CN103211101B - 决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途，其是在草鱼生长饲料中添加1.2-2.0‰（质量比）的决明子蛋白；所述的决明子蛋白由以下方法制备得到：将决明子粉碎，加入KH2PO4-NaOH缓冲液，浸提4-8h；然后离心，取上清液；往上清液中加入硫酸铵至饱和，然后离心，收集沉淀；将沉淀转移至透析袋中，透析至透析液无色为止；最后将透析袋中的成分冷冻干燥，得到决明子蛋白。决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂，能够促进草鱼生长，以及提高草鱼部分非特异免疫功能。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖领域，具体涉及决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途。
背景技术
草鱼（Ctenopharyngodon idellus）属鲤形目鲤科雅罗鱼亚科草鱼属，俗称有：鲩、油鲩、草鲩、白鲩、草根、混子、黑青鱼等。草鱼的味道鲜美，含有丰富的不饱和脂肪酸，对血液循环有利；还含有丰富的硒元素，经常食用有抗衰老、养颜的功效，对肿瘤也有一定的防治作用。草鱼与青鱼、鲢鱼、鳙鱼并称为我国淡水养殖的“四大家鱼”，也是人们喜食的经济价值较高的一个品种。
常规养殖中草鱼的疾病种类繁多，如细菌性出血病、病毒性出血病、烂鳃病、肠炎病、赤皮病、草鱼绦虫病、小瓜虫病等（单晓鸾，2005），而且同一池塘中、同一时段的并发症或同一尾鱼体上的并发症也特别多，这给草鱼的疾病防治工作带来了很大的难度。
在防治水生动物疾病中，中草药不但可以解决使用化学药物造成的耐药性和药物残留超标问题，而且符合发展无公害水产养殖业，生产绿色水产品的疾病防治原则。在大规模和高密度人工养殖环境下，水产动物对病原的敏感性大大提高，易造成传染病发生和流行。免疫增强剂可以增强水产动物对多种传染性病原的非特异性免疫反应，提高机体抗病力。鱼类免疫学的研究也证实，鱼类的免疫系统虽较低级，但与人类及哺乳动物有相似之处。因此，人与哺乳动物所用的中药免疫增强剂大多数都适用于鱼类。以鼠科动物免疫实验效果确切的中药决明子蛋白质为对象，开发新型植物源水产免疫增强剂有着广阔的前景。
中药决明子所含有的蛋白质对大鼠有降血压、降血脂、改善血液流变学的作用。决明子蛋白还有增强小鼠免疫功能的作用：能增加衰老模型小鼠免疫器官系数、降低其脑组织丙二醛（MDA）的含量、提高脑组织超氧化物岐化酶（SOD）水平和减少肝组织中脂褐素含量，降低脑组织单胺氧化酶含量等，体外促进小鼠淋巴细胞增殖的作用。而决明子蛋白对鱼类养殖的生长促进及非特异免疫功能的增强作用未见报道。
SOD是机体清除氧自由基的重要抗氧化酶，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是机体内广泛存在的一种重要的催化过氧化物分解的酶，而MDA是机体被自由基氧化后的产物。增加SOD和GSH-Px的活力，降低MDA含量，能减少机体内自由基的产生、预防机体组织的损伤，可提高鱼类的非特异免疫功，促进鱼类健康生长。
发明内容
本发明的目的在于提供决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途，决明子蛋白能够促进草鱼生长，以及提高草鱼部分非特异免疫功能。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途；
所述的决明子蛋白由以下方法制备得到：
将决明子粉碎，加入KH2PO4-NaOH缓冲液，浸提4-8h；然后离心，取上清液；往上清液中加入硫酸铵至饱和，然后离心，收集沉淀；将沉淀转移至透析袋中，透析至透析液无色为止；最后将透析袋中的成分冷冻干燥，得到决明子蛋白；
所述的KH2PO4-NaOH缓冲液，浓度优选50mmol/L，pH值优选8.0；
所述的离心，优选在3000r/min离心10min；
所述的决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途，是在草鱼生长饲料中添加1.2-2.0‰（质量比）的决明子蛋白。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂，能够促进草鱼生长，以及提高草鱼部分非特异免疫功能。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例
（1）决明子蛋白添加饲料的制备
决明子为豆科植物决明C.obtusifolialL.的干燥成熟种子，购自广州二天堂石牌药店。决明子经粉碎后，加入50mmol/L（pH值8.0）的KH2PO4-NaOH提取缓冲液，搅拌提取6h左右，3000r/min离心10min，上清液保留；上清液在不断搅拌下缓慢加入粉末状硫酸铵至饱和，离心（条件同上），收集硫酸铵沉淀的蛋白质，将沉淀蛋白质转移至透析袋，透析7d（平均每隔24h换一次水，至所换的水几乎为无色，改用双蒸水透析一次），收集透析袋中的成分并冷冻干燥，即得决明子蛋白质。
在草鱼饲料制粒过程中按1.2‰、1.6‰、2.0‰的质量比在基础饲料中加入决明子蛋白质，制成添加决明子蛋白质的饲料；
所用的基础饲料由以下质量百分比的成分组成：菜粕30%、豆粕10%、棉粕20%、米糠20%、麸皮18%、多维（即复合维生素，广州海因特生物技术有限公司生产，产品批准文号：粤饲预字（2008）193061，产品标准号：Q/HTS2-2011）2%。
（2）草鱼试验分组及养殖
实验用草鱼（Ctenpharyngodon idellus），购自广东顺德大良，初始质量30.22±0.04g，共120尾。购回后置于水族箱中暂养21天后随机分为对照组（喂食基础饲料）、1%决明子组（将购买的决明子经粉粹机粉粹，过160目筛，在基础饲料制粒过程中以1%质量比添加）和1.2‰、1.6‰、2.0‰的3个决明子蛋白组（喂食决明子蛋白添加饲料）。每组30尾，每组设3个平行，每个平行10尾养殖于容量为0.1m3的水族箱内。水族箱内水体pH值为7.2-7.5，氨氮含量低于0.2mg/L，亚硝酸盐含量低于0.05mg/L，水温30.2-32.6℃。草鱼饲喂过程中每日定时定量饲喂2次，投饵率为鱼体重的2-4%，饱食投喂。投饵2h后吸取残饵和粪便，每周换水1次。共养殖60d。
（3）草鱼生长性能指标测定
对饲喂60d的实验草鱼称重。
增重率（%）=[(试验末均重-试验初均重)/试验初均重]×100
特定生长率（%/d）=(ln试验末均重-ln试验初均重)/试验天数×100
饲料系数=均摄食量/(试验末均重-试验初均重)
（4）血清及肝脏部分非特异免疫指标检测
分别于饲喂草鱼的第30d和第60d血清取样，取样前1d停止投饵。每个平行随机取5尾鱼，即每组取15尾鱼。取血采用穿刺尾动脉取血法，采集的血样，置于4℃冰箱过夜，4000r/min离心10min，收集上层血清，保存在-20℃冰箱中备用。同时将鱼解剖，取出肝脏，用生理盐水清洗、滤纸吸干，称重后保存在-20℃冰箱中备用。
血清总超氧化物歧化酶（SOD）活力、肝脏丙二醛（MDA）含量、肝脏谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定：均按各自试剂盒方法进行测定，所有试剂盒均为南京建成生物工程研究所市售产品（批号均为20130116）。
（5）数据统计
结果用平均值±标准差
表示，以组间t检验进行统计处理。
（6）决明子蛋白不同添加比例对草鱼生长及部分非特异免疫功能的影响
6.1添加1.2‰决明子蛋白饲料对生长及部分非特异免疫功能的影响
以1.2‰决明子蛋白添加到草鱼喂养的饲料中，对其生长性能指标和部分非特异免疫功能进行测定，结果见表1。与对照组或1%决明子组比较，添加1.2‰决明子蛋白的饲料喂养30d，可增加草鱼的血清总SOD活力（P<0.05）、降低其肝脏MDA含量（P<0.01、P<0.05）、增强其肝脏GSH-Px的活力（P<0.001）；喂养60d，能增加草鱼的增重率（P<0.05）和特定生长率（P<0.05）、降低饲料系数（P<0.05），可增加草鱼的血清总SOD活力（P<0.05）、降低其肝脏MDA含量（P<0.05）。有促进草鱼生长和提高其部分非特异免疫功能的作用。
6.2添加1.6‰决明子蛋白饲料对草鱼生长及部分非特异免疫功能的影响
以1.6‰决明子蛋白添加到草鱼喂养的饲料中，对其生长性能指标和部分非特异免疫功能进行测定，结果见表1。与对照组或1%决明子组比较，添加1.6‰决明子蛋白的饲料喂养30d，可增加草鱼的血清总SOD活力（P<0.05）、降低其肝脏MDA含量（P<0.01、P<0.05）、增强其肝脏GSH-Px的活力（P<0.001）；喂养60d，能增加草鱼的增重率（P<0.05）和特定生长率（P<0.05）、降低饲料系数（P<0.05），可增加草鱼的血清总SOD活力（P<0.01、P<0.05）、降低其肝脏MDA含量（P<0.01、P<0.05）。有促进草鱼生长和提高其部分非特异免疫功能的作用。
6.3添加2.0‰决明子蛋白饲料对草鱼生长及部分非特异免疫功能的影响
以2.0‰决明子蛋白添加到草鱼喂养的饲料中，对其生长性能指标和部分非特异免疫功能进行测定，结果见表1。与对照组或1%决明子组比较，添加2.0‰决明子蛋白的饲料喂养30d，可增加草鱼的血清总SOD活力（P<0.01）、降低其肝脏MDA含量（P<0.01、P<0.05）、增强其肝脏GSH-Px的活力（P<0.01）；喂养60d，能增加草鱼的增重率（P<0.01）和特定生长率（P<0.01）、降低饲料系数（P<0.01），可增加草鱼的血清总SOD活力（P<0.01）、降低其肝脏MDA含量（P<0.01、P<0.05）。有促进草鱼生长和提高其部分非特异免疫功能的作用。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
表1.决明子蛋白对草鱼生长的促进作用
n=15）
| 测定指标 | 对照 | 1%决明子 | 1.2‰决明子蛋白 | 1.6‰决明子蛋白 | 2.0‰决明子蛋白 |
| 60d增重率（%） | 141.81±20.48 | 143.85±24.26 | 164.57±25.95*Δ | 168.84±33.22*Δ | 175.14±33.58**ΔΔ |
| 60d特定生长率（%/d） | 1.44±0.33 | 1.42±0.21 | 1.64±0.16*Δ | 1.68±0.17*Δ | 1.72±0.19**ΔΔ |
| 60d饲料系数 | 2.09±0.49 | 1.92±0.57 | 1.69±0.23*Δ | 1.75±0.23*Δ | 1.63±0.28**ΔΔ |
| 30d血清总SOD活力（U/mL） | 109.97±7.53 | 111.30±14.11 | 117.38±11.33*Δ | 120.07±14.44*Δ | 121.06±10.69**ΔΔ |
| 60d血清总SOD活力（U/mL） | 106.82±12.66 | 110.26±12.61 | 119.57±17.75*Δ | 121.81±13.17**Δ | 123.08±14.96**ΔΔ |
| 30d肝脏MDA含量（nmol/mgprot） | 0.28±0.09 | 0.23±0.07 | 0.19±0.06**Δ | 0.18±0.06**Δ | 0.20±0.05**Δ |
| 60d肝脏MDA含量（nmol/mgprot） | 0.43±0.09 | 0.39±0.13 | 0.35±0.08*Δ | 0.33±0.09**Δ | 0.34±0.07**Δ |
| 30d肝脏GSH-Px活力（U/mgprot） | 151.09±24.14 | 152.63±25.10 | 204.48±32.59***ΔΔΔ | 197.08±35.54***ΔΔΔ | 193.73±48.80**ΔΔ |
注：与对照组比较，“*”表示P<0.05；“**”表示P<0.01；“***”表示P<0.001；与1%决明子组比较，“Δ”表示P<0.05；“ΔΔ”表示P<0.01；“ΔΔΔ”表示P<0.001。
Claims (5)
1.决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途。
2.根据权利要求1所述的决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途，其特征在于：所述的决明子蛋白由以下方法制备得到：
将决明子粉碎，加入KH2PO4-NaOH缓冲液，浸提4-8h；然后离心，取上清液；往上清液中加入硫酸铵至饱和，然后离心，收集沉淀；将沉淀转移至透析袋中，透析至透析液无色为止；最后将透析袋中的成分冷冻干燥，得到决明子蛋白。
3.根据权利要求2所述的决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途，其特征在于：所述的KH2PO4-NaOH缓冲液，浓度为50mmol/L，pH值为8.0。
4.根据权利要求2所述的决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途，其特征在于：所述的离心，是在3000r/min离心10min。
5.根据权利要求1所述的决明子蛋白作为草鱼生长饲料添加剂的用途，其特征在于：是在草鱼生长饲料中添加1.2-2.0‰（质量比）的决明子蛋白。
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