中待用。
Tris-HCl缓冲液：准确称取三(羟甲基)氨基甲烷6.0g，NaCl4.5g与1000mL烧杯中，用双蒸馏水溶解，使体积接近1000mL，用3mol·L-1HCl溶液调pH至7.4，常温下静置待用。
1.0×10-3mol L-1的衍生物溶液的配置：准确称取一定量衍生物，用10mL DMSO溶解，转移至50mL的容量瓶中，用Tris-HCl缓冲液定容至刻度，置于4℃冰箱中待用。
（2）测试步骤
取10支10mL比色管中，分别准确移入1.0mL的1×10-4mol L-1的人血清白蛋白（HSA）溶液，再分别移入0、0.02mL、0.04mL、0.06mL、0.08mL、0.1mL、0.12mL、0.14mL、0.16mL、0.18mL1.0×10-3mol L-1的衍生物样品溶液，然后用Tris-HCl缓冲液定容至刻度，混匀，常温放置过夜待用。
（3）样品扫描
用RF-5301PC荧光光度计记录样品荧光光谱和荧光强度，石英比色皿规格为1cm×1cm，且四面都是光面，激发和发射狭缝宽度为3nm，波长分辨率为nm。固定激发波长为295nm，扫描300-450nm波长范围内荧光光谱，同时测定样品的同步荧光光谱（△λ=15nm和△λ=60nm），分别扫描25，30和35℃时的荧光光谱。
3实验结果
（1）通过4个衍生物-HSA体系的荧光发射得到的HSA的猝灭常数如下表所示。
表7 25℃时衍生物对HSA荧光猝灭的Stern-Volmer猝灭常数
（2）通过对三个温度的荧光发射光谱的测定，可以通过计算得到结合常数和结合位点数（结果见表8）
表8 在三个温度下HSA-化合物的结合常数和结合位点数
（3）通过对在三个不同温度（25℃，30℃和35℃）对结合常数与温度的关系进行了研究，计算结果见表9。
表9 衍生物-HSA系统的热力学函数
（4）化合物-HSA结合距离的计算
根据
非辐射能量转移理论，算出血清白蛋白中色氨酸和配体之间的距离如表10所示。
表10 HSA-衍生物系统的能量转移参数
（5）通过Δλ=60nm和Δλ=15nm时不同浓度衍生物与HSA作用的同步荧光光谱，发现当Δλ=15nm时，发射峰都相对发生了蓝移，因为几乎所有的疏水氨基酸都会嵌入圆筒形成疏水空腔，蓝移效应表明酪氨酸残基周围极性减小，药物加入使疏水作用增大。当Δλ=60nm时，对于四个衍生物，在研究浓度范围内，也发生了微小的蓝移，表明化合物对HSA色氨酸残基微环境影响也有影响。
因此，通过荧光方法在模拟生理条件（pH=7.4，离子强度0.1mol L-1）下研究四个具有较好血液生理活性的肉桂酸酰胺衍生物与HSA相互作用，获得了化合物与人血清白蛋白作用的结合常数、结合位点数、结合距离以及能量转移参数，实验结果表明，化合物与HSA作用的荧光猝灭机理与静态猝灭机理模型一致，在化合物-HSA体系相互作用中，氢键、疏水相互作用和范德华力占主要地位。同步荧光光谱表明，化合物的加入，对HSA络氨酸和色氨酸氨残基微环境都有影响。因此，通过研究可以为化合物作为潜在的止血化瘀药物提供实验基础和理论依据。
研究结论
（1）化合物1、2、8、9的APTT值比加入化合物之前下降，说明化合物的加入可以引起血浆中Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ因子的活性增高，通过影响内源途径达到止血的目的，同时这些化合物的血浆复钙实验结果也显示这些化合物表现出了一定的促凝活性（化合物8除外，其血浆复钙结果显示，在低浓度主要表现出抗凝效果）；化合物6在三个浓度0.0625、0.125，0.25mg/mL都表现出了促凝活性，在凝血指标中分别表现出PT对比空白时缩短，说明化合物的加入，血浆中凝血酶原、Ⅴ因子、Ⅶ因子活性有所增强，化合物通过外源凝血途径起作用达到促凝的目的；化合物4、5、7、11通过内外源途径共同作用，起到抗凝的效果，化合11则延长了TT，说明它对凝血酶或纤维蛋白的聚合有抑制作用，化合物7在高浓度时表现出延长PT，通过影响外源途径达到抗凝效果；化合物10则表现出了双向血液生理活性，即高低浓度不同，表现的活性不同，其同时影响了凝血四项的四个指标，说明在共同作用下，使其在低浓度促凝、在高浓度抗凝。
（2）进行小鼠离体子宫实验发现化合物6和7在浓度为2.49×10-5mg/mL和4.98×10-5mg/mL时较给药前离体子宫频率有较大幅度的减小（P<0.05），具有抗凝血活性。化合物1和2使得子宫收缩频率增加，起兴奋子宫作用，具有促凝活性。化合物5在浓度19.61×10-5mol/L时，加药后比加药前强度下降，具有显著性差异（P<0.01）。化合物2、4和10在低浓度时增加平均张力，化合物的其余浓度以及其它的化合物的各个浓度的张力都是相对加药前减小，说明化合物在一定的浓度内具有抗凝效果。
（3）血液活性与结构之间的关系：本发明肉桂酸酰胺衍生物的结构中除了含有相同的基团-CO-NH-外，基团含有能形成强氢键的元素（给体或受体），可以增强化合物的血液生理活性，这可能会使得化合物与血液中的蛋白的氨基酸形成氢键，增强了结合作用力。在肉桂酸苯环上的取代为间位取代时，对凝血四项指标的影响较大，取代基团为甲氧基团取代对化合物的活性影响最大，其次是乙酰基，最后是羟基，这可能是因为取代基团的极性不同，使得化合物在与血液中各种因素结合时作用力也不同造成的差异。
（4）为了研究活性较好的化合物在血浆内的存储和运输以及结合情况，选择化合物1（促凝）、4（抗凝）、5（抗凝）及10（双向调节）与HSA进行作用。研究发现，它们都能很好地与HSA结合，结合模型为静态猝灭，化合物与HSA都以1:1的方式结合，结合距离都小于8nm，说明结合过程发生非辐射能量的转移，在化合物-HSA体系中，氢键、输疏水相互作用和范德华力对化合物与HSA的结合起主要作用。同步荧光光谱表明，化合物的加入，对HSA络氨酸和色氨酸氨残基微环境都有影响。
Claims (10)
1.肉桂酸酰胺衍生物，其特征在于该衍生物为以下通式的化合物之一：
其中，
R1为-H、-OH、-OAc或-OCH3，R2为-H、-OH、-OAc或-OCH3，
R3为-H、
2.根据权利要求1所述的肉桂酸酰胺衍生物，其特征在于该衍生物为以下化合物之一：
化合物1
化合物2
化合物3
化合物4
化合物5
化合物6
化合物7
化合物8
化合物9
化合物10
化合物11
3.根据权利要求1或2所述肉桂酸酰胺衍生物在制备止血药物中的应用。
4.化合物1、2、3、8或9在制备止血药物中的应用。
5.根据权利要求1或2所述肉桂酸酰胺衍生物在制备抗凝药物中的应用。
6.化合物4、5、7或11在制备抗凝药物中的应用。
7.根据权利要求1或2所述肉桂酸酰胺衍生物在制备止血抗凝双向调节药物中的应用。
8.化合物10在制备止血抗凝双向调节药物中的应用。
9.根据权利要求1所述肉桂酸酰胺衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
<1>将羟基肉桂酸溶于乙酸酐中，待完全溶解后，加入吡啶，140℃下搅拌回流4小时后停止反应，减压抽滤得到白色粉末乙酰肉桂酸粗品，用乙醇重结晶得到乙酰肉桂酸纯品；加入的羟基肉桂酸、乙酸酐的摩尔比为1∶5；
<2>将步骤<1>得到的乙酰肉桂酸溶于二氯亚砜中，乙酰肉桂酸与二氯亚砜的摩尔比为1∶7，在80℃油浴下搅拌回流6小时后停止反应，减压蒸去溶剂，加入四氢呋喃稀释得到溶液；
<3>在冰浴条件下将磺胺类药物加入到步骤<2>所得的溶液中，加入吡啶，冰浴搅拌1.5h，常温搅拌24小时后停止反应；加入的磺胺类药物、吡啶与步骤<2>的乙酰肉桂酸的摩尔比为1：2：1；
<4>待步骤<3>反应结束后，减压蒸去溶剂，在反应混合物中加入蒸馏水，蒸馏水与反应物肉桂酸衍生物的摩尔比为1∶150，产物沉淀析出，减压过滤，水洗沉淀，再用体积比为1∶1的四氢呋喃和甲醇混合溶液对沉淀重结晶得到乙酰肉桂酸衍生物；
或待步骤<3>反应结束后，减压蒸去溶剂，加入浓盐酸，浓盐酸与步骤<1>的羟基肉桂酸的体积摩尔比为6mL∶0.0305mol，60℃水浴下搅拌回流3小时后停止反应，减压蒸去溶剂，冷却加入蒸馏水，蒸馏水与反应物肉桂酸衍生物的摩尔比为1∶150，沉淀析出，减压抽滤，水洗，取沉淀，再用体积比为1∶1的四氢呋喃和甲醇混合溶液对沉淀重结晶得到羟基肉桂酸衍生物。
10.根据权利要求9所述的肉桂酸酰胺衍生物的制备方法，其特征在于步骤<3>中的磺胺类药物是磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪钠、磺胺、磺胺氯哒嗪钠、磺胺二甲氧嘧啶钠或磺胺噻唑。
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