CN103255121B - 一种天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的复合稳定剂 - Google Patents
一种天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的复合稳定剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种保存天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的复合稳定剂及其使用方法，可以在液体条件下较长时间保存天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的酶活力。它是由原料甘油、β-环糊精、海藻糖和无机盐混配搅拌制成。各原料含量为：甘油0-60%、β-环糊精1-15g/L、海藻糖5-20g/L、0.5-5mol/L无机盐。其使用方法为：将复合稳定剂与酶制剂加热至一定的温度，然后迅速将两者混匀，边加入边搅拌，再在合适的温度下保温一定的时间即可。本发明可以使天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶在溶液中保持其稳定，活性衰退减缓。本发明的原料易于取得，可以在4℃下1年内保持天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶活力，避免使用冻干粉剂，简化了诊断试剂的操作步骤及保证了诊断试剂的稳定性。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域。具体涉及一种保存天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的复合剂及其使用方法。
背景技术
在已发现的转氨酶中，以天门冬氨酸氨基转移酶为代表的酸性氨基酸转氨酶应用最为广泛。天门冬氨酸氨基转移酶具有高催化活性的酶，它是以酸性氨基酸为氨基供体，α-酮酸为氨基受体，能专一性地制备一系列芳香族氨基酸。
真核生物天门冬氨酸氨基转移酶有两个同工酶：一种是胞质型，即ASTs，其亚基含有412个残基；另一个是线粒体型，即ASTm，其亚基含有401个残基。两种同工酶的序列同源性达到45%-50%。两种同工酶广泛存在于心、肝、骨骼肌、肾等脏器组织中，尤以心脏和肝组织中含量最高，达60%-80%。这些脏器损伤可使同工酶增高，损伤的程度不同，两种同工酶在血清中的比例也不同。
ASTs型主要是炎症使细胞通透性改变而释放进入血液系统，是一反映炎症的指标，在这种情况下细胞并没有坏死。ASTm型一般要在细胞坏死，胞质内线粒体破坏后，才释放入血。因此，ASTm型值反映细胞的坏死程度。两种同工酶在血清中的半衰期不同，ASTm型在血中消除率比ASTs型快5倍以上。当细胞不再破坏和修复时，血中ASTm值很快降至正常水平。因此，ASTm又是预后评价的指标。
但是ASTm稳定性很差，ASTm的不稳定性给临床样本的保存、工业上的应用带来很大困难。因此简单并且稳定酶活的保存方法具有很高的工业应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种保存天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的复合稳定剂及其使用方法，可以在液体条件下较长时间保持天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的酶活力。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
本发明是一种保存天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的复合稳定剂及其使用方法，由原料甘油、β-环糊精、海藻糖和无机盐搅拌配制而成；其使用方法为：将复合稳定剂与酶制剂加热至一定的温度，然后迅速将两者混匀，边加入边搅拌，再在合适的温度下保温一定的时间即可。
所述的无机盐为氯化锰、氯化亚铁、氯化锌、氯化钴、氯化钠和氯化钾中的一种或几种。
所述的海藻糖可以替换为乳糖、蔗糖、甘露糖。
所述的各原料含量为：甘油0-60%、β-环糊精1-15g/L、海藻糖5-20g/L 、0.5-5mol/L无机盐。
所述的加热温度为30℃-55℃，保温温度为25℃-40℃。
所述的保温时间为3-60min。
所述的天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶溶液与复合剂的体积比为5∶1-50∶1。
作为优选天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶复合剂的使用方法为：将复合稳定剂与酶制剂加热至35℃，然后迅速将两者混匀，边加入边搅拌，再在30℃下保温20min即可。
具体实施方式
实施例1
配制复合稳定剂1，其配方以1000mL量计为：
甘油 500mL
β-环糊精 15g
海藻糖 4g
氯化亚铁 0.5mol
氯化钠 2mol
实施例2
配制复合稳定剂2，其配方以1000mL量计为：
甘油 300mL
β-环糊精 10g
海藻糖 12g
氯化锌 1mol
氯化钠 3mol
实施例3
配制复合稳定剂3，其配方以1000mL量计为：
甘油 400mL
β-环糊精 15g
海藻糖 10g
氯化锰 1.5mol
氯化钠 1.5mol
实施例4
配制复合稳定剂4，其配方以1000mL量计为：
β-环糊精 15g
海藻糖 5g
氯化锰 1.5mol
氯化钠 2mol
实施例5
取上述各复合稳定剂10ml分别添加到90mL天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶制剂中，55℃烘箱1天后检测酶的活性。在相同条件下，检测添加复合剂和未添加复合剂的酶制剂活性，结果见表1。
表1 复合稳定剂对酶活的稳定作用
| 配方 | 复合稳定剂1 | 复合稳定剂2 | 复合稳定剂3 | 复合稳定剂4 | 无（即：对照） |
| 残留酶活 | 64.8% | 78.3% | 85.1% | 69.2% | 13.2% |
实施例6
取配方3的复合稳定剂10ml添加到90mL天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶制剂中，与未添加复合剂的酶制剂分别在4℃下冷藏保存或室温保存12个月后，其储存稳定性如表 2。
表2 复合稳定剂3对酶活的稳定作用
| 配方 | 复合稳定剂3 | 无（对照） |
| 4℃保存酶活保留率（%） | 81.1 | 18.4 |
| 室温保存酶活保留率（%） | 42.3 | 5.1 |
Claims (2)
1.一种保存天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的复合稳定剂，其特征在于：将甘油、β-环糊精、海藻糖和无机盐混匀搅拌，配置成液体稳定剂；将该液体稳定剂与酶制剂加热至一定的温度，然后迅速将两者混匀，边加入边搅拌，再在合适的温度下保温一定的时间即可；其中，各原料含量为：甘油0-60%、β-环糊精1-15 g/L、海藻糖5-20 g/L 、无机盐0.5-5 mol/L；
所述的无机盐为氯化锰、氯化亚铁、氯化锌、氯化钴、氯化钠和氯化钾中的一种或几种；
加热温度为30℃-55℃，保温温度为25℃-40℃；
保温时间为3-60 min。
2.根据权利要求1所述的一种保存天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶的复合稳定剂，其特征在于：天门冬氨酸氨基转移酶线粒体同工酶溶液与复合稳定剂的体积比为5:1 ~50:1。
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