CN103285072B - 包含金丝桃苷的提取物及其医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药和药物化学领域,涉及包含金丝桃苷的提取物及其医药用途。本发明还涉及包含金丝桃苷和/或其可药用盐的提取物。具体地,本发明涉及金丝桃苷或其可药用盐或者本发明的提取物或者本发明的药物组合物在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物或者减肥药物中的用途,能够有效地用于治疗和/或预防和/或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病或者减肥。
Description
技术领域
本发明属于中药和药物化学领域,涉及包含金丝桃苷的提取物及其医药用途。
背景技术
肥胖症作为一种全身性内分泌代谢疾病,已成为世界范围内的流行病。它不但影响体态和活动,而且与高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、糖尿病等疾病密切相关。由于饮食节制和增加运动通常不能达到满意的减肥效果,故药物治疗已成为肥胖症的重要治疗手段。
肥胖发生的原因是多方面的,如遗传因素、环境因素、饮食习惯等,其中高脂饮食是导致肥胖的重要原因。近年来,药物治疗是治疗肥胖症的有效手段之一,通过减少脂肪吸收达到治疗目的。胰和胃脂肪酶是肠道中脂肪消化吸收所必需的。食物中的脂肪被水解为单酰甘油和游离脂肪酸后,在肠道被吸收,然后在体内重新合成脂肪,造成脂肪堆积,最终可导致肥胖。应用脂肪酶抑制剂可有效抑制肠道中脂肪酶对脂肪的分解催化作用,达到减少脂肪吸收、控制和治疗肥胖的目的。因而开发和应用有效的脂肪酶抑制剂,受到人们的关注。
虽然新型减肥药作用靶点不断被发现,也开发了一些看来有前景的药物,但多数药物都还处在早期开发阶段,其疗效与安全性尚未可知。目前,美国FDA只批准了2种药物可以长期用于肥胖症治疗:sibutramine和orlistat。但这两种药都有明显的不良反应:sibutramine的副作用主要有口渴、便秘、头晕和失眠,orlistat的不良反应主要是胃肠道症状,常见的有腹泻腹痛、油性斑点、胃肠胀气等,其长期效果也有待于进一步评价。
金丝桃苷属于黄酮醇苷类化合物,拉丁名为Hyperoside,英文名为Hyperin,异名为田基黄苷、海棠因,化学名为槲皮素-3-O-β-半乳糖苷(Quercetin-3-O-β-galactoside),结构如下面的式I所示。
式I
金丝桃苷存在于各种植物体体内,譬如,金丝桃科、蔷薇科、桔梗科、唇型科、小薜科、杜鹃花科、葵科等的果实及全草。文献报道金丝桃苷有抗过敏、解痉、利尿、显著止咳、降血压、降低胆固醇及血脂、蛋白同化、胃黏膜及肝组织保护,增强免疫及抗抑郁等作用,但目前研究最多的是局部和中枢镇痛作用及对心脑血管的保护作用(李敏芳等.金丝桃苷药理作用研究进展.中国中医药信息杂志,2008,15(4):102-104;张成伟等.金丝桃苷药理作用研究进展.安徽医药,2007,11(11):961-962)。
目前,尚需要发现新的用于防治肥胖症的药物。
发明内容
本发明人经过深入地探索和分析,进行了大量的研究,从豆科的一种植物田皂角(拉丁名为Aeschynomene indica L,一年生亚灌木状草本,生于潮湿地或水边,分布于华北、华东、中南、西南等地。异名:合萌,水茸角,合明草,木排豆,野皂角等多种异名)中分离得到了金丝桃苷,并且惊奇地发现,该化合物具有良好减肥效果,具有作为治疗和/或预防和/或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病药物或者减肥药物的潜力。由此提供了下述发明:
本发明的一个方面涉及包含金丝桃苷和/或其可药用盐的提取物。具体地,所述提取物可以是乙醇提取物。
根据本发明任一项所述的提取物,其中,所述提取物中金丝桃苷的含量为大于或等于0.73%(w/w);优选地,为大于或等于3.28%(w/w);更优选地,为大于或等于8.20%(w/w);进一步优选地,为大于或等于32.8%(w/w)。
根据本发明任一项所述的提取物,其中,所述提取物为豆科植物提取物;具体地,为合萌属植物提取物;更具体地,为田皂角提取物。
根据本发明任一项所述的提取物,其通过如下步骤1)、步骤1)至2)、或步骤1)至3)制得:
1)取豆科植物或合萌属植物或田皂角地上部分1kg,加入6-10倍体积30%-95%乙醇(v/v)(优选50%-70%乙醇,例如50%、60%、70%)回流提取1次或多次(优选3次),每次大于或等于1小时(优选1-2小时);
2)抽滤,滤液合并,浓缩至原药材重量的1.8-2.2倍(例如1.8、1。9、2.0、2.1、或2.2倍,优选2倍),离心,得上清液;
3)将上清液注入大孔吸附树脂柱(优选D101大孔树脂),用小于或等于10%的乙醇溶液洗脱除去杂质后,再用大于或等于11%的乙醇(优选大于或等于45%)洗脱(例如2倍柱体积),收集大于或等于11%的乙醇(优选大于或等于45%)洗脱部分浓缩后冻干。
根据本发明任一项所述的提取物,其中,所述提取物的制备还包括如下步骤:
4)将步骤3)中得到的产物用适量(能够完全溶解所述产物的量)二氯甲烷和甲醇1∶1混合液溶解后用硅胶(50g左右)拌样,,进行硅胶柱层析(500g硅胶装柱,200-300目),乙酸乙酯∶甲醇∶水=10∶2∶1洗脱;收集第一柱体积(流分TZJ-1),浓缩并冻干;
优选地,还包括如下步骤:
5)将步骤4)中得到的产物进行sephadex LH-20凝胶柱层析分离,根据TLC检测收集并浓缩。
本发明的另一方面涉及一种药物组合物,其包含有效量的本发明中任一项所述的提取物,和/或包含金丝桃苷和/或其可药用盐;可选地,所述药物组合物还包含药学上可接受的载体或辅料。
通常本发明药物组合物含有0.1-90重量%的金丝桃苷和/或其可药用盐和/或包含金丝桃苷和/或其可药用盐的提取物。药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时,如果需要,可将金丝桃苷和/或其可药用盐与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合,制成可作为人用的适当的施用形式或剂量形式。
金丝桃苷和/或其可药用盐或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药,给药途径可为肠道或非肠道,如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、脂质体、透皮剂、口含片、栓剂、冻干粉针剂等。可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸收剂,如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等;湿润剂与粘合剂,如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等;崩解剂,例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等;崩解抑制剂,例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等;吸收促进剂,例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等;润滑剂,例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片,例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片,或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如稀释剂与吸收剂,如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Ge luc i r e、高岭土、滑石粉等;粘合剂如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等;崩解剂,如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂,可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是,例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊,将有效成分金丝桃苷和/或其可药用盐与上述的各种载体混合,并将由此得到的混合物置于硬的明明胶囊或软胶囊中。也可将有效成分金丝桃苷和/或其可药用盐制成微囊剂,混悬于水性介质中形成混悬剂,亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂,如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂,可以使用本领域常用的所有稀释剂,例如,水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外,为了制备等渗注射液,可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油,此外,还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。
此外,如需要,也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
金丝桃苷和/或其可药用盐或者本发明的药物组合物的给药剂量取决于许多因素,例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度,患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应,所用的具体化合物,给药途径及给药次数等。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个,例如二、三或四个剂量形式给药。
本文所用的术语“组合物”意指包括包含指定量的各指定成分的产品,以及直接或间接从指定量的各指定成分的组合产生的任何产品。
可改变本发明药物组合物中各活性成分的实际剂量水平,以便所得的活性化合物量能有效针对具体患者、组合物和给药方式得到所需的治疗反应。剂量水平须根据具体化合物的活性、给药途径、所治疗病况的严重程度以及待治疗患者的病况和既往病史来选定。但是,本领域的做法是,化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始,逐渐增加剂量,直到得到所需的效果。
本发明的再一方面涉及金丝桃苷或其可药用盐或者本发明中任一项所述的提取物或者本发明任一项所述的药物组合物在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病的药物或者减肥药物中的用途;具体地,所述肥胖症相关疾病为高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、或糖尿病。
本发明的再一方面涉及一种治疗和/或预防和/或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病或者减肥的方法,包括给予受试者有效量的金丝桃苷或其可药用盐或者本发明中任一项所述的提取物或者本发明任一项所述的药物组合物的步骤。
当用于上述治疗和/或预防或辅助治疗时,治疗和/或预防有效量的金丝桃苷和/或其可药用盐可以以纯形式应用,或者以药学可接受的酯或前药形式(在存在这些形式的情况下)应用。或者,可以以含有金丝桃苷和/或其可药用盐与一种或多种药物可接受赋形剂的药物组合物给药。但应认识到,金丝桃苷和/或其可药用盐或者本发明的药物组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者,具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定,所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度;所采用的具体化合物的活性;所采用的具体组合物;患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食;所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率;治疗持续时间;与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物;及医疗领域公知的类似因素。例如,本领域的做法是,化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始,逐渐增加剂量,直到得到所需的效果。一般说来,金丝桃苷和/或其可药用盐用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001-1000mg/kg体重/天,例如介于0.01-100mg/kg体重/天,例如介于0.01-10mg/kg体重/天。
金丝桃苷和/或其可药用盐或者本发明的药物组合物可以有效地预防和/或治疗和/或辅助治疗本发明所述的各种疾病或病症。
本发明的再一方面涉及金丝桃苷或其可药用盐或者本发明中任一项所述的提取物或者本发明任一项所述的药物组合物在制备抑制脂肪酶活性或调节脂肪酶活性的药物或者试剂中的用途。
本发明的再一方面涉及一种在体内或体外抑制或调节脂肪酶活性的方法,包括使用有效量的丝桃苷或其可药用盐或者本发明中任一项所述的提取物或者本发明任一项所述的药物组合物的步骤。
本发明的再一方面涉及一种制备金丝桃苷或者包含金丝桃苷的提取物的方法,其特征在于使用田皂角为原料;
具体地,包括下述步骤(例如下面的步骤1)、步骤1)至2)、步骤1)至3)、步骤1)至4)、步骤1)至5)、或者步骤1)至6)):
1)取豆科植物或合萌属植物或田皂角地上部分1kg,加入6-10倍体积30%-95%乙醇(v/v)(优选50%-70%乙醇,例如50%、60%、70%)回流提取1次或多次(优选3次),每次大于或等于1小时(优选1-2小时);
2)抽滤,滤液合并,浓缩至原药材重量的1.8-2.2倍(例如1.8、1。9、2.0、2.1、或2.2倍,优选2倍),离心,得上清液;
3)将上清液注入大孔吸附树脂柱(优选D101大孔树脂),用小于或等于10%的乙醇溶液洗脱除去杂质后,再用大于或等于11%的乙醇(优选大于或等于45%)洗脱(例如2倍柱体积),收集大于或等于11%的乙醇(优选大于或等于45%)洗脱部分浓缩后冻干;
4)将步骤3)中得到的产物用适量(能够完全溶解所述产物的量)二氯甲烷和甲醇1∶1混合液溶解后用硅胶(50g左右)拌样,,进行硅胶柱层析(500g硅胶装柱,200-300目),乙酸乙酯∶甲醇∶水=10∶2∶1洗脱;收集第一柱体积(流分TZJ-1)浓缩并冻干;
5)将步骤4)中得到的产物进行sephadex LH-20凝胶柱层析分离,根据TLC检测收集并浓缩;
6)将步骤5)中得到的产物通过半制备高效液相色谱进行纯化;
具体地,
步骤6)中所述半制备高效液相色谱的条件如下:
流动相A为乙腈∶甲醇=1∶1;
流动相B为0.2%乙酸水溶液;
A∶B=31∶69;
流速:4mL/min;
色谱柱:C18半制备柱(10*250mm,5μm);
保留时间Rt为10.3min;
DAD检测器检测波长为254或365nm。
本发明的再一方面涉及豆科植物或合萌属植物或田皂角在制备金丝桃苷或其可药用盐或者本发明任一项所述的提取物中的用途。
本发明中,
术语“有效量”是指可在受试者中实现治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的剂量。
术语“受试者”可以指患者或者其它接受金丝桃苷或其可药用盐或者本发明中任一项所述的提取物或者本发明任一项所述的药物组合物以治疗、预防、减轻和/或缓解本发明所述疾病或病症的动物,特别是哺乳动物,例如人、狗、猴、牛、马等。
术语“疾病和/或病症”是指所述受试者的一种身体状态,该身体状态与本发明所述疾病和/或病症有关。
在本发明中,如果没有特别说明,所述甲醇溶液(水溶液)或者乙醇溶液(水溶液)的浓度均指体积浓度(v/v)。
本发明中所述的田皂角,如果没有特别说明,优选地,为田皂角的地上部分。
发明的有益效果
金丝桃苷或其可药用盐或者本发明的提取物或者本发明的药物组合物能够有效地抑制脂肪酶活性,减少脂肪吸收,抑制体重增加,能够用于治疗和/或预防和/或辅助治疗肥胖症或肥胖症相关疾病或者减肥。
附图说明
图1:上图是254nm波长下检测的图谱,下图是365nm波长下检测的图谱。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1:金丝桃苷的分离纯化及活性评价(金丝桃苷可以商购)
取田皂角(购自南阳市康正医药有限公司)地上部分1kg,加入6-10倍体积(第1次为8倍体积、2次为6倍体积、3次为6倍体积)50%乙醇(v/v)回流提取3次,每次1小时;抽滤,滤液合并,得到合并液,浓缩合并液至原药材重量的2倍,离心,得上清液;将上清液注入D101大孔树脂,10%乙醇溶液(v/v)洗脱除去杂质后,再用45%乙醇(v/v)洗脱2倍柱体积,收集45%乙醇(v/v)洗脱部分浓缩后冻干,即得田皂角有效部位50g。
田皂角有效部位用适量(能够完全溶解田皂角有效部位的量)二氯甲烷和甲醇1∶1混合液溶解后用50g左右硅胶拌样,500g硅胶装柱(200-300目),进行硅胶柱层析,乙酸乙酯∶甲醇∶水=10∶2∶1洗脱。收集第一柱体积(流分TZJ-1)浓缩并冻干,得干粉20g。
取TZJ-1干粉20g,进行sephadex LH-20凝胶柱层析分离,根据TLC检测(TLC检测条件为正相硅胶板:展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水=1∶5∶1∶0.3,金丝桃苷的Rf值约为0.36,),收集并浓缩含有金丝桃苷的部位TZJ-1E(2.5g)。最后用半制备高效液相色谱进行纯化得到金丝桃苷约250mg。
液相条件:流动相A为乙腈∶甲醇=1∶1,B为0.2%乙酸水溶液
A∶B=31∶69;流速:4mL/min;色谱柱:C18半制备柱(10*250mm,5μm);保留时间Rt为10.3min;DAD检测器检测波长为254或365nm(图1)。
另外,经检测,上面各步骤得到的提取物中的金丝桃苷的含量如下:
在合并液中的含量为0.73%,经过大孔树脂得到的有效部位的含量为3.28%,经过硅胶柱层析后的所得产物中的含量为8.20%,经过sephadex LH-20凝胶部分的含量为32.8%。
实施例2:金丝桃苷对小鼠脂肪吸收的影响(体内脂肪酶抑制活
性的检测)
脂肪组织主要由富含甘油三酯的脂肪细胞组成,甘油三酯是人体内脂肪的主要储存形式,是脂类代谢的重要指标之一。脂肪酶是一种特殊的酯键水解酶,它可作用于甘油三酯的酯键,使甘油三酯降解为甘油二酯、单甘油酯、甘油和脂肪酸。从而可以推断该甘油三酯浓度与脂肪酶的活性及脂肪吸收的量有直接的关系。
具体实验方法可以参考:Sugiyama H,Akazome Y,Shoji T,etal.Oligomeric procyanidins in apple polyphenol are main activecomponents for inhibition of pancreatic lipase and triglycerideabsorption.J Agric Food Chem.2007,55:4604-4609,也可以参考如下的步骤:
1.实验材料
动物:雄性ICR小鼠分为对照组和给药组(按体重对等原则随机分组);体重-30g左右;动物来源-购于北京维通利华实验动物技术有限公司
金丝桃苷:按照实施例1中的方法制备,也可以商购;
阳性对照药物奥利司他(Orlistat),购于金像大药房;
抗凝剂EDTA,购于北京化学试剂公司;
玉米油,购于超市发超市;
测定甘油三酯含量试剂盒,购于中生北控生物科技股份有限公司。
2.实验方法
a.分组,给药
将30g左右的雄性ICR小鼠分为对照组和给药组,每组8只。禁食不禁水20h左右后给药,对照组以5mL/kg的剂量灌胃给予玉米油,给药组则给予等剂量的玉米油的同时,给予不同剂量的受试药,其中阳性药奥利司他的剂量为12.5mg/kg。在给予玉米油后2h剪尾取血,制备血浆(EDTA抗凝)。用中生北控试剂盒测定甘油三酯含量,最后计算出血脂升高抑制率。
b.观察指标及测定方法
检测指标:血浆甘油三酯浓度
测定方法:参照中生北控生物科技股份有限公司的测甘油三酯试剂盒说明书
3.实验结果
如下面的表1所示。
表1:小鼠脂肪餐负荷试验
由表1可见,金丝桃苷具有耐脂肪吸收效果,能够有效地抑制脂肪酶活性(例如在体内抑制脂肪酶活性)。
实施例3:金丝桃苷对营养型肥胖小鼠体重的影响
实验方法可以参考:刘英华,张永,于晓明,等.中链脂肪酸改善高脂饲料短期和长期喂养C57BL/6J小鼠的脂蛋白水平的作用.实验预防医学,2011,18(9):1610-1613;李涛,籍保平,周峰,等.红茶菌对饮食诱导肥胖小鼠体重控制的研究.食品科学,2009,30(11):246-251;也可以参考如下的步骤:
1.实验材料
动物:C57BL/6J雄性小鼠(3-4周龄)分为对照组和给药组(按体重对等原则随机分组);体重-16-18g左右;动物来源-购自北京维通利华实验动物技术有限公司;
高脂饲料D12492及低脂肪热能饲料D12450B,购自上海睿安生物科技有限公司;
金丝桃苷:按照实施例1中的方法制备,也可以商购;
阳性对照药物奥利司他(Orlistat),购自金像大药房。
2.实验方法
a.造模,分组及给药
将C57BL/6J雄性小鼠在实验环境下喂普通饲料7d,称体重,随机分成2组:空白对照组小鼠(共10只)从实验开始至结束用低脂饲料喂养,其余小鼠均喂高脂饲料。高脂饲料喂养4周后,小鼠的体重超过低脂饲料喂养小鼠体重的20%作为实验肥胖小鼠。实验肥胖小鼠分为4组,模型对照、阳性对照(25mg/kg的orlistat)、金丝桃苷高剂量组(100mg/kg),金丝桃苷低剂量组(50mg/kg),每组10只,每日灌胃1次,连续给药7周后结束实验。
b.观察指标
体重
3.实验结果
如下面的表2所示。
表2:金丝桃苷对营养型肥胖小鼠体重的影响
*p<0.05,与模型对照组相比
由表2可见,实验各组初始体重差异无统计学意义(p>0.05);治疗结束时,模型对照组与正常对照组比较,体重显著升高;阳性对照组、金丝桃苷高剂量组、金丝桃苷低剂量组与模型对照组比较,体重显著降低,表明金丝桃苷具有抑制小鼠体重增加作用,能够用于防治和/或辅助治疗肥胖症或其相关疾病。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述,本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导,可以对那些细节进行各种修改和替换,这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
Claims (17)
1.包含金丝桃苷和/或其可药用盐的提取物,其中,所述提取物为田皂角提取物;
所述提取物的制备方法包括如下步骤:
1)取田皂角地上部分1kg,加入6-10倍体积30%-95%乙醇(v/v)回流提取1次或多次,每次大于或等于1小时;
2)抽滤,滤液合并,浓缩至原药材重量的1.8-2.2倍,离心,得上清液;
3)将上清液注入大孔吸附树脂柱,用小于或等于10%的乙醇溶液洗脱除去杂质后,再用大于或等于11%的乙醇洗脱,收集大于或等于11%的乙醇洗脱部分浓缩后冻干。
2.根据权利要求1所述的提取物,其中,所述提取物中金丝桃苷的含量为大于或等于0.73%(w/w)。
3.根据权利要求1所述的提取物,其中,所述提取物中金丝桃苷的含量为大于或等于3.28%(w/w)。
4.根据权利要求1所述的提取物,其中,所述提取物中金丝桃苷的含量为大于或等于8.20%(w/w)。
5.根据权利要求1所述的提取物,其中,所述提取物中金丝桃苷的含量为大于或等于32.8%(w/w)。
6.根据权利要求1所述的提取物,其制备方法还包括如下的步骤4)或者步骤4)至5):
4)将步骤3)中得到的产物用适量二氯甲烷和甲醇1:1混合液溶解后用硅胶拌样,进行硅胶柱层析,乙酸乙酯:甲醇:水=10:2:1洗脱;收集第一柱体积,浓缩并冻干;
5)将步骤4)中得到的产物进行sephadex LH-20凝胶柱层析分离,根据TLC检测收集并浓缩。
7.一种药物组合物,其包含有效量的权利要求1至6中任一项所述的提取物。
8.根据权利要求7所述的药物组合物,其还包含金丝桃苷和/或其可药用盐。
9.根据权利要求7或8所述的药物组合物,其还包含药学上可接受的载体或辅料。
10.如下的(1)-(2)中的任一项在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗肥胖症的药物或者减肥药物中的用途;或者在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗高脂血症、动脉粥样硬化或冠心病的药物中的用途:
(1)权利要求1至6中任一项所述的提取物,
(2)权利要求7至9中任一项所述的药物组合物。
11.权利要求1至6中任一项所述的提取物或者权利要求7至9中任一项所述的药物组合物在制备治疗和/或预防和/或辅助治疗糖尿病中的用途。
12.如下的(1)-(2)中的任一项在制备抑制脂肪酶活性或调节脂肪酶活性的药物或者试剂中的用途:
(1)权利要求1至6中任一项所述的提取物,
(2)权利要求7至9中任一项所述的药物组合物。
13.一种在体外抑制或调节脂肪酶活性的方法,包括使用有效量的如下的(1)-(2)中的任一项的步骤:
(1)权利要求1至6中任一项所述的提取物,
(2)权利要求7至9中任一项所述的药物组合物。
14.一种制备权利要求1至6中任一项所述包含金丝桃苷的提取物的方法,其特征在于使用田皂角为原料。
15.根据权利要求14所述的制备方法,其包括下述步骤:
1)取田皂角地上部分1kg,加入6-10倍体积30%-95%乙醇(v/v)回流提取1次或多次,每次大于或等于1小时;
2)抽滤,滤液合并,浓缩至原药材重量的1.8-2.2倍,离心,得上清液;
3)将上清液注入大孔吸附树脂柱,用小于或等于10%的乙醇溶液洗脱除去杂质后,再用大于或等于11%的乙醇洗脱,收集大于或等于11%的乙醇洗脱部分浓缩后冻干;
4)将步骤3)中得到的产物用适量二氯甲烷和甲醇1:1混合液溶解后用硅胶拌样,进行硅胶柱层析,乙酸乙酯:甲醇:水=10:2:1洗脱;收集第一柱体积浓缩并冻干;
5)将步骤4)中得到的产物进行sephadex LH-20凝胶柱层析分离,根据TLC检测收集并浓缩;
6)将步骤5)中得到的产物通过半制备高效液相色谱进行纯化。
16.根据权利要求15所述的制备方法,其中,步骤6)中所述半制备高效液相色谱的条件如下:
流动相A为乙腈:甲醇=1:1;
流动相B为0.2%乙酸水溶液;
A:B=31:69;
流速:4mL/min;
色谱柱:C18半制备柱(10*250mm,5μm);
保留时间Rt为10.3min;
DAD检测器检测波长为254或365nm。
17.田皂角在制备权利要求1至6中任一项所述的提取物中的用途。
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