CN103230418A - 一种抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物及其制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物，该提取物是用体积百分比浓度为40～80%的乙醇回流提取猴头菌培养物，然后在30～80℃条件下旋蒸，加水析出的沉淀物。该提取物打破了传统的以抗生素为主，辅加抑酸剂（铋剂），常用抗生素羟氨苄青霉素、庆大霉素、克拉霉素和阿莫西林等治愈幽门螺旋杆菌感染的治疗原则，其治疗效果明显，且副作用小。

Description

一种抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物及其制备工艺

技术领域

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及生物药用菌丝体，其提取物抗幽门螺旋杆菌效果好。 

背景技术

幽门螺旋杆菌病是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的细菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃粘膜活检组织中分离成功，是目前所知能够在人胃中生存的惟一微生物种类。幽门螺旋杆菌病包括由幽门螺旋杆菌感染引起的胃炎、消化道溃疡、淋巴增生性胃淋巴瘤等。幽门螺旋杆菌病的不良预后是胃癌。 

幽门螺旋杆菌寄生在胃粘膜组织中，67%-80%的胃溃疡和95%的十二指肠溃疡是由幽门螺旋杆菌引起的。慢性胃炎和消化道溃疡患者的普遍症状为：食后上腹部饱胀、不适或疼痛，常伴有其它不良症状，如嗳气、腹胀、反酸和食欲减退等。有些病人还可出现反复发作性剧烈腹痛、上消化道少量出血等。专家们认为，幽门螺旋杆菌感染使患胃癌的危险增加了2.7-12倍，如果没有幽门螺旋杆菌感染，至少有35%-89%的胃癌不会发生。 

幽门螺旋杆菌感染是可以治愈的。一般的治疗原则是以抗生素为主，辅加抑酸剂（铋剂），常用抗生素羟氨苄青霉素、庆大霉素、克拉霉素和阿莫西林等，但副作用也较明显。在中药中虽然也有报道，但效果并不很明显。 

药用真菌是指能治疗疾病，具有药用价值的一类真菌，即在菌丝体、子实体、菌核或孢子中能产生诸如氨基酸、蛋白质、维生素、多糖及糖蛋白、甙类、生物碱、甾醇类、蒽醌类、黄酮类等多类物质，对人体有保健作用，对疾病有预防抑制或治疗作用的真菌。真菌作为药用在我国已有2000多年的历史，早在《神农本草经》中就记载了茯苓、猪苓等真菌药物，《本草纲目》中也收载了20多种生物药用菌，目前我国传统作为药用及试验证实具有药效的真菌已超过400种，主要集中在担菌亚门和子囊菌亚门。然而日常广泛应用于临床的却仅有20余种，《中国药典》2010年版明确收录了7种，这说明对生物药用菌的研究还很不完善，开发空间较大。现有的研究主要集中于灵芝、虫草等少数几 个品种，并且主要针对真菌多糖作为剂型的研究及开发应用。 

猴头菌培养物的活性物质中最重要的是多糖及糖蛋白，目前国内外对猴头多糖的研究表明，猴头菌多糖具有多种生物活性和药理作用，能增强巨噬细胞的吞噬功能，促进溶血素的形成，抗白细胞下降，降血糖、抗凝血、抗血栓、抗突变和抗衰老等。因此，猴头菌多糖备受人们关注，成为近年来分子生物学、医药、食品科学等领域研究和开发应用的热点。《湖南省中药材标准》2009年版，122-123页记载了猴头菌培养物，现有的猴头健胃灵胶囊药物就是以猴头菌培养物为主要原料，另配伍海螵蛸、延胡索、白芍、香附、甘草，具有舒肝和胃，理气止痛。用于肝胃不和，胃脘胁肋胀痛，呕吐吞酸；慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡属上述证侯者。 

随着生物科学的发展，真菌、粘菌、地衣等已从植物界中分离出来，单独成立菌物界。虽然该界入选中药的品种还较少，但其中高等真菌数千种潜力巨大，除目前久负盛名的灵芝、茯苓、虫草、槐耳种类外，今后无疑将会出现更多此类菌物药，将会大大丰富中药宝库。此外，以药用真菌为主体的菌物药，除传统应用子实体外，现代已发展到采用液体（深层）发酵（应用菌球与发酵液）、固体发酵（应用菌质）等生产工艺。固体发酵产生的普通菌质其主要药用部位仍只是它所含的菌丝体及其次生物质，但值得注意的是药用菌子实体除可自身入药外，还可用以进行中药生物工程研究，以研制新药。而发酵工程，尤其是我国特有的固体发酵工程，它存在的时间已有2000多年历史，通过长时间的固体发酵，产生了生物代谢产物包括生物酶类物质，其生成的药用菌质比液体发酵药效好。但固体发酵存在缺陷，容易杂菌污染，现固体发酵技术研究是国内研究热点，主要研究的方向是无菌培养、二次培养、杂菌抑制、中药材作为营养基实施双向固体发酵技术，突破固体发酵技术的瓶颈，实现生物药用菌的大规模产业化。 

当前，从高等真菌及其培养物中进行筛选和发现活性成分，应用于抗肿瘤、抗病毒、糖尿病等，不仅成为国家重点研究新药的发展方向，也是当今世界各国开发生物医药的热点，但还未有报道称从药用真菌中进行筛选和发现活性成分，应用于抗幽门螺旋杆菌的报道。 

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，从药用真菌猴头菌培养物中提取分离出一 种具有抗幽门螺旋杆菌效果的提取物。 

为了达到上述目的，本发明提供的技术方案为： 

一种抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物，所述提取物按如下步骤制备： 

（1）取猴头菌培养物，用体积百分比浓度为40～80%的乙醇回流提取1～3h，然后在4000r/min条件下离心5～10min，除去药渣，得提取液；其中，回流提取时，猴头菌培养物与乙醇的重量比为1:3～10； 

（2）将提取液在30～80℃条件下旋蒸至无醇味，加水析出沉淀物，然后在4000r/min条件下离心5～10min，将沉淀物在-60～-40℃条件下干燥，即得抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物。 

优选地，步骤（1）中乙醇的体积百分比浓度为40～60%。 

优选地，步骤（1）中乙醇的体积百分比浓度为50%。 

优选地，步骤（2）中提取液是在40～60℃条件下旋蒸至无醇味。 

优选地，步骤（2）中提取液是在50℃条件下旋蒸至无醇味。 

优选地，步骤（2）中沉淀物干燥温度为-60℃。 

优选地，步骤（1）和（2）中离心条件均为4000r/min离心8min。 

本发明所述猴头菌培养物是《湖南省中药材标准》2009年版，122-123页记载的猴头菌培养物，该猴头菌培养物为猴头菌科真菌猴头菌Hericium erinaceum（Bull.ex Fr）Pers.的菌丝体与其附生的固体培养基的干燥混合物。 

下面结合试验方法及数据对本发明及其效果做进一步说明： 

一、样品制备：取猴头菌培养物，按下述制备工艺制备样品（各实验组其他条件相同，以下所述的猴头菌培养物提取物即为抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物） 

二、体外抗幽门螺杆菌实验 

1、目的：采用二倍试管稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）和点试法测定最低杀菌浓度（MBC），评价1-7号样品体外抗幽门螺杆菌作用。 

2、结果： 

2.1琼脂平板中各药物的抗H.pylor作用 

1、3、4、5、6号药物在平板中未见抑菌圈，2号可见明显的抑菌圈。各药物抗菌作用1.3.4.5.6号药物无抗菌作用与2号药比较（p＜0.05）；2号药虽然表现出抗菌作用，但其抗菌作用不如阳性对照药头孢曲松钠（菌必治），羟氨苄青霉素，克拉霉素以及四环素，但与阳性药物联合体现出协同作用（见表1，图1-5）。 

表1  对幽门螺杆菌（H.pylori）抑菌作用 

2.2液体培养基中药物对H.pylori的抑杀作用 

表2提示各药对H.pylori的抑制作用，2号提取物则表现出较好的杀菌作 

用，2号效果最优（见表2）。 

表2  对H.pylori杀菌作用 

该提取物打破了传统的以抗生素为主，辅加抑酸剂（铋剂），常用抗生素羟氨苄青霉素、庆大霉素、克拉霉素和阿莫西林等治愈幽门螺旋杆菌感染的治疗原则，其治疗效果明显，且副作用小。 

附图说明

图1为猴头菌培养物提取物1、2、3、4、6的抑菌实验图； 

图2为猴头菌培养物提取物1、3、4、5、6的抑菌实验图； 

图3为猴头菌培养物提取物2号的抑菌实验图； 

图4为猴头菌培养物提取物2号与菌必治、四环素、克拉霉素的联合抗菌实验图； 

图5为猴头菌培养物提取物2号与菌必治、克拉霉素、羟氨苄青霉素的联合抑菌实验图； 

其中，图中数字为猴头菌培养物提取物编号。 

具体实施方式

实施例1 

一种抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物，所述提取物按如下步骤制备： 

（1）取猴头菌培养物，用体积百分比浓度为50%的乙醇回流提取1h，然后在4000r/min条件下离心8min，除去药渣，得提取液；其中，回流提取时，猴头菌培养物与乙醇的重量比为1:3； 

（2）将提取液在50℃条件下旋蒸至无醇味，加水析出沉淀物，然后在4000r/min条件下离心8min，将沉淀物在-60℃条件下干燥，即得抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物。 

实施例2 

一种抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物，所述提取物按如下步骤制备： 

（1）取猴头菌培养物，用体积百分比浓度为40%的乙醇回流提取3h，然后在4000r/min条件下离心58min，除去药渣，得提取液；其中，回流提取时，猴头菌培养物与乙醇的重量比为1:10； 

（2）将提取液在50℃条件下旋蒸至无醇味，加水析出沉淀物，然后在4000r/min条件下离心8min，将沉淀物在-40℃条件下干燥，即得抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物。 

实施例3 

一种抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物，所述提取物按如下步骤制备： 

（1）取猴头菌培养物，用体积百分比浓度为80%的乙醇回流提取2h，然后在4000r/min条件下离心8min，除去药渣，得提取液；其中，回流提取时，猴头菌培养物与乙醇的重量比为1:6； 

（2）将提取液在80℃条件下旋蒸至无醇味，加水析出沉淀物，然后在4000r/min条件下离心8min，将沉淀物在-60℃条件下干燥，即得抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物。 

Claims (7)

1.一种抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物，其特征在于，所述提取物按如下步骤制备：

（1）取猴头菌培养物，用体积百分比浓度为40～80%的乙醇回流提取1～3h，然后在4000r/min条件下离心5～10min，除去药渣，得提取液；其中，回流提取时，猴头菌培养物与乙醇的重量比为1:3～10；

（2）将提取液在30～80℃条件下旋蒸至无醇味，加水析出沉淀物，然后在4000r/min条件下离心5～10min，将沉淀物在-60～-40℃条件下干燥，即得抗幽门螺旋杆菌生物药用菌丝体提取物。

2.如权利要求1所述的提取物，其特征在于，步骤（1）中乙醇的体积百分比浓度为40～60%。

3.如权利要求2所述的提取物，其特征在于，步骤（1）中乙醇的体积百分比浓度为50%。

4.如权利要求1所述的提取物，其特征在于，步骤（2）中提取液是在40～60℃条件下旋蒸至无醇味。

5.如权利要求4所述的提取物，其特征在于，步骤（2）中提取液是在50℃条件下旋蒸至无醇味。

6.如权利要求1所述的提取物，其特征在于，步骤（2）中沉淀物干燥温度为-60℃。

7.如权利要求1所述的提取物，其特征在于，步骤（1）和（2）中离心条件均为4000r/min离心8min。

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