CN103275869B - 好氧高温菌的富集和培养装置及使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种好氧高温菌的富集和培养装置；包括通气时间控制部件、无菌空气输送部件、高温恒定部件以及三通培养瓶等；三通培养瓶的进气口、接种及取样口以及挥发水汽回流口上分别设置具孔橡胶塞Ⅰ、具孔橡胶塞Ⅱ和具孔橡胶塞Ⅲ；玻璃管Ⅰ的一端贯穿具孔橡胶塞Ⅰ后伸入三通培养瓶的底部，玻璃管Ⅰ的另外一端通过通气管Ⅲ与过滤器相连接；玻璃管Ⅱ的一端贯穿具孔橡胶塞Ⅱ后伸入三通培养瓶的底部；玻璃管Ⅱ的另外一端与接种口橡胶管相连接；过滤器与无菌空气输送部件相连接；冷凝管通过具孔橡胶塞Ⅲ与三通培养瓶内的空腔相连接；三通培养瓶的下方设置高温恒定部件。
Description
技术领域
本发明涉及一种高温菌的筛选和培养装置，尤其是一种适用于多种好氧高温菌的筛选、培养及其相关试验研究的好氧高温菌的富集和培养装置及使用方法。
背景技术
好氧高温堆肥是畜禽粪、农作物秸秆以及菇渣等农村或者农业有机固体废弃物的无害化资处置与源化利用的重要途径。在好氧高温堆肥过程中的高温阶段，物料堆温可升至55～60℃以上，能将物料中的绝大部分寄生虫及虫卵、孢子和病原菌等杀死，保证堆肥产品无害化。但高温阶段因堆体温度较高，物料中大部分微生物的生长和活性将受到抑制，使得微生物群落多样性降低且数量减少， 相对于中温阶段，微生物群落要少 1～2 个数量级，这无疑限制了难降解的大分子木质纤维素物质的快速降解；同时，高温也抑制了硝化细菌的活性，使得物料降解过程中产生的氨态氮难以充分硝化，造成大量氮素以氨的形态挥发，这不仅导致堆肥场所的恶臭加剧，而且降低堆肥成品的含量氮，影响堆肥品质，造成营养资源的浪费。在堆肥物料中接种高温硝化菌和纤维素降解菌，有利于促进堆肥高温阶段物料中的木质纤维素物质快速降解，并强化氨态氮的硝化作用而防止其挥发损失，从而起到促腐保氮作用。
目前，高温细菌的筛选工作，大都是建立在摇床或培养箱的高温培养的基础之上。如张金金等（堆肥中高温纤维素降解菌的筛选和应用[J]. 中国奶牛. 2010(10): 57-60.）采用55℃ 130r/min 摇床培养的方式进行高温纤维素降解菌的筛选；王志超等（好氧堆肥中高温纤维素分解菌的筛选及性状研究[J]. 北京大学学报(自然科学版).2006(2): 259-264.）则利用堆肥系统的高温发酵物在65℃恒温恒湿箱中培养 1～2 d的方法进行筛选；王艳等（耐高温高盐氨氧化细菌的分离、筛选、鉴定及氨氧化特性研究[D]. 四川大学, 2002.）在温度50℃，转速 200r/ min 的条件下培养12d进行耐高温高盐亚硝化单胞菌特性的研究。
以上所述的培养方法虽能满足高温条件，但是还存两方面的不利影响：一是高温培养过程中，培养液中的水分会因高温而不断挥发，容易造成培养液失水浓缩，进而导致培养液的理化性质如养分浓度发生较大改变，可能影响目标菌的正常生长；二是，若采用恒温箱进行高温静止培养，则培养体系中的氧气供应会受限制，也不适合较长时间的好氧高温菌培养。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种结构简单的好氧高温菌的富集和培养装置及使用方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种好氧高温菌的富集和培养装置，包括通气控制组件和微生物培养组件；所述的通气控制组件包括相互连接的通气时间控制部件以及无菌空气输送部件，所述微生物培养组件包括微生物培养部件、挥发水汽回流部件以及高温恒定部件；所述微生物培养部件包括三通培养瓶、过滤器、通气管、玻璃管Ⅰ、具孔橡胶塞Ⅰ、具孔橡胶塞Ⅱ、玻璃管Ⅱ、接种口橡胶管以及具孔橡胶塞Ⅲ；所述三通培养瓶的进气口、接种及取样口以及挥发水汽回流口上分别设置具孔橡胶塞Ⅰ、具孔橡胶塞Ⅱ和具孔橡胶塞Ⅲ；所述玻璃管Ⅰ的一端贯穿具孔橡胶塞Ⅰ后伸入三通培养瓶的底部，玻璃管Ⅰ的另外一端通过通气管Ⅲ与过滤器相连接；玻璃管Ⅱ的一端贯穿具孔橡胶塞Ⅱ后伸入三通培养瓶的底部；玻璃管Ⅱ的另外一端与接种口橡胶管相连接；所述过滤器与无菌空气输送部件相连接；所述挥发水汽回流部件包括冷凝管；所述冷凝管通过具孔橡胶塞Ⅲ与三通培养瓶内的空腔相连接；所述三通培养瓶的下方设置高温恒定部件。
作为对本发明的好氧高温菌的富集和培养装置的改进：所述高温恒定部件为水浴锅。
作为对本发明的好氧高温菌的富集和培养装置的进一步改进：所述接种口橡胶管的末端塞有棉花塞。
作为对本发明的好氧高温菌的富集和培养装置的进一步改进：冷凝管内包括冷水腔，所述冷凝管上设置有进水口Ⅰ和出水口Ⅱ，所述进水口Ⅰ和出水口Ⅱ均与冷水腔相互连通；所述冷凝管上端分别设置有棉花塞和冷凝管滤膜。
作为对本发明的好氧高温菌的富集和培养装置的进一步改进：所述冷凝管滤膜为0.22μm的滤膜。
作为对本发明的好氧高温菌的富集和培养装置的进一步改进：所述过滤器内设置有0.22μm的滤膜。
作为对本发明的好氧高温菌的富集和培养装置的进一步改进：所述通气时间控制部件为定时器；所述无菌空气输送部件包括气泵、通气管Ⅰ、气体流量计以及通气管Ⅱ；所述气泵分别通过通气管Ⅰ和通气管Ⅱ与过滤器相连接；所述通气管Ⅰ和通气管Ⅱ之间设置气体流量计；所述气泵与定时器信号连接。
作为对本发明的好氧高温菌的富集和培养装置的进一步改进：所述进水口Ⅰ和出水口Ⅱ上分别设置有橡胶管。
一种好氧高温菌的富集和培养装置的使用方法：A、将三通培养瓶、过滤器、通气管Ⅲ、玻璃管Ⅰ、具孔橡胶塞Ⅰ、具孔橡胶塞Ⅱ、玻璃管Ⅱ以及接种口橡胶管组装；B、在三通培养瓶中放入配制好的适量培养液；C、通过具孔橡胶塞Ⅲ将冷凝管的底端与三通培养瓶相连接；D、进水口Ⅰ和出水口Ⅱ均不连接橡胶管，并将装配成一体的微生物培养部件和挥发水汽回流部件置于高压灭菌锅中，以121℃高压灭菌30min；E、高压灭菌后，放置冷却，固定于已设定好水温的水浴锅之中；F、通过定时器和气体流量计设置通气间隙时间和通气量，将通气管Ⅱ连接过滤器，并分别连接好冷凝管的进水口Ⅰ和出水口Ⅱ的橡胶管，通入自来水，三通培养瓶内反应时出现的水汽在冷凝管内被冷却，再重新回到三通培养瓶内；G、通过接种口橡胶管无菌操作接种特定微生物后进行高温培养。
本发明的好氧高温菌的富集和培养装置设置挥发水汽回流部件、通气时间控制部件和无菌空气输送部件；挥发水汽回流部件包括冷凝管、棉花塞、冷凝管滤膜、进水口Ⅰ和出水口Ⅱ；冷凝管通过进水口Ⅰ和出水口Ⅱ进行冷水循环降温，而棉花塞可以有效的防止没有完全冷却的水蒸气外逃，而再通过冷凝管滤膜过滤进入冷凝管的空气，防止培养基被污染；所以通过挥发水汽回流部可以有效防止高温培养过程中，培养液中的水分因高温而不断挥发，造成培养液失水浓缩，进而导致培养液的理化性质如养分浓度发生较大改变，影响目标菌的正常生长；而通气时间控制部件包括定时器，无菌空气输送部件又包括气泵、通气管Ⅰ、气体流量计以及通气管Ⅱ，通过定时器和气体流量计相互配合，可以有效的设定三通培养瓶的进气量和通气时间，通过对进气量和通气时间的设定，可以针对各种好氧高温菌进行不一样的环境模拟；而通过微生物培养部件中的过滤器进行空气的过滤，防止进入的空气污染培养基；所以，本发明的好氧高温菌的富集和培养装置在培养过程中，氧气供应会可以根据实验对象进行设置，适合各种较长时间或者较短时间的好氧高温菌培养。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1是本发明的好氧高温菌的富集和培养装置的主要结构示意图；
图2是图1在连接外接电源100后的结构示意图。
具体实施方式
实施例1、图1给出一种好氧高温菌的富集和培养装置及使用方法，好氧高温菌的富集和培养装置包括通气控制组件和微生物培养组件；通气控制组件包括相互连接的通气时间控制部件1以及无菌空气输送部件2，微生物培养组件包括微生物培养部件3、挥发水汽回流部件4以及高温恒定部件5。
以上所述的通气时间控制部件1包括定时器10；无菌空气输送部件2包括气泵20、通气管Ⅰ21、气体流量计22以及通气管Ⅱ23；微生物培养部件3包括三通培养瓶30、过滤器31（装有0.22μm滤膜）、通气管Ⅲ32、玻璃管Ⅰ33、具孔橡胶塞Ⅰ34、具孔橡胶塞Ⅱ35、玻璃管Ⅱ36、接种口橡胶管37以及具孔橡胶塞Ⅲ38；挥发水汽回流部件4包括冷凝管40、棉花塞41、冷凝管滤膜42（0.22μm）、进水口Ⅰ43和出水口Ⅱ44；高温恒定部件5包括水浴锅50。
实际使用的时候，定时器10外接电源100（通过外接电源100供电，如图2所示），定时器10与气泵20信号连接，通过定时器10进行通气时间设置；气泵20与过滤器31之间通过通气管Ⅰ21和通气管Ⅱ23相互连接，通气管Ⅰ21和通气管Ⅱ23之间设置气体流量计22，通过气体流量计22对经过通气管Ⅰ21和通气管Ⅱ23的空气进行统计；过滤器31上装有0.22μm的滤膜，通过过滤器31上设置的滤膜对空气进行过滤除菌；三通培养瓶30的进气口、接种及取样口以及挥发水汽回流口上分别设置具孔橡胶塞Ⅰ34、具孔橡胶塞Ⅱ35和具孔橡胶塞Ⅲ38；玻璃管Ⅰ33的一端贯穿具孔橡胶塞Ⅰ34后伸入三通培养瓶30的底部，玻璃管Ⅰ33的另外一端通过通气管Ⅲ32与过滤器31相连接；玻璃管Ⅱ36的一端贯穿具孔橡胶塞Ⅱ35后伸入三通培养瓶30的底部；玻璃管Ⅱ36的另外一端与接种口橡胶管37相连接，接种口橡胶管37的末端塞有棉花塞；在实际使用的时候，可以根据实际操作的需要而取下接种口橡胶管37，对玻璃管Ⅱ36进行火焰灭菌后，就可在无菌环境下进行接种或取样操作；冷凝管40的底端贯穿具孔橡胶塞Ⅲ38后与三通培养瓶30的内腔相连接，冷凝管40的顶端塞有一个棉花塞41，在棉花塞41上覆有冷凝管滤膜42（0.22μm），通过冷凝管滤膜42对进入冷凝管40的空气进行过滤除菌（棉花塞41与冷凝管滤膜42均是过滤除菌的作用，通过增加棉花塞41加强除菌过滤效果）；冷凝管40内设置有冷水腔，冷凝管40上设置进水口Ⅰ43和出水口Ⅱ44，进水口Ⅰ43和出水口Ⅱ44分别与冷水腔相互连通；实际使用的时候，进水口Ⅰ43用橡胶管接入自来水，在出水口Ⅱ44用其他的橡胶管引出水流。
本发明的好氧高温菌的富集和培养装置使用前，先将三通培养瓶30、过滤器31（装有0.22μm滤膜）、通气管Ⅲ32、玻璃管Ⅰ33、具孔橡胶塞Ⅰ34、具孔橡胶塞Ⅱ35、玻璃管Ⅱ36以及接种口橡胶管37组装；再在三通培养瓶30中放入配制好的适量培养液（根据实验的需求自主选择相应的培养液）；再通过具孔橡胶塞Ⅲ38将冷凝管40的底端与三通培养瓶30相连接。进水口Ⅰ43和出水口Ⅱ44均不连接相应的橡胶管，将装配成一体的微生物培养部件3（玻璃管Ⅱ36不接入接种口橡胶管37）和挥发水汽回流部件4（进水口Ⅰ43和出水口Ⅱ44均不连接橡胶管）置于高压灭菌锅中，121℃高压灭菌30min；高压灭菌后，放置冷却，固定于已设定水温的高温恒定部件5之中。通过定时器10和气体流量计22设置通气间隙时间和通气量，将通气管Ⅱ23连接上含0.22μm滤膜的过滤器31，并分别连接好冷凝管40的进水口Ⅰ43和出水口Ⅱ44的橡胶管，通入自来水。最后，通过接种口橡胶管37无菌操作接种特定微生物后进行高温培养。
试验1、高温亚硝化细菌富集培养：
一、培养第一次富集培养液：
1、以硝化势较高的湖北潜江潮土（水分状况与供氮水平对土壤可溶性氮素形态变化的影响[J]. 植物营养与肥料学报. 2010,16(5):1153-1160.）为高温亚硝化细菌筛选材料，按1:10的土水比制备土壤悬液；
2、将装配成一体的微生物培养部件3和挥发水汽回流部件4置于高压灭菌锅中，121℃高温灭菌30min，冷却，再在玻璃管Ⅱ36上连接接种口橡胶管37；
3、将200ml亚硝化细菌富集液体培养基装入三通培养瓶30；
4、通过接种口橡胶管37无菌操作接种土壤悬液5ml；
5、将三通培养瓶30置于水浴锅50上；
6、通过橡胶管将进水口Ⅰ43与自来水管道相连接，通过自来水管道向进水口Ⅰ43输入自来水；出水口Ⅱ44上设置另外的橡胶管，用做出水口；
7、在定时器10进行通气时间设置，通气时间为30min/2h，在气泵20上进行通气量设置，通气量为为2L/min；
8、在水浴锅50上设置水浴温度，水浴温度设置为60℃；
9、连续培养5d（day），得到第一次富集培养液；
二、培养第二次富集培养液：
10、将装配成一体的微生物培养部件3和挥发水汽回流部件4置于高压灭菌锅中，121℃高温灭菌30min，冷却，再在玻璃管Ⅱ36上连接接种口橡胶管37；
11、将200ml亚硝化细菌富集液体培养基装入三通培养瓶30；
12、通过接种口橡胶管37无菌操作接种步骤9获得的第一次富集培养液2ml；
13、将三通培养瓶30置于水浴锅50上；
14、通过橡胶管将进水口Ⅰ43与自来水管道相连接，通过自来水管道向进水口Ⅰ43
输入自来水；出水口Ⅱ44上设置另外的橡胶管将，用做出水口；
15、在定时器10进行设置通气时间，通气时间为30min/2h，在气泵20上设置通气量，
通气量为为2L/min；
16、在水浴锅50上上设置水浴温度，水浴温度设置为60℃；
17、连续培养5d（day），得到第二次富集培养液；
三、分离和纯化：
18、取100μl第二次富集培养液涂布于亚硝化细菌富集固体分离培养基平板上，并于
30℃恒温培养箱中培养7天，由接种环挑取单菌落于牛肉膏蛋白胨固体培养基上划线分离和纯化，最终得到3个分离物。
亚硝化细菌富集液体培养基: (NH4)2SO4 2g，NaCl 0.3g，FeSO4·7H2O 0.03g，K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0. 03 g，NaHCO3 1. 6g，H2O 1L，pH 7. 2。
亚硝化细菌富集固体培养基: (NH4)2SO4 2g，NaCl 0.3g，FeSO4·7H2O 0.03g，K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0. 03 g，NaHCO3 1. 6g，琼脂 20g，H2O 1L， pH 7. 2。
牛肉膏蛋白胨固体培养基：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，琼脂 20g，H2O 1L，pH 7. 2。
试验2、高温纤维素降解菌富集培养：
一、培养第一次富集培养液：
1、以处于高温期的牛粪堆肥物料为高温纤维素降解菌筛选材料，按1:10的料水比制备堆肥物料悬液。
2、将装配成一体的微生物培养部件3和挥发水汽回流部件4置于高压灭菌锅中，121℃高温灭菌30min，冷却，再在玻璃管Ⅱ36上连接接种口橡胶管37；
3、将200ml羧甲基纤维素钠液体培养基装入三通培养瓶30；
4、通过接种口橡胶管37无菌操作接种堆肥物料悬液5ml；
5、将三通培养瓶30置于水浴锅50上；
6、通过橡胶管将进水口Ⅰ43与自来水管道相连接，通过自来水管道向进水口Ⅰ43输
入自来水；出水口Ⅱ44上设置另外的橡胶管将，用做出水口；
7、在定时器10进行通气时间设置，通气时间为30min/2h，在气泵20上进行通气量设置，通气量为为2L/min；
8、在水浴锅50上上设置水浴温度，水浴温度设置为60℃；
9、连续培养7d（day），得到第一次富集培养液；
二、培养第二次富集培养液：
10、将装配成一体的微生物培养部件3和挥发水汽回流部件4置于高压灭菌锅中，121℃高温灭菌30min，冷却，再在玻璃管Ⅱ36上连接接种口橡胶管37；
11、将200ml羧甲基纤维素钠液体培养基装入三通培养瓶30；
12、通过接种口橡胶管37无菌操作接种步骤9中得到的第一次富集培
养液2ml；
13、将三通培养瓶30置于水浴锅50上；
14、通过橡胶管将进水口Ⅰ43与自来水管道相连接，通过自来水管道向进水口Ⅰ43
输入自来水；出水口Ⅱ44上设置另外的橡胶管将，用做出水口；
15、在定时器10进行通气时间设置，通气时间为30min/2h，在气泵20上进行通气量设置，通气量为为2L/min；
16、在水浴锅50上上设置水浴温度，水浴温度设置为60℃；
17、连续培养7d（day），得到第二次富集培养液；
三、分离和纯化：
18、取100μl二次富集培养液涂布于羧甲基纤维素钠固体培养基上，于30℃恒温培养箱中培养7天，由接种环挑取周边培养基褪色的单菌落于羧甲基纤维素钠固体培养基上进行划线分离和纯化，最终筛选出3个分离物。
羧甲基纤维素钠培养基：蛋白胨 2.5g，CMC-Na 20g，Na2HPO42.5g，KH2PO4 1.5g，H2O 1L，pH 7. 2。
羧甲基纤维素钠固体培养基：蛋白胨 2.5g，CMC-Na 20g，Na2HPO42.5g，KH2PO4 1.5g，琼脂20g，H2O 1L，pH 7. 2。
试验3、高温菌株Paenibacillus cineris CGMCC No.3883培养试验：
1、将装配成一体的微生物培养部件3和挥发水汽回流部件4置于高压灭菌锅中，121℃高温灭菌30min，冷却，再在玻璃管Ⅱ36上连接接种口橡胶管37；
2、将200ml牛肉膏蛋白胨液体培养基装入三通培养瓶30；
3、通过接种口橡胶管37无菌操作接入Paenibacillus cineris CGMCC No.3883种子液5ml；
4、将三通培养瓶30置于水浴锅50上；
5、通过橡胶管将进水口Ⅰ43与自来水管道相连接，通过自来水管道向进水口Ⅰ43输
入自来水；出水口Ⅱ44上设置另外的橡胶管将，用做出水口；
6、在定时器10进行通气时间设置，通气时间为20min/h，在气泵20上进行通气量设置，通气量为为2.5L/min；
8、在水浴锅50上上设置水浴温度，水浴温度设置为65℃；
9、连续培养48h，得到Paenibacillus cineris CGMCC No.3883的菌落；Paenibacillus cineris CGMCC No.3883的菌落数为1.3?109cfu/ml，且无杂菌菌落出现（采用牛肉膏蛋白胨固体培养基平板计数）；
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，H2O1L，pH 7.2。
牛肉膏蛋白胨固体培养基: 牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，琼脂 20g，H2O 1L，pH 7. 2。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的一个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (8)
1.好氧高温菌的富集和培养装置；包括通气控制组件和微生物培养组件；其特征是：所述的通气控制组件包括相互连接的通气时间控制部件(1)以及无菌空气输送部件(2)，所述微生物培养组件包括微生物培养部件(3)、挥发水汽回流部件(4)以及高温恒定部件(5)；
所述微生物培养部件(3)包括三通培养瓶(30)、过滤器(31)、通气管Ⅲ(32)、玻璃管Ⅰ(33)、具孔橡胶塞Ⅰ(34)、具孔橡胶塞Ⅱ(35)、玻璃管Ⅱ(36)、接种口橡胶管(37)以及具孔橡胶塞Ⅲ(38)；
所述三通培养瓶(30)的进气口、接种及取样口以及挥发水汽回流口上分别设置具孔橡胶塞Ⅰ(34)、具孔橡胶塞Ⅱ(35)和具孔橡胶塞Ⅲ(38)；
所述玻璃管Ⅰ(33)的一端贯穿具孔橡胶塞Ⅰ(34)后伸入三通培养瓶(30)的底部，玻璃管Ⅰ(33)的另外一端通过通气管Ⅲ(32)与过滤器(31)相连接；玻璃管Ⅱ(36)的一端贯穿具孔橡胶塞Ⅱ(35)后伸入三通培养瓶(30)的底部；玻璃管Ⅱ(36)的另外一端与接种口橡胶管(37)相连接；
所述过滤器(31)与无菌空气输送部件(2)相连接；
所述挥发水汽回流部件(4)包括冷凝管(40)；所述冷凝管(40)通过具孔橡胶塞Ⅲ(38)与三通培养瓶(30)内的空腔相连接；
冷凝管(40)内包括冷水腔，所述冷凝管(40)上设置有进水口Ⅰ(43)和出水口Ⅱ(44)，所述进水口Ⅰ(43)和出水口Ⅱ(44)均与冷水腔相互连通；
所述冷凝管(40)上端分别设置有棉花塞(41)和冷凝管滤膜(42)；
所述三通培养瓶(30)的下方设置高温恒定部件(5)。
2.根据权利要求1所述的好氧高温菌的富集和培养装置，其特征是：所述高温恒定部件(5)为水浴锅(50)。
3.根据权利要求2所述的好氧高温菌的富集和培养装置，其特征是：所述接种口橡胶管(37)的末端塞有棉花塞。
4.根据权利要求3所述的好氧高温菌的富集和培养装置，其特征是：所述冷凝管滤膜(42)为0.22μm的滤膜。
5.根据权利要求4所述的好氧高温菌的富集和培养装置，其特征是：所述过滤器(31)内设置有0.22μm的滤膜。
6.根据权利要求5所述的好氧高温菌的富集和培养装置，其特征是：所述通气时间控制部件(1)为定时器(10)；
所述无菌空气输送部件(2)包括气泵(20)、通气管Ⅰ(21)、气体流量计(22)以及通气管Ⅱ(23)；所述气泵(20)分别通过通气管Ⅰ(21)和通气管Ⅱ(23)与过滤器(31)相连接；所述通气管Ⅰ(21)和通气管Ⅱ(23)之间设置气体流量计(22)；
所述气泵(20)与定时器(10)信号连接。
7.根据权利要求6所述的好氧高温菌的富集和培养装置，其特征是：所述进水口Ⅰ(43)和出水口Ⅱ(44)上分别设置有橡胶管。
8.一种好氧高温菌的富集和培养装置的使用方法，基于权利要求1所述的好氧高温菌的富集和培养装置，其特征是：A、将三通培养瓶(30)、过滤器(31)、通气管Ⅲ(32)、玻璃管Ⅰ(33)、具孔橡胶塞Ⅰ(34)、具孔橡胶塞Ⅱ(35)、玻璃管Ⅱ(36)以及接种口橡胶管(37)组装；
B、在三通培养瓶(30)中放入配制好的适量培养液；
C、通过具孔橡胶塞Ⅲ(38)将冷凝管(40)的底端与三通培养瓶(30)相连接；
D、进水口Ⅰ(43)和出水口Ⅱ(44)均不连接橡胶管，并将装配成一体的微生物培养部件(3)和挥发水汽回流部件(4)置于高压灭菌锅中，以121℃高压灭菌30min；
E、高压灭菌后，放置冷却，固定于已设定好水温的水浴锅(50)之中；
F、通过定时器(10)和气体流量计(22)设置通气间隙时间和通气量，将通气管Ⅱ(23)连接过滤器(31)，并分别连接好冷凝管(40)的进水口Ⅰ(43)和出水口Ⅱ(44)的橡胶管，通入自来水，三通培养瓶(30)内反应时出现的水汽在冷凝管(40)内被冷却，再重新回到三通培养瓶(30)内；
G、通过接种口橡胶管(37)无菌操作接种特定微生物后进行高温培养。
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