CN103283687A

CN103283687A - 用白僵菌制备蛴螬僵虫的方法

Info

Publication number: CN103283687A
Application number: CN2013102483740A
Authority: CN
Inventors: 夏西超; 马瑜红; 黄川峰; 归改霞; 丁可; 张文娟; 刘荣志; 方家选
Original assignee: 夏西超
Priority date: 2013-06-21
Filing date: 2013-06-21
Publication date: 2013-09-11

Abstract

本发明公开了一种用白僵菌制备蛴螬僵虫的方法，该方法为：(1)菌种制备：将3株球孢白僵菌分离成3菌株，分别为菌株A、B和C，备用；(2)蛴螬僵虫制备：菌株A、B和C接种至液体培养基，活化后配制成菌液，采用体表喷布的方法将该菌液喷于蛴螬虫体体表，喷后正常饲养，当蛴螬虫体发病僵化后将虫子及时捡出，摊放于培养箱内培养，待其僵化，当虫体表长出白粉后干燥，干燥后的蛴螬虫体即为蛴螬僵虫。与现有技术相比，制备方法简便快捷，较适合大范围推广。蛴螬僵虫将在抗凝、抗血栓、抗惊厥、抗癌、降糖、降脂等具有广阔的应用价值；本发明不仅实现了昆虫利用领域的变废为宝，同时深化了虫菌结合技术，为僵虫蛴螬药用价值研究奠定了基础。

Description

用白僵菌制备蛴螬僵虫的方法

技术领域

本发明属于中医药技术领域，具体涉及一种用白僵菌制备蛴螬僵虫的方法。

背景技术

白僵菌是一种虫生真菌，寄主范围广泛，可寄生的昆虫宿主多达700多种，Bassi在1816年就发现家蚕硬化病(白僵病)是由一种类似于葡萄孢属的真菌引起，但直到1912年才将该菌归类为白僵菌属(Beauveria)；此后，关于白僵菌的研究逐渐展开。白僵菌具有对温血动物无害、易于培养、寄主范围广、致病力强、易随风扩散等特点，已成为寄生昆虫的主要真菌之一。我国最先使用白僵菌制备并应用于医药行业，最早记载《神农本草经》一书中，以后诸本草又不断有所增加。以虫类(主要是昆虫)的幼虫同某种真菌寄生而死亡，药用其类菌丝的虫体，如僵蚕，冬虫夏草，蝉花等，都具有很高的药用价值。

我国蛴螬资源丰富，分布大江南北，主要危害甘薯，花生，棉花等作物地下部分，其防治较为困难，农民对这种害虫防治主要采取捕捉方法。但蛴螬又是一味中药，药用价值早在《神农本草经》就有记载，其后历代医药典籍如《本草纲目》、《金匮要略》等也均有记载。蛴螬具有明目退翳的功效，对妇女经闭、瘤瘕的治疗效果也比较明显，外用可治疗丹毒、痈疽、痔漏、跌打损伤等。另外还可治疗小儿脐疮、小儿唇紧、痈疽痔漏、断酒不饮等。有关蛴螬的药理实验研究比较多，主要包括抗肿瘤活性、抗菌、保护肝脏以及其他方面等。目前，关于虫菌结合产物僵蚕制备和冬虫夏草人工制备已多有报道，而且在这些虫菌结合产物里面形成很多能够增强人体免疫力的物质，如多糖，多酚类。

发明内容

以家蚕和蝙蝠蛾幼虫分别作为原材料，以真菌作为侵染媒介，制备成僵蚕和冬虫夏草的技术已有很多报道，而且这些虫菌结合产物市场需求极大，其潜在应用价值广泛，备受很多专家和学者关注。但至今为止，还没有发现任何有关蛴螬僵虫制备的报道，本发明人经过反复研究，终于找到了僵虫蛴螬的制备方法，完成了本发明。本发明目的是提供一种用白僵菌制备蛴螬僵虫的方法。

为达到上述目的，本发明所述用白僵菌制备的方法为：

(1)菌种制备：将3株球孢白僵菌分离成3菌株，分别为菌株A、B和C，备用；

(2)、蛴螬僵虫制备：菌株A、B和C接种至液体培养基，活化后配制成10⁴个/mL～10⁷个/mL浓度级菌液，采用体表喷布的方法将该菌液喷于蛴螬虫体体表(比例为：1mL菌液/30～50头蛴螬幼虫)，喷后30min正常饲养，当蛴螬虫体发病僵化后将虫子及时捡出，摊放于培养箱内25℃培养，待其僵化，当虫体表长出白粉后干燥，干燥后的蛴螬虫体即为蛴螬僵虫。

本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明具有思路新颖，制备方法简便快捷，较适合大范围推广的优点。本发明制备的蛴螬僵虫将在抗凝、抗血栓、抗惊厥、抗癌、降糖、降脂等具有广阔的应用价值；此外，蛴螬僵虫制备和医学应用的大面积推广有助于为农民增收提供渠道。本发明僵虫蛴螬的制备不仅实现了昆虫利用领域的变废为宝，同时深化了虫菌结合技术，为僵虫蛴螬药用价值研究奠定了基础。

附图说明

图1是本发明制备的蛴螬僵虫。

具体实施方式

本发明所述用白僵菌制备的方法为：

(1)、菌种制备：由南阳地区仲景中药材市场购置僵蚕，研碎，常规方法分离出3株球孢白僵菌菌株，分别为菌株A、B和C，备用；

本发明僵虫蛴螬制备各组成份的用量是发明人经过长期大量摸索总结得来的，各组份用量在下述组分都具有较好的疗效：

蛴螬30～50头、白僵菌孢子10⁴个/mL～10⁷个/mL，菌株A，

蛴螬30～50头、白僵菌孢子10⁴个/mL～10⁷个/mL，菌株B，

蛴螬30～50头、白僵菌孢子10⁴个/mL～10⁷个/mL，菌株C

作为优选方案，上述的僵虫蛴螬制备，各配方组分为：

蛴螬50头、白僵菌孢子10⁶个/Ml，菌株A。

从河南南阳地区收集蛴螬，将不同白僵蚕分离的病原株进行培养基分离培养，观察各菌株的菌落特征，并通过光学显微镜对不同菌株的分生孢子形态进行观察鉴别。

将筛选出的最优菌株按10倍稀释法配制成10⁴个/mL～10⁷个/mL共4级浓度，虫30-50头将各试验菌种配制成10个/mL，采用体表喷布的方法将病原喷于不同蛴螬虫体体表，喷后30min正常饲养，当蛴螬虫体发病僵化后将虫子及时捡出，摊放于培养箱内25℃培养，待其僵化，当虫体表长出白粉后干燥，干燥后的蛴螬虫体即为蛴螬僵虫。

本发明所述蛴螬僵虫总蛋白的制备：

蛴螬僵虫粉碎成粉末，称取粉末2g，加入去离子水10mL室温浸泡过夜，随后加入30mL蛋白裂解液(购自生工生物公司)和0.05mol/L Tris-HCL(pH8.0)缓冲液60mL，混匀，静置30min，4℃、12000r/min离心30min，取上清即为获取水溶性蛋白，此水溶性蛋白冷却到0℃，逐步加入固体(NH₄)₂S0₄，4℃静置2h，12000r/min，离心30min，吸出上清液，收集沉淀，用蒸馏水溶解，并装入透析袋中，用蒸馏水在4℃中透析，脱盐，更换透析液至测不出(NH₄)₂SO₄为止；将透析袋放入吸水性强的聚乙二醇中，浓缩至小体积，离心除去沉淀，即得蛋白提取物。

本发明所述蛴螬僵虫多糖的制备：

取僵虫蛴螬粉末1.0g，加入蒸馏水，水浴提取，过滤，残渣再加入蒸

馏水提取，合并滤液，将滤液用蒸馏水定容至50mL，水提液加无水乙醇(水提液∶乙醇＝1∶4体积比)，放入冰箱4℃过夜，离心4000转/rain，10min，弃上清液，收集沉淀，干燥称重，得到粗多糖。

本发明制备的蛴螬僵虫总蛋白和多糖含量明显高于未用该菌处理的蛴螬。

类别	总蛋白含量(mg/g)	多糖含量(mg/g)
			蛴螬僵虫	23.11	4.65
未用该菌处理的蛴螬	19.51	3.12
			含量增加值(％)	18.47	49.03

Claims

1.一种用白僵菌制备蛴螬僵虫的方法，该制备方法为：

(2)、蛴螬僵虫制备：菌株A、B和C接种至液体培养基，活化后配制成10⁴个/mL～10⁷个/mL浓度级菌液，采用体表喷布的方法将该菌液喷于蛴螬虫体体表，喷后30min正常饲养，当蛴螬虫体发病僵化后将虫子及时捡出，摊放于培养箱内25℃培养，待其僵化，当虫体表长出白粉后干燥，干燥后的蛴螬虫体即为蛴螬僵虫。

2.根据权利要求1所述用白僵菌制备蛴螬僵虫的方法，其特征在于上述菌液与蛴螬幼虫的比例为1mL∶30～50头。