CN103263486A

CN103263486A - 一种具有降糖活性的赤芍提取物的应用

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Publication number: CN103263486A
Application number: CN2013102328336A
Authority: CN
Inventors: 陈曦; 齐云; 路娟; 高源�; 李光
Original assignee: 陈曦
Priority date: 2013-06-13
Filing date: 2013-06-13
Publication date: 2013-08-28

Abstract

本发明属于中药提取物应用领域，具体涉及一种具有降糖活性的赤芍提取物的应用。本发明赤芍提取物通过溶剂加热回流提取，再通过柱色谱分离纯化得到赤芍提取物，体外实验表明该提取物可以抑制α-糖苷酶的活性，动物实验表明该提取物能显著降低糖尿病大鼠体内的血糖浓度。在该提取物中通过加入不同的剂型辅料，即可加工制作成各种食品、保健品和药品。同时，该提取物还具有来源广泛、物美价廉、服用安全的突出优点。

Description

一种具有降糖活性的赤芍提取物的应用

技术领域

本发明属于中药提取物应用领域，具体涉及一种具有降糖活性的赤芍提取物的应用。

背景技术

糖尿病是一种慢性代谢性疾病，患者的主要表现为高血糖。持续的高血糖会导致许多并发症，如视网膜、肾脏、神经系统及微血管并发症等。目前全世界约有2.46亿人患有Ⅱ型糖尿病，预计在20年内患者数目将达到3.8亿。目前，治疗糖尿病的药物主要有胰岛素分泌促进剂(磺酰脲类、瑞格列奈)、胰岛素增敏剂(双胍类、噻唑烷二酮类)和α-葡萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)，但它们常具有不同程度的副作用，如低血糖、体重增加及心血管副作用等。开发作用于新靶点、避免传统抗糖尿病药物副作用的新型抗糖尿病药物成为国内外研究的热点。

中草药是我国独具优势的天然药物资源，古今中医典籍记载和临床应用都有大量的中草药降糖的实例。而且中草药本身具有多靶点、毒副作用小的优点。赤芍为毛莨科芍药(Paeonia lactiflora Pall.)或川赤芍(P. veitchii Lynch.)的干燥根。其味苦，微寒，归肝经，具有清热凉血，散瘀镇痛之功效。从赤芍中分离出有效组分，开发出治疗糖尿病的现代中药具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的问题是运用现代中药提取技术，从赤芍中制备具有降血糖作用的提取物，该提取物可以与药学上所有可接受的剂型辅料混合后进一步加工成相应食品、保健品和药品。

为解决以上问题，本发明采取了如下的技术方案：

本发明赤芍提取物通过溶剂加热回流提取，再通过柱色谱分离纯化得到赤芍提取物，体外实验表明该提取物可以抑制α-糖苷酶的活性，动物实验表明该提取物能显著降低糖尿病大鼠体内的血糖浓度。

在该提取物中通过加入不同的剂型辅料，即可制成各种不同剂型的食品、保健品和药品。同时，该提取物还具有来源广泛、物美价廉、服用安全的突出优点。

具体实施方式：

以下实施例仅用于阐述本发明，并不限制本发明的保护范围。本技术领域的普通技术人员依据以上公开的范围，均可实现本发明的目的。

实施例1 赤芍提取物的制备

取干燥赤芍饮片200g，以料液比1:8加70%乙醇1600ml，提取两次，每次60min，滤过，合并滤液，减压浓缩，得到含有0.50g生药/ml的药液400ml。称取已预处理的D101大孔吸附树脂300g，置于层析柱中，上样，控制上样流速为3BV/h，静置0.5h，水洗4BV，20%乙醇纯化3BV, 并用4BV的50%的乙醇解析，解析液回收乙醇，冻干，得到赤芍提取物10.38g，通过高效液相色谱的方法，确定提取物中芍药总苷的含量为63.21%，将该提取物用于以下体外α-糖苷酶抑制活性及大鼠体内降糖活性的考察。

实施例2 赤芍提取物的制备

取干燥赤芍饮片200g，以料液比1:10加70%乙醇2000ml，提取两次，每次1.5min，滤过，合并滤液，减压浓缩，得到含有0.50g生药/ml的药液400ml。称取已预处理的D101大孔吸附树脂300g，置于层析柱中，上样，控制上样流速为3BV/h，静置0.5h，水洗4BV，20%乙醇纯化3BV, 并用4BV的50%的乙醇解析，解析液回收乙醇，冻干，得到赤芍提取物10.38g。

实施例3 赤芍提取物中芍药总苷含量的测定

芍药苷类成分均含有苯甲酸酯键结构，所以采用碱水解法释放出苯甲酸，高效液相色谱法测定苯甲酸的含量，进一步计算芍药总苷的含量。

色谱条件：

Waters Acquity H-Class系统；色谱柱: Diamonsil200*4.6mm, 5μm；流动相：甲醇：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液：异丙醇：冰醋酸=67：173：4：4；流速：1ml/min；检测波长：235nm；进样量10μl。

称取苯甲酸对照品(批号120930，上海融禾医药科技发展有限公司)0.0049g，置于5ml容量瓶中，用40%甲醇稀释至刻度。

精密称取赤芍提取物0.0288g，置于5ml容量瓶中，加5%NaOH溶解并稀释至刻度，摇匀得样品储备液5.76mg/ml。分别取样品储备液0.2ml，置于20ml具塞试管中，于100℃沸水浴中水解2h，冷却，用40%甲醇转移至5ml量瓶中，定容，0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液，进行分析。

按照上述色谱条件进行分析(如图1和图2所示)，对照品和样品进样后得到的峰面积分别为41705673和1585344，赤芍提取物中苯甲酸的含量为16.17%。

芍药总苷含量(%)=苯甲酸含量/122.12*480.47*100%

通过高效液相色谱的方法，确定提取物中芍药总苷的含量为63.61%，将该提取物用于以下体外α-糖苷酶抑制活性及大鼠体内降糖活性的考察。

实施实例4 赤芍提取物的活性评价实验

将各浓度的药液按每孔50μl加入酶标板，空白加50μl磷酸缓冲液，每个剂量设反应孔和对照孔，空白也不例外。每个反应孔加50μl酶(空白加50μl磷酸缓冲液)后在37℃孵育20min。每孔加100μl底物后在37℃孵育20min在酶标仪405nm处测定OD值，测试结果见图3。抑制率（%）＝［1－（给药反应OD值－给药对照OD值）/（空白反应OD值－空白对照OD值）］*100

由图3可以看出，随着赤芍提取物浓度的增大，对α-糖苷酶的抑制活性逐渐增大，当浓度达到10μg/ml时，对α-糖苷酶的抑制率趋于100%，对α-糖苷酶的抑制作用使淀粉类物质分解为葡萄糖的速度减慢，从而减缓肠道内葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖。

实施实例5 赤芍提取物体内降糖活性评价

1．动物与试剂

SD大鼠，雄性，体重（180-200g），由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(军)2007-004，链脲霉素（STZ）。

2．实验方法

选取体重为（180-200g）的SD雄性大鼠70只，普通饲料喂养2周，自由进食、饮水。取体重为220±5g的大鼠，选取8只作为空白组，其余大鼠禁食12h后腹腔注射STZ，注射剂量为60mg/kg，24h内连续注射2次。3天后禁食12h眼眶取血测血糖含量，选取血糖含量>16.1mmol/L的糖尿病模型大鼠40只，分为5组，每组8只，即为模型组、阳性对照胰岛素组、赤芍提取物低、中、高剂量组。各组给药剂量如下：空白组、模型组灌胃等剂量生理盐水，赤芍低剂量组为60mg/kg，赤芍中剂量组120mg/kg，赤芍高剂量组240mg/kg。连续灌胃28天，第0d、14d、21d和28d大鼠禁食12h，眼眶取血测血糖值。于最后一次测血糖前1天禁食12h，灌胃1h后，取血，分离血清，按照试剂盒说明书分别测定各种指标。

3. 数据分析

采用SPSS进行数据分析。

4. 试验结果

赤芍提取物对糖尿病大鼠空腹血糖的影响如下表所示：

表1 赤芍提取物对糖尿病大鼠空腹血糖值的影响

Figure 2013102328336100002DEST_PATH_IMAGE001

注：与空白组比较，^##P＜0.01，与模型组比较，* P＜0.05.

赤芍提取物的体外α-糖苷酶抑制活性测试结果表明，该提取物在体外具有较强的α-糖苷酶抑制作用；动物实验表明，糖尿病大鼠给药28天后，赤芍提取物中、高剂量组与模型组相比均可显著降低糖尿病大鼠空腹血糖水平。该结果说明该赤芍提取物对糖尿病大鼠具有一定的降血糖作用。

表2 赤芍提取物对STZ所致糖尿病大鼠血脂及抗氧化能力的影响

Figure 2013102328336100002DEST_PATH_IMAGE002

与模型组比较，**P＜0.01，* P＜0.05；与空白组比较，^##P＜0.01，^# P＜0.05

从表2中可以看出，与空白对照组相比，模型组中甘油三酯水平、低密度脂蛋白水平和MDA水平均显著升高(P＜0.05)，血清高密度脂蛋白水平和红细胞SOD活力显著降低(P＜0.05)，说明糖尿病大鼠出现了显著的血脂升高和抗氧化能力降低的症状，造模型成功。与模型组相比，高、中剂量赤芍提取物组阳对组可显著降低甘油三酯的水平，高、中剂量组赤芍提取物可显著降低血清低密度脂蛋白水平和高密度脂蛋白水平，高、中、低剂量组均可显著降低血清MDA水平，升高红细胞SOD的活力。

实施实例6 赤芍提取物胶囊剂的制备

取赤芍提取物100g，过80目筛，与微晶纤维素40g混合均匀，以95%乙醇制粒，干燥，以20目筛整粒，灌装胶囊。

实施实例7 赤芍提取物片剂的制备

取赤芍提取物100g，过80目筛，与微晶纤维素120g、羧甲基淀粉钠10g混合均匀，以5%PVP制粒，干燥，以20目筛整粒，加入硬脂酸镁3.5g，压片。

实施实例8 赤芍提取物口服液的制备

取赤芍提取物100g，过80目筛，与蜂蜜1kg，蔗糖180g、苯甲酸钠12g及蒸馏水2000ml混合，加热至85～90℃，搅拌使其溶解，保温30min，滤过，滤液加水稀释至4000ml，搅拌均匀，灌装，灭菌。

实施实例9 本发明的临床应用

本发明在西苑医院自2011年8月-2012年12月临床应用了赤芍提取物胶囊，治疗糖尿病人80例，收到良好疗效，其中最大年龄82岁，最小年龄21岁，男性48人，女性32人，其治疗效果如表所示：

表3 80例临床应用效果观察

Figure 2013102328336100002DEST_PATH_IMAGE003

由表3可以看出，80例临床应用效果达到97.5%，只有尿糖和血糖值较高的两例病例未恢复到正常血糖的水平，赤芍制得的赤芍提取物胶囊在临床上具有非常好的降糖效果。

Claims

1.一种具有降糖活性的赤芍提取物的应用，其特征为将该提取物与药学上所有可接受的剂型辅料混合，加工制作成各种食品、保健品和药品。

2.根据权利要求1所述的从赤芍中制备的具有降糖活性的提取物，其特征为有效部位芍药总苷的含量大于50%。

3.根据权利要求1-2所述的从赤芍中制备的具有降糖活性的提取物，其特征为体外实验中，能够抑制α-葡萄糖苷酶的活性。

4.根据权利要求1-3所述的从赤芍中制备的具有降糖活性的提取物，其特征为动物实验中，能够显著降低糖尿病大鼠体内的血糖浓度。