CN103266068B - 一种氨氧化微生物的分离筛选方法 - Google Patents

一种氨氧化微生物的分离筛选方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103266068B
CN103266068B CN201310149554.3A CN201310149554A CN103266068B CN 103266068 B CN103266068 B CN 103266068B CN 201310149554 A CN201310149554 A CN 201310149554A CN 103266068 B CN103266068 B CN 103266068B
Authority
CN
China
Prior art keywords
liquid
bacterial strain
ammonia
culture
ammonia nitrogen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201310149554.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103266068A (zh
Inventor
周宁
张源
程迪
黄剑宇
张宇
许淑娟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHENYANG CHEMICAL RESEARCH INSTITUTE Co Ltd
Sinochem Corp
Sinochem Environmental Technology Engineering Co Ltd
Original Assignee
Shenyang Research Institute of Chemical Industry Co Ltd
Sinochem Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenyang Research Institute of Chemical Industry Co Ltd, Sinochem Corp filed Critical Shenyang Research Institute of Chemical Industry Co Ltd
Priority to CN201310149554.3A priority Critical patent/CN103266068B/zh
Publication of CN103266068A publication Critical patent/CN103266068A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103266068B publication Critical patent/CN103266068B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于环境微生物领域,具体涉及一种氨氧化微生物的分离筛选方法。将分离源在以氨氮为单一氮源的液体变色培养基中富集培养;而后再经过显色平板和液体培养筛选得到具有氨氧化能力的菌株,收集的目标菌株用于污水处理,使其在有氧条件下氧化污水中的氨进行氨氧化反应;本发明选择具有代表性的曝气池活性污泥样品为分离源,采用创新的变色培养基,过程直观,方法简便。

Description

一种氨氧化微生物的分离筛选方法
技术领域
本发明属于环境微生物领域,具体涉及一种氨氧化微生物的分离筛选方法。
背景技术
由于氮素对水生生物圈富营养化的严重影响,以及对水生生物具有毒性,废水氨氧化引起人们越来越多的关注,生物氨氧化技术是废水脱氮最为经济有效的方法,可以实现真正意义上的氮去除。传统生物氨氧化工艺是多数废水生物氨氧化处理的主要承担者,但仍存在着硝化速率低、工艺复杂、氨氧化效率低等缺点,投加氨氧化微生物有助于提高生物氨氧化反应速率,提高处理效率。因此,分离筛选具有良好活性的氨氧化微生物极为重要。
目前关于氨氧化菌的文献报道多集中在富集培养方面,关于硝化菌的分离筛选方面相关文献报道并不多,专利CN200910223298A申请公开一种自养硝化细菌及其筛选和鉴定方法,但是在富集过程中并不直观,需要随时取出菌液进行分析NO3-生成情况,容易造成菌株流失。
发明内容
本发明的目的是提供一种简便易行、快速有效的氨氧化微生物的分离筛选方法。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案为:
一种氨氧化微生物的分离筛选方法,将分离源在以氨氮为单一氮源的液体变色培养基中富集培养;而后再经过显色平板和液体培养筛选得到具有氨氧化能力的菌株,收集的目标菌株用于污水处理,使其在有氧条件下氧化污水中的氨进行氨氧化反应;
所述以氨氮为单一氮源的液体变色培养基配制过程如下:
将(NH4)2SO42~3g、KH2PO41~2g、Na2HPO4·12H2O10~12g、FeSO4·7H2O0.03g、MgSO4·7H2O0.03g、溴百里酚兰40~80mg和酵母浸粉0.01~0.05g加入到1L无菌水中,pH为7.5~9.0;120~125度蒸汽灭菌15~20分钟后,放置冷却备用。
所述显色平板配制过程如下:将(NH4)2SO42g、FeSO4·7H2O0.03g、MgSO4·7H2O0.03g、酵母浸粉0.05g、琼脂15~20g、溴百里酚兰40~80mg加入到1L蒸馏水中,pH为7.5~9.0,120~125度蒸汽灭菌15~20分钟后,放置冷却到50~80℃后,倒制平板冷却后备用。
具体筛选过程为:
1)取分离源加入到其5~10倍体积的无菌水中,使微生物混合均匀;取混合液1~10ml加入到100ml以氨氮为单一氮源的液体变色培养基中,以25~35℃,150~250转/分富集培养至培养液由蓝色变为橙红色,取1~10ml菌液再加入至新的氨氮为单一氮源的液体变色培养基中,继续富集培养至培养液由蓝色变为橙红色;再取20~30ml菌液重复富集培养3~5次,待用;
2)将上述富集培养至橙红色的菌液用无菌水稀释至10-6~10-9各梯度;
3)分别取上述稀释的各个梯度浓度的菌液50~200ul于显色平板,于25~35℃培养箱中倒置培养,待出现明显的橙红色菌株后挑取深红色的菌落在显色平板上划线纯化培养;
4)将划线纯化培养得到的深红色的菌落接种至AOM固体培养基(AOM平板),培养3~5天后挑取单菌落接种到AOM液体培养基中,在25~35℃,150~250转/分摇瓶培养5~7天,检测菌液在600nm波长检测光下吸光值,OD600值大于等于1,氨氮去除率(残留氨氮浓度/氨氮初始浓度)大于等于50%的菌株即为高活力氨氧化菌株。
取上述氨氮去除率大于50%的且OD600值最高的菌液,在AOM固体培养基上划线,平板在25~30℃培养3~5天后,挑取单菌落接种到液体培养基中,在25~30℃,150~250转/分摇瓶培养5~7天,取菌液200ul加入1.8ml的20%甘油水溶液中,-70℃冰箱保存。
所述分离源为城市污水处理厂曝气池污泥或含氨废水工厂曝气池污泥。
所述步骤2)取上述富集培养至橙红色的菌液1ml加入至9ml无菌水涡旋混匀稀释,取混匀后的菌液200ul备用;再取上述混匀后的菌液1ml,再加入9ml无菌水涡旋混匀稀释,取混匀后的菌液200ul备用;重复稀释6~9次使菌液最终浓度稀释到步骤1)富集培养液浓度的10-6-10-9
所述步骤3)于25~35℃培养箱中倒置培养的平板上菌株出现明显的橙红色菌株后挑取深红色的菌落在显色平板上划线;划线后的平板再于25~35℃培养箱中倒置培养5~7天,挑取深红色的单菌落继续在显色平板上划线培养,重复这一过程3~5次。
所述液体培养基为(NH4)2SO42~3g,K2HPO41~2g,Na2HPO4·12H2O10~12g溴百里酚蓝40~80mg,蒸馏水1000ml。该培养中富集或培养氨氧化菌株,培养基由蓝变红,且培养基红色深度与菌株氨氧化能力呈正比。
所述AOM液体培养基为:(NH4)2SO42~3g、NaCl0.3~0.5g、FeSO4·7H2O0.03~0.05g、K2HPO42~3g、MgSO4·7H2O0.03~0.05g、蒸馏水1000ml、pH8~9;
所述AOM固体培养基配制过程如下:(NH4)2SO42~3g、NaCl0.3~0.5g、FeSO4·7H2O0.03~0.05g、K2HPO42~3g、MgSO4·7H2O0.03~0.05g、2%琼脂、蒸馏水1000ml、pH8~9。
本发明所具有的优点:本发明选择具有代表性的曝气池活性污泥样品为分离源,采用创新的变色培养基,过程直观,方法简便,通过液体培养基富集培养,显色平板筛选,菌株的分离纯化,菌体在液体培养条件下脱氨情况检测四个步骤最终得到氨氧化微生物。具体在富集阶段采用变色培养基,培养基选用pH值在8左右的磷酸盐缓冲体系搭配酸碱指示剂溴百里酚兰,由于磷酸缓冲液和溴百里酚兰的解离常数和培养基pH值相近,该培养基颜色变化和pH变化呈线性,可以通过观察培养基颜色变化考察培养体系中pH的变化,而pH的变化是由培养体系中氨氧化转化为硝酸氮的效率决定的,pH变化大的体系氨氧化效率高,该方法简便直观。
具体实施方式
本发明首先选取污水中氨氮浓度在100~200mg/L的城市污水处理厂或工业废水处理的曝气池污泥样品为分离源,使用以氨氮为单一氮源的液体培养基富集培养分离源中的氨氧化微生物,通过观察培养基颜色变化,确定二次富集培养时间,经过3~5次富集培养获得大量数目的微生物;以显色平板对富集后的微生物进行分离筛选,通过菌株的颜色变化挑出菌落饱满颜色变化明显的的目的菌株;最后对初筛得到的目的菌株进行液体培养,以比色法检测菌液OD600值来比较菌株生长能力,最终得到生长性状良好氨氧化能力较强的氨氧化目标菌株。目标菌株可以在有氧条件下氧化污水中的氨进行氨氧化反应。
实施例1
1.取沈阳某污水处理厂曝气池污泥样品作为分离源,将样品块放入灭菌后的三角瓶中,再加入样品5~10倍体积的无菌水,使样品中微生物充分混合均匀;取混合液1~10ml加入100ml氨氮为单一氮源的液体变色培养基中,在三角烧瓶中25~35℃,150~250转/分摇瓶培养;
2.观察培养液颜色由蓝色变为橙红色时,取10ml菌液加入新的氨氮为单一氮源的液体变色培养基中,继续摇瓶培养;重复此步骤3次。
所述以氨氮为单一氮源的液体变色培养基为:(NH4)2SO43g、FeSO4·7H2O0.03g、MgSO4·7H2O0.03g、KH2PO42.5g、Na2HPO4·12H2O10g、溴百里酚兰40mg和酵母浸粉0.01g,再用水定容至1L;pH为7.5,121度蒸汽灭菌15分钟后,放置冷却备用。
其中以氨氮为单一氮源的固体变色培养基,是在液体培养基的基础上加入2%琼脂。
3.待上述菌液培养5天后再次变为橙红色时取1ml,加入装有9ml无菌水的试管中涡旋混匀,取混匀后的菌液200ul备用;再取上述混匀后的菌液1ml,加入装有9ml无菌水的试管中涡旋混匀,取混匀后的菌液200ul备用;取混匀后的菌液如上依次梯度稀释,使最终菌液的浓度稀释到原培养后浓度的10-6~10-9
4.取上述10-6、10-7、10-8、10-9依次梯度稀释对应的备用200ul的稀释液涂于显色固体平板(12cm)每个梯度涂5个平板。28℃培养箱中倒置培养,观察菌株生长与情况,5天后平板上出现明显的橙红色菌株后挑取深红色的菌落在显色平板上划线,28℃培养箱中倒置培养5天,挑取生长较好的红色较深的单菌落继续在显色平板上划线培养,重复这一过程4次,即得显色平板上划线纯化菌落。
5.挑选上述生长较好红色较深的菌落16株分别接种至AOM固体培养基,培养5天后挑取单菌落接种至AOM液体培养基中在试管内以28℃,200转/分,培养24小时,观察培养液出现明显浑浊后取200uL,加入装有1800uL20%甘油的冻存管中颠倒混匀后-70℃放置保存备用。
6.将上述培养于AOM固体培养基的每个菌株各取1环菌体接种AOM液体培养基。28℃200转/分摇瓶培养。5天后分光光度计检测菌液的OD600值,检测菌液中残留氨氮量计算降解率。OD600值大于等于1,氨氮降解率(培养基中残留氨氮浓度/培养基中氨氮初始浓度)大于等于50%的菌株有8株,菌株降解与生长数据如下:
菌株编号 1 2 3 4 5 6 7 8
菌液OD600 1.01 1.23 1.21 2.103 2.834 2.661 1.512 1.56
降解率(%) 52 62 65 85 100 100 72 75
所述AOM液体培养基为:(NH4)2SO42~3g、NaCl0.3~0.5g、FeSO4·7H2O0.03~0.05g、K2HPO42~3g、MgSO4·7H2O0.03~0.05g、蒸馏水1000ml、pH8~9;
所述AOM固体培养基配制过程如下:(NH4)2SO42~3g、NaCl0.3~0.5g、FeSO4·7H2O0.03~0.05g、K2HPO42~3g、MgSO4·7H2O0.03~0.05g、2%琼脂、蒸馏水1000ml、pH8~9。
7)上述筛选后菌株将氨氮去除率大于50%的且OD600值最高的菌液,在AOM固体培养基上划线,平板在25~30℃培养3~5天后,挑取单菌落接种到液体培养基中,在25~30℃,150~250转/分摇瓶培养5~7天,取菌液200ul加入1.8ml的20%甘油水溶液中,-70℃冰箱保存。
所述液体培养基中(NH4)2SO42~3g,K2HPO41~2g,Na2HPO4·12H2O10~12g溴百里酚蓝40~80mg,蒸馏水1000ml。
该培养中富集或培养氨氧化菌株,培养基由蓝变红,且培养基红色深度与菌株氨氧化能力呈正比。
实施例2
与实施例1不同之处在于,其所选用的样品为南方某颜料厂曝气池污泥。并按照具体分离筛选方式通过步骤1~5获得菌株16株,将所得16株菌株培养后用分光光度计检测菌液的OD600值,HPLC检测菌液中残留氨氮量计算降解率。OD600值大于等于1,氨氮降解率(培养基中残留氨氮浓度/培养基中氨氮初始浓度)大于等于50%的菌株有5株,菌株降解与生长数据如下:
菌株编号 1 2 3 4 5
菌液OD600 1.012 1.311 1.342 2.582 1.763
降解率(%) 53 62 65 100 76
实施例3
与实施例1、2不同之处在于,其所选用的样品为河北某氮肥厂曝气池污泥。并按照具体分离筛选方式通过步骤1~5获得菌株12株,将所得12株菌株培养后用分光光度计检测菌液的OD600值,HPLC检测菌液中残留氨氮量计算降解率。OD600值大于等于1,氨氮降解率(培养基中残留氨氮浓度/培养基中氨氮初始浓度)大于等于50%的菌株有3株,菌株降解与生长数据如下:
菌株编号 1 2 3
菌液OD600 1.112 1.211 1.842
降解率(%) 54 63 75

Claims (3)

1.一种氨氧化微生物的分离筛选方法,其特征在于:将分离源在以氨氮为单一氮源的液体变色培养基中富集培养;而后再经过显色平板和液体培养筛选得到具有氨氧化能力的菌株,收集的目标菌株用于污水处理,使其在有氧条件下氧化污水中的氨进行氨氧化反应; 
所述以氨氮为单一氮源的液体变色培养基配制成分如下: 
将(NH4)2SO4 2~3g、KH2PO4 1~2g、Na2HPO4·12H2O 10~12g、FeSO4·7H2O 0.03g、MgSO4·7H2O 0.03g、溴百里酚兰40~80mg和酵母浸粉0.01~0.05g加入到1L无菌水中,pH为7.5~9.0; 
所述显色平板配制成分如下,将(NH4)2SO4 2g、FeSO4·7H2O 0.03g、MgSO4·7H2O 0.03g、酵母浸粉0.05g、琼脂15~20g、溴百里酚兰40~80mg加入到1L蒸馏水中,pH为7.5~9.0; 
所述分离源为城市污水处理厂曝气池污泥或含氨废水工厂曝气池污泥; 
具体筛选过程为: 
1)取分离源加入到其5~10倍体积的无菌水中,使微生物混合均匀;取混合液1~10ml加入到100ml以氨氮为单一氮源的液体变色培养基中,以25~35℃,150~250转/分富集培养至培养液由蓝色变为橙红色,取1~10ml菌液再加入至新的氨氮为单一氮源的液体变色培养基中,继续富集培养至培养液由蓝色变为橙红色;再取20~30ml菌液重复富集培养3~5次,待用; 
2)将上述富集培养至橙红色的菌液用无菌水稀释至10-6~10-9各梯度; 
3)分别取上述稀释的各个梯度浓度的菌液50~200μl于显色平板,于25~35℃培养箱中倒置培养,待出现明显的橙红色菌株后挑取深红色的菌落在显色平板上划线纯化培养; 
4)将划线纯化培养得到的深红色的菌落接种至AOM固体培养基,培养3~5天后挑取单菌落接种到AOM液体培养基中,在25~35℃,150~250转/分摇瓶培养5~7天,检测菌液在600nm波长检测光下吸光值,OD600值大于等于1,氨氮去除率大于等于50%的菌株即为高活力氨氧化菌株; 
所述AOM液体培养基为(NH4)2SO4 2~3g、NaCl 0.3~0.5g、FeSO4·7H2O 0.03~0.05g、K2HPO4 2~3g、MgSO4·7H2O 0.03~0.05g、蒸馏水1000ml、pH8~9; 
所述AOM固体培养基为:(NH4)2SO4 2~3g、NaCl 0.3~0.5g、FeSO4·7H2O 0.03~0.05g、K2HPO4 2~3g、MgSO4·7H2O 0.03~0.05g、2%琼脂、蒸馏水1000ml、pH8~9。 
2.按权利要求1所述的氨氧化微生物的分离筛选方法,其特征在于:取所述氨氮去除率大于50%的且OD600值最高的菌液,在AOM固体培养基上划线,平板在25~30℃培养3~5天后,挑取单菌落接种到液体培养基中,在25~30℃,150~250转/分摇瓶培养5~7天,取菌液200μl加入1.8ml的20%甘油水溶液中,-70℃冰箱保存; 
所述液体培养基为(NH4)2SO4 2~3g,K2HPO4 1~2g,Na2HPO4·12H2O 10~12g,溴百里酚蓝40~80mg,蒸馏水1000ml。 
3.按权利要求1所述的氨氧化微生物的分离筛选方法,其特征在于:所述步骤3)于25~35℃培养箱中倒置培养的平板上菌株出现明显的橙红色菌株后挑取深红色的菌落在显色平板上划线;划线后的平板再于25~35℃培养箱中倒置培养5~7天,挑取深红色的单菌落继续在显色平板上划线培养,重复这一过程3~5次。 
CN201310149554.3A 2013-04-26 2013-04-26 一种氨氧化微生物的分离筛选方法 Active CN103266068B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310149554.3A CN103266068B (zh) 2013-04-26 2013-04-26 一种氨氧化微生物的分离筛选方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310149554.3A CN103266068B (zh) 2013-04-26 2013-04-26 一种氨氧化微生物的分离筛选方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103266068A CN103266068A (zh) 2013-08-28
CN103266068B true CN103266068B (zh) 2015-02-25

Family

ID=49009733

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310149554.3A Active CN103266068B (zh) 2013-04-26 2013-04-26 一种氨氧化微生物的分离筛选方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103266068B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105002119A (zh) * 2015-08-17 2015-10-28 海南卓越生物有限公司 一种硝化细菌的半固体培菌方法
CN110511975A (zh) * 2019-08-05 2019-11-29 天津亿利科能源科技发展股份有限公司 一种含溴废水处理高效菌筛选培养实验方法
CN117431170B (zh) * 2023-04-10 2024-05-14 恒臻(无锡)生物科技有限公司 一种氨氧化菌及利用氨氧化菌检测废水毒性的方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102864075A (zh) * 2012-10-10 2013-01-09 天津市兴源环境技术工程有限公司 氨氧化细菌筛选鉴定试剂盒、筛选鉴定及菌样分离方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL2172430T3 (pl) * 2007-08-08 2011-11-30 Guanghao Peng Sposób usuwania zanieczyszczenia w postaci C, N, wykorzystujący heterotroficzne bakterie utleniające amoniak

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102864075A (zh) * 2012-10-10 2013-01-09 天津市兴源环境技术工程有限公司 氨氧化细菌筛选鉴定试剂盒、筛选鉴定及菌样分离方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
一株氨氧化茵的分离及其生物学特性研究;罗琼芳等;《四川大学学报(自然科学版)》;20060630;第43卷(第3期);682-687 *
新型异养氨氧化菌的分离鉴定及氨氧化特性ag;刘志培等;《环境污染与防治》;20050831;第27卷(第5期);337-339 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103266068A (zh) 2013-08-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Fito et al. Microalgae–bacteria consortium treatment technology for municipal wastewater management
Zhang et al. Rapid establishment and stable performance of a new algal-bacterial granule system from conventional bacterial aerobic granular sludge and preliminary analysis of mechanisms involved
Su et al. Comparison of nutrient removal capacity and biomass settleability of four high-potential microalgal species
Marchello et al. Microalgae population dynamics in photobioreactors with secondary sewage effluent as culture medium
CN103103153B (zh) 一株具有脱氮除磷效果的厌氧反硝化聚磷菌及其应用
Zhang et al. Mixed-culture aerobic anoxygenic photosynthetic bacterial consortia reduce nitrate: Core species dynamics, co-interactions and assessment in raw water of reservoirs
CN109536405A (zh) 一种复合微生物制剂
CN103805546A (zh) 约翰逊不动杆菌aj-3菌株及其用途
CN103266068B (zh) 一种氨氧化微生物的分离筛选方法
CN110846254A (zh) 用于脱氮的复合微生物菌剂及其制备方法和应用
CN102864098B (zh) 一株反硝化聚磷细菌H-hrb02及其筛选方法和应用
Liu et al. Comparison of swine wastewater treatment by microalgae and heterotrophic nitrifiers: focusing on nitrogen removal mechanism revealed by microbiological correlation analysis
CN109355206A (zh) 复合微生物除氮菌剂
CN105925508A (zh) 一种好氧反硝化假单胞菌及其应用
Liu et al. Research on microbial community structure and treatment of dye wastewater with the enhancement of activated sludge by magnetic field at low temperature
Narendran et al. Bioremoval of toxic substances in synthetic wastewater using Trichoderma pubescens (NPK2), isolated from mangrove soil
CN105039225B (zh) 一种好氧反硝化菌及其应用
G Madkour et al. Removal of ammonia and orthophosphate from domestic wastewater using marine actinomycetes
CN111440747A (zh) 用于污水处理的复合微生物菌剂及微生态制剂与应用
CN101418273B (zh) 工业废水生物脱氮的反硝化假单胞菌sh12及用途
Wang et al. Efficient culture of Rhodopseudomonas palustris using landfill leachate
CN110261267B (zh) 一种渔用光合细菌制剂产品的检测方法
CN108034622B (zh) 一株好氧反硝化菌zj-17及其应用
Wang et al. Isolation and degradation characteristics of highly efficient malodorous black water degrading bacteria
Naili et al. Screening of bacteria isolated from activated sludges for phosphate removal from wastewater

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 100031, 28, Fuxing Avenue, Xicheng District, Beijing

Co-patentee after: Shenyang Chemical Research Institute Co., Ltd.

Patentee after: Sinochem Corporation

Co-patentee after: Sinochem Environmental Technology Engineering Co., Ltd

Address before: 100031, 28, Fuxing Avenue, Xicheng District, Beijing

Co-patentee before: Shenyang Chemical Research Institute Co., Ltd.

Patentee before: Sinochem Corporation

Co-patentee before: Shenyang Research Institute of Chemical Industry Design Engineering Co., Ltd.

CP01 Change in the name or title of a patent holder