CN103214467B - 5-[[4-[(2,3-二甲基-2h-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基-苯磺酰胺衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基-苯磺酰胺衍生物及其制备方法与应用。本发明提供的化合物的结构式如I所示，其中R选自下述任意一种基团：烷基或苄基取代的六元含氮杂环基、具有5～8个碳原子的直链或支链烷胺基、含一个氧原子且具有6～11个碳原子的直链或支链烷胺基、含1个羧基且具有至少4个碳原子的直链或支链烷胺基、含1个羰基且具有至少5个碳原子的直链或支链烷胺基。本发明是在现已应用于临床的药物帕唑帕尼基础上，修饰其氨基侧链部分结构，得到的新化合物。通过药效试验证明，该化合物具有更好的抗血管内皮生长因子受体抑制作用。

Description

5-[[4-[(2,3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基-苯磺酰胺衍生物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基-苯磺酰胺衍生物及其制备方法与应用。

背景技术

随着生命科学研究的飞速发展，抗肿瘤药物的研发热点已从传统的细胞毒药物向肿瘤细胞内信号传导通路发展，目前抗血管生成治疗是抗肿瘤研究的热点。当实体肿瘤长到大约2～3mm³时需诱导新的血管生成以获取供血，否则肿瘤将会因缺血、缺氧而坏死。肿瘤的生长关键是需要新生血管生成及密度来提供营养及排泄代谢物，因此抑制其新生血管生成可以控制肿瘤生长。血管内皮生长因子(VEGF)是刺激血管生成的重要因子之一，血管内皮生长因子受体(VEGFR)在肿瘤新生血管中高表达，因此成为肿瘤靶向治疗的理想药物靶点。

发明内容

本发明的目的是提供一类5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基-苯磺酰衍生物及其制备方法。

本发明所提供的5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基-苯磺酰衍生物的结构式如式I所示：

式I中，R选自下述任意一种基团：烷基或苄基取代的六元含氮杂环基、具有5～8个碳原子的直链或支链烷胺基、含一个氧原子且具有6～11个碳原子的直链或支链烷胺基、含1个羧基且具有至少4个碳原子的直链或支链烷胺基、含1个羰基且具有5个碳原子的直链或支链烷胺基。

所述R可进一步选自下述基团中的任意一种：

式I所示化合物药学上可接受的盐也属于本发明的保护范围。适用于该化合物的药学上可接受的盐具体可为磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、醋酸盐、甲酸盐或马来酸盐。

制备上述式I所示化合物的方法，包括下述步骤：将式II所示化合物与式III化合物在无水乙醇中进行加热回流反应，得式I所示化合物；

其中，所述加热回流的时间为6～8小时。

制备式I化合物药学上可接受的盐的方法，包括下述步骤：将式I所示化合物溶于无水乙醇、甲醇或异丙醇中，并向其中加入有机酸或无机酸进行反应，即得式I化合物的盐。

所述有机酸可为甲酸、醋酸或马来酸；所述无机酸可为磷酸、盐酸、硫酸或硝酸。

为了等到纯化的产品，还可将上述步骤得到的盐置于体积分数为20％-95％的乙醇水溶液中进行重结晶。

制备上述式I化合物所用的式II所示化合物也属于本发明的保护范围。

式II中，R的定义同式I。

制备上述式II所示化合物的方法，包括下述步骤：

1)将式IV所示化合物与氯磺酸反应，得到式V所示化合物； 

2)将式V所示化合物与式VI所示化合物在二氯甲烷中反应后，再用盐酸对氨基脱保护，得到式II所示化合物；

或将式V所示化合物与烷基或苄基取代的六元含氮杂环化合物在二氯甲烷中进行反应，得到式II所示化合物；

式IV、式V中Ac代表乙酰基。

式VI中，R₁为具有5～8个碳原子的直链或支链烷胺基、含一个氧原子且具有6～11个碳原子的直链或支链烷胺基、含1个羧基且具有至少4个碳原子的直链或支链烷胺基、含1个羰基且具有至少5个碳原子的直链或支链烷胺基。

所述R₁可进一步选自下述基团中的任意一种：

所述烷基或苄基取代的六元含氮杂环化合物具体可选自下述基团中的任意一种：

本发明还提供了式I所示化合物或其药学上可接受的盐的应用。

本发明所提供的应用之一是式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用。

本发明所提供的应用之二是式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备抗血管生成药物中的应用。所述抗血管生成药物尤其是指抗肿瘤血管生成药物。

本发明所提供的应用之三是式I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖抑制剂中的应用。

本发明还保护一种预防和/或治疗肿瘤的药物。

所述药物，其活性成分为式I化合物或其药学上可接受的盐。

需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

用式I化合物或其药学上可接受的盐制备的预防和/或治疗肿瘤的药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

所述预防和/或治疗肿瘤的药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

体外抗血管生成试验常采用人血管内皮细胞模型。人血管内皮细胞模型主要包含两种：人脐静脉血管内皮细胞和人微血管(肺、皮肤等)内皮细胞。本发明的目标化合物为抗肿瘤血管生成抑制剂，其体外活性试验采用人脐静脉血管内皮细胞增殖抑制剂活性来评价抗血管生成活性。药效学试验证明，本发明提供的化合物具有抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的作用。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1、制备[5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基]-N-哌啶基苯磺酰胺盐酸盐

步骤1：室温下，在三颈瓶中加入对甲基苯胺(21.4g，0.2mol)与H₂O(100ml)，搅拌中加入浓HCl(14.7ml，0.2mol)溶解对甲基苯胺。再加入乙酸酐(18.88ml，0.2mol)同 时缓慢加入乙酸钠饱和溶液(32.66g，0.24mol)。室温搅拌下，析出沉淀，过滤，用适量的H₂O冲洗，晾干，得对甲基乙酰苯胺，淡咖啡色晶体24.25g，产率81.5％。

步骤2：在0℃下，缓慢将9ml(0.14mol)氯磺酸滴加入对甲基乙酰苯胺(3g，0.02mol)中，滴毕后50℃下加热30min。将溶液小心倒入冰水中(150ml)，析出大量泥浆状沉淀，过滤，干燥，得淡黄色固体2-甲基(5-氨基乙酰)苯磺酰氯，4.1g，产率82.3％。

步骤3：取2-甲基(5-氨基乙酰)苯磺酰氯(1.24g，0.005mol)溶解于CH₂Cl₂(12.5ml)中。室温下，滴加三乙胺(0.5ml)和哌啶(0.01mol)的混合溶液搅拌过夜。采用TLC监测反应完全后，用质量浓度10％稀HCl(12.5ml)洗涤溶液，收集有机相，减压浓缩得粘稠棕色固体。取质量浓度18％HCl(4.5ml)溶解固体，加热回流2h。冷却至室温后，加入饱和NaHCO₃溶液，调pH至8～9左右。用CH₂Cl₂(50ml)萃取，收集有机相，加无水Na₂SO₄干燥过滤，减压浓缩得棕色(2-甲基-5-氨基)-N-哌啶基苯磺酰胺，1,07g，产率84％。

步骤4：将本发明中式III所示化合物(0.6905g，0.0024mol)和(2-甲基-5-氨基)-N-哌啶基苯磺酰胺(0.0024mol)溶于无水乙醇(48ml)中，加6滴浓HCl(质量浓度36％)，加热回流6h。冷却至室温后，过滤，用少量乙醇冲洗固体，得淡黄色固体。加甲醇(30ml)加热溶解，加活性炭脱色除杂，过滤，冷却重结晶3次，得到灰白色或淡黄色结晶。其收率、理化数据见表1，核磁数据及质谱数据见表2。

表1中编号2-15的化合物参照实施例1制备，只需将步骤3中的哌啶替换为相应的侧链化合物即可。化合物的收率、理化数据见表1，核磁数据及质谱数据见表2。

实施例2、制备[5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基]-N-正己酰基苯磺酰胺

步骤1：室温下，在三颈瓶中加入对甲基苯胺(21.4g，0.2mol)与H2O(100ml)，搅拌中加入浓HCl(14.7ml，0.2mol)溶解对甲基苯胺。再加入乙酸酐(18.88ml，0.2mol)，同时缓慢加入乙酸钠饱和溶液(32.66g，0.24mol)。室温搅拌下，析出沉淀，过滤，用适 量的H₂O冲洗，凉干，得对甲基乙酰苯胺，淡咖啡色晶体24.25g，产率81.5％。

步骤2：在0℃下，缓慢将9ml(0.14mol)氯磺酸滴加入对甲基乙酰苯胺(3.5g，0.02mol)中，滴毕后50℃下加热30min。将溶液小心倒入冰水中(150ml)，析出大量泥浆状沉淀，倒去上层水液，加入氨水(15ml)。在搅拌下，缓慢滴加质量浓度20％H₂SO₄(20ml)，3h后过滤得灰白色粉末固体。在单口瓶中加入质量浓度18％HCl(10ml)与粉末固体，加热回流30min。冷却后，加H₂O(10ml)，再加入饱和的Na₂CO₃中和，有大量的白色固体析出，过滤的灰白色固体(2-甲基-5氨基苯磺酰胺)1.7g。

步骤3：将本发明中式III所示化合物(0.6905g，0.0024mol)和2-甲基-5-氨基苯磺酰胺(0.0024mol)溶于无水乙醇(48ml)中，加6滴浓HCl(质量浓度36％)，加热回流6h。冷却至室温后，过滤，用少量乙醇冲洗固体，得淡黄色固体。加甲醇(30ml)加热溶解，加活性炭脱色除杂，过滤，冷却重结晶3次，得[5-[[4-[(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)甲氨基]-2嘧啶基]氨基]-2-甲基]-N-正己酰基苯磺酰胺。其收率、理化数据见表1，核磁数据及质谱数据见表2。

实施例3、目标化合物的药效试验

药效试验采用了常用的MTT法测试目标产物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖抑制活性，所用的仪器为Labsystems公司的Multiskan Ascent-Thermo全自动酶标仪。

1、细胞培养及实验方法

接种细胞于含10％胎牛血清的RPMI1640细胞培养液中(补充青、链霉素各100u/ml)，置于37℃含5％CO₂的细胞培养箱中，每1-2天换液一次，0.25％胰蛋白酶消化，传代和收集细胞。将对数生长期细胞，用含10％胎牛血清的RPMI1640细胞培养液配制成3.0×10⁴/ml浓度的细胞悬液，按每孔3000细胞(100μl)加入到96孔细胞培养板中，培养24小时后。每孔加入含有不同浓度受试物的培养基100μl，每个浓度设3个平行孔。培养72小时后弃上清。每孔加入100μl新配制的0.5mg/ml四氮唑蓝(MTT)的无血清培养液，37℃培养4小时后弃上清。以100μl DMSO溶解，轻度振荡15分钟后，用酶标仪检测吸光度(OD值)，检测波长为570nm。

2、药物浓度及配制方法

以《抗肿瘤药效学指导原则》为指导，设置受试药品浓度100μg/ml，用细胞培养液10倍梯度稀释，另设空白为阴性对照组，帕唑帕尼为阳性对照组。药物临用前，用细胞培养液溶解使用。

3、数据处理 

根据公式：抑制率＝(对照组OD值-给药组OD值)/对照组OD值×100％。计算 出抑制率。再运用R软件同一样品的不同浓度对抑制率做线性回归法计算得到受试目标化合物的IC₅₀，结果见表1。

表1目标化合物的理化性质及药效学结果

注：上述产率为最后一步产率；；帕唑帕尼IC₅₀＝5.35μg/ml。

表2目标化合物的名称、核磁氢谱、质谱

^aCDCl₃；^bDMSO-d₆。

Claims (10)

1.式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐：

式Ⅰ中，所述R选自下述基团中的任意一种：

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述式Ⅰ所示化合物药学上可接受的盐为磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、醋酸盐、甲酸盐或马来酸盐。

3.制备权利要求1或2所述式Ⅰ所示化合物的方法，包括下述步骤：将式Ⅱ所示化合物与式Ⅲ所示化合物在无水乙醇中进行加热回流反应，得到式Ⅰ所示化合物；

4.制备权利要求1或2所述式Ⅰ所示化合物药学上可接受的盐的方法，包括下述步骤：将式Ⅰ所示化合物溶于无水乙醇、甲醇或异丙醇中，并向其中加入有机酸或无机酸进行反应，即得式Ⅰ所示化合物药学上可接受的盐；

其中，所述有机酸为甲酸、醋酸或马来酸；所述无机酸为磷酸、盐酸、硫酸或硝酸。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将所述式Ⅰ所示化合物药学上可接受的盐置于体积分数为20％-95％的乙醇水溶液中进行重结晶。

6.式Ⅱ所示化合物：

式Ⅱ中，所述R选自下述基团中的任意一种：

7.制备权利要求6中所述式Ⅱ所示化合物的方法，包括下述步骤：

1)将式Ⅳ所示化合物与氯磺酸反应，得到式Ⅴ所示化合物；

2)将式Ⅴ所示化合物与式Ⅵ所示化合物在二氯甲烷中反应后，再用盐酸对氨基脱保护，得到式Ⅱ所示化合物；

或将式Ⅴ所示化合物与烷基取代的六元含氮杂环化合物在二氯甲烷中进行反应，得到式Ⅱ所示化合物；

式Ⅳ、式Ⅴ中Ac代表乙酰基；

式Ⅵ中，所述R₁选自下述基团中的任意一种：

所述烷基取代的六元含氮杂环化合物选自下述基团中的任意一种：

8.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在下述任意方面的应用：1)在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用；2)在制备抗血管生成药物中的应用；3)在制备人脐静脉内皮细胞增殖抑制剂中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述抗血管生成药物指抗肿瘤血管生成药物。

10.一种药物，其活性成分为权利要求1或2所述化合物或其药学上可接受的盐；所述药物为下述1)和/或2)：1)预防和/或治疗肿瘤的药物；2)抗血管生成药物。